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收稿日期 : 2017 06 19; 修回日期 : 2017 11 01基金项目 :“蓝莓有害生物绿色防控关键技术研究及应用 ”( 黔科合重大专项字 2015 6013 2) ; “高丛蓝莓产业化高效栽培技术研究及示范 ”( 黔科院 SY 字 2016 03 号 1) ; “贵州省蓝莓工程技术研究中心建设 ”( 黔科合平台人才 20165202 号 )第一作者 : 任春光 ( 1981) , 女 , 土家族 , 贵州印江人 , 硕士 , 副研究员 , 主要从事真菌资源及真菌病害研究 , E-mail:408558682 qq com通信作者 : 聂飞 , 研究员 , E-mail: 1134477929 qq com。贵州省蓝莓主栽区真菌病害调查初报任春光1, 2, 杨丰2, 黄振兴1, 2, 刘曼1, 2, 聂飞1, 2( 1. 贵州省生物研究所 , 贵州 贵阳 550009; 2. 麻江蓝莓产业工程技术中心 , 贵州 麻江 557602)摘要 : 20152017 年作者采用随机普查和定点调查方式调查贵州省蓝莓 Vaccinium sp 主要栽培区病害种类 。结果发现 : 贵州蓝莓叶 、茎 、花共有 7 种真菌病害 , 其中蓝莓褐斑病 ( Pseudocercosporasp ) 、蓝莓炭疽病 ( Colletotrichum sp ) 、蓝莓茎枯病 ( Ophiobolus sp ) 、蓝莓枯萎病 ( Phomopsis sp ) 值得后期密切关注 。关键词 : 蓝莓 ; 真菌病害 ; 调查 ; 危害评价中图分类号 : S763. 15 文献标志码 : A 文章编号 : 1671 0886( 2018) 02 0022 06Preliminary investigation of fungal diseases of blueberry in major cultivation areas of Guizhouprovince/EN Chunguang, et al ( Guizhou Institute of Biology, Guiyang 550009, China)Abstract: Fungal diseases of blueberry in major cultivation areas of Guizhou province were investigatedwith random and point surveys from 2015 to 2017 The results showed that there were seven fungal dis-eases on leaf, stem and flower of blueberry in Guizhou province, in which brown spot ( Pseudocercos-pora sp ) , anthracnose ( Colletotrichum sp ) , stem blight ( Ophiobolus sp ) and wilt disease ( Pho-mopsis sp ) should be paid close attention toKey words: blueberry; fungal disease; investigation; hazard evaluation蓝莓 Vaccinium sp 又称蓝浆果或越桔 , 属多年生灌木型小浆果果树 , 果实呈蓝色 , 是杜鹃花科 Eri-caceae 越橘属 Vaccinium 植物 。因果实中含有丰富的花青素 , 具有独特的食用营养与保健作用 , 联合国粮农组织将其列为人类五大健康食品之一 。