毛木耳代料栽培适宜碳氮比及菌棒中固碳、固氮细菌群落结构.pdf

DOI 10 19675 ki 1006 687x 2020 08050 收稿日期 Received 2020 08 31 接受日期 Accepted 2020 10 10 国家食用菌产业技术体系毛木耳和药用菌栽培岗位 CARS 20 和四川食用菌创新团队项目 SCCXTD 2020 07 资助 Supported by the Projects of China Agriculture Research System CARS 20 and Mushroom Innovation Team of Sichuan SCCXTD 2020 07 通信作者 Corresponding author E mail kerrylee tw 毛 木 耳代 料 栽 培 适 宜 碳 氮 比 及 菌 棒 中 固 碳 固 氮 细 菌 群 落 结 构 叶 雷 1 2 谭 伟 1 2 张伟伟 3 戴怀斌 3 张 波 1 2 李小林 1 2 1 四川省食用菌研究所 成都 610066 2 农业农村部西南区域农业微生物资源利用科学观测实验站 成都 610066 3 什邡市农业农村局 什邡 618400 摘 要 为解析毛木耳代料栽培基质碳氮比 C N 组 成 对其生育的影响以及在最 适 C N的菌棒 菌丝和基料混合物 中参与卡尔文循环的固碳基因和固氮基因多样性 以毛木耳 上海1号 为 供 试 菌 株 设 计 5个不同C N基 质 在 同 一 条 件下进行出耳试验 测定相关农艺性状指标并采用高通量测序技术分析最佳C N处理组菌棒中固碳和固氮基因多样 性 结 果 显 示 1 在 C N约60 1时生长最佳 菌丝长速最快 为4 43 mm d 发菌期料袋污染率最低 为4 27 菌 丝 长势好 第一潮鲜耳单簇表面积达3 624 09 cm 2 簇 干耳边缘厚达0 71 mm 单 袋 干 耳 单 产 达 164 79 g 袋 转 化 率 达 14 98 生长情况其次C N 45 1和75 1 2 菌 丝 满 袋 期 C N 60 1时菌棒含cbbL固碳基因主要分布在Proteobacteria 和Actinobacteria 相 对 丰 度 分 别 为 90 8 和0 2 且 以 Proteobacteria为 主 主 要 归 属 于 Cupriavidus 41 7 Rubrivivax 33 6 Methylococcus 6 5 而 含 cbbM基因的固碳细菌未检测出 3 norB固氮基因主要分布 在Firmicutes 3 2 和 Proteobacteria 0 4 主 要 优 势 菌 属 为 Geobacillus 2 1 Macrococcus 0 9 Pseudomonas 0 2 Staphylococcus 0 1 和 Bacillus 0 1 等 本研究筛选获得了毛木耳代料栽培较佳基质 C N为60 1 并解析了菌丝满袋期参与固碳和固氮基因细菌群落 为实现毛木耳精准化栽培和研究参与基质碳 氮素物 质转化功能微生物菌群奠定了基础 图5 表5 参38 关键 词 碳氮比 毛木耳 代料栽培 农艺性状 cbbL基因 norB基因 The suitable carbon nitrogen ratio on Auricularia cornea substitute cultivation and the community structure of carbon and nitrogen assimilating bacteria YE Lei 1 2 TAN Wei 1 2 ZHANG Weiwei 3 DAI Huaibin 3 ZHANG Bo 1 2 the surface areas reached up to 3 624 09 cm 2 tuft the fresh fruiting body of the first harvested ones and edge thickness of 0 71 mm the dry fruiting body of the first harvested ones a yield of 164 79 g bag weight of dry fruiting bodies harvested three times from one bag and a converted efficiency of 14 98 