2021-‘阳光玫瑰’葡萄组培脱毒快繁技术研究_林茜.pdf

DOI 10 13925 ki gsxb 20200280 阳光玫瑰 葡萄组培脱毒快繁技术研究 林 茜 1 2 高营营 2 覃换玲 2 黄天琨 2 赵 宇 2 王钟霞 2 陈淑媛 2 1 广西农业科学院生物技术研究所 南宁 530007 2 广西植物组培苗有限公司 南宁 530007 摘 要 目的 培育 阳光玫瑰 葡萄组培脱毒苗木 初步建立 阳光玫瑰 葡萄组培脱毒快繁技 术体系 方法 采用MS 为 基 本 培 养 基 以 植 物 生 长 调 节 剂6 BA NAA 和IBA 为 变 量 接 种 后 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 苗 的 生 长 状 况 为 因 变 量 通 过 热 处 理 结 合 茎 尖 培 养 技 术 在32 预 热 处 理7d 再 逐 渐 升 温 至37 热 处 理30d 后 剥 取 茎 尖 进 行 培 养 待 获 得 完 整 植 株 时 利 用RT PCR 检 测 方 法 对 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 苗 进 行 病 毒 检 测 结 果 阳 光 玫 瑰 葡 萄 嫩 茎 段 外 植 体 经 75 乙 醇30s 0 1 氯 化 汞8min 处 理 外 植 体 的 污 染 率 和 褐 化 率 最 低 经 消 毒 灭 菌 的 外 植 体 接 种 到 添 加 含 有6 BA 和 NAA 的MS 培 养 基 上 诱 导 萌 发 在1 5mg L 1 6 BA 和0 2mg L 1 NAA 的 培 养 基 上 萌 芽 率 最 高 将 启 动 培 养 获 得 的 无 菌 新 芽 接 种 到 含 有6 BA 和NAA 的MS 培 养 基 中 进 行 继 代 培 养 在1 0mg L 1 6 BA 0 1mg L 1 NAA 的 培 养 基 中 单 芽 增 殖 效 果 最 明 显 把 继 代 培 养 中 生 长 健 壮 的 单 芽 切 下 转 入 添 加IBA 和NAA 的1 2MS 培 养 基 中 进 行 生 根 培 养 在 添 加0 4mg L 1 IBA 和0 2mg L 1 NAA 的1 2MS 培 养 基 上 生 根 效 果 最 佳 采 用 热 处 理 结 合 茎 尖 培 养 进 行 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 苗 的 脱 毒 处 理 热 处 理 植 株 的 成 活 率 为78 茎 尖 成 活 率 为60 经 检 测 再 生 植 株 不 带 葡 萄 卷 叶 病 毒1 GLRaV 1 葡 萄 卷 叶 病 毒3 GLRaV 3 葡 萄 病 毒A GVA 葡 萄 斑 点 病 毒 GFkV 葡 萄 扇 叶 病 毒 GFLV 结 论 初 步建立了 阳光玫瑰 葡萄组培脱毒快繁技术体系 为 阳光玫瑰 葡萄组培脱毒苗的工厂化生产提供了技术支撑 关键词 阳光玫瑰 葡萄 组织培养 快繁 脱毒 中图分类号 S663 1 文献标志码 A 文章编号 1009 9980 2021 03 0435 09 收稿日期 2020 07 31 接受日期 2020 12 14 作 者 简 介 林 茜 女 助 理 研 究 员 主 要 从 事 香 蕉 葡 萄 中 草 药 等 方 面 作 物 的 组 培 及 栽 培 技 术 的 研 究 Tel 0771 3243086 E mail 657788823 通信作者Authorforcorrespondence Tel 18376788265 E mail 595249583 果 树 学 报 2021 38 3 435 443 JournalofFruitScience Study on rapid propagation technology of virus free seedlings by tissue culturein ShineMuscat grape LIN Qian 1 2 GAO Yingying 2 QIN Huanling 2 HUANG Tiankun 2 ZHAO Yu 2 WANG Zhongxia 2 CHENShuyuan 2 1 BiotechnologyReserachInstitute GuangxiAcademyofAgriculturalSciences Nanning530007 Guangxi China 2 GuangxiPlantTissue CultureSeedlingCo LTD Nanning530007 Guangxi China Abstract Objective Shine Muscat grape with its unique advantages of seedless high sugar con tent rich rose fragrance and good flavor surpasses the quality of other grape varieties and is welcomed by consumers In recent years Shine