贵州境内山峦重叠 , 丘陵起伏 , 地势变化大 , 形成了明显的地区性气候差异 。贵州发展蓝莓具有得天独厚的自然条件优势 , 从 2000 年开始引种兔眼蓝莓 , 至今已有 17 年栽培历史 , 先后引入了四类 40 多个品种 1 2, 贵州的麻江 、黄平 、丹寨 、凤冈 、松桃 、独山 、花溪和乌当等 20 个县区进行了栽培种植 。近年来随着蓝莓种植面积持续增长 、对外引种频繁 , 病害种类随之增多 , 发病程度日趋严重 。为了摸清贵州省蓝莓叶 、茎 、花真菌病害种类 , 有效控制病害的发生 , 保持蓝莓良好的生长状态 , 提高生产效益 , 我们对蓝莓真菌病害种类进行了系统调查 。1 材料与方法1. 1 标本采集 20152017 年 , 采用随机普查和定点调查方式分别在贵州麻江 、黄平 、丹寨 、凤冈 、松桃等地的蓝莓主要栽培区调查病害种类 , 采集症状典型的新鲜病株供室内鉴定 。1. 2 病原真菌分离及鉴定 根据真菌病害发生部位和形式 , 针对性采用不同方法分离病原 。每份材料重复 3 次 , 取蓝莓基地健康植株组织作空白对照 。对于症状明显 , 病原菌用肉眼可见的病害 , 在解剖镜下用无菌接种针直接从病部挑取病原菌放在无菌水中 , 混合均匀后 , 再吸取少量菌液在水琼脂培养基 ( 15 g 琼脂 , 1 000 mL) 上 , 等待萌发后挑取单孢进行多次纯化获得纯培养 。对于症状明显但病原菌无法用肉眼看见的病害 , 采取组织分离法 , 取新鲜病健交界处的病组织洗净后切成 4 mm 4 mm 小块 , 用灭菌水冲洗 3 422 Forest Pest and Disease Mar 2018 No2次 ; 分别用 75%酒精消毒 30 s 左右 , 再在 0. 1%升汞中消毒 1 2 min, 然后用无菌水冲洗 3 4 次 , 在无菌条件下将感病组织接在 PDA 培养基 3的平板上 。1. 3 致病性测定 对疑难病害用柯赫氏法则进行致病性测定 3 4。将纯化所得的菌株配成孢子悬浮液 , 每视野 50 60 个孢子 ( 10 16 倍 ) , 以刺伤和无伤接种法 , 把孢子液涂于新鲜健康的离体寄主上 ; 以无菌水保湿作对照 ( CK) , 然后将接种的叶片或枝条放入无菌湿润滤纸的培养皿中 , 置于 25 温箱内保湿培养 , 每处理 3 个重复 , 每隔 2 d 观察 1 次 , 记录接种结果 , 并对接种成功的病斑进行组织分离 , 确认致病菌株 5。根据病原菌形态特征 , 参照魏景超 5( 1979)真菌鉴定手册 和陆家云 4( 2001) 植物病原真菌学 , 按照 Ainsworth 分类系统 , 参考有关文献 6 8,初步鉴定贵州蓝莓病害的病原真菌 。2 结果与分析2. 1 蓝莓褐斑病症状 褐斑病主要危害叶片 , 叶片受害初期产生棕褐色小点 , 边缘有卷起 , 后期随着病斑扩大 , 边缘褐色至红褐色 , 病健交界清楚 , 斑点生于叶正面 , 形状不规则 , 多个病斑融合成不规则大斑 ( 图 1a) 。病原菌 假尾孢菌 Pseudocercospora sp。分生孢子梗多根 , 直立或稍弯曲 , 灰褐色 , 有隔膜 , 分枝 。分生孢子棍棒形 、呈曲膝状 、浅褐色 、多数稍弯曲 , 两端钝圆 , 通常有 3 6 个隔膜 ,( 20 80) m ( 2 9) m, 符合假尾孢菌属 Pseudocercospora 的形态描述 ( 图 1b) 。分布及危害评价 假尾孢属 Pseudocercosporasp 在世界各地广泛发生 , 如美国 、英格兰 、澳大利亚 、韩国等均有报道 8, 在中国的东北 、重庆 、北京 、贵州等其它植物上发现过假尾孢属病原菌 7 9。假尾孢病原菌在贵州的猕猴桃上有报道 , 主要危害叶片 , 引起干枯后卷曲 , 落叶 , 严重影响植物光合作用 7。该属是植物病原菌 , 可危害蔬菜 、花卉 、经济林木 、中药材等多种植物 , 是非常重要的病原菌 。