黑木耳液体菌种培养基配方及培养条件优化.pdf

O k 中国食用菌 B O H Q 黑木耳液体菌种培养基配方及培养条件优化 盛立柱 叶松梅 叶晓菊 何建芬 文冬华 孙孔兰 林火松 龙泉市食药用菌产业办公室 浙江 龙泉 浙江双益菇业有限公司 浙江 龙泉 摘要 为探讨黑木耳液体菌种最佳培养基配方及最佳培养条件 以黑木耳品种 黑山 为材料开展研究 采用 单因素和 正交试验方法 研究不同碳源 氮源 无机盐以及不同培养温度 培养天数和摇床转速对黑木耳 液体菌种菌丝体生物量的影响 结果显示 黑木耳液体菌种最佳培养基配方为玉米粉 豆粕 磷酸 二氢钾 硫酸镁 摇瓶培养温度 培养天数 转速 关键词 黑木耳 液体菌种 正交试验 菌丝生物量 中图分类号 S646 6文献标志码 A 文章编号 1003 8310 2022 03 0082 05 Optimization of ula and Cultivation Conditions of Auricularia heimuer Liquid Spawn SH NG Li zhu 1 Y Song mei 2 Y Xiao ju 1 H Jian fen 1 W N Dong hua 1 SUN Kong lan 2 LIN Huo song 1 O Q q q Abstract T Auricularia heimuer q w w w A auricular H T x w k A auricular q w T w A auricular q w w k k w w k w Key words Auricularia heimuer q w 基金项目 浙江省农业重大技术协同推广计划项目 作者简介 盛立柱 女 硕士 农艺师 主要从事食 药 用菌栽培技术与品种选育方面研究 qq 收稿日期 黑木耳 Auricularia heimuer W B 隶属于担子菌纲 B 木耳 目 木耳科 木耳 属 Auricularia 别称黑耳 云耳 树耳等 黑木 耳味道独特 嫩口爽滑 营养丰富 被现代营养学 家誉为 素中之荤 世界上称之为 中餐中的黑色 瑰宝 兼具食 药 用价值 具有提高免疫力 抗凝血和抗肿瘤等保健效果和药用功效 其营养价 值丰富 味道鲜美且口感松脆 深受消费者喜爱 随着集约化 机械化生产规模的日益扩大 以 及黑木耳产业转型升级的需求提升 液体菌种生产 制作技术成为食用菌企业 合作社 菇农等的迫切 需求 故对黑木耳液体菌种培养基配方进行筛选优 化试验 可为黑木耳产业转型升级提供技术支持 1 材料与方法 1 1 材料 菌种 选用的黑木耳菌种 黑山 来自龙泉市 张良明菌种场 斜面培养基 马铃薯 去皮煮汁 麸皮 煮汁 葡萄糖 硫酸镁 磷酸二氢 钾 琼脂 加水至 液体培养基 去皮马铃薯 麸皮 碳 源 氮源 磷酸二氢钾 硫酸镁 菇农之友 B 加纯净水至 H 自然 1 2 试验方法 母种制备 在超净工作台上进行操作 挑取黑木耳木粒种 接种于 试管中 于 恒温培养箱内避光培养 待菌丝长满 试管斜面后 挑取边缘 处 直径为 的菌块转接于 平皿中进行扩繁 继续于 恒温培养箱内避光培养 待菌丝长满平皿后待用 液体菌种培养方法 向 摇瓶中加入 液体培养基 接 入 块直径 大小的菌种块 置于 恒温摇 床中 振荡培养 黑木耳菌丝体生物量测定 将培养好的菌丝体装入离心管 于 离心机内离心 条件下烘干至恒重 记录 黑木耳菌丝体生物量 进行数据统计分析 不同碳源试验 分别以葡萄糖 