2 The cbbM gene was not detected in C3 samples whereas the cbbL gene was found The cbbL containing genetic communities were dominated by Proteobacteria and Actinobacteria with relative abundances of 90 8 and 0 2 respectively of which Proteobacteria were more dominant attributable mainly to Cupriavidus 41 7 Rubivivax 33 6 叶雷 谭伟 张伟伟 戴怀斌 张波 李小林 毛木耳代料栽培适宜碳氮比及菌棒中固碳 固氮细菌群落结构 J 应用与环境生物学报 2022 28 1 97 103 Ye L Tan W Zhang WW Dai HB Zhang B Li XL The suitable carbon nitrogen ratio on Auricularia cornea substitute cultivation and the community structure of carbon and nitrogen assimilating bacteria J Chin J Appl Environ Biol 2022 28 1 97 103叶 雷 等 28 卷 第1 期 2022 年2 月 98 毛木耳Auricularia cornea Ehrenb 是木耳属Auricularia 的一种好氧性异养木腐真菌 包括黄背毛木耳和白背毛木 耳 1 2 据中国食用菌协会统计 2018年全国毛木耳产量 1 898 483 23 t 其中四川省毛木耳产量最高 为971 285 t 占 全国毛木耳总量的51 16 3 碳氮比是指栽培料中总碳 C 与总氮 N 的 含 量 比 一 般 用 C N 表示 4 郑林用等介绍 了食用菌C N计算方法 5 刘佳宁等介绍了代料栽培黑木耳的 C N计算方法 6 目前我国毛木耳生产均采用熟料袋栽 栽培 配方多以木屑 玉米芯 高粱壳 棉籽壳和甘蔗渣等为碳源 麦麸 豆粕 蚕沙和玉米粉等为氮源 并辅以石膏和石灰等以 调节pH和提供微量元素配制而成 1 且 多元 化 的 栽 培 配 方 的 获得是配方各组分C N组 成 相 协 调 的 结 果 然 而 关 于 栽 培 基 质 C N组成对毛木耳生育的影响研究却鲜见报道 在毛木耳菌棒 菌丝和基料的混合物 中异养真菌以木 耳属为绝对优势 分解消耗栽培料的各种碳水化合物 此外 菌棒中还广泛分布着各种细菌 7 它们的营养生活可能影响 着毛木耳菌丝的生长 8 其中碳素和氮素是最重要的 卡尔 文循环是光能自养型和化能自养型细菌固定碳的重要途径 其中核酮糖 1 5 二磷酸羧化 加氧酶 即 RubisCO酶 是该过 程关键酶 催化CO 2 的固定 9 该 酶 分 为 I型RubisCO和II型 RubisCO 分别对应功能基因cbbL和cbbM 一氧化氮还原酶 基 因 norB 是控制地球生态系统氮素生物转化途径重要过程 的酶编码基因之一 10 起 反 硝 化 作 用 主 要 参 与 NO转化为N 2 O 过程 可用cbbL cbbM和norB作 为 标 记 基 因 对 其 保 守 区 序 列进行扩增 比对和后续分析等 来检测环境中固碳和固氮微 生物群落 11 12 本 研 究 以 阔 叶 树 木 屑 和 玉 米 芯 为 碳 源 麦 麸 为 氮 源 研 究 栽 培 基 质 C N对毛木耳生长的影响 测定相关农艺 性 状 指 标 并 采 用 高 通 量 测 序 技 术 分 析 最 佳 C N处理组菌棒中 固碳和固氮基因多样性 以期获得毛木耳代料栽培基质适宜 C N 并为揭示参与菌棒碳 氮素循环的微生物奠定研究基础 1 材 料 与 方法 1 1 供 试 菌 株与 材 料 1 1 1 供 试 菌 株 毛 木 耳 上海 1号 菌 株 来 源 于 四 川 省 食 用菌研究所菌种保藏中心 1 1 2 主 要 材 料 栽培种配方 质量比 棉籽壳50份 米 糠20份 玉 米 芯 15份 木 屑 15份 石 灰 3份 玉 米 粉 3份 石 膏 1 份 白 糖 1份 试 验 基 础 配 方 质 量 比 木 屑 50份 玉 米 芯 50 份 石 灰 4份 