引起叶片枯焦 , 提前脱落 , 或造成落花 、落果 , 影响产量和品质 , 常造成一定的经济损失 , 假尾孢属有些种引起的病害甚至被列在检疫法规中成为检疫对象 。目前蓝莓褐斑病发病率为 10% 15%, 在蓝莓上未见此病原菌报道 。因为蓝莓褐斑病对蓝莓生产可能造成相当大的经济损失 , 严重时甚至可以导致绝收 , 因此不能轻视蓝莓褐斑病的危害 , 应作为后期重点观察病害之一 ; 定点观察蓝莓褐斑病害的发生发展规律 , 加强室内生物源药剂筛选试验 , 为预防病害进一步蔓延打下前期基础 。图 1 蓝莓褐斑病症状和病原菌 Pseudocercospora sp2. 2 蓝莓叶点病症状 主要危害叶片 , 新叶和老叶均危害 , 病部多从叶中开始 , 发病初期出现很多褪绿色大小不一小斑点 , 后期呈棕色斑点 , 斑点形状不规则 , 后期叶片逐渐变红 , 病斑仍清楚 。保湿培养后着生黑色小点 , 即病菌分生孢子器 。78 月高温干旱 , 病害最重 , 导致叶片提早枯落 ( 图 2a) 。病原菌 拟盘多毛孢属 Pestalotiopsis sp。分生孢子纺锤形 ,( 13 18) m ( 4 6) m, 直或稍弯 , 3 个隔膜 , 中间 3 个细胞黑褐色 , 两端细胞无色 ,圆锥形 , 顶生 1 2 根附属丝 , 长 12 23 m, 基细胞具短柄 ( 图 2b) 。分布及危害评价 拟盘多毛孢属 Pestalotiopsissp 在世界各地广泛发生 , 可危害许多农作物及经济植物 , 例如玉米 、猕猴桃 、竹子等 。目前该病发病率为 5% 10%, 拟盘多毛孢菌是多数植物上的弱致病32中国森林病虫 2018 年 3 月 第 37 卷 第 2 期真菌 , 也是植物上常见腐生真菌 , 通常引起不同程度斑点状 , 环境条件适合时发病较重 , 拟盘多毛孢菌对生产危害不大 , 及时喷施叶面肥或植物源真菌杀菌剂该症状很快缓解 。图 2 蓝莓叶点病症状和病原菌 Pestalotiopsis sp2. 3 蓝莓炭疽病症状 蓝莓炭疽病可危害蓝莓花 、叶 、果 , 嫩芽等 , 主要危害叶片 , 在高温多雨时发病较重 , 发病初期在叶缘或叶尖开始 , 出现水渍状棕褐色斑点 , 后期变成深褐色或黑色 、近圆形 、中央稍凹陷的病斑 。天气干燥 , 病斑中央灰白色 , 表皮下埋生小黑点即为病原菌分生孢子盘 。严重时造成叶片脱落 , 嫩梢枯死 ,果实产量下降 ( 图 3a) 。病原菌 刺盘孢属 Colletotrichum sp。分生孢子盘多聚生 , 黑褐色 , 顶端不规则破裂 。分生孢子盘上着生刚毛直立 , 黑褐色 , 刚毛 1 3 根 , 顶端较尖 , 基部较粗 , 1 3 个隔膜 ,( 80 320) m ( 2 4) m。分生孢子无色 , 单胞 , 纺锤形 、椭圆形或棒状形 , 两端钝圆 , 含 1 个油球或无油球 , 大小为 ( 15 27) m ( 3 5) m( 图 3b) 。分布及危害评价 炭疽病原菌能侵染很多经济植物 , 在世界各地广泛发生 , 如美国 、英格兰 、澳大利亚等均有报道 11 12。在中国辽宁 , 曾报道蓝莓炭疽病发生严重 , 可造成相当大的经济损失 , 损失严重时甚至可以导致绝收 ; 有专家认为炭疽病的高发还会导致蓝莓采收后微生物超标 , 影响产品安全 10 13。刺盘孢属 Colletotrichum sp 在贵州的蓝莓 、猕猴桃 、竹子等经济植物上有过报道 6 7, 13 14, 目前在贵州蓝莓上发生危害较轻 , 发病率为 5% 8%, 鉴于炭疽病在其它蓝莓栽培区可造成相当大的经济损失 ,因此不能轻视 , 后期要定点定时观察蓝莓炭疽病的发生发展规律 。图 3 蓝莓炭疽病症状和病原菌 Colletotrichum sp2. 