果糖 蔗糖 麦芽糖 玉米粉 为碳源 以蛋白胨为氮源 其他成 分不变 去皮马铃薯 麸皮 磷酸二氢钾 硫酸镁 B 配制供试培养基 于 摇瓶中加入 供试液体培养基 高压蒸汽灭菌 参照参考文 献 的方法 待压力降至 时 取出供试液体培养 基 冷却至室温 在超净工作台内取 块直径 的活化母种块 接种于摇瓶内 后续试验方法同 培养 后测量菌丝体生物量 以不加碳源 的培养基为对照 每个处理 次重复 不同氮源试验 分别以蛋白胨 酵母粉 麸皮 豆粕 硫酸铵 为氮源 以葡萄糖为碳源 其余成 分不变 去皮马铃薯 麸皮 磷酸二氢钾 硫酸镁 B 配制供试培养基 以不加氮源的培养基为对照 试验方法同 无机盐配比试验 选用最佳碳源 最佳氮源 使用磷酸二氢钾和 硫酸镁分别设置 个添加量配比 配比 为磷酸二 氢钾 硫酸镁 比例为 配比 为 磷酸二氢钾 硫酸镁 比例为 配 比 为磷酸二氢钾 硫酸镁 比例为 试验方法同 每个配比 次重复 培养基配方优化试验 根据单因素试验结果 选用最佳碳源 最佳氮 源 硫酸镁和磷酸二氢钾为影响因子 采用 法进行正交试验 接种量 恒 温振荡培养 测量黑木耳菌丝体生物量 确定黑 木耳液体培养基最优配方 每个处理 次重复 摇床培养温度试验 以筛选出的最优碳源 氮源 无机盐比例配制 好供试培养基 接种量 摇床转速 培养温度设置 共 个试验处理 每个处理 次重复 培养 摇瓶培养天数试验 试验以筛选的碳源 氮源和无机盐比例配置供 试培养基 接种量 最优培养温度为 中筛 选所得 进行摇床培养 试验设置为培 养 共 个试验处理 试验方法 同 每个处理 次重复 摇床转速试验 试验以最佳的碳源 氮源和无机盐比例配置好 供试培养基 接种量 按 培养 摇床转速设 置 个处理 培养 试验方法同 每个处理 次重复 2 结果与分析 2 1 不同碳源对黑木耳菌丝生物量的影响 不同碳源对黑木耳菌丝生物量的影响见表 由表 可知 以玉米粉为碳源的试验组菌丝生 物量最高 平均达到 其次是麦 芽糖 蔗糖 菌丝生物量分别达 几种碳源对黑木耳菌丝生物量 影响的排序依次为玉米粉 麦芽糖 蔗糖 果糖 葡萄 B 碳源 菌丝生物量 果糖 平均值 葡糖糖 B 玉米粉 对照 B B 蔗糖 麦芽糖 B 表 不同碳源对黑木耳菌丝生物量的影响 T Auricularia heimuer 注 不同小写字母表示差异显著 P 不同大写字母表 示差异极显著 P w P x P 盛立柱等 黑木耳液体菌种培养基配方及培养条件优化 糖 其中葡萄糖和果糖效果较差 低于对照 2 2 不同氮源对黑木耳菌丝生物量的影响 不同氮源对黑木耳菌丝生物量的影响见表 由表 可知 以豆粕为碳源的试验组黑木耳菌 丝生物量最高 平均达到 其次 是酵母粉 麸皮 菌丝生物量达 几种氮源对黑木耳菌丝生物量影 响的排序依次为豆粕 酵母粉 麸皮 蛋白胨 硫酸铵 其中只有硫酸铵效果较差 低于对照 2 3 无机盐配比对黑木耳菌丝生物量的影响 不同无机盐配比对黑木耳菌丝生物量的影响结 果见表 由表 可以看出 磷酸二氢钾和硫酸镁比例为 时 黑木耳菌丝生物量最高 平均达 其次是比例为 时 比例为 时 黑木耳菌丝生物量最低 2 4 黑木耳液体菌种培养基配方优化正交试验 根据单因素试验结果 采用 设计 选 用最佳碳源 最佳氮源 硫酸镁和磷酸二氢钾为因 子 进行 正交试验 正交试验因素水平见 表 优化结果见表 菌丝生物量 平均值 无机盐 配比 无机盐添加量 磷酸二氢钾硫酸镁 水平 含量 磷酸二氢钾 