石 膏 1份 并在此配方上添加不同质量的麦麸以 形成系列试验处理 Power Soil DNA Isolation Kit MoBio USA 扩 增聚合酶Q5 High Fidelity DNA Polymerase NEB M0 491L 荧 光 定 量 染 料 Quant iT PicoGreen dsDNA Assay Kit Invitrogen P7589 琼 脂 糖 凝 胶 试 剂 Agarose Invitrogen 75510 019 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 缓 冲 液 TAE Invitrogen AM9870 NanoDrop 2000分光光度计 Thermo Scientific公 司 电 泳 仪 DYY 6C型 北 京六 一 仪器 厂 Illumina MiSeq PE250 1 2 试 验 方法 1 2 1 试验时间 与 地点 毛木耳栽培试验于2018年1月 8月 在四川省德阳市什邡市湔氐镇桐林村毛木耳生产基地进行 9 月在上海派森诺生物科技股份有限公司进行基质固氮和固碳 基因的细菌群落测定 1 2 2 栽 培 基质C N 设 计与 样 品 采 集 根据栽培原料组分 C N组成情况 在以木屑和玉米芯为碳源 麦麸为氮源 石膏 和石灰调节pH和 提 供 无 机 盐 的 试 验 基 础 配 方 质 量 比 上 以麦麸添加量为单一变量 调节基质C N组成 设计成不同 C N处理共5个 即 90 1 C1 75 1 C2 60 1 C3 45 1 C4 和 30 1 C5 各 处 理 3次重复 100袋 重复 高通量测定样品采集 各处理组菌丝满袋时的菌棒 在超 净工作台上按照无菌操作流程进行采样 各处理随机选取5个 菌棒 取菌棒内部菌丝体和基质的混合物混匀成1个 样 品 每 组3次重复 采样后立即放置在液氮中30 s 然 后 迅 速 放 在 80 超低温保藏箱中备用 1 2 3 栽 培 方 法 采用袋式熟料栽培荫棚出耳模式 栽培袋 规 格 折 径 长度 厚度 20 cm 48 cm 0 003 cm 为 透 明 聚乙烯料袋 按照毛木耳代料生产常规方法进行拌料 装袋 灭菌 接种 发菌和出耳管理等 13 控制栽培基质含水量60 菌 棒 松 紧 度 菌 种菌 龄 接 种 时 间 接 种 量 750 mL玻璃瓶固 体菌种均匀接种8袋栽培袋 发菌环境和出耳环境等一致 1 2 4 观测记载项 目 及方法 总 碳 测 定 重 铬 酸 钾 硫 酸 氧化法 14 总 氮 测 定 依 照 标 准 NY T 2419 2013 15 菌丝生 长 速 度 转 化 率 测 定 按 张 金 霞等 介 绍 的 方 法 4 进行 污染率计 算 菌袋接种培养杂菌污染袋数占制袋接种总数的比例 耳片 感病率计算 在一定期间内一定耳片中某病害发生的病例出现 的频率 耳片大小测定方法 采用 排水法 来间接地测定耳 片腹面和背面的表面积 以此来衡量耳片的大小 第 一 步 随 机代表性抽取鲜耳片 将耳片切成长宽4 cm 4 cm的方块10 片 腹面和背面的表面积32 cm 2 片 分 10次 每 次 1片 逐片放 入量筒之中 并借助移液管测定每次排水体积 依据这10个排 水体积数量 方块耳片数及其表面积制作出方块耳片表面积 和排水量相关的标准曲线 第二步 通过排水法测定各处理耳 簇的排水体积 取每个处理的6个 重 复 12簇耳 中的单簇耳 用于排水体积测定 第三步 根据标准曲线和各处理单簇耳排 水体积计算该处理下各簇耳的表面积 数据采用Excel软件进行统计汇总 差异显著性分析采用 SPSS软件进行 P 0 05 1 2 5 DNA提取 PCR扩增和MISeq测序 采用土壤 DNA提取试 剂盒 Power Soil DNA Isolation Kit MoBio USA 提取总 DNA 用 0 8 琼脂糖凝胶和NanoDrop and Methylococcus 6 5 3 norB containing genetic communities were dominated by Firmicutes 3 2 and Proteobacteria 0 4 mainly including Geobacillus 2 1 Macrococcus 0 9 Pseudomonas 0 2 Staphylococcus 0 1 and Bacillus 