6种杀菌剂对2种草莓炭疽病菌室内毒力测定.pdf

唐冬兰 唐 泉 蒋立奔 等 null null 种杀菌剂对 null 种草莓炭疽病菌室内毒力测定 null null 江苏农业科学 nullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null 种杀菌剂对 null 种草莓炭疽病菌室内毒力测定 唐冬兰 唐 泉 蒋立奔 宋芹芹 曹荣祥 江苏丘陵地区南京农业科学研究所 江苏南京 nullnullnullnullnullnull 摘要 从江苏省南京地区草莓病株上分离的 null 株炭疽病致病菌 经多基因系统发育分析 确定为胶孢炭疽复合种 中的暹罗炭疽菌和果生刺盘孢 为筛选有效防治草莓炭疽病药剂 测定了 null 种杀菌剂对这 null 个菌株菌丝生长和分生 孢子萌发的抑制活性 结果表明 不同杀菌剂对 null 种炭疽病菌的抑制效果不同 各杀菌剂在试验浓度下对 null 种菌的菌 丝生长和分生孢子萌发均有不同程度地抑制作用 相对抑制率与药剂浓度呈正相关 根据对病原菌菌丝生长和分生 孢子萌发抑制效果的综合表现 nullnullnull肟菌 戊唑醇和 nullnullnull苯醚甲环唑的 nullnull nullnull 值在供试药剂中是相对较小的 在推荐 使用浓度下对 null 种病菌相对抑制率均可达 nullnullnull以上 可作为南京地区草莓炭疽病防治候选药剂 关键词 草莓 炭疽病 多基因序列分析 杀菌剂 室内毒力测定 抑制作用 中图分类号 nullnullnullnullnullnullnull null null 文献标志码 null 文章编号 nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnull nullnullnull 收稿日期 nullnullnullnull nullnullnull nullnullnull 基金项目 江苏省农业科技自主创新资金 编号 nullnull nullnull nullnullnullnull 亚夫 科技服务项目 编号 nullnull nullnull nullnullnullnull 江苏现代农业产业技术体系 建设项目 编号 nullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull 作者简介 唐冬兰 nullnullnullnull 女 江苏淮安人 博士 助理研究员 主要 从事果树病理学及生物技术研究 null null nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull 通信作者 曹荣祥 副研究员 主要从事草莓栽培与生理研究 null null nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnull 草莓 Fragaria null ananassa nullnullnullnullnull 为蔷薇科 nullnullnullnullnullnullnullnull 草莓属 Fragaria 多年生草本植物 因 其独特的风味深受消费者欢迎 近年来 我国草莓 产业发展迅速 为主产区带来巨大的经济效益和社 会效益 但由于品种单一 连作及病菌抗药性等 病害问题日益突出 炭疽病是草莓生产中最具威胁性的病害之一 草莓整个生长期均可受此病危害 尤以育苗期和促 成栽培前期发病最重 最严重时 病菌直接侵染根 颈 可导致整个植株萎蔫死亡 null 目前药剂防治仍 是生产上该病最常用且最有效的方法 但国内外 研究表明 不同地区发生为害的炭疽病菌种类不尽 相同 null nullnull 常见的有胶孢炭疽菌 Colletotrichum gloeosporioides nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnull 尖孢炭疽菌 C acutatum nullnullnullnullnullnullnullnull 草莓炭疽菌 C fragariae nullnullnullnullnullnullnull 和 束 状 炭 疽 菌 C dematium nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull 其中胶孢炭疽菌被鉴定为多地草莓炭疽病 的优势种群 null nullnull 事实上 胶孢炭疽菌是包含多个 隐存种的复合种 null 但不同隐存种对不同药剂的敏 感性差异目前尚未见报道 另一方面 随着杀菌剂 使用频率与剂量的不断增加 草莓炭疽病病原菌已 对多种杀菌剂产生抗药性 有研究表明 杭州市草 莓炭疽病致病菌已存在高比例的多菌灵和乙霉威 双抗菌系 null 林婷对浙江省不同地区的草莓炭疽病 菌菌株进行室内毒力测定发现 供试 nullnull 个菌株中有 nullnull 个对甲基硫菌灵表现出高水平抗药性 null 本研究对从南京地区草莓炭疽病病株上分离 的 null 株致病菌 采用多基因系统发育分析进行分子 物种鉴定 并选择 null 种生产上常用且相对低毒低残 留的杀菌剂 比较其对 null 种草莓炭疽病菌的菌丝生 长和分生孢子萌发的室内抑菌活性 以期筛选出适 用于南京地区草莓炭疽病防治的药剂 从而延缓抗 药性的产生 提高药剂使用的针对性 为生产上有 效防治草莓炭疽病提供参考 1 材料与方法 nullnullnull 供试菌株 本研究所用 null 株草莓炭疽病菌 nullnull null null null null 和 nullnull nullnull nullnull 于 nullnullnullnull 年 null 月从江苏省南京市设施栽 培的草莓炭疽病发病植株上采用组织分离法获得 按照科赫氏法则验证致病性后 菌株于 null null下保存 于马铃薯葡萄糖琼脂 nullnullnull 培养基斜面上备用 nullnullnull 菌株分子物种鉴定 挑取适量保存的菌种接入 nullnullnull 液体培养基中 nullnull null nullnullnull nullnullnullnullnull 条件下 振荡培养 null null null null 经无菌 纱布过滤去除液体培养基 再用无菌水清洗 null null null nullnullnull 江苏农业科学 nullnullnullnull 年第 nullnull 卷第 nullnull 期 次 将得到的菌丝用无菌滤纸吸干水分 取适量菌 丝 加液氮研磨成粉末 用基因组提取试剂盒 nullnullnullnullnull 天根生化科技 北京 有限公司 提取基因 组总 nullnullnull 利用文献中报道的引物扩增各菌株的 nullnullnull 区 肌 动 蛋 白 nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull 钙 调 蛋 白 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull 和 null null 微管蛋白 null null nullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull 片段 null nullnullnull 反应总体积 nullnull nullnull 内含 nullnullnullnull nullnull null null nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnull 康为世纪生物科技有 限公司 引物各 nullnullnull nullnullnullnullnullnull 模板 nullnullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnullnull 扩增程序 nullnull null预变性 null nullnullnull nullnull null 变性 nullnull null 退火 nullnull null 不同引物退火温度见表 null nullnull null 延伸 nullnull null nullnull 