7个品种草莓茎尖组培脱毒苗技术研究.pdf

青海农林科技 实用技术与科普 nullnullnullnull 年第 null 期 收稿日期 nullnullnullnull nullnull nullnullnull 基金项目 互助县农业科技园区绩效评优后补助项目 作者简介 沈 莉 nullnullnullnull null 女 硕士 互助县现代农业示范园区初级农艺师 主要研究方向 园艺 nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null null nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnull 7 个品种草莓茎尖组培脱毒苗技术研究 沈 莉 曹玉梅 互助县现代农业示范园区管委会 青海 互助 nullnullnullnullnullnull 摘 要 以青海互助地区主栽的 null 个不同品种草莓匍匐茎茎尖为外植体 利用 nullnull 基本培养基添加适宜 浓度的 null null nullnull nullnull null 或 nullnullnull 探索草莓茎尖组织培养获得脱毒苗的方法 结果表明 以草莓茎尖组织培养技术 培育出的草莓脱毒苗 幼苗移栽后生长 开花和结果正常 草莓茎尖分化培养基 nullnull null nullnull nullnullnullnullnull null null nullnull null nullnull nullnullnullnullnull nullnull null 适合 红颜 等 null 个品种茎尖生长 增殖培养基 nullnull null nullnull nullnullnullnullnull null null nullnull null nullnull nullnullnullnullnull nullnull null 适合草莓 红颜 通州公主 小白 京泉香 和 章姬 null 个品种幼苗增殖 增殖系数均在 null 以上 生根培养基 nullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnull 短期内各品种生根较快 但生根超过 nullnullnull 时幼苗根部生长异常 还需进一步试验找到适 宜培养基 关键词 草莓脱毒苗 组织培养 培养基 中图分类号 nullnullnullnullnull null 文献标识码 null 文章编号 nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnull nullnullnull Study on Virus nullfree Seedling Technology of Shoot Tip Tissue Culture of Seven Strawberry Varieties nullnullnullnull nullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull Abstract nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull null null nullnull nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull null nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull null nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnull null nullnull nullnullnull null nullnull null nullnull null nullnullnullnull nullnull null nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnull null nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnull null nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull null nullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull null nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull Key words nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull null nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull 草莓作为一种深受消费者喜爱的鲜果 其营 养价值高 富含维生素 null 有帮助消化的功能 国 家统计局数据显示 截至 nullnullnullnull 年我国草莓种植面 积为 nullnull nullnull null nullnull null nullnull null 同比增长 