不同基质对桑黄菌丝生长及酶活性的影响.pdf

北 null 方 null 园 null 艺 nullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 食 用 菌 第一作者简介 王鑫淼 nullnullnullnull null 女 硕士研究生 研究方向 为生物学 null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull 责任作者 王丽艳 nullnullnullnull null 女 博士 副教授 现主要从事 食用菌资源开发与利用等研究工作 null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 基金项目 内蒙古自治区科技创新引导资助项目 nullnullnullnull 黑龙江省大学生创新创业资助项目 nullnullnullnullnullnull 国家自然科学基金面上资助项目 nullnullnullnull 收稿日期 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 不同基质对桑黄菌丝生长及酶活性的影响 王 鑫 淼 荆 瑞 勇 吴 null 楠 闫 null 权 李 喜 梅 王 丽 艳 黑龙江八一农垦大学 生命科学技术学院 黑龙江 大庆 nullnullnullnullnullnull nullnull 摘 null 要 以桑黄为试材 利用粗木屑 细木屑 小麦秸秆 花生秸秆 玉米秸秆 油菜秸秆 和大豆秸秆 null 种主料对桑黄进行培养 采用单纯型格子法进行混料设计 筛选以粗木屑 油 菜秸秆和大豆秸秆为主料的配方 对菌丝生长速率 漆酶 多酚氧化酶 纤维素酶 半纤维素 酶以及酸性蛋白酶活性进行了测定 分析胞外酶活性与菌丝生长速率之间的相关性 优化适 合桑黄生长的配方 以期为桑黄培养配方的筛选提供参考依据 结果表明 不同基质对各胞 外酶活性大小有不同的影响 且酶活性大小与菌丝生长速率之间的偶联性较差 优化得出 适合桑黄生长的配方为粗木屑 nullnullnullnullnull 油菜秸秆 nullnullnullnullnull 大豆秸秆 nullnullnullnullnull 麦麸 nullnullnull 蔗糖 nullnull 碳酸钙 nullnull 关键词 桑黄 农作物秸秆 单纯型格子法 酶活测定 中图分类号 nullnullnullnullnullnullnullnullnull 文献标识码 nullnull 文章编号 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull 桑黄 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 属大型多孔菌 null 是 一种珍贵的药食两用真菌 富含多种活性成分 具 有抗肿瘤 抗炎 调节免疫等作用 null 药用价值较 高 在抗癌治疗中被广泛应用 许多研究证明桑黄 作为癌症的辅助用药 应用前景广阔 null 然而 桑 黄在自然环境下生长周期较长 产量较少 难以满 足市场的需求 null 因此 对于桑黄栽培基质的研究 意义重大 目前 利用秸秆对食用菌进行栽培已 成为研究热点 它来源广 产量大 种类多 价格低 廉且营养丰富 null 是栽培食用菌的理想原料 null 秸秆应用于食用菌生产推动了食用菌产业的快速 发展 nullnull 进而提高了它在真菌界的二次利用 nullnull 然而不同秸秆用于栽培食用菌前仍需优化配方才 能得以大面积应用 该研究利用混料设计方法对初筛得到的粗木 屑 油菜秸秆和大豆秸秆 null 种主料进行主料配方 设计 测定桑黄在营养生长阶段的菌丝生长速率 及相关胞外酶活性等评价指标 比较各胞外酶活 性与菌丝生长速率的相关性 以期优化得出适合 桑黄菌丝生长的配方 为快速高效生产桑黄菌包 提供参考依据 nullnull 材料与方法 nullnullnullnull 试验材料 nullnullnullnullnullnull 供试菌株 供试食用菌品种为桑黄 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 编 号 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 由黑龙江八一农垦大学生命科 学技术学院食用菌实验室提供 nullnullnullnullnullnull 供试材料 新鲜无霉变的粗木屑 细木屑 小麦秸秆 花 生秸秆 玉米秸秆 油菜秸秆 大豆秸秆 麦麸 蔗 糖 碳酸钙均采用分析纯试剂 均由黑龙江八一农 垦大学生命科学技术学院食用菌实验室提供 nullnullnullnullnullnull 供试仪器 nullnullnullnullnullnullnullnull 超净工作台 北京东联哈尔仪器 制造有限公司 nullnullnullnullnullnullnull 培养箱 北京东联哈尔 仪器制造有限公司 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 多功能酶 标仪 北 京 龙 跃 生 物 科 技 发 展 有 限 公 司 nullnullnullnullnullnullnull 电 子 天 平 奥 豪 斯 仪 器 常 州 有 限 公司 nullnullnullnull 试验方法 nullnullnullnullnullnull 初筛培养基制备 培养基配方 主料 nullnullnull 麦麸 nullnullnull 碳酸钙 nullnull 蔗糖 nullnull 分别称取 null 种主料各 nullnullnull 主料 分别为粗木屑 细木屑 小麦秸秆 花生秸秆 玉米 秸秆 油菜秸秆 大豆秸秆 其它辅料成分不变 等 量分 装 至 null 个 平 板 nullnullnullnull 中 含 水 量 nullnullnull nullnullnullnull 高压灭菌 nullnull 冷却至室温备用 nullnullnullnullnullnull 粗酶液提取 待菌丝长满平板后取基质 nullnull 适当研磨后移 入 nullnullnullnull 离心管中 加入纯净水 nullnullnullnull 于 nullnullnull 水浴 锅 中 浸 提 nullnull 后 过 滤 取 滤 液 定 容 至 nullnullnullnull 即为粗酶液 用 nullnullnull 离心管分装 保存于 nullnullnullnull 备用 nullnullnullnullnullnull 酶活测定 用酶活性测定试剂盒 苏州格瑞思生物科技 有限公司 测定多酚氧化酶 