次循环 nullnull null 延伸 nullnull nullnullnull nullnullnull 反应结束 后 取 null nullnull 扩增产物用 nullnull琼脂糖凝胶进行电泳检 测 对确定有目的条带的 nullnullnull 产物送样测序 测序 工作交由南京擎科生物科技有限公司完成 表 1 本研究中所用引物序列及其来源 基因类型 引物名 方向 序列 nullnullnullnullnull 退火温度 null 文献来源 nullnullnull nullnullnullnull 正向 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnullnull 反向 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull 正向 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnullnullnullnull 反向 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnullnullnull 正向 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnullnull 反向 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnullnull nullnull 正向 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnullnull 反向 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull 使用 nullnullnullnullnullnullnull 软件包中的 nullnullnullnullnullnull 序列拼接软 件进行序列拼接 从 nullnullnullnullnullnullnull 数据库中下载相关 序列 表 null 主要是炭疽菌属的序列 将各菌株的 nullnullnull 片段按 nullnullnull null nullnullnull null nullnullnull null nullnullnullnull 的顺序首尾相 连 在 nullnullnullnull nullnullnull 软件中 对序列进行 nullnullnullnullnullnullnull null 比 对 然后进行 nullnullnullnullnull nullnullnullnull 分析选出最优碱基替换模 型 再用最大似然法构建多基因系统发育树 并进 行重复 null nullnullnull 次的自展分析 nullnull nullnullnull 供试药剂 共 null 种供试药剂 分别为 nullnullnull nullnullnull 吡唑醚菌酯 乳油 巴斯夫植物保护 江苏 有限公司 nullnullnull nullnullnull 咪鲜胺水乳剂 苏州富美实植物保护剂有限公司 nullnullnull 肟菌 戊唑醇水分散粒剂 德国拜耳股份公 司 nullnullnull苯醚甲环唑水分散粒剂 先正达南通作物 保护有限公司 nullnullnull代森锰锌可湿性粉剂 陶氏益 农农业科技 中国 有限公司 nullnullnull 丙森锌可湿性 粉剂 德国拜耳股份公司 各药剂均用无菌水配 制成 nullnull nullnullnull nullnullnullnullnull 母液 根据供试药剂的使用说 明 以推荐的最高使用浓度为初始浓度 逐步稀释 成 null 个浓度梯度开展试验 表 null nullnullnull 不同药剂对病菌菌丝生长的影响 不同药剂对 null 个菌株菌丝生长的影响采用菌丝 生长速率法 nullnull 进行测定 方法为将保存的菌种在 nullnullnull 培养基上培养 null null null null nullnull null 待菌落长到合 适大小时 用无菌打孔器在菌落边缘切出直径 null nullnull 的菌块 然后将菌块转入含不同浓度药剂的 nullnullnull 培 养基上 nullnull null培养 null nullnull null 每个处理重复 null 次 含 药培养基的制作为将上述 null 种药剂的母液依次稀释 成一系列浓度 使稀释后的浓度为试验浓度的 nullnull 倍 再将 null nullnull 药液与 nullnull nullnull 熔化的 nullnullnull 培养基混 匀 分装到 null nullnull 个无菌培养皿中 以无菌水作空白 对照 nullnull 待对照菌落快长满培养皿时 进行统 计 采用十字交叉法测量各药剂不同浓度下的菌落 直径 取平均值 菌丝生长抑制率 null 对照菌落直 径 null 药剂处理菌落直径 null 对照菌落直径 null 菌饼直 径 nullnullnullnullnull nullnullnull 不同药剂对病菌分生孢子萌发的影响 采用凹玻片法测定不同药剂对 null 种病菌分生孢 子萌发的影响 nullnull 将保存的菌种 挑取适量接入 nullnullnull nullnull nullnullnull 液体培养基中 nullnull null nullnullnull nullnullnullnullnull 振荡 培养 null nullnull null 经无菌纱布过滤去除菌丝 将得到的孢 子液在 null nullnullnull nullnullnullnullnull 下离心 nullnull nullnullnull 去除上清液后用 无菌水重悬浮 再离心 重复 null null null 次 进行镜检 计 数 稀释 将孢子悬浮液的浓度调整至 null null nullnull null 个孢 子 nullnullnull 再用无菌水清洗 null null null 次 将上述 null 种药剂 的母液依次稀释成一系列浓度 使稀释后的浓度为 试验浓度的 null 倍 配制 nullnull nullnull 葡萄糖溶液 灭菌 将 nullnullnullnull葡萄糖溶液 菌悬液和药液按体积比 null null null null null nullnullnull 江苏农业科学 nullnullnullnull 年第 nullnull 卷第 nullnull 期 表 2 本研究中所用菌株序列信息 种名 菌株编号 nullnullnullnullnullnullnull 登录号 nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnull 隐秘刺盘孢 C aenigma nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C aeschynomenes nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C alatae nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C alienum nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 奥特阿罗刺盘孢菌 C aotearoa nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 亚洲刺盘孢 C asianum nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C beeveri nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 博宁炭疽菌 C boninense nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C brasiliense nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C