nullnull nullnullnull 草莓产量 达 nullnull nullnull null nullnull null null 同比增长 nullnull nullnullnull 其中山东 江 苏 辽宁三省在我国草莓产量中的占比近半 为 nullnullnull 是我国草莓主产区 null 近年来互助县草莓鲜果种植面积逐年增加 草莓鲜果平均公顷产量达 nullnullnull nullnull 纯收入 nullnull 万元 null nullnull null 以上 全县草莓鲜果产量 nullnullnullnull 产值 nullnullnull 万元 以上 null 但是 青海互助地区种草莓种植年限较 短 草莓作为一个新兴产业还未形成完整产业 nullnull 链 种苗的来源与草莓病毒病制约着产业发展 在已报道的草莓病毒中 危害最为严重的病毒有 草莓镶脉病毒 nullnullnullnull 草莓斑驳病毒 nullnullnullnull 草莓皱缩病毒 nullnullnull 草莓轻型黄边病毒 nullnullnullnull nullnull null 种 null 要想解决这个问题 自主培育草莓 脱毒苗是最有效的途径 前人提出草莓茎尖组织 培养技术是草莓脱除病毒的一种最经济有效的 途径 null 本试验为高寒地区利用茎尖组织培养 培育草莓脱毒苗提供了参考依据 1 试验材料与方法 1 1 试验材料 根据 nullnullnullnull nullnullnullnull 年互助县农业示范园区引 进草莓新品种在互助县威远镇 塘川镇 台子乡 等地的试种结果 选择其中生长性状良好 鲜果 口感佳的 白雪公主 章姬 红颜 甜查 理 通州公主 小白 和 京泉香 null 个草莓品 种 于 nullnullnullnull 年 null 月 null null 月采集匍匐茎用于茎尖 组培 1 2 试验方法 1 2 1 试验材料的采集 匍匐茎长出一周后即可采集 此时生长点明 显易辨别 选择生长健壮无病虫害侵染的草莓 匍匐茎 用灭菌剪刀剪取前端 null nullnullnullnull 长的茎段 置于无菌瓶中 即刻带回实验室 用自来水持续 冲淋 nullnullnullnullnull 以上 冲淋时瓶口包裹 null 层干净纱 布 用皮筋扎好瓶口 避免茎段溢出 1 2 2 试验材料的灭菌处理 将瓶装 nullnullnull 酒精 nullnull 次氯酸钠溶液 nullnull 双 氧水及瓶装茎段用 nullnullnull 酒精喷雾消毒后放入超 净工作台 进行茎段灭菌 灭菌顺序及时间为 nullnullnull酒精 nullnullnull null nullnull nullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnull null nullnull null null null null nullnullnull null 灭菌纯水清洗 null 至 null 遍 经试验证明污染 率控制在 nullnull 以内 实际操作过程中清洗时间长 短可视茎段幼嫩程度适当增减 1 2 3 茎尖诱导培养基的选择 将电子显微镜下剥出的大小约为 nullnull null null nullnull nullnullnull 的茎尖全部接种到 nullnull null nullnull nullnullnullnullnull null null nullnull null nullnull nullnullnullnullnull nullnull null 的试管装 培 养 基 中 nullnull null nullnull null nullnullnull null 每升培养基添加 nullnullnull 蔗糖和 nullnull 琼脂 nullnullnullnull灭菌 nullnullnullnullnull 配方根据前人试验结果适当调 整 null 每管培养基接种 null 个 避免相互污染 置 于温度 nullnull nullnull null 光照强度 nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnull 光照 时长 nullnull null nullnull nullnullnull 湿度 nullnullnull null nullnullnull 的条件下培 养 每个品种至少接种 nullnull 个 接种 nullnullnull 后观察各 品种茎尖成活分化情况 注 若操作不当 试管一般在进入培养室后 null nullnullnull出现污染 要及时移出培养室并进行灭菌 处理 减少污染源传播 茎尖剥离过程中有可能 会将叶原基误当做茎尖生长点 在接种一周左右 即能观察到叶片展开却无其他组织分化 及时剔 除即可 1 2 4 芽丛继代 茎尖生长约 nullnull null nullnullnull 后 发育良好的会长出 密集芽丛 待芽丛长至 null nullnullnullnull 进行继代 在灭菌 牛皮纸或培养皿上用解剖刀切开芽丛 接种到与 茎尖诱导一样的培养基中 null null null 丛 null瓶 置于适 宜条件下 一般与茎尖培养条件一致 培养 null 个 月左右 按需要生根或二次继代 一般继代次数 不超过 null 次 否则幼苗生长弱化 1 2 5 生根培养 对各品种组培苗按比例进行病毒抽检 一般 为 nullnull 抽检合格后准备生根 将组培苗在超净 工作台中转入生根培养基 本试验中选择 nullnull null nullnull nullnullnullnullnull nullnullnull nullnull null nullnull null null nullnull null 每升培养基添加 nullnullnull 蔗糖和 nullnull 琼脂 参考前人方法略有调整 null 在培养室培养 null 个月左右 环境条件与前期一 样 观察各品种幼苗根部生长情况 1 2 6 幼苗的炼苗与移栽 将幼苗连带培养瓶全部转移至提前消毒灭 菌过的温室中 前 nullnull 遮阴 少通风 之后每日增 加光照时长 逐渐打开培养瓶盖 使幼苗逐步适 应温室环境 炼苗约 null null nullnullnull 后 完全打开瓶盖 用清水冲洗干净幼苗根部培养基 移栽到 nullnull 孔 穴盘中 穴盘基质为不加任何底肥的草莓专用基 质 进行正常水肥管理 观察各品种生长情况 1 2 7 早期开花结果试验 穴盘移栽 null null null 月后 幼苗根部发育健壮 挑选植株生长正常 根系发达的健康母株 移栽 到花盆中 进行正常管理并观察记录开花 结果 等性状 从中挑选结果性状优良的原原种苗并标 记 后续可繁殖原种苗和生产苗 1 3 数据分析 试验数据采用 nullnullnullnullnull nullnullnullnull 以及 nullnullnullnull nullnullnull null 软 件进 行 统 计 分 析 各数据指标如下 成 活 率 null null 成活茎尖数 null接种茎尖总数 nullnullnullnullnull 生根率 null null 生根幼苗数 null接种幼苗总数 null nullnullnullnull 移栽成活率 null null 移栽幼苗成活数 null移 栽幼苗总数 nullnullnullnullnull 2 结果与分析 2 1 同一诱导培养基配方对不同草莓品种茎尖 分化的影响 生长 nullnullnull 左右统计茎尖分化情况 从表 null 可 nullnull 以看出 nullnull null nullnull nullnullnullnullnull null null nullnull null nullnull nullnullnullnullnull nullnull null 培 养基适合 红颜 甜查理 通州公主 和 小 白 null 个草莓品种茎尖生长 成活率超过 nullnullnull 但 不适合 京泉香 章姬 白雪公主 生长 后 期还需要对生长不良 null 个草莓品种茎尖适宜生 长培养基配方进行细致研究 表 null 同一培养基对不同品种草莓茎尖诱导分化的影响 序号 品种 茎尖接种数量 个 成活数量 个 成活率 null null 红颜 nullnullnullnull nullnullnull nullnullnull null null 甜查理 nullnullnull nullnullnull nullnullnull null null 通州公主 nullnull nullnull nullnullnull null null 小白 nullnullnullnull nullnullnull nullnullnull null null 京泉香 nullnullnull nullnull nullnullnull null null 章姬 nullnullnull nullnullnull nullnullnull null null 白雪公主 nullnullnull nullnullnull nullnullnull null 2 2 同一培养基配方对不同草莓品种幼苗增殖 的影响 茎尖生长 nullnullnull 左右达到增殖标准 经过外送 病毒检测后 无病毒的植株选用与接种培养基一 样的配方增殖 其中 白雪公主 茎尖数量少 长 势很差 放弃增殖 幼苗增殖后置于与茎尖培养 相同条件下培养 nullnullnull 左右观察幼苗生长情况 从表 null 可以看出 剩余 null 个品种草莓中 除甜查理 外增殖系数均在 null 以上 幼苗生长正常 表 null 草莓幼苗增殖情况统计表 序号 品种 增殖茎尖数量 个 增殖丛数 丛 增殖系数 生长情况 null 红颜 nullnullnull nullnullnullnull nullnull null null 甜查理 nullnull nullnullnull nullnull null null 通州公主 nullnull nullnullnull nullnullnull null null 小白 nullnullnull nullnullnullnull nullnull null 生长正常 null 京泉香 null nullnull nullnull null 章姬 null nullnull nullnullnull null 2 3 同一培养基配方对不同草莓品种幼苗生根 的影响 增殖 nullnullnull 左右 开始生根培养 采用 nullnull null nullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnull 蔗糖 nullnullnullnullnull 卡拉胶的瓶装 培养基 参考前人方法略有调整 null 每瓶接种 null 株 培养条件与增殖期相同 生根 nullnullnull 左右 观察各品 种生根情况 从表 null 可以看出 初期各品种植株生 长正常 生根速度较快 培养 nullnullnull 左右 幼苗根部 出现黑褐色瘤状物 根部生长异常 生根培养基配 方还需进一步调整和试验 表 null 草莓幼苗生根情况统计 序号 品种 生根丛数 丛 培养 nullnullnull 生根情况 培养 nullnullnull 生根情况 null 红颜 nullnullnullnull 根长 nullnull nullnullnull 根 null nullnull 条 正常 null 甜查理 nullnullnull 根长 nullnull nullnullnull 根 null nullnull 条 正常 null 通州公主 nullnullnull 根长 nullnull nullnullnull 根 null nullnull 条 正常 根部均出现黑褐色团状 null 小白 nullnullnullnull 根长 nullnull nullnullnull 根 null nullnull 条 正常 结构 生长异常 null 京泉香 nullnull 根长 nullnull nullnullnull 根 null nullnull 条 正常 null 章姬 nullnull 根长 nullnull nullnullnull 根 null nullnull 条 正常 nullnull 2 4 幼苗炼苗与移栽 生根 nullnullnull 后应准备炼苗移栽 本试验中由于 移栽场地限制 幼苗生根培养后一直在组培室培 养 null 个月 nullnullnullnull 年 null 月 null 日 nullnull 月 null 日连带培养 瓶转移到园区连栋温室进行炼苗 前 nullnull 采取遮 阴措施 室内温度保持在 nullnullnull左右 nullnullnullnull 年 null 月 null 日全部移栽到 nullnull 孔穴盘中 穴盘基质为无底肥 草莓专用基质 移栽后进行正常管理 其中 京 泉香株数过少 补做后续结果试验 从表 null 可以 看出 不添加底肥的草莓专用基质适合幼苗的生 长 成活率均在 nullnullnull以上 表 null 幼苗移栽后成活率 序号 品种 幼苗移栽株数 株 成活株数 株 成活率 null null 红颜 nullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull null null 甜查理 nullnullnull nullnullnull nullnullnull null null 通州公主 nullnullnull nullnullnull nullnullnull null null 小白 nullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull null null 章姬 nullnull nullnull nullnullnull 2 5 幼苗花芽分化检测 移栽约 null 个月后 待幼苗根系发达 植株生 长良好时 抽样检测花芽分化情况 每个品种随 机取样 nullnull 株 带回实验室在电子显微镜下观察 是否有花芽 从表 null 可以看出 各品种幼苗花芽 分化比例差异较大 同一取样时间下 甜查理 小白 通州公主 花芽分化比例较高 章姬 花芽分化比例最小 表 null 草莓幼苗花芽分化情况统计表 序号 品种 取样时间 取样数 花芽分化比例 null 红颜 nullnullnullnull 年 null 月 null 日 nullnull nullnullnullnull null 甜查理 nullnullnullnull 年 null 月 null 日 nullnull nullnullnullnull null 通州公主 nullnullnullnull 年 null 月 null 日 nullnull nullnullnullnull null 小白 nullnullnullnull 年 null 月 null 日 nullnull nullnullnullnullnull null 章姬 nullnullnullnull 年 null 月 null 日 nullnull nullnullnullnull 2 6 开花结果研究 花芽分化检测完成 将穴盘苗移栽到花盆中 进行开花结果试验 每盆种植一株 避免根部病 害的相互传染 并且有利于优势植株的选择与标 记 原原种苗种植后 连续观察各品种开花 结 果情况 具体定植和开花时间见表 null 可以看出原 原种苗种植后 陆续开花结果 畸形果很少 果实 口感佳 植株生长正常 表 null 原原种苗开花时间统计表 序号 品种 定植时间 开花时间 null 红颜 nullnullnullnull 年 null 月 null 日 nullnull 月 nullnull 日 null 甜查理 nullnullnullnull 年 null 月 null 日 nullnull 月 nullnull 日 null 通州公主 nullnullnullnull 年 null 月 null 日 nullnull 月 nullnull 日 null 小白 nullnullnullnull 年 null 月 null 日 nullnull 月 nullnull 日 null 章姬 nullnullnullnull 年 null 月 nullnull 日 nullnull 月 nullnull 日 3 结论与讨论 试验结果表明 在同一茎尖诱导培养基中 不同品种草莓茎尖成活情况差异较大 nullnull 添加 nullnull nullnullnullnullnullnull null nullnull 和 nullnull nullnullnullnullnullnullnull null 适合 红颜 甜 查理 通州公主 和 小白 茎尖诱导 说明浓 度适宜的 null null nullnull 和 nullnull null 可促进草莓茎尖的诱导 分化 前人对 红颜 草莓的茎尖组培研究结果也 表明 null null nullnull 主要影响草莓的茎尖增殖 nullnull nullnull null 和活性炭影响其生长 null 但是 京泉香 章姬 和 白雪公主 茎尖分化率低 说明不同草莓品种 茎尖分化所需生长调节剂种类和浓度不同 前 人试验结果指出培养基 nullnull null nullnull nullnullnullnullnull null null nullnull null nullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnull 适宜 红颜 章姬 草莓茎尖分 化 null nullnull nullnullnull nullnullnullnullnull null null nullnull 适宜 甜查理 草莓 茎尖诱导 null 剥离的茎尖大小也可能影响到茎尖的诱导 成活情况 前人试验证明 接种 nullnull null nullnullnull nullnullnull 的草 莓茎尖都可以诱导出苗 但是茎尖的大小对草莓 nullnull 组培苗的成活率和脱毒率影响比较大 当茎尖小 于 nullnull nullnullnull 时 诱导绿色植株的时间比较长 需要 nullnullnull 脱毒率可以达到 nullnullnull nullnull 但是成活率仅有 nullnullnull nullnull 当茎尖大小在 nullnull null null nullnull nullnullnull 时 成活率 和脱毒率分别为 nullnullnull nullnull 和 nullnullnull nullnull nullnull 本试验 中 白雪公主茎尖存活率低可能与剥离茎尖过小 和培养基配方不适宜两个原因均有关系 在试验中发现 nullnull 添加 nullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnull 有利 于草莓组培幼苗的快速生根 但是培养时间超过 nullnullnull 根部异常 说明该培养基不适宜幼苗的长期 生长 而前人试验采用 nullnullnull nullnull 添 加 nullnull null 或 nullnull nullnullnullnullnull nullnullnull 红颜 草莓根系较长且粗壮 nullnull 这说明在组培苗生根阶段培养基中过多的基本 元素可能会影响根部的正常生长 在幼苗生根培养阶段发现 大多数幼苗在培 育 nullnullnull 左右会出现叶片发黄的症状 适当调整 组培室温度到 nullnullnull左右 叶片全部转绿 恢复正 常生长 说明草莓组培苗在培养后期需要保持 较低的环境温度 温度过高容易使幼苗失水发 黄 参考文献 null 王鸣谦 薛莉 赵珺 等 null 世界草莓生产及贸易现状 null null 中国果树 nullnullnullnull null nullnullnull nullnullnullnullnull null 王琳娜 祁妙 null 青海互助 打造全国最大高原草莓种 苗繁育中心 null null 中国新闻网 nullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnull null 李志强 王晶 丁国亮 等 null 草莓热处理结合茎尖脱毒 技术研究 null null 北方园艺 null nullnullnullnull null nullnullnull nullnullnullnullnull null 花秀凤 陈铣 null 草莓茎尖组培脱毒实用技术探讨 null null 福建农业科技 nullnullnullnull null nullnull null 花秀凤 陈铣 许玲 null 草莓茎尖组培脱毒和种苗三级繁 育体系的建立 null null 福建果树 nullnullnullnull null nullnull null 聂园军 李瑞珍 张春芬 等 null 草莓茎尖脱毒技术研究 null null 黑龙江农业科学 nu