4 蓝莓茎枯病症状 该病可危害蓝莓叶 、茎 , 发病初期在嫩茎上形成圆形或椭圆形病斑 , 后期纵横方向逐渐扩散到整个嫩枝 , 严重时每株多个枝条受害 , 严重影响开花和座果率 。嫩茎上密生许多黑色小点 , 为病原菌的分生孢子器 , 保湿后长白色丝状霉层 ( 图 4a) 。病原菌 蛇孢腔菌属 Ophiobolus sp。子囊座散生 , 球形或近球形 , 浅棕色 , 顶端呈乳头状突起 。子囊圆筒形或棍棒形 , 大小为 ( 74 113) m ( 5 8) m。子囊孢子丝状 , 无色 , 有 2 5 个隔膜 , 大小为 ( 72 110) m ( 2 4) m( 图 4b) 。分布及危害评价 目前蛇孢腔菌属 Ophiobolussp 在土 耳 其 、美国等许多国家和地区广泛发生 15 18, 我国主要在小麦栽培区发生较重 。蛇孢腔菌主要侵染禾本科植物 , 例如小麦 、玉米 、竹子等植物 , 可引起禾谷类根部毁灭性的影响 15。蓝莓茎枯42 Forest Pest and Disease Mar 2018 No2病目前发病率为 10% 15%, 蛇孢腔菌在寄主蓝莓上还未见报道 。鉴于蛇孢腔菌属病原菌可能对蓝莓造成毁灭性的影响 , 所以必须密切注意蓝莓茎枯病的侵染发生情况 , 积极深入研究病害发生规律及防治措施 , 及时进行有效防控 , 避免和减少蓝莓茎枯病的传播 , 影响贵州蓝莓可持续发展 。图 4 蓝莓茎枯病症状和病原菌 Ophiobolus sp2. 5 蓝莓灰霉病症状 蓝莓灰霉病可危害蓝莓的花和果实 。在花期 , 阴雨天气相对湿度大时最易感病 ; 初期多从花尖形成逐渐向花内扩展 , 形成灰色病斑 , 后期病斑上着生许多灰色霉层 , 蓝莓灰霉病病菌易迅速发生 、流行 。采收后的蓝莓在室内存放一周后 , 果实容易被感染 , 上呈现灰色霉层 , 很快软化腐烂 , 严重影响蓝莓的果实品质 ( 图 5a, b) 。病原菌 葡萄孢属 Botrytis cinerea。分生孢子梗细长 , 直立 , 通常二叉或三叉分枝 。分生孢子圆形 、卵圆形 , 单细胞 , 无色 , 单生或聚集呈葡萄状 , 大小为 ( 5 11) m ( 1 8) m( 图 5c) 。图 5 蓝莓灰霉病症状和病原菌 Botrytis cinerea分布及危害评价 灰霉病在世界各地均有危害 , 是植物上常见病害 。多数是腐生真菌 , 少数是弱寄生真菌 , 葡萄孢菌在蓝莓上有报道 14。目前发病率 15% 25%, 该病原菌主要受天气影响较大 , 当52中国森林病虫 2018 年 3 月 第 37 卷 第 2 期开花期连续数日阴雨天气 , 树体抵抗力低 , 座果率差时 , 容易感染此病 , 当天气连续数日晴朗时病原菌数量自然降低 , 病菌不再传播蔓延 , 不用喷施药剂症状很快缓解 , 对生产危害不大 。2. 6 蓝莓枯萎病症状 蓝莓枝条枯萎病往往发生在当年生嫩尖上 , 主要症状是顶尖死亡 , 缘叶脉向边缘扩散到整叶 , 发病初期呈水渍状 , 后期呈现黑色萎焉 , 严重时 ,一个植株上多个枝条受害 。保湿培养后上着生黑色小点 , 即分子孢子器 ( 图 6a) 。病原菌 拟茎点霉属 Phomopsis sp , 分生孢子有 2 种 。1 种 型孢子 , 钩状或丝状 , 单孢 , 无色 ,( 9 26) m ( 1 2) m。另 1 种是 型孢子 , 纺锤型或椭圆形 , 无色 , 单胞 ,( 4 7) m ( 1 2) m,内含 1 2 个油球 , 其中 型孢子较多 ( 图 6b) 。分布及危害评价 拟茎点霉菌呈世界性分布 ,是林业和农业上重要的病原菌和内生菌 。拟茎点霉属真菌种类较多 , 可引起多种病害 , 例如果腐 、叶枯 、枝枯 、根腐等 , 部分种类可以危害人或其他哺乳动物造成真足菌肿病 , 在自然生态系统中占有非常重要的地位 。