高丛蓝莓‘珠宝’组织培养离体快繁技术_张慧婷.pdf

97 栽培技术 上海农业科技 张慧婷 等 高丛蓝莓 珠宝 组织培养离体快繁技术 2025 4 97 99 高丛蓝莓 珠宝 组织培养离体快繁技术 张慧婷1 陈孙杰1 姜亮1 李水根2 蒋佳琪1 1上海市闵行区三农综合服务中心 上海 201109 2上海市农业科学院 上海 201106 蓝莓为杜鹃花科 Ericaceae 越橘属 Vaccinium 小浆果类多年生灌木 原产于北美地 区 1 20世纪80年代传入中国 目前在全世界广泛 种植 蓝莓果实不仅味道鲜美 还富含黄酮类化合 物 具有增强机体免疫力 降低心脑血管疾病发生 风险 提高记忆力 延缓衰老 增强视力等多种保 健功能 被联合国粮食农业组织列为五大健康食品 之一 有 浆果之王 的美誉 2 3 蓝莓的栽培品种 主要包括高丛蓝莓 矮丛蓝莓和兔眼蓝莓 其中高 丛蓝莓因其广泛的栽培面积而占据主导地位 根据 需冷量的不同 高丛蓝莓又可细分为南高丛蓝莓 北 高丛蓝莓和半高丛蓝莓 4 稳定高效的优质种苗繁殖技术是决定蓝莓产业 健康发展的基础 蓝莓一般采用扦插 嫁接和组织培 养技术进行繁殖 国内外学者对蓝莓的组培技术进 行了大量研究 并在很多主栽品种上取得了成功 5 7 目前 组织培养技术以其繁殖速度快和种苗无病毒 的优势 成为蓝莓繁殖的主要手段 8 蓝莓在生产中 主要采用嫩茎段作为外植体 通过丛生芽诱导进行 规模化繁殖 然后采用瓶内 9 10 或瓶外生根 11 12 的方 式获得完整植株 在组织培养过程中 由于基因型的 差异 需要对培养基组分和激素的种类 浓度进行优 化 从而建立针对不同蓝莓品种的稳定丛生芽增殖 体系 在组培苗驯化过程中 选择适宜的移栽驯化基 质以及进行有效的环境管理是确保驯化成功的关键 珠宝 属于美国三个主要栽培的南高丛蓝莓品 种之一 其果实大 产量高 风味浓 回味好 13 在 前人对其他高丛蓝莓品种的组培技术进行研究的基 础上 笔者通过优化增殖和生根培养基组分 提高了 珠宝 的增殖系数 解决了瓶内生根困难问题 为 珠宝 的种苗规模化繁殖和该品种的进一步推广应 用奠定了基础 现笔者将高丛蓝莓 珠宝 的组织培 养及规模化快速繁殖技术总结介绍如下 以供参考 1 外植体采集及消毒 外植体选择是组培体系成功建立的第一步 根 据现有研究报道 蓝莓组培的外植体可以采用茎段 和叶片 以春季或秋季萌发的新梢为外植体 可以 直接诱导腋芽萌发获得无菌不定芽 以叶片为外植 体 则需经过愈伤组织再生 然后间接诱导不定芽 发生 从而建立无菌丛生芽体系 为了降低外植体 的污染率 应尽量从无病虫害的植株上采集茎段或 叶片 且剪刀在使用前须用75 酒精擦拭消毒 外植体的表面消毒流程 1 将带芽茎段或叶片 在自来水下冲洗30 min后 转入超净工作台进行操 作 2 将带芽茎段或叶片先用75 酒精浸泡1 min 再用无菌水冲洗1遍 然后用10 次氯酸钠溶液或者 0 1 升汞溶液浸泡10 15 min 期间不断摇晃瓶子 使消毒液与外植体充分接触 3 用无菌蒸馏水冲洗 外植体5遍 每遍冲洗5 min左右 4 将消毒好 的外植体置于无菌滤纸上 吸干表面多余的水分 2 不定芽再生诱导 采用茎段作为外植体时 适合 珠宝 腋芽启动 的最佳培养基组分为木本植物培养基 WPM 添 加玉米素 ZT 0 5 mg L 萘乙酸 NAA 0 05 mg L 蔗糖20 g L 琼脂粉6 5 g L pH调至 5 15 5 25 将培养基高温高压 121 103 107 kPa 灭菌20 min后 分装于罐头瓶 采用带有透 气膜的瓶盖 