0 1 In this study we obtained the best C N that is 60 1 for the substitute cultivation of A cornea The bacterial community that participates in carbon nitrogen assimilation was analyzed for the first time when the bag was full of hyphae and thus laying a foundation for accurate cultivation and research on the functional microbial flora involved in the conversion of carbon nitrogen in the A cornea substrate Keywords carbon nitrogen ratio Auricularia cornea substitute cultivation agronomic character cbbL gene norB gene毛 木 耳 代 料 栽 培 适 宜碳 氮 比及 菌棒中 固碳 固氮 细 菌群 落 结 构 99 Vol 28 No 1 Feb 2022 超微量分光光度计进行DNA检测 cbbL扩增前引物序 列 5 ACCAYCAAGCCSAAGCTSGG 3 后引物序列 5 GCCTTCSAGCTTGCCSACCRC 3 16 cbbM扩增引 物序列为cbbM F 5 TTCTGGCTGGGBGGHGAYTTYA TYAARAAYGACGA 3 cbbM R 5 CCGTGRCC RGCVCGRTGGTARTG 3 16 17 norB扩增引物序列为 cnorB 2F 5 GACAAGNNNTACTGGTGGT 3 cnorB 6R 5 GAANCCCCANACNCCNGC 3 扩 增 体系 25 L 5 反应缓冲液5 L 5 GC缓冲液5 L dNTP 2 5 mmol L 2 L 正 向 引 物 10 mol L 1 L 反 向 引 物 10 mol L 1 L DNA 模板2 L 超 纯 水 8 75 L Q5超保真DNA聚合酶0 25 L PCR扩增条件同苏鑫等方法 12 PCR扩增产物通过2 琼脂糖凝胶电泳进行检测 并对目标片段采用AXYGEN公司 的凝胶回收试剂盒进行切胶回收 后续使用Microplate reader BioTek FLx800 进行荧光定量 DNA样品在Illumina MiSeqPE250平台进行高通量测序等 1 2 6 数 据 处 理 与分析 MiSeqPE250下机原始数据按照 叶雷等介绍的方法 18 进行数 据整 理 过 滤 及 质量 评 估处 理 和 分 析 等 并 基 于 97 的序列相似度进行OTU operational taxonomic unit 划分和分类地位鉴定以及各分类水平的分类 学组成分析等 2 结果与 分 析 2 1 栽培料C N对 毛 木 耳 农 艺性 状的影响 2 1 1 栽 培 基 质 组 分 总 碳 总 氮 测 定 对供试 木屑 玉 米 芯 和麦麸样品进行总碳和总氮测定 结果见表1 根据表1栽培原料总碳和总氮组成情况 取其平均值进行 换算 并根据试验设计C N要 求 明 确 各 处 理 栽 培 组 分 情 况 见表2 2 1 2 菌 丝 生长 情 况 栽 培 料 袋 接 种 后 前 20 d放置在室温 25 84 2 的 无 光 环 境 抢 温 发 菌 然 后 在 温 度 17 63 4 的环境中继续发菌 直到菌丝满袋 表3 由表3可知 各处理料袋装料平均干重存在显著差异 且 随着麦麸的增加 单袋干重也在增加 供试5个处理菌丝长速 为2 4 5 72 mm d 其 中 C1最慢为2 4 mm d C5最快为5 72 mm d 料袋发菌期的杂菌平均污染率为4 3 10 3 其 中 C3 最低为4 3 C1最高为10 3 在0 05水平下 C5菌丝生长速 度显著高于C3 约29 12 C2和C4无显著差异且显著高于 C1 各处理间料袋发菌期污染率均存在显著差异 且C1显著 高于其他处理 C3显著低于其他处理 表明高C N C1 会降 低菌丝长速 长势和提高料袋发菌期污染率 相对较低 C5 C N会促进菌丝生长 但也会提高料袋发菌期污染率 综合分 析认为 C3处理条件下发菌良好 2 1 3 耳 片农 艺 性 状 依据 排水法 测定耳片表面积大小 标准曲线所用耳片厚度1 31 0 23 mm 与各处理间差异不 显著 P 0 05 以 耳 片 面 积 为 横 坐 标 X 单簇耳排水体 积 Y 为 纵 坐 标 得 标 准 曲 线 Y 0 100756X 0 2667 R 2 0 999 最终得到第一潮鲜耳腹面和背面表面积 表4 供试处理第一潮鲜耳单簇表面积为1 771 44 3 624 09 cm 2 簇 其 中 C5最 小 为 1 771 44 cm 2 簇 C3最 大 为 3 624 09 cm 2 簇 C2和C3的鲜耳和干耳厚度均最大 0 05水 平时 C3处理单簇耳表面积显著大于其他4个 处 理 表 面 积 大 35 25 104 58 C5 C4和C1耳片表面积小并无差异显著 性 C2 C3和C4的第一潮鲜耳较厚且无显著差异 C1 C2和 C3干 耳 较 厚 且 无 显 著 差 异 但 C4和C5耳片较薄 供试处理前3潮干耳产量为75 03 164 79 g 袋 图 1和图 2 由 低 至 高 顺 序 依 次 为 C5 75 03 1 28 g 袋 C1 78 18 2 39 g 袋 C4 95 99 0 80 g 袋 C2 96 27 1 39 g 袋 C3 164 79 3 14 g 袋 第一潮鲜耳和干耳均以C3最 高 干耳单产较其他处理高37 18 81 36 前 3潮干耳较其 他处理高71 17 119 63 且 转 化 率 达 14 98 其次C2和 C4无差异显著性 C1和C5出耳单产最低且差异不显著 P 表2 栽 培 料 组分 情况 Table 2 Composition of cultivated materials 处理 Number 木屑 Sawdust m kg 玉米芯 Corncob m kg 麦麸 Bran m kg 石灰 Lime m kg 石膏 Gypsum m kg 总碳含量 Total carbon m g 总氮含量 Total nitrogen m g C N C1 50 50 0 4 1 38762 0000 440 0000 88 10 C2 50 50 3 2 4 1 39791 2160 530 4640 75 01 C3 50 50 9 0 4 1 41656 6700 694 4300 59 98 C4 50 50 20 0 4 1 45194 6000 1005 4000 44 95 C5 50 50 48 5 4 1 54361 0550 1811 0950 30 46 表3 菌 丝 生长 情 况 Table 3 Growth vigor of mycelium 处理 Number 每袋平均干重 Average dry weight per bag m kg 菌丝平均生长速度 Average growth rate of mycelium v mm d 1 菌丝长势 Growth vigor of mycelium 料袋发菌污染率 Contamination rate r C1 0 91 2 40 0 15d 10 34 0 05a C2 0 98 2 72 0 11c 7 67 0 12c C3 1 10 4 43 0 40b 4 27 0 15e C4 1 15 2 88 0 22c 7 20 0 20d C5 1 23 5 72 0 30a 8 16 0 06b 干重为基质自然晾干后每3袋的平均重量 和 分 别 表 示 稀 疏 密 较 密 和 浓 密 同列数据后有不同小写字母表示在0 05水平下差异显著 The dry weight is the weight average of each 3 bags dried naturally represent sparse dense more dense and thick mycelia respectively Different lowercase letters in the same column represente significant difference at the 0 05 level 表1 栽 培 原 料 总 碳 和 总氮 测 定 值 Table 1 Results of total carbon and nitrogen in cultivation materials 材料名称 Material name 总碳 Total carbon TC g kg 1 总氮 Total nitrogen TN g kg 1 平均C N Average of C N 木屑 Sawdust 399 77 0 31 1 87 0 06 213 78 玉米芯 Corncob 375 47 0 21 6 93 0 06 54 18 麦麸 Bran 321 63 0 60 28 27 0 06 11 37 石灰和石膏不作测定 6 Lime and gypsum are not determined 6 叶 雷 等 28 卷 第1 期 2022 年2 月 100 0 05 可见C3是较理想的C N 有 利 于 产 量 的 形 成 2 1 4 出耳 期 感 病 率 供试5个处理均能出耳 第1潮耳几乎 无 感 病 情 况 第 2潮耳时 气温回升 病虫基数大 有感病耳片 出 现 第 3潮耳产量骤减无统计价值 第2潮耳感病情况见表5 供试处理第二潮耳期间的感病率范围为13 89 50 56 在0 05水平 C1和C5感病率显著高于其他处理 C3感病率显著低于其他处理 C N会引起毛木耳菌棒出现不 同程度的污染 C1处 理 在 第 二 潮 耳 采 收 后 菌 棒 污 染 率 高 达 95 96 C4最低为1 79 C3和C4处理菌棒相对杂菌污染率 较 低 说 明 栽 培 基 质 C N不协调可引起出耳产量降低 出耳期 菌棒杂菌易污染的情况 C N还 直 观 地 对菌棒 色 泽 表 现有显著影 响 图 3 随着 C N的下降 菌棒颜色呈现深褐色 褐色 黄白色 灰褐色的 过渡趋势 菌丝长势在不同处理间发生了剧烈的变化 综上分析表明 C3处 理 菌 丝 长 速 适 中 出 耳 单 产 高 耳 片 厚 出 耳 感 病 率 低 即 C N约在60 1较适宜毛木耳菌丝生长和 出耳产量形成 2 2 菌丝 满 袋 期C3处 理固碳和固氮 细菌群落 多 样性 2 2 1 含cbbL基因的固碳细菌群落结构 除了栽培基质自 身C N组成会对毛木耳菌丝生长产生影响 基质微生物组成 也在一定程度上产生作用 为进一步研究C3栽培基质中细 菌群落对基质碳循环和氮循环的响应和反馈 对C3菌丝满袋 无光环境控温发菌培养54 d 时菌棒进行功能基因cbbL和 cbbM的测定 对cbbL和cbbM基 因 进 行 扩 增 结 果 cbbL基因 PCR扩增达到要求 在Illumina Miseq PE250平台进行了高通 量测序 全 部样品16S rRNA基因序列原始数据提交到NCBI 的SRA数 据 库 登 录 号 PRJNA656319 但 cbbM基因多次扩 增结果均为阴性 故未进行后续测定 采用Illumina MiSeq平 台 高 通 量 测 序 对 C3处理菌丝满 袋期菌棒细菌进行碳循环基因cbbL的 测 定 结 果 得 到 39 687 条 有 效 序 列 并 根 据 OTU划分和分类地位鉴定结果 获得 6个门 7个纲 14个目 19个科 24个属 在门分类 水平 图 4a 变 形 菌 门 Proteobacteria和放线菌门Actinobacteria 为 优 势 菌 门 且 相 对 丰 度 分 别 为 90 8 和0 2 Others为 8 9 在属分类 水平 图 4b 含 cbbL基 因固 碳 细 菌 相 对丰 度排名前10 主 要 归 属于贪铜菌属Cupriavidus 41 7 变形菌门 红长命菌属Rubrivivax 33 6 变 形菌门 甲基球菌属Methylococcus 6 5 变形菌门 贪噬菌属 Methylococcus 3 3 变形菌门 硫杆菌属Thiobacillus 1 4 变形菌门 慢生根瘤菌属Bradyrhizobium 0 9 变形菌门 伯克氏菌属Bradyrhizobium 0 7 变形菌门 嗜酸菌属Acidiphilium 0 5 变 形菌门 根瘤菌属Rhizobium 0 4 变 形菌门 和 Methylibium 0 3 变形菌门 其中贪铜菌属和红长命菌属为丰度最 大的两个属 占所有菌群的75 3 2 2 2 含norB基因的固氮 细菌群落结构 与用于cbbL基因 测定样品同期采样 norB基因进行PCR扩 增 等后 在 Illumina MiSeq PE250平台进行功能基因的测定 结果获得49 123条 有 效 序 列 并 根 据 OTU划分和分类地位鉴定获得4个门 7个 纲 12个目 16个科 19个属 在门分类 水平 图 5a 厚 壁 菌 门Firmicutes和变形菌门Proteobacteria为 优 势 菌 门 相 对 丰 度分别是3 2 和0 4 Others达96 4 在属分类 水平 图 5b 含 norB基因细菌主要归属于土芽孢杆菌Geobacillus 2 1 厚 壁 菌 门 巨 球 菌 属 Macrococcus 0 9 厚 壁 菌 门 假 单 胞 菌 属 Pseudomonas 0 2 变 形 菌 门 葡 萄球菌属Staphylococcus 0 1 厚 壁 菌 门 和 芽 孢 杆 菌 属 Bacillus 0 1 厚 壁 菌 门 等 3 结 论与 讨 论 本研究证明栽培料C N组成对毛木耳菌丝长速 菌丝长 图2 各 处 理 第一 潮 鲜 耳 C1 C5表示C N分别为90 1 75 1 60 1 45 1和30 1 Fig 2 Fresh fruiting bodies at the first harvest C1 C5 represent 90 1 75 1 60 1 45 1 and 30 1 respectively C1 C2 C3 C4 C5 Number Weight of fresh fruiting bodies at the first harvest g bag Weight of dry fruiting bodies at the first harvest g bag Weight of dry fruiting bodies harvested three times g bag Converted efficiency 700 600 500 400 300 200 100 0 16 14 12 10 8 6 4 2 0 m g r 图1 每 袋 产 量 m 和 转 化 率 r 分 析 C1 C5表示C N 分别为90 1 75 1 60 1 45 1和30 1 Fig 1 Analysis of yield m per bag and converted efficiency r C1 C5 represent 90 1 75 1 60 1 45 1 and 30 1 respectively 表4 第 一潮耳表 面积 大 小 和厚度 Table 4 The surface area and thickness of the first harvest fruiting bodies 处理 Number 单簇耳表面积大小 Surface area per tuft of fruiting body A cm 2 鲜耳片厚度 Thickness of fresh fruiting body mm 干耳片厚度 Thickness of dry fruiting body mm C1 1872 34 785 33c 1 28 0 21b 0 69 0 19a C2 2679 57 543 68b 1 51 0 11a 0 70 0 20a C3 3624 09 478 80a 1 43 0 28ab 0 71 0 22a C4 2318 14 852 47bc 1 38 0 12ab 0 54 0 10b C5 1771 44 403 93c 1 29 0 16b 0 49 0 10b 同列数据后有不同小写字母表示在0 05水平下差异显著 Different lowercase letters in the same column represent significant difference at the 0 05 level 毛 木 耳 代 料 栽 培 适 宜碳 氮 比及 菌棒中 固碳 固氮 细 菌群 落 结 构 101 Vol 28 No 1 Feb 2022 势 发菌 期 污 染 率 耳片 大小 耳片厚 度 耳片感 病 率 出耳 期菌棒杂菌污染率和出耳单产等均有显著影响 在以木屑 和玉米芯为碳源 麦麸为氮源时 栽培料基质C N组成在C3 60 1 左 右 菌 丝 长 速 快 4 43 mm d 发菌期料袋污染率 低 4 27 菌 丝 长 势 好 单 簇 耳 表 面 积 达 3 624 09 cm 2 簇 第一潮干耳厚 达 0 71 mm 出 耳 单 产 达 164 79 g 袋 从 生 产 栽 培 角 度 认 为 在 C N为C3 即60 1 左 右 时 利 于 毛 木 耳 产 量的形成 林新坚等以甘蔗渣为碳源 硫酸铵为氮源设计了 