硫酸镁 玉米粉 豆粕 B 菌丝生物量 试验 编号 因素 平均值 玉米粉 豆粕 B 磷酸二氢钾 硫酸镁 B B K K K R B 氮源 菌丝生物量 麸皮 平均值 酵母粉 B 蛋白胨 B 对照 B 豆粕 硫酸铵 B 表 不同氮源对黑木耳菌丝生物量的影响 T Auricularia heimuer 注 不同小写字母表示差异显著 P 不同大写字母表 示差异极显著 P w P x P 表 不同无机盐添加量及配比对黑木耳菌丝生物量的影响 T Auricularia heimuer 注 不同小写字母表示差异显著 P w P 表 正交试验因素和水平 T x 表 正交试验结果 T 注 不同小写字母表示差异显著 P 不同大写字母表示差异极显著 P w P x P 下转第 页 由表 可知 在 个单因子之间 对黑木耳菌 丝生物量的影响排序依次为 B 玉米粉影响 最大 其次是豆粕 硫酸镁 磷酸二氢钾影响最小 从正交试验结果可以看出各因素水平的较理想培养 基配方为 B 培养 天后菌丝生物量达 结果较理想 2 5 摇床培养温度试验 摇床培养温度试验结果见表 由表 可知 摇床培养时 黑木耳菌丝生 物量最大 为 其次是 摇床 培养时 黑木耳菌丝生物量达 摇床培养时 黑木耳菌丝生物量最小 为 各温度对黑木耳菌丝体生物量 影响排序依次 但试验所设温度对 摇瓶黑木耳菌丝生物量影响不大 无显著差异 2 6 摇床培养天数试验 摇床培养天数试验结果见表 由表 可知 摇床培养黑木耳液体菌种 培养 菌丝生物量最高 平均达 其 次是培养 和 培养 黑木耳菌丝生物量最 低 平均为 培养天数对黑木耳 菌丝生物量影响排序依次为 其中 培养 和 黑木耳的菌丝生物量差异不显著 培 养 和 黑木耳菌丝生物量差异不显著 培养 与培养 间黑木耳菌丝生物量差异显著 摇床培养 和 对黑木耳菌丝生物量影响较大 2 7 摇床转速试验 摇床转速试验结果见表 由表 可以看出 在 个摇床转速处理中 对 黑木耳菌丝生物量的影响排序依次为 其中 影响最 大 黑木耳菌丝生物量达 其 次是 影响最小 菌丝生物 量达 在设置的 个转速处理 试验中 转速对黑木耳菌丝生物量的影响不大 无 显著差异 3 小结 从试验结果中可以看出碳源是影响黑木耳液体 菌种菌丝生物量的重要因素 不同碳源对黑木耳液 体菌种菌丝生物量影响程度不同 其中多糖 双糖 单糖 黑木耳液体菌种制作较适宜的碳源为玉米粉 氮源为食用菌细胞生长必不可少的营养 可促 进蛋白质和核酸的合成 试验结果显示 不同氮源 对黑木耳液体菌种菌丝生物量影响程度不同 其中 有机氮 无机氮 黑木耳液体菌种制作较适宜的氮源 为豆粕 酵母粉和麸皮 硫酸镁是食用菌合成氨基酸过程中重要的酶激活 剂 磷酸盐在培养基中起到缓冲作用 磷是蛋白质 核酸和细胞膜的重要组成部分 因此不同无机盐比 例对黑木耳液体菌种菌丝生物量影响不同 磷磷酸二 氧钾与硫酸镁的比例为 时 试验结果较理想 不同碳源 氮源 无机盐比例 直接影响着黑 摇床培养 温度 菌丝生物量 平均值 表 摇床培养温度试验 T T k 注 不同小写字母表示差异显著 P w P 摇床培养 天数 菌丝生物量 平均值 表 摇床培养天数试验 T T k 注 不同小写字母表示差异显著 P w P 摇床转速 菌丝生物量 平均值 表 摇床转速试验 T k 注 不同小写字母表示差异显著 P w P 盛立柱等 黑木耳液体菌种培养基配方及培养条件优化 木耳液体菌种的菌丝生物量 试验结果显示 玉米 