漆酶 半纤维素酶 纤 维素酶 酸 性 蛋 白 酶 null 种 酶 活 性 分 别 在 nullnullnull nullnullnullnullnull 和 nullnullnullnullnull 处测定 nullnull 值 并根据说明书 所提供的公式计算酶活性 nullnullnullnullnullnull 混合设计配方 运用混料设计方法 nullnullnullnullnullnullnull 中的单纯型格 子法 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 来限制主料成分的 上下界 nullnull 从而进行比例设计 利用 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 软件对主料中各成分的比例进行优 化设 计 具 体 配 比 见 表 null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull 其中 nullnull 为粗木屑 nullnull 为油菜秸秆 nullnull 为大豆秸秆 nullnullnullnull 项目测定 测定桑黄生长时期的菌丝生长速率 多酚氧 化酶 漆酶 半纤维素酶 纤维素酶 酸性蛋白酶活 性 null 个评价指标 菌丝生长速率采用 nullnullnullnull 的 培养皿测定 接种块直径为 nullnullnull 菌丝生长速 nullnullnullnullnullnull 表 null null 培养基配方设计 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null 配方 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 栽培基质配比 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnull null nullnullnullnull nullnull null null nullnull nullnullnullnull null null nullnull nullnull nullnullnull null nullnullnull nullnullnull null null nullnullnull nullnull nullnull null nullnull nullnullnull nullnull null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull 率 nullnull null nullnull null 第 nullnull 天所测菌落直径 null 接种 块直径 nullnull nullnull null 种胞外酶活性根据试剂盒说 明书所提供的公式计算测定 nullnullnullnull 数据分析 采用 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 软件统计试验数据 采用 nullnullnullnullnullnullnullnullnull 软件进行数据相关性 nullnullnullnullnullnullnull 分析 采用 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 软件对主料中各成 分的比例进行优化设计 nullnull 注 不同小写字母表示处理间差异显著 null nullnullnullnullnull 下同 nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 图 null null 初筛配方桑黄菌丝生长速率差异显著性分析 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull 结果与分析 nullnullnullnull 桑黄培养主料的筛选 由图 null 可知 不同主料培养的桑黄菌丝生长 速率之间存在显著性差异 nullnullnullnullnullnull 粗木屑基 nullnullnull 北 null 方 null 园 null 艺 nullnullnullnullnullnull null 月 上 null 质的菌丝生长速率为 nullnullnullnullnullnull null nullnull 显著高于 花生秸秆 玉米秸秆 小麦秸秆基质 其次为油菜 秸 秆 和 大 豆 秸 秆 菌丝生长速率分别为 nullnullnullnullnullnull null nullnull 和 nullnullnullnullnullnull null nullnull 小麦秸秆基质 的菌丝生长速率最小 为 nullnullnullnullnullnull null nullnull 以此作 为依据 筛选出粗木屑 油菜秸秆 大豆秸秆 null 种 优势主料 进行下一步配方优化试验 nullnullnullnull 不同主料对桑黄菌丝生长速率的影响 根据 nullnull 种配方的平板培养试验 表 null 将测 得菌丝生长速率做差异显著性分析 由图 null 可 知 不同配方培养的桑黄菌丝生长速率之间存在 显著性差异 nullnullnullnullnullnull null 配方的菌丝生长速率 为 nullnullnullnullnullnull null nullnull 显著高于其它配方 其次是 null null null null 和 null 配方 其中 null 和 null 配方菌丝生长 速率分别为 nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null nullnull null 配方的菌 丝生长速率最小 为 nullnullnullnullnullnull null nullnull 图 null nullnullnull 个配方菌丝生长速率差异显著性分析 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull 不同主料对桑黄相关胞外酶活性的影响 nullnullnullnullnullnull 桑黄不同主料培养条件下胞外酶活性的 变化 nullnull 食用菌产生的酶主要为胞外酶 它有利于菌 体将原料中的物质进行分解 把大分子物质转化 成小分子物质 然后用于菌体的消化 吸收和利 用 为自身生长发育提供营养 nullnull 通过对多酚氧 化酶 漆酶 半纤维素酶 纤维素酶和酸性蛋白酶 null 种胞外酶活性进行回归分析 结果表明 null 种胞 外酶在桑黄培养过程中发挥着不同的作用 