中 将消毒好的嫩茎剪成带1 2个芽 摘 要 为促进高丛蓝莓 珠宝 的种苗规模化繁殖和该品种的进一步推广应用 总结了该品种的组织培养及规模化 快速繁殖技术 以春季萌发的蓝莓嫩茎或叶片为外植体 通过外植体采集及消毒 不定芽再生诱导 不定芽增殖培养 生根 培养及移栽驯化等步骤 可实现高丛蓝莓 珠宝 的高效繁殖 其中 最佳增殖培养基配方为木本植物培养基 WPM 硝酸 钙0 5 g L 玉米素 ZT 1 0 mg L 吲哚丁酸 IBA 0 1 mg L 每45 d继代培养1次 增殖系数在5 6左右 最佳生根培 养基配方为WPM IBA 0 5 mg L NAA 0 2 mg L 活性炭0 2 g L 蔗糖20 g L 琼脂粉6 5 g L 生根率在95 左右 关键词 高丛蓝莓 珠宝 组织培养 离体快繁 芽启动 增殖培养 中图分类号 S663 9 收稿日期 2024 12 28 98 的茎段 接种于腋芽启动培养基上 在光强为2 000 lx 光照周期为16 h 8 h 温度为25 的环境条 件下 培养1周 然后 及时舍弃被污染的茎段 余 下的继续培养 10 15 d后可观察到腋芽生长点开 始萌动 新叶逐渐展开 然后伸长形成新梢 采用叶片作为外植体时 需将叶尖和边缘部分 去掉 然后用剪刀将剩余部分剪成小方块 叶背面 朝下接种于愈伤和不定芽再生培养基上 培养基组 分为WPM 添加噻苯隆 TDZ 2 0 mg L 萘乙 酸 NAA 0 05 mg L 蔗糖20 g L 琼脂粉6 5 g L pH调至5 15 5 25 将培养基高温高压 121 103 107 kPa 灭菌20 min后 分装于玻璃 培养皿 直径为9 cm 中 在黑暗 25 的环境条 件下 培养15 d 诱导叶片伤口处形成愈伤组织 然后将其转入光强为2 000 lx 光照周期为16 h 8 h 温度为25 的环境条件下继续培养30 d 可 观察到大量不定芽从愈伤上再生 3 不定芽增殖培养 待茎段或叶片诱导的不定芽长度大于1 cm时 用剪刀将其剪下 转接于增殖培养基上 由图1可 知 木本植物培养基WPM适用于 珠宝 的培养 且在培养基WPM中添加硝酸钙可以显著提高增殖 系数 结合不同培养基组分对 珠宝 增殖培养影 响的试验结果 最终得出适合 珠宝 不定芽增殖 的最佳培养基配方为WPM 硝酸钙0 5 g L ZT 1 0 mg L IBA 0 1 mg L 蔗糖20 g L 琼脂 粉6 5 g L pH调至5 15 5 25 培养基的分装 和灭菌方法与不定芽再生诱导相同 培养温度为25 光照强度为2 000 lx 光照周期为16 h 8 h 培养一段时间后可诱导形成丛生芽 每45 d继代培 养1次 增殖系数在5 6左右 注 不同小写字母表示处理间差异达显著水平 图1 不同培养基组分对蓝莓 珠宝 增殖培养的影响 4 植株生根培养 将增殖培养的蓝莓丛生芽剪成单个不定芽 转 接于生根培养基上 蓝莓瓶内生根较困难 需要配 合使用IBA和NAA 由表1可知 在添加不同激素 的培养基组分中 最适生根培养的培养基配方为 WPM 添加IBA 0 5 mg L NAA 0 2 mg L 活性炭0 2 g L 蔗糖20 g L 琼脂粉6 5 g L pH调至5 15 5 25 培养温度为25 光照强度 为2 000 lx 光照周期为16 h 8 h 培养1 2个 月后 可诱导不定芽基部形成根系 生根率在95 左右 大部分植株的根系呈白色 生长良好 整体 长势旺盛 表1 不同激素组合对蓝莓 珠宝 生根的影响 注 表中同列数据后不同小写字母表示处理间差异达显 著水平 