粉对黑木耳液体菌种菌丝生物量影响最大 其次是 豆粕 硫酸镁 磷酸二氢钾影响最小 正交试验结 果显示适宜的培养基配比为 玉米粉 豆粕 硫酸镁 磷酸二氢钾 培养条件是黑木耳液体菌种制作的关键 不同 培养条件对黑木耳菌丝生物量的影响不同 培养温 度 时对黑木耳液体菌种菌丝生物量影响最大 但各温度试验处理对黑木耳菌丝生物量影响差异不 显著 培养 和 的黑木耳液体菌种菌丝生物量 和培养 和 的黑木耳液体菌种菌丝生物量差 异显著 较理想的培养天数为 摇床培养 转速 时 黑木耳液体菌种菌丝生物量最 大 但试验设置的 个转速处理对黑木耳液体菌种 菌丝生物量影响差异不显著 液体菌种具有生产周期短 菌龄一致 菌种 纯度高 省工 生产成本低等优点 大大提升了 黑木耳生产效益 故黑木耳液体菌种生产技术越 来越受欢迎 试验对黑木耳液体菌种培养基配方 及培养条件进行优化试验 但培养条件对菌丝生 物学活性的影响机制还有待进一步研究 参考文献 陈青 黄国洋 鲁长根 等 菌棒场功能定位与科学发展 对策研究 J 中国食用菌 李玉 中国黑木耳 长春 长春出版社 应国华 何建芬 吕明亮 等 龙泉市黑木耳产业态势与 相关意见 J 食药用菌 叶晓菊 叶松梅 何建芬 等 应用液体菌种栽培黑木耳 技术 J 食用菌 李超 李红 张敏 黑木耳液体培养基配方优化 J 北方园 艺 王庆武 李秀梅 兰玉菲 等 黑木耳液体菌种配方优化 试验 J 食用菌 陈青 食用菌产业发展趋势和研究方向的探讨 J 中国食 用菌 邵坤 外源激素对茶树菇液体培养胞外酶活性影响的研 究 重庆 西南大学 刘启燕 戚俊 周红英 等 食用菌液体菌种工厂化生产 应用现状及发展浅析 J 食用菌 本文编辑 李丹丹 上接第 页 二潮菇培养 天后又产出第二潮菇 工厂化管理 一般采收 潮菇 每包平均产量 生物 学效率 左右 4 采收保鲜 4 1 鲜品保鲜 当白参菌子实体叶片平展时达到采收标准 用 采菇刀从子实体基部割下 清理菇根基料 按照销 售要求 称重装盒包好保鲜膜 放入泡沫箱中 转 入 冷库 货架期为 4 2 干品烘干 将白参菌按照级别分好类 采用烘干箱进行烘 干 温度升至 直至白参菌烘干为止 烘干后 使用塑料袋包装 置于干燥无虫的房间 5 小结 白参菌作为一种食药兼具的珍稀食用菌类 在 我国云南省采食野生白参菌较多 由于其独特的香 味和较高的药用价值 目前已作为高档的食用菌走 进百姓的餐桌 新鲜的白参菌价格在市场批发价 为 元 k 元 k 不等 白参菌干品价格在 元 k 元 k 对于生产厂家而言 经济效益较 为可观 随着消费者的认可与青睐 目前白参菌市 场呈供小于求趋势 工厂化生产的白参菌大小均匀 朵型好 分类标准 更利于白参菌在市场的流通与 推广 通过对白参菌的液体菌种制作 装袋配方 养菌 催蕾出菇 采收 包装冷藏等方面进行研究 对白参菌工厂化生产具有一定的指导意义 但是白 参菌配方的优化 产量的提高 品质的提升仍需进 行下一步探索 参考文献 李玉 李泰辉 杨祝良 等 中国大型菌物资源图鉴 郑州 中原农民出版社 卯晓岚 中国大型真菌 郑州 河南科技出版社 罗信吕 陈士瑜 中国菇业大典 北京 清华大学出版 社 郭孟壁 人工培养裂褶菌营养成分分析研究 J 现代仪器 曾素芳 裂褶菌的培养研究 J 中国食用菌 朱传进 白参菌的生物学特性及适用栽培技术 J 食药用 菌 陈志敏 陆北路 白参菌特性与人工栽培技术 J 食药用 菌 本文编辑 周 汐 王宝印 白参菌工厂化栽培技术