拟茎点霉菌在辽宁 、山东 、贵州麻江先后报道 , 国内将拟茎点霉菌 Phomopsis vaccinii 危害果实的病害列为新的检疫性病害 19 20。目前拟茎点霉在凯里市宣威镇蓝莓基地上发病率为 5% 8%, 危害蓝莓报道 。鉴于拟茎点霉属的病原菌可能危害蓝莓果实 , 其中部分病原菌已被列入检疫病害 , 虽然目前发病较轻 , 对生产影响不大 , 但是不能轻视该病的危害 , 因此后期要定点定时观察其病害的发生发展规律 , 及时对这些病害进行有效防控 , 避免此类病害的传播 。图 6 蓝莓枯萎病症状和病原菌 Phomopsis sp2. 7 叶斑病症状 主要危害叶片 。叶片染病初期为黑褐色小斑点 , 不久扩大为不规则形大斑 , 褐色 。随着斑点增多变大 , 整叶变褐干枯向内卷曲 , 高温天气病斑中间呈灰白色轮纹状 。潮湿时 , 病部出现黑色粉状霉层 ( 图 7a) 。高温高湿有利于病害发生 。病原菌 链格孢属 Alternaria sp。分生孢子梗单生或簇生 , 直立或稍弯曲 , 褐色具隔膜 。分生孢子单生 , 倒棒形 , 直或弯曲 , 褐色 , 具隔膜 , 横隔 2 4个 , 纵 、斜隔 0 2 个 , 分隔处略缢缩 ,( 13 20) m ( 5 11) m。喙短柱状 , 淡褐色 ( 图 7b) 。分布及危害评价 蓝莓叶斑病在世界各地广泛发生 。链格孢属病原菌能侵染很多经济植物 , 是植物上常见病害 , 多数是腐生真菌 , 少数是弱寄生真菌 。目前发病率为 10% 15%, 此病原菌与环境条件关系密切 。链格孢病原菌对生产危害不大 , 及时沟施微生物菌肥或喷施叶面肥 , 病害症状很快缓解 。图 7 蓝莓叶斑病症状和病原菌 Alternaria sp62 Forest Pest and Disease Mar 2018 No23 结 论与讨论通 过近 2 a 对蓝莓病害的研究 , 我们已基本摸清了贵州蓝莓叶 、茎 、花病害种类和主要病害危害情况 , 初步鉴定出贵州蓝莓叶 、茎 、花真菌病害 7 种 ,蓝莓褐斑病 、蓝莓炭疽病 、茎枯病 、枯萎病 4 种病害可能对蓝莓产业造成潜在的危害 。此研究结果对今后蓝莓主要病害的病原生物学特性 、发生规律 、病害检疫及综合防治具有一定的理论参考价值 , 也为指导蓝莓产业生产提供了重要的理论依据 。目前我国已报道的侵染蓝莓叶部的真菌病害有5 种 2, 14, 20, 其 中假尾孢属和蛇孢腔菌属病原菌在蓝莓上引发病害为首次报道 , 同属病原菌在不同寄主上危害症状不一 。假尾孢属主要危害蔬菜 、花卉等植物 , 蛇孢腔菌主要危害禾本科植物 , 此次蓝莓成为该病原菌的新寄主 , 是否与贵州一带采用稻谷壳作为蓝莓栽培后覆盖物 , 果园附近有蔬菜和花卉基地有关 , 有待进一步验证 。本试验仅从调查和鉴定病害入手 , 其中重要病害发生发展规律 、发病特点等还需进行深入研究 。参 考文献 : 1 任艳玲 , 周杰 , 王涛 , 等 贵州蓝莓产业的发展现状及对策 J 贵州农业科学 , 2016, 44( 6) : 172 175 2 张 国辉 , 李性苑 , 杨芩 , 等 麻江县蓝莓重要病虫害的种类调查和病原鉴定 J 浙江农业科学 , 2016, 57( 3) : 372 375 3 方 中达 植病研究方法 M 3 版 北京 : 中国农业出版社 ,1998: 137 138 4 陆家云 植物病原真菌学 M 北京 : 中国农业出版社 , 2001:449 533 5 魏景超 真菌鉴定手册 M 上海 : 上海科学技术出版社 ,1979: 647 648 6 任春光 , 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!72中国森林病虫 2018 年 3 月 第 37 卷 第 2 期
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