Muscat grape has been widely introduced and planted in Zheji ang Jiangsu Anhui Yunnan Guangxi and other places showing a broad market prospect With the de velopment of grape industry the demand for Shine Muscat grape seedlings is growing rapidly How ever in the cultivation of this variety in China the plants generally show the symptoms of viral diseas es sothattheyieldandberryqualitywereseriouslyaffected Thetraditionalwayofgrapeseedlingpro ductiontoremovethevirusisinefficient Therefore itisnecessarytoestablisharapidpropagationtech nology system for virus free seedlings of Shine Muscat grape by combining tissue culture with heat treatment method Methods Based on the heat treatment method the virus free zone of the stem tip can expand by inactivating the virus and the stem tip has the advantage of taking small apical meri stems to grow a whole plant In this paper the tissue culture seedlings of Shine Muscat grape were treated by combining heat treatment with stem tip culture Firstly the stem segments with axillary bud果 树 学 报 第38 卷 阳 光 玫 瑰 Shine Muscat 又 名 夏 音 马 斯 卡 特 耀 眼 玫 瑰 是 日 本 果 树 试 验 基 地 选 育 的 葡 萄 品 种 亲 本 为 安 芸 津21 白 南 1 该 品 种 属 二 倍 体 欧 美 杂 交 种 晚 熟 果 皮 黄 绿 色 或 黄 色 粒 大 皮 薄 可 食 肉 脆 多 汁 玫 瑰 香 味 浓 郁 可 溶 性 固 形 物 含 量 w 可 达23 达 到18 时 果 糖 高 于 葡 萄 糖 2 3 近 年 来 阳 光 玫 瑰 在 浙 江 江 苏 安 徽 云 南 广 西 等 地 被 广 泛 引 种 种 植 但 该 品 种 在 我 国 各 地 栽 培 中 植 株 普 遍 表 现 类 似 病 毒 病 症 状 对 果 实 产 量 品 质 造 成 严 重 影 响 随 着 我 国 阳 光 玫 瑰 葡 萄 产 业 的 发 展 对 苗 木 的 需 求 量 也 越 来 越 大 传 统 的 扦 插 嫁 接 繁 殖 虽 简 捷 方 便 但 受 母 株 及 砧 木 的 限 制 繁 殖 数 量 有 限 育 苗 周 期 长 且 苗 木 常 携 带 病 毒 长 期 采 用 这 些 传 统方法进行繁殖 葡萄品种的种性也会严重退化 4 5 多 年 来 我 国 学 者 一 直 从 事 葡 萄 病 毒 脱 除 技 术 研 究 6 虽 然 该 技 术 已 较 为 成 熟 但 是 目 前 针 对 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 脱 毒 及 快 繁 方 面 的 研 究 少 有 报 道 适 合 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 脱 毒 种 苗 的 快 繁 技 术 体 系 area of new canes were used as explants and they were disinfected by different disinfection methods Then they were inoculated on MS medium containing different concentrations of plant growth regula tors Afterafewdays thepollutionrate survivalrate germinationrate subculturemultiplicationcoeffi cient rootingrate rootlengthandrootnumberofexplantswerecalculated Thebestmethodofdisinfec tion disinfection time start medium subculture medium rooting medium for explants was determined Secondly when robust tissue culture seedlings were obtained they were heat treated at different culture temperaturesanddurations Attheendoftreatment thestemtipswereselectedandculturedtogrowin to intact plants Finally the tube seedlings were sent to qualified institutions for virus detection by RT PCR detection Results After disinfection with 75 alcohol for 30 s and 0 1 mercuric chloride for 8 min the contamination rate and browning rate of stem explants were the lowest and the survival rate was 86 the explants were inoculated on MS medium containing 6 BAand NAAto induce germina tion and the highest germination rate was on MS medium containing 6 BA 1 5 mg L 1 and NAA 0 2 mg L 1 which reached 86 4 the sterile buds were inoculated on MS medium containing 6 BA and NAA On the medium containing 1 0 mg L 1 6 BA 0 1 mg L 1 NAA the effect of proliferation was the most obvious in the subculture and the multiplication coefficient was 3 5 from subculture the sin gle buds with strong growth were separated and transferred onto the medium of 1 2MS with IBA and NAAfor proliferation and rooting and the effect of rooting was the best on the medium of 1 2MS with IBA0 4 mg L 1 and NAA0 2 mg L 1 the rooting rate was 86 the average number of roots was 4 13 and the average root length was 3 89 cm detoxification treatment of tissue culture seedlings by heat treatment was combined with shoot tip culture After 18 days of heat treatment at 37 individual plants began to gradually lose their green leaves and became withered and finally the whole plant died The survival rate of heat treated plants was 78 and the shoot tip survival rate was 60 The results showed that regenerated plants did not contain grape leaf curl virus 1 GLRaV 1 grape leaf curl virus 3 GLRaV 3 grapevirusA GVA grapespotvirus GFkV andgrapefanleafvirus GFLV Conclu sion Through the technology of plant tissue culture the production efficiency of grape seedlings could be improved effectively At the same time using heat treatment combined with detoxification technolo gyofstemtipculture thedetoxificationefficiencyofvirusinthetissuecultureseedlingwasalsogreat ly improved Therefore this study preliminarily established the technology system of tissue culture and detoxification and rapid reproduction of Shine Muscat grape Moreover it can provide technical sup port for the factory production of detoxification tissue culture seedling of Shine Muscat grape It can also provide the market with high quality robust virus free excellent characteristics of virus free ShineMuscat tissuecultureseedlings Keywords ShineMuscat grape Tissueculture Rapidpropagation Virus free 436 等 阳光玫瑰 葡萄组培脱毒快繁技术研究 第3 期 还 未 建 立 国 内 当 前 并 未 见 葡 萄 良 繁 体 系 的 大 规 模 建 设 和 推 广 市 面 上 可 供 销 售 的 脱 毒 葡 萄 苗 木 数 量 极其有限 7 因 此 笔 者 以 阳 光 玫 瑰 葡 萄 品 种 为 试 验 材 料 拟 通 过 探 索 外 植 体 消 毒 启 动 培 养 增 殖 培 养 生 根 培 养 热 处 理 结 合 茎 尖 脱 毒 等 环 节 的 关 键 技 术 初 步 建 立 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 脱 毒 快 繁 技 术 体 系 以 期 加 快 阳 光 玫 瑰 葡 萄 优 质 种 苗 的 市 场 供 应 量 使 该 品 种 能 得 到 大 面 积 的 推 广 应 用 从 而 促 进 我 国 阳 光 玫瑰 葡萄产业的健康有序发展 1 材料和方法 1 1 材料 供 试 材 料 为2019 年4 月 份 采 集 的 阳 光 玫 瑰 葡 萄 优 株 当 年 生 嫩 枝 条 由 广 西 植 物 组 培 苗 有 限 公 司 种植示范地提供 1 2 方法 1 2 1 外 植 体 采 集 及 消 毒 于 连 续 晴 朗 的 午 后 取 生 长 健 壮 植 株 的 新 生 带 腋 芽 茎 段 分 割 成3cm 左 右 大 小 腋 芽 上 端1 cm 下 端2 cm 在 超 净 工 作 台 上 采 用 不 同 的 消 毒 方 式 表1 对 茎 段 进 行 表 面 消 毒 消 毒 后 用 无 菌 水 冲 洗4 5 次 无 菌 滤 纸 吸 干 其 表 面 水 分 两 端 分 别 切 除5mm 左 右 后 接 种 于 相 应 的 启 动 培 养 基 上 每 消 毒 方 式 处 理 外 植 体100 个 培 养 期 间 发 现 外 植 体 出 现 褐 化 污 染 等 现 象 及 时 记 录 数 据 茎 段 离 体 培 养 两 周 后 褐 化 污 染 情 况 趋 于 稳 定 观 察 并 统 计 褐 化 污 染 的 外 植 体 总 数 计 算 污 染 率 褐化率及成活率 表1 阳光玫瑰 葡萄外植体消毒处理 Table1 Disinfectionofexplantsof ShineMuscat 处理编号 Processnumber 1D 2D 3D 4D 5D 6D 7D 8D 9D 10D 11D 12D 75 乙醇消毒时间 75 alcohol disinfectiontime s 0 0 0 0 30 30 30 30 60 60 60 60 0 1 氯化汞消毒时间 0 1 mercurychloride disinfectiontime min 6 8 10 12 6 8 10 12 6 8 10 12 1 2 2 启 动 培 养 将 消 毒 处 理 后 的 外 植 体 接 种 于 含 有 不 同 植 物 生 长 调 节 剂 组 合 的MS 培 养 基 中 表2 促 其 腋 芽 萌 发 每 配 方 接 种 外 植 体100 个 茎 段 离 体 培 养20d 腋 芽 萌 发 情 况 稳 定 此 时 观 察 并 统 计 外 植 体 萌 芽 数 计 算 萌 芽 率 培 养 条 件 温 度 25 2 光 照 度2500 3000 lx 每 天 光 照 时 间12 h 下 同 表2 阳光玫瑰 葡萄外植体启动培养基 Table2 Theestablishmentmediumof ShineMuscat explants 处理编号 Processnumber 1P 2P 3P 4P 5P 6P 7P 8P 9P 10P 11P 12P 基本培养基 Basicmedium MS MS MS MS MS MS MS MS MS MS MS MS 6 BA 6 BA mg L 1 0 5 0 5 0 5 1 0 1 0 1 0 1 5 1 5 1 5 2 0 2 0 2 0 NAA NAA mg L 1 0 1 0 2 0 3 0 1 0 2 0 3 0 1 0 2 0 3 0 1 0 2 0 3 1 2 3 继 代 培 养 将 经 启 动 培 养 获 得 的 无 菌 单 芽 接 种 于 含 有 不 同 植 物 生 长 调 节 剂 组 合 的 继 代 培 养 基 中 表3 诱 导 不 定 芽 产 生 每 配 方 接 种 单 芽100 个 培 养60d 观 察 并 统 计 每 个 接 种 单 芽 的 总 芽 数 计算增殖系数 表3 阳光玫瑰 葡萄继代培养基 Table3 Thesubculturemediumof ShineMuscat 处理编号 Processnumber 1S 2S 3S 4S 5S 6S 7S 8S 9S 10S 11S 12S 基本培养基 Basicmedium MS MS MS MS MS MS MS MS MS MS MS MS 6 BA 6 BA mg L 1 0 5 0 5 0 5 1 0 1 0 1 0 1 5 1 5 1 5 2 0 2 0 2 0 NAA NAA mg L 1 0 0 0 1 0 2 0 0 0 1 0 2 0 0 0 1 0 2 0 0 0 1 0 2 1 2 4 生 根 培 养 将 继 代 培 养 中 株 高1 5 2 0cm 枝 叶 舒 展 的 单 芽 切 下 接 种 于 不 同 的 生 根 培 养 基 中 表 4 每 生 根 配 方 接 种100 株 培 养30 d 观 察 并 记 录 林 茜 437果 树 学 报 第38 卷 各单株的生根条数 根长等数据 计算生根率 表4 阳光玫瑰 葡萄生根培养基 Table4 Therootingmediumof ShineMuscat 处理编号 Processnumber 1R 2R 3R 4R 5R 6R 7R 8R 9R 10R 11R 12R 13R 14R 15R 基本培养基 Basicmedium 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS IBA IBA mg L 1 0 0 0 0 0 0 0 2 0 2 0 2 0 2 0 4 0 4 0 4 0 4 0 6 0 6 0 6 0 6 NAA NAA mg L 1 0 2 0 4 0 6 0 0 0 2 0 4 0 6 0 0 0 2 0 4 0 6 0 0 0 2 0 4 0 6 1 2 5 组 培 脱 毒 技 术 及 病 毒 检 测 将 生 长 势 较 好 的 阳 光 玫 瑰 葡 萄 待 脱 毒 试 管 苗100 株 转 接 到 新 鲜 的 生 根 培 养 基 中 先 在 室 温 条 件 下 培 养15d 然 后 转 移 至 恒 温 培 养 箱 中 32 培 养 7 d 再 逐 渐 升 温 至 37 热 处 理30d 后 剥 取 2mm 茎 尖 转 接 到 新 配 制 的 生 根 培 养 基 中 6 生 根 培 养 基 为 1 2MS 0 4mg L 1 IBA 0 2mg L 1 NAA 成 活 的 茎 尖 继 代4 5 次 每 个 茎 尖 培 养 获 得 的 植 株 数 量 达5 7 瓶 每 瓶6 株 时 将 阳 光 玫 瑰 葡 萄 试 管 苗 送 往 中 国 农 业 科 学 院 果 树 研 究 所 国 家 落 叶 果 树 脱 毒 中 心 进 行 葡 萄 卷 叶 病 毒1 GLRaV 1 葡 萄 卷 叶 病 毒3 GLRaV 3 葡 萄 病 毒A GVA 葡 萄 斑点 病毒 GFkV 葡萄 扇叶 病毒 GFLV 的检 测 单 样 送 检 植 株 数 量 为10 株 病 毒 检 测 方 法 为 反 转 录 聚合酶链反应 RT PCR 1 3 数据处理 采 用Excel2013 进 行 数 据 处 理 及 制 图 用SPSS 19 0 软件对数据进行分析 2 结果与分析 2 1 不 同 消 毒 方 式 对 阳 光 玫 瑰 葡 萄 外 植 体 成 活 率的影响 由 表5 可 知 不 同 消 毒 方 式 对 外 植 体 成 活 率 的 影 响 不 同 只 使 用0 1 氯 化 汞 消 毒 外 植 体 的 污 染 率 均 高 于 使 用75 乙 醇 与0 1 氯 化 汞 组 合 的 方 式 而 两 种 消 毒 液 组 合 消 毒 时 以75 乙 醇 消 毒 时 间 为 30s 时 最 佳 0 1 氯 化 汞 不 同 的 消 毒 时 间 对 葡 萄 外 植 体 的 污 染 率 及 褐 化 率 影 响 较 为 明 显 随 着 消 毒 时 间 的 延 长 外 植 体 污 染 率 降 低 但 褐 化 率 明 显 升 高 从 而 降 低 成 活 率 故 阳 光 玫 瑰 葡 萄 腋 芽 茎 段 外 植 体 的 最 佳 消 毒 方 式 为6D 75 乙 醇30 s 0 1 氯 化 汞8min 外植体成活率86 2 2 不 同 培 养 基 对 阳 光 玫 瑰 葡 萄 外 植 体 萌 芽 率 的影响 由 图1 可 知 不 同 启 动 培 养 基 对 外 植 体 的 萌 芽 率 影 响 不 同 随 着 培 养 基 中6 BA 浓 度 的 升 高 阳 表5 不同消毒方式对 阳光玫瑰 葡萄外植体成活率的影响 Table5 Theeffectofdifferentdisinfectionmethodsonthesurvivalrateof ShineMuscat explants 处理编号 Processnumber 1D 2D 3D 4D 5D 6D 7D 8D 9D 10D 11D 12D 外植体数 Numberof explants 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 污染数 Numberof pollution 44 38 27 27 28 11 16 17 29 26 15 12 污染率 Pollution rate 44 38 27 27 28 11 16 17 29 26 15 12 褐化数 Browning number 1 2 5 8 2 3 6 10 2 3 8 14 褐化率 Browning rate 1 2 5 8 2 3 6 10 2 3 8 14 成活数 Survival number 55 60 68 65 70 86 78 73 69 71 77 74 成活率 Survivalrate 55g 60f 68de 65e 70d 86a 78b 73cd 69d 71cd 77bc 74c 注 表中不同小写字母表示不同处理之间差异达显著水平 p 0 05 下同 Note Differentsmalllettersinthetableindicatedthatthedifferencebetweendifferenttreatmentswassignificant p 0 05 Thesamebelow 438 等 阳光玫瑰 葡萄组培脱毒快繁技术研究 第3 期 光 玫 瑰 葡 萄 外 植 体 萌 芽 率 整 体 呈 先 上 升 后 下 降 的 趋 势 在 相 同6 BA 质 量 浓 度 水 平 下 随 着NAA 质 量 浓 度 的 升 高 外 植 体 萌 芽 率 也 同 样 表 现 出 先 上 升 后 下 降 试 验 发 现 培 养 基 编 号4P 5P 7P 8P 9P 10P 11P 中 外 植 体 萌 芽 率 均 在60 以 上 培 养 基 编 号8P 中 的 外 植 体 萌 芽 率 最 高 为86 4 且 与 其 他 编 号 启 动 培 养 基 中 的 外 植 体 萌 芽 率 呈 显 著 性 差 异 故 阳 光 玫 瑰 葡 萄 外 植 体 最 佳 腋 芽 启 动 培 养 基 为8P MS 1 5mg L 1 6 BA 0 2mg L 1 NAA 2 3 不 同 培 养 基 对 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 苗 继 代 增 殖的影响 由 图2 可 看 出 不 同 继 代 培 养 基 对 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 苗 继 代 增 殖 的 影 响 不 同 当 培 养 基 中6 BA 质 量 浓 度 为0 5mg L 1 时 单 芽 的 增 殖 系 数 均 较 低 不 足1 5 随 着6 BA 质 量 浓 度 的 升 高 芽 的 增 殖 系 数 先 上 升 后 下 降 当6 BA 质 量 浓 度 升 至1 5mg L 1 f d d c a b f e e h g h 图1 不同培养基对 阳光玫瑰 葡萄外植体萌芽率的影响 Fig 1 Theeffectofdifferentculturemediumonthegerminationrateof ShineMuscat explants l i h g f e d b a c k j 图2 阳光玫瑰 葡萄组培苗在不同培养基上的增殖系数 Fig 2 Themultiplicationcoefficientof ShineMuscat tissuecultureseedlingsondifferentmedia 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 外植体萌芽率 Germinationrateofexplants 1P 2P 3P 4P 5P 6P 7P 8P 9P 10P 11P 12P 处 理编号 Processnunber 及 以 上 时 芽 的 增 殖 明 显 受 到 抑 制 且 试 验 中 发 现 此 质 量 浓 度 培 养 的 芽 质 脆 玻 璃 化 现 象 明 显 并 出 现 肥大不 规则叶 片 而当6 BA 质量浓 度为1 0mg L 1 时 芽 的 增 殖 系 数 均 略 高 丛 芽 长 势 正 常 翠 绿 健 壮 活 力 佳 另 外 6 BA 需 配 合 低 质 量 浓 度 的NAA 一 起 使 用 即 两 者 质 量 浓 度 比 为10 1 时 增 殖 效 果 最 佳 故 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 苗 最 佳 继 代 增 殖 培 养 基 为5S MS 1 0mg L 1 6 BA 0 1mg L 1 NAA 2 4 不 同 培 养 基 对 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 苗 生 根 的 影响 从 表6 可 知 不 同 的 生 根 培 养 基 对 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 苗 的 生 根 率 根 条 数 及 根 长 影 响 不 同 当 培 养 基 中 单 独 添 加 不 同 质 量 浓 度 生 长 素NAA 时 单 株 的 生 根 率 根 数 均 较 低 而 单 独 添 加 不 同 质 量 浓 度 4 0 3 5 3 0 2 5 2 0 1 5 1 0 0 5 0 0 增殖系数 Proliferationrate 处理编号 Processnunber 1S 2S 3S 4S 5S 6S 7S 8S 9S 10S 11S 12S 林 茜 439果 树 学 报 第38 卷 生 长 素IBA 时 单 株 的 生 根 情 况 较 好 可 见 生 长 素IBA 对 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 苗 生 根 的 诱 导 效 果 强 于NAA 但 经 试 验 培 养 发 现 将IBA 与 低 质 量 浓 度 的NAA 搭 配 使 用 比 单 独 使 用IBA 更 能 明 显 提 高 组 培 苗 的 生 根 率 增 加 单 株 根 条 数 及 侧 根 数 量 根 系 洁 白 健 壮 有 活 力 故 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 苗 的 最 佳 生 根 培 养 基 为9R 1 2MS 0 4mg L 1 IBA 0 2mg L 1 NAA 2 5 热处理及植株再生 本 研 究 通 过 热 处 理 结 合 茎 尖 培 养 技 术 进 行 阳 光 玫 瑰 葡 萄 组 培 苗 的 脱 毒 处 理 研 究 过 程 中 发 现 37 热 处 理18 d 个 别 植 株 开 始 出 现 叶 片 逐 渐 失 绿 变 枯 最 终 整 株 死 亡 的 现 象 热 处 理30d 时 试 管 苗 的 最 终 成 活 率 为78 热 处 理 完 成 后 切 取 植 株 2mm 茎 尖 进 行 室 温 下 培 养 图3 10 15d 茎 尖 开 始 陆 续 恢 复 生 长 约60d 可 长 成 完 整 植 株 未 恢 复 的 茎 尖 约30 d 开 始 失 绿 死 亡 茎 尖 最 终 成 活 率 为60 表7 2 6 阳光玫瑰 葡萄组培苗的病毒检测 对 阳 光 玫 瑰 葡 萄 试 管 苗 进 行 病 毒 检 测 图4 检 测 结 果 表 明 送 检 的 阳 光 玫 瑰 葡 萄 试 管 苗 不 含 有 葡 萄 卷 叶 病 毒1 GLRaV 1 葡 萄 卷 叶 病 毒3 GL RaV 3 葡 萄 病 毒A GVA 葡 萄 斑 点 病 毒 GFkV 表6 不同培养基对 阳光玫瑰 葡萄组培苗生根的影响 Table6 Theeffectsofdifferentmediaonrootingof ShineMuscat plantlets 处理编号 Processnumber 1R 2R 3R 4R 5R 6R 7R 8R 9R 10R 11R 12R 13R 14R 15R 接种株数 Numberofinoculations 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 生根 株数 Rootnumber 8 7 5 29 35 58 40 57 86 74 66 55 75 58 49 生根率 Rootingrate 8j 7k 5l 29i 35h 58d 40g 57de 86a 74b 66c 55e 75b 58d 49f 平均根数 Averagenumberofroot 1 87j 1 85j 1 70k 2 15hi 2 43g 2 20h 1 85j 3 48c 4 13a 3 81b 3 60c 2 64f 3 15d 2 83e 2 05i 平均根长 Averagerootlength cm 2 53f 2 50fg 2 39g 2 67e 2 93d 3 13c 3 27c 3 43bc 3 89a 3 90a 3 53b 2 78e 3 53b 3 28c 2 97d 表7 热处理试管苗及茎尖成活率 Table7 Thesurvivalrateofheattreatmenttubeseedlingandstemtip 热处理试管苗成活情况 Survivalofheat treatedtubeseedlings 热处理 株 数 Numberofheat treated 100 成活 株数 Survivalnumber 78 成活率 Survivalrate 78 茎尖成活情况 Stemtipsurvival 切取数 Numberofcut 78 成活数 Survivalnumber 47 成活率 Survivalrate 60 A Cultivatefor1day B Cultivatefor30days 图3 阳光玫瑰 葡萄组培苗茎尖培养 Fig 3 Thestemtipcultureof ShineMuscat grapetissuecultureseed