不同C N培 养 基 进 行 试 验 结 果 显 示 C N为80 100 1时 利 于 781 菌株子实体的形成 且认为80 1时 最 理 想 其 后 依 次 是100 1和60 1 且 认 为 40 1时原基不会形成 19 本研究表明 上海 1号 菌株在碳氮比为 60 1时是较理想的 其次是45 1和 75 1 在 30 1时 也 能 形 成 子 实 体 第 一 潮 干 耳 达 69 g 袋 但 是 第二潮后不再形成原基 这可能与菌株差异有关 贺新生等设 计了16个栽培基质配方栽培毛木耳 上海3号 菌 株 结 果 显 示采用60 100 1的高C N和0 4 0 8 低含氮量的配方栽培 毛 木 耳 时 干 耳 生 物 学 效 率 达 到 了 20 24 20 陈文良等采 用不同基质配方栽培北京大木耳 Au 1 得 出 C N为25 59 1 的配方利于木耳菌丝生长 21 但 没 有 进 一 步 作 出 耳 产 量 统 计 柯丽娜等在白背毛木耳栽培基质中添加不同量的豆粕以调整 基质C N组成 从而得出了豆粕的最适宜添加比例 22 张波等 在毛木耳基础配方 木屑35 玉 米 芯 30 米 糠 20 棉 籽 壳10 石 灰 4 和石膏1 中以麦麸和玉米粉分别作为氮源 以替代木屑百分含量 结果表明 在基础配方中以2 麦麸或 6 玉米粉替代木屑作为氮源时能获得较高栽培效益 23 但 未给出栽培料具体的碳氮比组成 汤春燕以不同培养料栽培 毛 木 耳 黄耳 10号 菌 株 发 现 木 屑 67 玉 米 芯 20 麦 麸 10 石 灰 2 和石膏1 的配方表现优质高产 24 根 据 文 章 碳氮比数据换算该配方碳氮比为120 1 张晓宇表明短毛木耳 Auricularia villosula Malysheva菌丝营养生长最适碳氮比为 20 1 25 但 生 殖 生 长 阶 段 出 耳 基 质 碳 氮 比 未 深 入 研 究 姜 建新等介绍 玉木耳栽培要求基质碳氮比为30 40 1 26 张介 驰等以木屑和麦麸为碳 氮源袋栽黑木耳 结果表明碳氮比为 114 3 1的 木 屑 配 方 菌 丝 洁 白 吃 料 速 度 最 快 菌 袋 弹 性 好 单 产 高 品 质 优 27 可见基质C N对食用菌生殖生长意义重大 肖生美对双孢蘑菇和秀珍菇栽培过程中碳素物质转化及 CO 2 排放规律进行的研究表明 在子实体生长阶段基质干物 质量显著减少 呼吸耗能强度大 双孢蘑菇和秀珍菇培养料 中碳素分别仅有5 29 7 45 和5 36 6 34 转移到子实体 中去 其余大部分的碳量以呼吸形式消耗掉 28 但 没 有 探 讨 栽 培体系碳 氮循环还可能与哪些功能细菌菌群有关 本研究中 含cbbL基因的固碳细菌主要包括 变形菌门中一些化能自养 微 生 物 如 Rubrivivax和Variovorax等固碳微生物 变形菌 门中主要包括一些典型的非共生固氮的细菌 如Rhizobium和 Bradyrhizobium等 变形菌门仅有Methylococcus 石岩首 次发现Cupriavidus菌株 自生固氮菌 具有木质素降解能力 且在pH为7 温 度 为 30 最适宜 29 杨颖等表明Cupriavidus sp SHE的细胞上清液 全细胞以及胞内提取物均具有合成 表5 第二 潮 耳 感 病 情况 及其差异性比 较 Table 5 The infection rate of fruiting bodies at the second harvest 处理 Number 耳片感病率 Infection rate r 菌棒杂菌污染率 Contamination rate of artificial bed log r 主要杂菌污染 表观情况 Main contamination type C1 50 56 2 55a 95 96 菌棒变黑变黄 绿霉 黄曲霉 细菌污染 The artificial bed log turns black and yellow with Trichoderma Aspergillus and bacterial contamination C2 35 00 1 67b 20 19 菌棒变黑变黄 绿霉 细菌污染 The artificial bed log turns black and yellow with Trichoderma and bacterial contamination C3 13 8