由表 null 可知 多酚氧化酶在 null 培养基活性最 高 且 null null 与 null 培养基的多酚氧化酶活性处于同 一显著水平 漆酶在 null 培养基上具有较高的活 性 说明培养在该种培养基上的桑黄对木质素的 降解能力较强 在食用菌生长发育过程中 半纤 维素酶和纤维素酶的变化趋势相似 nullnull 从表 null 还 可以看出 null 种酶均在 null 培养基上活性最高 达到 nullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull 和 nullnullnullnullnullnull nullnull nullnull 且在 null 和 null 培养基上 null 种酶的活性处于同一显著水平 在 null 培 养 基 上 酸 性 蛋 白 酶 活 性 最 高 达 到 nullnullnullnullnull nullnull nullnull null nullnullnullnullnullnull 桑黄胞外酶活性与各主料之间的回归模 型方程分析 由表 null 可知 null 种胞外酶的回归模型的 null 值 均小于 nullnullnullnull 且失拟项不显著 表明 null 种胞外酶 与各主料之间的回归方程拟合较好 方程的自变 量系数 null 反映了方程中自变量的影响程度 由 null 种胞外酶活性与各主料之间的回归方程可知 各主料对多酚氧化酶和漆酶活性贡献程度依次为 nullnull 大豆秸秆 nullnullnull 油菜秸秆 nullnullnull 粗木屑 各主料对纤维素酶和半纤维素酶活性的贡献程度 依次为 nullnull 油菜秸秆 nullnullnull 大豆秸秆 nullnullnull 粗 木屑 各主料对酸性蛋白酶活性的贡献程度依次 为 nullnull 大豆秸秆 nullnullnull 粗木屑 nullnullnull 油菜秸 秆 因此 不同基质对各胞外酶活性的贡献程度 不同 基质对酶活性也有着重要的影响 nullnullnullnull 菌丝生长速率与胞外酶活性的相关性分析 由表 null 可知 菌丝生长速率与多酚氧化酶 半 纤维素酶和纤维素酶 null 种胞外酶活性的相关系数 均为负值 分别为 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull 和 nullnullnullnullnullnull 三者在 nullnullnullnullnullnull 水平呈极显著负相关 漆酶活 性与酸性蛋白酶活性 null 种胞外酶之间的相关系数 较小 为 nullnullnullnullnull 且在 nullnullnullnullnullnull 水平上呈显著正相 关 漆酶活性与半纤维素酶活性和纤维素酶活性 在 nullnullnullnullnullnull 水平上呈极显著负相关 相关系数均 为负数 分别为 nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull 纤维素酶活性 与半纤维素酶活性在 nullnullnullnullnullnull 水平上呈极显著 正相关 相关系数较高 为 nullnullnullnullnull nullnullnullnull 配方预测 根据各评价指数之间的相关性 设定各组分 的期望值 运用 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 软件设置 目标响应值并进行回归方程分析见表 nullnullnull 最终 优化得出适合桑黄菌丝体生长的配方 其组分为 粗木 屑 nullnullnullnullnull 油 菜 秸 秆 nullnullnullnullnull 大 豆 秸 秆 nullnullnullnullnull 麦麸 nullnullnull 蔗糖 nullnull 碳酸钙 nullnull nullnullnullnull 第 null期 nullnullnullnullnullnullnull 北 null 方 null 园 null 艺 表 null null 不同胞外酶活性比较 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnull nullnull 配方 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 多酚氧化酶活性 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 漆酶活性 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 半纤维素酶活性 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 纤维素酶活性 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 酸性蛋白酶活性 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull 注 不同小写字母代表差异显著 null nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 表 null null 胞外酶活性与各主料之间的回归模型方程分析 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 酶 nullnullnullnullnullnull 回归方程 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null值 nullnullnullnullnullnull 失拟项 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 多酚氧化酶 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null null nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull 漆酶 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null null nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull 纤维素酶 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull