中国中部太白山不同海拔杜鹃兰根部内生真菌多样性.pdf

Research paper 研究论文 22 May 2021 40 5 992 1007 Mycosystema ISSN1672 6472 CN11 5180 Q DOI 10 13346 j mycosystema 200296 基金项目 国家自然科学基金 41671268 Supported by the National Natural Science Foundation of China 41671268 Corresponding author E mail tangm Received 2020 09 15 accepted 2020 12 07 菌物学报 Copyright 2021 Institute of Microbiology CAS All rights reserved jwxt Http journals Tel 86 10 64807521 992 中国中部太白山不同海拔杜鹃兰根部内生真菌多 样性 任玮 1 杨韧 3 张永新 1 唐明 1 2 西北农林科技大学林学院 陕西 杨凌 712100 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室 华南农业大学林学与风景园林学院 广东 广州 510642 深圳华大基因股份有限公司 广东 深圳 518000 摘 要 本研究以太白山自然保护区蒿坪站杜鹃兰 Cremastra appendiculata 为材料 采用菌丝团和根组织 分离法进行真菌分离 并用 ITS 序列分子鉴定 用变性梯度凝胶电泳 denaturing gradient gel electrophoresis DGGE 分析根部内生真菌多样性 研究海拔和根际土理化性质对真菌多样性的影响 分离到 79 株 19 种 真菌 均为子囊菌门 Ascomycota 隶属于座囊菌纲 Dothideomycetes 1 目 2 科 2 种和粪壳菌纲 Sordariomycetes 7 目 10 科 17 种 其中 12 种兰科菌根真菌 DGGE 检测到 80 种真菌 其中兰科菌根真菌交链链格孢 锈 腐土赤壳和木霉属真菌可通过组织分离法得到 担子菌门 Basidiomycota 3 种真菌只在 DGGE 检测到 随 着海拔升高 根际土硝态氮和速效磷下降 导致真菌丰富度和香侬维纳指数降低 辛普森指数升高 本 研究为发掘此地区杜鹃兰菌根真菌资源进行杜鹃兰人工培育奠定基础 关键词 兰科植物 兰科菌根真菌 变性梯度凝胶电泳 真菌群落结构 引用本文 任玮 杨韧 张永新 唐明 2021 中国中部太白山不同海拔杜鹃兰根部内生真菌多样性 菌物学报 40 5 992 1007 Ren W Yang R Zhang YX Tang M 2021 Diversity of endophytic fungi in the roots of Cremastra appendiculata Orchidaceae at different altitudes in Taibaishan Nature Reserve Central China Mycosystema 40 5 992 1007 研究论文 22 May 2021 40 5 992 1007 Mycosystema ISSN1672 6472 CN11 5180 Q 菌物学报 993 Diversity of endophytic fungi in the roots of Cremastra appendiculata Orchidaceae at different altitudes in Taibaishan Nature Reserve Central China REN Wei 1 YANG Ren 3 ZHANG Yong Xin 1 TANG Ming 1 2 College of Forestry Northwest A B and C The morphology of pelotons in the roots of C appendiculata observed under microscope P Pelotons CO Cortex EX External cortex PE Pericycle RH Root hair VE Velamen 研究论文 22 May 2021 40 5 992 1007 Mycosystema ISSN1672 6472 CN11 5180 Q 菌物学报 995 1 2 根际土理化性质测定 根际土测定鲜土含水量 烘干称重法 剩余土样自然风干 过 0 15mm 筛后采用鲍 士旦 2000 的方法测定速效磷 碳酸氢钠 浸提 钼锑抗比色法 速效钾 乙酸铵浸提 火焰光度法 硝态氮 氯化钾浸提 流动分 析法 铵态氮 氯化钾浸提 流动分析法 和有机质含量 外加热 重铬酸钾容量法 1 3 杜鹃兰根部内生真菌分离 真菌分离培养基为马铃薯燕麦琼脂培养 基 potato oats agar POA 孙晓颖等 2015 PDA 和 Martin 琼脂培养基 侯天文等 2010 采用组织分离法从菌丝团和根组织中分离根 部内生真菌 将根系用 75 乙醇和 1 次氯酸 钠表面消毒后 切成长 2cm 根段 均匀分成 2 组 一组切成 0 5mm 的薄片 平铺于 3 种 培养基上 每皿 10 个 侯天文等 2010 另 一组用灭菌解剖刀将根皮层细胞刮下 置于 无菌研钵中 加 1mL 无菌水碾碎制成菌丝团 悬浮液 取 8 L 至 3 种培养基块 9mm 中 央 每皿 10 块 孙晓颖等 2015 28 恒温 暗培养 待有菌丝长出 挑取菌丝至 PDA 培 养基上纯化后 转接到 PDA 斜面培养基上 4 冰箱保存 1 4 真菌鉴定 采用真菌 DNA 提取试剂盒 Fung al DNA Kit Omega America 提取 DNA 以 ITS1 F 5 CTTGGTCATTTAGAGGAAGTAA 3 Gardes Bruns 1993 和 ITS4 5 TCCTCCGCTTATTGA TATGC 3 White et al 1990 为引物 扩增 真菌转录间隔区 internal transcribed spacer ITS 序列进行分子鉴定 采用 40 L 体系 模 板 2 L 2 Premix Taq 20 L TaKaRa Japan 上游引物 ITS1 F 1 L 10 mol L 下游引物 ITS4 1 L 10 mol L ddH 2 O 16 L PCR 条件 94 预变性 3min 35 个循环 94 变性 30s 55 退火 30s 72 延伸 1min 最终 72 延 伸 5min Seifert 2009 经 1 琼脂糖凝胶电 泳 120V 30min 检测 PCR 产物为单一条 带 送至奥科鼎盛生物科技有限公司 北京 测序 测序结果上传至 GenBank 数据库 https www ncbi nlm nih gov genbank 代表菌株 GenBank 登录号为 MT920565 MT920583 运用 BLAST 工具 https blast ncbi nlm nih gov Blast cgi 进行同源比对 并 下载高同源性序列为相似序列 用 Clustal X Version 2 1 进行多序列比对分析后 以 MEGA Version 5 05 中的 Neighbor Joining 法计算 Bootstrap 值 1 000 次随机抽样 构 建系统发育树 Crozier et al 2006 张宇和郭梁 栋 2012 真菌分离频率 isolation frequency IF 为分离到该种真菌数与总分离真菌数的 比值 柴新义和陈双林 2011 E 值表示期 望偶然匹配的几率 小于 10 5 表明序列比对 的可靠性高 Hou et al 2018 1 5 杜鹃兰根部内生真菌多样性分析 1 5 1 DNA 提取及巢式 PCR 新鲜根经液氮研 磨后 用 DNA 提取试剂盒提取 DNA Plant Genomic DNA kit Tiangen China 经 Nanodrop 和 1 琼脂糖凝胶电泳 120V 30min 测定 DNA 浓度和质量 侯天文等 2010 参照 Yu et al 2013 的方法进行巢 式 PCR 第一轮 PCR 为 20 L 体系 模板 1 L 2 Premix Taq 10 L 上游引物 ITS1 F 0 5 L 10 mol L 下游引物 ITS4 0 5 L 10 mol L ddH 2 O 8 L PCR 条件 94 预变性 3min 35 个循环 94 变性 1min 56 退火 1min 72 延伸 1min 最终 72 延伸 10min 第二 轮 PCR 为 40 L 体系 模板 第一轮 PCR 产物 稀释 100 倍 2 L 2 Premix Taq 20 L 上游 引物 ITS1 F GC 5 CGCCCGCCGCGCGCGGCGG GCGGGGCGGGGGCACGGGGGGCTTGGTCATTTA 任玮 等 中国中部太白山不同海拔杜鹃兰根部内生真菌多样性 Research paper 菌物学报 996 GAGGAAGTAA 3 下划线处为 GC 发夹结构 1 L 10 mol L 下 游 引 物 ITS2 5 GCTGCGT TCTTCATCGATGC 3 1 L 10 mol L ddH 2 O 16 L Gardes Bruns 1993 PCR 条件 94 预变性 5min 35 个循环 94 变性 45s 56 退火 45s 72 延伸 45s 最终 72 延伸 5min 经 1 琼脂糖凝胶电泳检测 第二轮 PCR 产物 为单一条带 进行变性梯度凝胶电泳 1 5 2 变性梯度凝胶电泳 denaturing gradient gel electrophoresis DGGE 参 照 Strathdee Free 2013 的方法配制变性梯度胶 浓度为 30 40 从胶的上方向下方递增 取巢式 PCR 第二轮产物 40 L 加入加样孔中 电泳缓 冲液为 1 TAE 60 70V 预电泳 30min 120V 电泳 5h 电泳完毕 将胶块放入含核酸染液 Gel Stain TransGen China 的 1 TAE 中染 色 30min 在凝胶自动成像仪上拍照 保存 用于杜鹃兰根部内生真菌多样性分析 将 DGGE 凝胶各泳道最亮的条带切下 置入 100 L 无菌水中 4 浸泡 24h 作为模板 以巢 式 PCR 第二轮程序不含 GC 发夹结构的引物 ITS1 F 和 ITS2 扩增 ITS 区用于优势菌鉴定 Yu et al 2013 经 1 琼脂糖凝胶电泳检测后 单一条带送至奥科鼎盛生物科技有限公司 北京 测序 测序结果已上传至 GenBank 数据库 GenBank 登录号为 MT929301 MT929309 1 6 数据处理 使用 Microsoft Office Excel Version 2016 统计数据 SPSS Version 19 0 进行单因素方 差分析 Duncan s test 和相关性分析 Pearson s correlation coefficient MetaboAnalyst Version 4 0 进行主成分分析 Chong et al 2019 DGGE 图谱通过 Quantity One Version 4 41 软件进行数字化处理 将条带的亮度 转换为峰密度值分析真菌多样性 依据公式 将得到的峰密度值转为辛普森指数 D 均匀度指数 Eh 和香侬维纳指数 H 丰富度指数 S 以各泳道出现的条带数表 示 S 为 DGGE 图谱中的不同条带数的总和 N 为各泳道中检测到所有条带的峰密度的 总和 Ni 为第 i 条泳道的峰密度值 Yu et al 2013 ss i 1 i 1 hmax s 2 i 1 H PilnPi Ni N ln Ni N E H H H lnS D Ni N 2 结果与分析 2 1 杜鹃兰根部内生真菌鉴定及系统发育 分析 采用组织分离法从根组织和菌丝团在 3 种培养基上分离到 79 株真菌 通过比对真 菌 ITS 序列鉴定为 19 种 表 1 19 种真菌 E 值均小于 10 5 表明序列比对的可靠性高 除 M251 M342 O322B 和 TP331B 以外 其 余 15种真菌 ITS序列一致性均达到 98 以上 认为是同种真菌 结合系统发育分析 M251 为角担菌科 Ceratobasidiaceae 真菌 M342 为 刺盘孢菌属 Colletotrichum 真菌 O322B 为毛 壳菌属 Chaetomium 真菌 TP331B 为木霉属 Trichoderma 真菌 系统发育树中 19 种真 菌 ITS 序列与 GenBank 数据库相似度最高序 列能够聚在一起 且隶属于同一目的真菌聚 在一起 与分子鉴定结果一致 图 2 19 种真菌均属于子囊菌门 Ascomycota 隶属于 2 纲 8 目 12 科 表 1 其中座囊菌 纲 Dothideomycetes 1 目 2 科 2 种 小双腔菌 科 Didymellaceae 和隔孢腔菌科 Pleosporaceae 各 1 种 粪壳菌纲 Sordariomycetes 7 目 10 科 17种 最多的为小丛壳科 Glomerellaceae 4种 肉座菌科 Hypocreaceae 丛赤壳科 Nectriaceae 毛孢壳科 Coniochaetaceae和炭角菌科 Xylariaceae 各 2 种 线孢虫草菌科 Ophiocordycipitaceae 研究论文 22 May 2021 40 5 992 1007 Mycosystema ISSN1672 6472 CN11 5180 Q 菌物学报 997 图2 基于ITS序列构建的内生真菌系统发育树 Fig 2 Phylogenetic tree based on ITS sequences of endophytic fungi in roots of Cremastra appendiculata 麦角菌科 Clavicipitaceae 角担菌科 团壳菌科 Boliniaceae 和毛壳菌科 Chaetomiaceae 各 1 种 其中 麦冬刺盘孢 Colletotrichum liriopes 多 孢木霉 Trichoderma polysporum 交链链格孢 Alternaria alternata 和木霉属 Trichoderma sp 从根组织和菌丝团中均能分离得到 肉座菌 科 炭角菌科和小丛壳科真菌分离频率较高 分别为 31 19 和 14 其中肉座菌科的多 孢木霉 Trichoderma polysporum 和炭角菌科的 多节孢属真菌 Nodulisporium sp 分离频率分 别为 23 和 14 2 2 不同海拔野生杜鹃兰根部内生真菌多 样性 DGGE 图谱条带清晰 表明变性胶浓度合 适 每一条电泳条带代表单独的真菌 条带 亮度表示该真菌数量 共检测到 80 种不同真 菌 图 3A 不同海拔样地条带分布和亮度不 同 表明真菌多样性存在差异 不同样地的 优势条带位置不同表明优势菌存在差异 以 第 1 泳道作为参考泳道进行泳道分析 条带 相似度较低表明不同海拔样地间真菌多样性 不同 图 3B 任玮 等 中国中部太白山不同海拔杜鹃兰根部内生真菌多样性 Research paper 菌物学报 998 表1 根部内生真菌鉴定结果 Table 1 Taxonomic status of the fungi isolated from the roots of Cremastra appendiculata 菌株号 Strain No 登录号 Accession No 分类地位 Taxonomic affiliation GenBank 最相似序列 Closest match in GenBank 序列一致性 Sequence identity E 值 E value 分离 频率 IF 分离方式 Isolated M111 MT920565 小丛壳科 Glomerellaceae 麦冬刺盘孢 Colletotrichum liriopes isolate HZ 1 MK644098 1 98 80 0 8 根组织 Roots 菌丝团 Pelotons M112 MT920566 小双腔菌科 Didymellaceae Paraboeremia putaminum strain CBS 538 66 MH858878 1 99 62 0 3 根组织 Roots M251 MT920567 角担菌科 Ceratobasidiaceae Ceratobasidiaceae sp CBS 510 93 KF267009 1 82 39 2E 32 1 根组织 Roots M311 MT920568 炭角菌科 Xylariaceae 多节孢属 Nodulisporium sp JP60 3 GQ906948 1 98 56 0 14 根组织 Roots M321Y MT920569 小丛壳科 Glomerellaceae 大豆刺盘孢 Colletotrichum truncatum strain BBA 70523 AJ301937 1 98 96 0 4 根组织 Roots M322 MT920570 丛赤壳科 Nectriaceae 锈腐土赤壳 Ilyonectria destructans isolate UASWS1480 KT722597 1 100 00 0 3 根组织 Roots M342 MT920571 小丛壳科 Glomerellaceae Colletotrichum rhombie isolate RP257 2 KX067811 1 74 29 2E 17 1 根组织 Roots M353MZ MT920572 炭角菌科 Xylariaceae Nemania serpens voucher KoLRI EL006190 MN844433 1 98 99 0 5 根组织 Roots O112 MT920573 麦角菌科 Clavicipitaceae 厚垣轮枝孢菌 Metacordyceps chlamydosporia isolate KYK00228 AB378549 1 99 67 0 6 根组织 Roots O311 MT920574 团壳菌科 Boliniaceae Camaropella pugillus strain CBS 128346 MH864891 1 98 69 0 6 根组织 Roots O322B MT920575 毛壳菌科 Chaetomiaceae 球毛壳菌 Chaetomium globosum isolate FMB HP03 MF716852 1 93 57 0 3 根组织 Roots P142 MT920576 丛赤壳科 Nectriaceae Dactylonectria macrodidyma strain GFR05 MT447510 1 99 09 0 4 根组织 Roots P231 MT920577 毛孢壳科 Coniochaetaceae Coniochaeta mutabilis strain KRP51 8 HM036599 1 99 63 0 3 根组织 Roots P321 MT920578 小丛壳科 Glomerellaceae 高代花刺盘孢 Colletotrichum godetiae isolate A49 LT717068 1 99 15 0 1 根组织 Roots P353 MT920579 线孢虫草科 Ophiocordycipitaceae 白色弯颈霉 Tolypocladium album strain CBS 830 73 MH860811 1 98 79 0 3 根组织 Roots 待续 研究论文 22 May 2021 40 5 992 1007 Mycosystema ISSN1672 6472 CN11 5180 Q 菌物学报 999 续表 1 TM121 MT920580 肉座菌科 Hypocreaceae 多孢木霉 Trichoderma polysporum isolate TR3 2 KX343125 1 98 87 0 23 根组织 Roots 菌丝团 Pelotons TP131 MT920581 毛孢壳科 Coniochaetaceae 木生锥毛壳 Coniochaeta ligniaria strain B121 KX090317 1 99 26 0 1 菌丝团 Pelotons TP321H MT920582 隔孢腔菌科 Pleosporaceae 交链链格孢 Alternaria alternata isolate RdKnA 5 MF167641 1 99 48 0 5 根组织 Roots 菌丝团 Pelotons TP331B MT920583 肉座菌科 Hypocreaceae 装絮木霉 Trichoderma tomentosum strain DAOM 195050 AY605717 1 95 35 0 8 根组织 Roots 菌丝团 Pelotons 图3 根部内生真菌DGGE图谱及泳道分析 A 泳道顶部数字为样品号 1 5 6 10 和 11 15 分别为 1 177m 1 409m 和 1 590m 海拔样地 箭头所指条带为优势菌条带 B 泳道底部数字为对应图 A 中样品 编号 编号下为与 1 泳道的相似系数 Fig 3 DGGE profiles and lane analysis of endophytic fungi in roots of Cremastra appendiculata The number at the top of lane in A represented the sample number 1 5 6 10 and 11 15 sampled in altitudes of 1 177m 1 409m and 1 590m respectively The band with arrow represented the dominant fungi The number at the bottom of lane in B was the sample number in Fig A The number under sample number was the similarity coefficient with lane 1 各样地优势菌序列与 GenBank 数据库比 对信息见表 2 条带 5的序列一致性为 96 23 为柔膜菌科 Helotiaceae 真菌 条带 6 的序列 一致性为 97 78 为链格孢属 Alternaria真菌 条带 8 的序列一致性为 97 09 为锤舌菌纲 Leotiomycetes 真菌 其余条带序列一致性大 于 98 可确认为同一种 E 值均小于 10 5 表明序列比对的可靠性高 拟锁瑚菌属真菌 Clavulinopsis sp HQ021970 1 和锈腐土赤壳 I destructans MN540280 1 在 3 个海拔下 均为优势菌 1 177m 海拔处特有优势菌为乳菇 属的 Lactarius gymnocarpoides LK392600 1 任玮 等 中国中部太白山不同海拔杜鹃兰根部内生真菌多样性 Research paper 菌物学报 1000 表2 DGGE分析优势菌鉴定结果 Table 2 Taxonomic status of dominant fungi identified by DGGE 条带号 Band No 海拔 Altitude m 登录号 Accession No 分类地位 Taxonomic affiliation GenBank 最相似序列 Closest match in GenBank 序列一致性 Sequence identity E 值 E value 1 1 177 MT929301 红菇科 Russulaceae Lactarius gymnocarpoides strain MD318 LK392600 1 100 5E 10 2 1 177 MT929302 子囊菌类 Ascomycota incertae sedis Tetracladium maxillie strain DSM105583 MK353128 1 100 4E 141 3 1 177 1 409 1 590 MT929303 珊瑚菌科 Clavariaceae Uncultured Clavulinopsis sp clone 4Bart1300S HQ021970 1 100 6E 11 4 1 409 MT929304 伞菌亚门 Agaricomycotina Uncultured Rhizoctonia sp isolate IT1B 10r DQ061931 1 100 5E 13 5 1 409 MT929305 柔膜菌科 Helotiaceae Uncultured Hymenoscyphus sp clone ITS 09 AB456655 1 96 23 1E 13 6 1 409 MT929306 隔孢腔菌科 Pleosporaceae 交链链格孢 Alternaria alternata strain OTU1257 MT594775 1 97 78 9E 11 7 1 177 1 409 1 590 MT929307 丛赤壳科 Nectriaceae 锈腐土赤壳 Ilyonectria destructans MN540280 1 98 80 4E 121 8 1 590 MT929308 锤舌菌纲 Leotiomycetes Uncultured ectomycorrhiza Leotiomycetes clone LTSP EUKA P3A23 FJ553339 1 97 09 4E 126 9 1 590 MT929309 肉座菌科 Hypocreaceae 哈茨木霉 Trichoderma harzianum strain 104 D12 MT594389 1 100 3E 15 注 条带号对应图 3A 中优势菌条带编号 Note The band No corresponds to the band No of dominant fungi in Fig 3A 和四枝孢属的 Tetracladium maxillie MK353128 1 1 409m 海拔处特有优势菌为 丝核菌属真菌 Rhizoctonia sp DQ061931 1 膜盘菌属真菌 Hymenoscyphus sp AB456655 1 和链格孢属真菌 Alternaria sp MT594775 1 1 590m 海拔处特有优势菌为锤舌菌纲真菌 Leotiomycetes sp FJ553339 1 和哈茨木霉 T harzianum MT594389 1 说明不同海拔 下杜鹃兰与内生真菌的共生关系存在差异 运用 Quantity One 软件对所得 DGGE 图 谱进行数字化处理后分析 得到 3 个海拔下杜 鹃兰根部内生真菌多样性指数 图 4 3 个海 拔样地真菌均匀度指数差异不显著 图 4A 真菌丰富度和香侬维纳指数在 1 177m 海拔 处最高 图 4B 和图 4C 1 409m 和 1 590m 海拔处相对较低 辛普森指数在 1 177m 海拔 处最低 图 4D 1 409m 和 1 590m 海拔处 相对较高 在 1 409m 海拔处真菌丰富度 香 侬维纳指数和辛普森指数与 1 590m 海拔处 无显著差异 海拔变化对太白山杜鹃兰根部内生真菌 群落丰富度 香侬维纳指数和辛普森指数影 响较大 海拔越高内生真菌越少 群落分布 越不均匀 优势真菌越突出 研究论文 22 May 2021 40 5 992 1007 Mycosystema ISSN1672 6472 CN11 5180 Q 菌物学报 1001 图4 不同海拔样地真菌群落多样性指数 柱子表示均值 标准误 柱子上不同小写字母表示差异显著 Duncan 检验 P 0 05 n 5 Fig 4 The diversity indices of fungal community in different sample sites Bars indicate mean SE The different lowercase letters on the bars mean that there is significant difference by Duncan s test P 0 05 n 5 2 3 不同海拔下杜鹃兰根部内生真菌多样性 与土壤理化性质的关系 主成分分析 principal component analyses PCA 海拔与杜鹃兰根部内生真菌多样性和样 地根际土理化性质的关系 图 5 第一主成 分 principal component 1 PC1 和第二主成 分 principal component 2 PC2 的总解释量 为 96 3 PC1 和 PC2 将 3 个海拔样地分开 表明不同海拔野生杜鹃兰根部内生真菌多样 性和根际土理化性质存在显著差异 对不同海拔杜鹃兰根际土壤理化性质分 析表明 硝态氮和速效磷含量在 1 177m 海拔 处最高 显著高于 1 409m 和 1 590m 海拔处 但 1 409m 和 1 590m 海拔样地的硝态氮和速 效磷含量无显著差异 3 个海拔样地的含水 量 有机质 速效钾和铵态氮含量差异不显 著 表 3 相关性分析表明 真菌丰富度与 硝态氮极显著正相关 与速效磷显著正相关 图5 不同海拔样地真菌群落多样性与根际土理化 性质的主成分分析 1 177 1 409 和 1 590 分别 表示 1 177 1 409 和 1 590m 海拔的 3 个样地 n 5 Fig 5 Principal component analysis plot of the fungal community diversity indices and rhizosphere soil factors in different altitude sample sites 1 177 1 409 and 1 590 respectively represented 3 sample sites at altitudes of 1 177 1 409 and 1 590m n 5 任玮 等 中国中部太白山不同海拔杜鹃兰根部内生真菌多样性 Research paper 菌物学报 1002 表3 不同海拔杜鹃兰根际土土壤理化性质 Table 3 Rhizosphere soil factors of Cremastra appendiculata in different altitude sample sites 根际土理化性质 Rhizosphere soil factors 样地海拔 Sample site altitudes m 1 177 1 409 1 590 有机质 Organic matter g kg 119 50 25 90a 68 46 17 08a 72 14 3 72a 含水量 Water content 0 33 0 03a 0 38 0 02a 0 36 0 01a 硝态氮 Nitrate N mg kg 67 27 25 01a 13 28 1 29b 36 13 2 10ab 铵态氮 Ammonium N mg kg 43 77 11 58a 29 94 1 41a 48 07 6 29a 速效磷 Available P mg kg 50 15 1 17a 30 06 5 29b 34 61 6 84b 速效钾 Available K mg kg 72 91 4 66a 80 99 3 14a 77 20 1 39a 注 表中数据为均值 标准误 SE 同行不同字母代表差异显著 Duncan 检验 P 0 05 n 5 Note The data in the table is the mean standard error SE n 5 Different letters within a row indicate the values are significantly different at the level of P 0 05 by Duncan s test 与海拔极显著负相关 辛普森指数与海拔极 显著正相关 与硝态氮显著负相关 香侬维 纳指数与海拔极显著负相关 与硝态氮显著 正相关 表 4 说明杜鹃兰根部内生真菌群 落多样性与海拔有关 且受硝态氮和速效磷 的影响较大 表4 根际土理化性质与真菌多样性之间的相关性分析 Table 4 Pearson s correlation analysis between rhizosphere soil factors and the fungal community diversity indices 根际土理化性质 Rhizosphere soil factors 相关系数 Pearson s correlation index 香侬维纳指数 Shannon Wiener index 丰富度 Richness 均匀度指数 Evenness 辛普森指数 Simpson index 海拔 Altitude 0 858 0 868 0 484 0 821 含水量 Water content 0 049 0 054 0 293 0 055 硝态氮 Nitrate N 0 607 0 652 0 087 0 534 铵态氮 Ammonium N 0 266 0 280 0 437 0 235 速效磷 Available P 0 513 0 519 0 067 0 497 速效钾 Available K 0 432 0 467 0 019 0 373 有机质 Organic matter 0 323 0 368 0 365 0 267 注 表示相关性达显著水平 P 0 05 表示相关性达极显著水平 P 0 01 n 5 Note represents statistical significant at 0 05 level P 0 05 represents statistical significant at 0 01 level P 0 01 n 5 研究论文 22 May 2021 40 5 992 1007 Mycosystema ISSN1672 6472 CN11 5180 Q 菌物学报 1003 3 讨论 对兰科植物菌根真菌角担菌科 L pez Ch vez et al 2016 和胶膜菌科 Tulasnellaceae 的研究较多 盖雪鸽等 2014 本研究以组 织分离法从太白山蒿坪站 3 个海拔杜鹃兰根 部分离到的内生真菌 19 种 均为子囊菌门 其中小丛壳科 肉座菌科 丛赤壳科 角担 菌科 毛壳菌科 小双腔菌科和孢腔菌科的 12 种真菌属于兰科植物菌根真菌 郭顺星 2016 DGGE 检测到的真菌共 80 种 在组织 分离法的基础上新检测到担子菌门红菇科 珊瑚菌科和伞菌亚门的真菌 3 种 子囊菌门 柔膜菌科的真菌 1 种 明显多于组织分离法 检测到的真菌 DGGE 直接以样本中 DNA 进 行分析 不受培养方式的影响 能够更准确 地反映植物内生真菌的多样性 Strathdee Free 2013 DGG