5 试管苗移栽驯化 将组培苗转移到室温条件下放置7 d后 打开 瓶盖继续放置2 d 然后取出植株 用自来水将根 部的培养基冲洗干净 移栽到装有基质的128孔穴 盘中 有研究表明 最适宜蓝莓移栽驯化的基质为 苔藓 移栽前 将干水苔用清水泡发后 加入0 1 多菌灵处理24 h 然后 将泡发好的水苔藓沥干 装入128孔穴盘中备用 在组培苗移栽或扦插后 将 其放置于覆盖塑料薄膜的拱棚中 然后覆盖1层遮 阳网 遮光率为50 左右 每天喷雾补水2次 保 持湿度在95 以上 1周后将拱棚两端的薄膜掀开 每天喷雾补水1次 且每隔7 d喷洒1次0 1 代森 锰锌溶液 1个月后将薄膜彻底掀开 每10 d喷洒 1次0 02 磷酸二氢钾 用0 03 硫酸钾复合肥灌 根1次 2个月后驯化基本完成 将驯化成活的植株 移栽到钵盆中 进行常规水肥管理 采用生根组培 苗进行移栽驯化的植株成活率达98 采用瓶外生根方式能省略组培苗生根步骤 具 体操作 1 直接将增殖培养复壮后的不定芽从瓶 中取出 2 用0 1 的甲基硫菌灵浸泡处理后 剪 成长度为2 4 cm 带2 3个腋芽的茎段 3 用 1 mg L的IBA处理茎段基部30 s 4 将处理好 的茎段直接插入苔藓基质中 扦插后的管理同上 2 个月左右即可诱导茎段生根 形成完整植株 瓶外 上海农业科技 SHANGHAI AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY 2025 4 IBA mg L 0 1 0 2 0 5 0 1 0 2 0 5 处理 1 2 3 4 5 6 NAA mg L 0 0 0 0 2 0 2 0 2 生根率 26 80 8 91 e 53 70 5 92 cd 41 00 19 26 de 66 00 6 63 bc 78 20 4 07 ab 94 80 4 40 a 99 生根的成活率在80 左右 6 结论与讨论 本研究以高丛蓝莓 珠宝 为研究对象 通过优 化组织培养技术 成功实现了其规模化快速繁殖 即 采用 珠宝 春季萌发的新梢或叶片作为外植体 通 过嫩茎离体培养诱导腋芽萌发 利用叶片诱导愈伤 组织和不定芽再生 然后对不定芽进行增殖扩繁 最 终诱导不定芽生根 形成完整植株 在培养基的选 择上 通常使用木本植物培养基 WPM 玉米素 ZT 对蓝莓的腋芽启动和增殖培养具有促进作用 噻苯隆 TDZ 则在叶片愈伤组织的诱导过程中发 挥着关键作用 由于蓝莓组培苗瓶内生根困难 本 研究通过配合使用IBA和NAA 并添加一定浓度的 活性炭促进其生根 最佳增殖培养基配方为木本植 物培养基 WPM 硝酸钙0 5 g L 玉米素 ZT 1 0 mg L 吲哚丁酸 IBA 0 1 mg L 每45 d 继代培养1次 增殖系数在5 6左右 最适生根培养 基配方为WPM IBA 0 5 mg L NAA 0 2 mg L 活性炭0 2 g L 蔗糖20 g L 琼脂粉6 5 g L 生根率在95 左右 此外 通过比较瓶内生根和瓶 外生根两种生根方式植株的成活率 探讨了瓶外生 根的可行性 可在一定程度上降低生产成本 本研 究提出的技术方法 不仅为蓝莓 珠宝 的种苗规 模化快速繁殖提供了高效的技术方案 还为农杆菌 介导的蓝莓遗传转化提供了技术基础 7 参考文献 1 顾姻 贺善安 於虹 等 蓝浆果与蔓越桔 M 北京 中国农 业出版社 2001 2 刘欢 浆果之王 蓝莓的营养保健作用研究 J 中国新技 术新产品 2009 19 228 3 李亚东 张志东 吴林 蓝莓果实的成分及保健机能 J 中 国食物与营养 2002 1 27 28 4 WANG L Y LI Y D SUN H Y et al An efficient droplet vitrification cryopreservation for valuable blueberry germplasm J Scientia Horticulturae 2017 219 60 69 5 苏艳 张艺萍 毕云 等 不同蓝莓基因型的组织培养技术 研究 J 西南农业学报 2013 26 6 2476 2480 6 朱宏芬 沈岚 黄坚 等 兔眼蓝莓 灿烂 组织培养与植 株再生研究 J 北方园艺 2012 19 105 107 7 李森 高丽霞 刘念 等 高丛越橘 奥尼尔 的组织培养 J 北方园艺 2016 9 102 105 8 于巧芝 赖钟雄 蓝莓组织培养技术研究进展 J 园艺与种 苗 2015 35 6 79 81 9 梁文卫 宋鹏慧 阎聪 等 美登蓝莓试管苗瓶内快速生根 试验 J 中国果树 2015 4 44 47 10 韩德伟 IBA对蓝莓组培苗瓶内生根的影响 J 江苏农业 科学 2013 41 7 38 40 11 李京 张妍妍 张建瑛 蓝莓组培苗瓶外生根技术的优化 J 林业科技 2013 38 5 4 6 12 黄国辉 姚平 蓝莓组培苗瓶外生根的研究 J 江苏农业 科学 2011 39 4 227 228 13 刘笑宏 李公存 沙玉芬 等 不同品种蓝莓花色苷及其抗 氧化活性分析 J 中国酿造 2020 39 2 120 124 上海农业科技 SHANGHAI AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY 2025 4 尿素5 kg 田间保持一定的墒情 在天气连续干旱 土壤含水量不足时 及时灌溉 但是水不能漫过畦 面 遇上连续阴雨天 及时排水 确保田间不积水 4 7 采 收 在定植后1个月即可采收塌菜 采收时 用刀切 断塌菜茎基部 并去掉老叶 黄叶 5 病虫害防治 5 1 农业防治 及时清除田间和周围的杂草 保持合理的种植 密度 5 2 物理防治 利用害虫的趋光性 于其羽化盛期在田间布置 频振式杀虫灯 每0 67 1 00 hm2设置1盏灯 5 3 生物防治 在7月 11月 在田块内放置针对甜菜夜蛾 斜 纹夜蛾的诱捕器及性诱剂 用于诱捕甜菜夜蛾 斜纹 夜蛾成虫 一般每0 13 0 20 hm2设置1个诱捕器 交替放置2种夜蛾诱捕器 在5月 6月 9月 10 月 每667 m2放置1个玉米螟性诱剂 放置高度宜 在玉米植株上方10 cm左右 5 4 化学防治 使用登记在作物上的农药进行化学防治 并严 格按照说明书的指导用量进行喷施 6 参考文献 1 顾晓雯 俞晓云 曹婷 等 奉贤区 鲜食玉米 结球甘蓝 结球甘蓝 高效茬口栽培模式 J 上海农业科技 2024 4 140 142 2 况慧云 卢媛 孙萍东 等 优质特色甜糯玉米新品种 黑 金699 的选育 J 上海农业学报 2023 39 5 72 76 3 陆方燕 徐莉莉 俞晓云 等 奉贤区特色糯玉米新品种引 进筛选试验初报 J 上海农业科技 2024 5 61 62 4 李丹 江健 张婉英 等 鲜食玉米 水稻 深翻高效茬口 栽培技术 J 上海农业科技 2017 3 132 134 5 叶建平 上海绿叶菜保险的探索与实践 C 2019中国蔬 菜产业大会 2019中国蔬菜产业大会论文集 银川 2019中 国蔬菜产业大会 2019 1 22 6 王敏权 夏季青菜栽培与病虫害防治技术 J 上海蔬菜 2017 2 23 24 上接第82页