clidemiae nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C cordylinicola nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C cymbidiicola nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 黑生刺盘孢 C fructicola nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C gigasporum nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 胶孢炭疽菌 C gloeosporioides nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 哈锐炭疽菌 C horii nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C hippeastri nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 卡哈瓦刺盘孢 C kahawae nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C karstii nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 香蕉炭疽菌 C musae nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C nupharicola nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C psidii nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C pseudomajus nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C queenslandicum nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C radicis nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C salsolae nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 暹罗炭疽菌 C siamense nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C theobromicola nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 热带炭疽菌 C tropicale nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull C xanthorrhoeae nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 混匀 以无菌水作空白对照 nullnull 滴在双孔凹玻片 上 置于 nullnull null 保湿培养 当对照孢子萌发率达到 nullnullnull以上时 判断孢子萌发标准为芽冠长度超过孢 子最大直径长度 nullnullnull 对各处理进行拍照 统计不 同浓度下的孢子萌发率 并计算孢子萌发抑制率 孢子萌发抑制率 null 对照孢子萌发数 null 处理孢子萌 发数 null对照孢子萌发数 nullnullnullnullnull nullnullnull 数据分析 利用 nullnullnull nullnull null 软件对数据进行处理分析 求出 毒力回归方程 计算各供试药剂的相关系数 r 和 抑制中浓度 nullnull nullnull 值 分析比较不同杀菌剂对 null 种草 莓炭疽病菌菌丝生长和分生孢子萌发的抑制作用 2 结果与分析 nullnullnull 病原菌的多基因分子分析与鉴定 对分离纯化后 经致病性鉴定确定为草莓炭疽 病致病菌的 null 个菌株的 nullnullnull nullnullnullnull nullnullnull 和 nullnullnull 序 列进行测序 菌株 nullnull null null null null 得到的 null 个片段长度 分别为 nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnull 菌株 nullnull null null null null 的 null 个片段长度分别为 nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnull 通过 nullnullnullnull nullnullnull 构建的 nullnullnull null nullnullnullnull null nullnullnull null nullnullnull 多基因 系统发育树 图 null 可以看出 nullnull nullnull nullnull 和 nullnull nullnull null nullnullnull 江苏农业科学 nullnullnullnull 年第 nullnull 卷第 nullnull 期 null 分别与已登录的暹罗炭疽菌 C siamense nullnullnullnullnullnullnullnullnull 和 果 生 刺 盘 孢 C fructicola nullnullnullnullnullnullnullnullnull 聚在一起 支持率分别为 nullnullnull nullnullnull 结合形态特征 将供试菌株分别鉴定为胶孢炭疽复 合种中的暹罗炭疽菌和果生刺盘孢 nullnullnull 不同药剂对暹罗炭疽菌菌丝生长的抑制作用 由表 null 可以看出 在各供试药剂所设定的浓度 范围内 暹罗炭疽菌的菌丝生长均受到不同程度的 抑制 与药剂浓度呈正相关 相对抑制率在 nullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull 代 森 锰 锌 null nullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull苯醚甲环唑 之间 不同杀菌 剂在推荐使用浓度下 nullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull 苯醚甲环 唑的相对抑制率最高 nullnullnull nullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull 肟 菌 戊唑醇表现次之 nullnullnull nullnullnull null nullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull代森锰锌相对抑制率最低 nullnullnull nullnullnull 毒力分 析结果 表 null 表明 null 种杀菌剂对暹罗炭疽菌的 nullnull nullnull 值从低到高依次为 nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnull nullnullnull肟菌 戊 唑 醇 nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnull 咪 鲜 胺 nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnull nullnullnull苯醚甲环唑 nullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnu