保定辣椒炭疽病菌鉴定及对5种药剂的敏感性.pdf

null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 收稿日期 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 修订日期 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 基金项目 null 河北省现代农业产业技术体系建设专项 nullnullnullnullnullnullnullnullnull 武汉市园林植物炭疽病绿色防控技术研究与应用 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null 通信作者 null nullnullnullnullnull 张娜 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 杨文香 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null 为并列第一作者 保定辣椒炭疽病菌鉴定及对 null 种药剂的敏感性 朱亚楠 null null 王冰雪 null null 戴祎卓 null 杨军玉 null 胡同乐 null 张 null 娜 null null 杨文香 null 河北农业大学植物保护学院 河北省农作物病虫害生物防治技术创新中心 保定 nullnullnullnullnullnullnull 摘要 null 为明确河北省保定市部分县区辣椒炭疽病病原菌种类 以望都 顺平和安新县采集的辣椒炭疽病病果为材 料 利用组织分离法获得炭疽病病原菌nullnull株 通过形态学和分子生物学鉴定 确定nullnull株为平头炭疽菌nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null株为斯高威尔炭疽菌nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 分离比例分别为 nullnullnullnullnull和nullnullnullnullnull 采用菌丝生长速率法测定 了null种杀菌剂对nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull 和nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull的室内抑菌效果 结果表明 咯菌腈对这null个菌株抑菌效 果最好 nullnull nullnull 分别为nullnullnullnullnull nullnull null null nullnull和nullnullnullnullnullnullnull null null nullnull 多菌灵和苯醚甲环唑对 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull表现较好的抑制效果 nullnullnullnull分 别为nullnullnullnullnull nullnull null null nullnull和nullnullnullnullnullnullnull null null nullnull 嘧菌酯和啶酰菌胺抑制效果稍差 多菌灵和苯醚甲环唑同样对 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull效果较好 nullnullnullnull分别为nullnullnullnullnullnullnull null null nullnull和nullnullnullnullnullnullnull null null nullnull 嘧菌酯和啶酰菌胺对 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull抑制效果较差 nullnullnullnull 分别为nullnullnullnullnull nullnull null null nullnull和nullnullnullnullnullnullnull null null nullnull 本试验结果明确了保定地区辣椒炭疽病的病原 为生产中防治由 nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull引起的辣椒炭疽病提供理论依据和用药参考 关键词 null 辣椒炭疽病 null 病原鉴定 null 杀菌剂 null 室内毒力测定 中图分类号 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 文献标识码 nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnull null null nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull null null nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnull nullnullnullnull null nullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull null null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull null null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnull null null nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null null nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnull null nullnull 辣椒 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 是我国栽培面积最大的蔬 菜作物 null nullnull 河北省是辣椒生产大省 生产面积已达 null 万 nullnull null 总产量 nullnullnull 余万 null 病害的肆虐给辣椒生 产带来严峻的挑战 据报道 目前对辣椒造成危害的 病原真菌多达 nullnull 种 辣椒炭疽病是世界范围内辣 椒采前和采后的重要病害 可造成 nullnullnullnullnullnull 的减 nullnullnullnull 产 给辣椒生产造成严重的经济损失 null 辣椒炭疽病的主要症状为在病果和病叶表面产 生的凹陷病斑 后期病部产生同心轮纹排列的小黑 点 湿度大时溢出黏液 病原菌不但危害生长期的 辣椒果实和茎叶 而且会导致果实储存和运输的过 程中不断产生腐败 从而严重影响了鲜椒的产量和 品质 引起辣椒炭疽病的病原菌属于炭疽菌属 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 常见优势致病种有平头炭疽菌 nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 斯高威尔炭疽菌 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 以及暹罗炭疽菌 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 等 null 我国已报道的 辣椒炭疽病致病菌至少有 nullnull 种 且不同地区的优势 种差异较大 null 目前 化学防治是作物炭疽病菌的主要防治手 段 尤其在病害流行时更是不可替代的 周建波 等 null 用 null 种不同作用机制的 nullnull 种药剂防治辣椒炭 疽病 发现这些药剂的田间防效在 nullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnull 之间 其中 nullnullnull 咪鲜胺锰盐可湿性粉剂防 效最高 高杨杨等 null 发现唑醚菌酯 咯菌腈和啶菌 唑对尖孢炭疽菌 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 引起的辣椒炭疽病具 有较好的预防和治疗作用 但化学药剂的单一使 用和滥用 使得致病菌群对药剂敏感性下降 防治 效果大打折扣 nullnullnullnullnull 等 null 基于我国 nullnullnull 株平头 炭疽菌 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 的分析发现 该菌群体对咪鲜 胺 氟环唑和苯醚甲环唑敏感 对戊唑醇和腈菌唑 产生了一定抗药性 但 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 对 nullnullnull 类杀菌 剂抗性风险较低 评估药剂对辣椒炭疽病的潜在 应用价值也是对病害进行有效防控的前提 王爱萍 等 null 发现苯并烯氟菌唑对尖孢炭疽菌有较高毒力 且对辣椒炭疽病田间保护和治疗防效达 nullnullnull 以 上 可开发为防治辣椒炭疽病的新药剂 目前河北省保定市辣椒炭疽病菌群体种类及对 药剂敏感性尚无系统的研究 鉴于此 本研究对保 定部分辣椒主要生产县区辣椒炭疽病菌进行分离鉴 定 明确致病菌类型 并测定优势致病菌对苯醚甲环 唑 咯菌腈 多菌灵 嘧菌酯和啶酰菌胺的敏感性 旨 在为河北省保定市辣椒炭疽病防治提供指导 也为 辣椒炭疽病菌对生产中常见药剂的抗药性监测奠定 基础 nullnull 材料与方法 nullnullnullnull 供试材料 nullnullnullnull 年从河北保定望都县 nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull 顺平县 nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull 安新县 nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull 采集的感染辣椒炭疽病的辣椒果实 nullnullnull 苯醚甲环唑 nullnullnull 咯菌腈 nullnullnull 多菌灵 nullnullnull 嘧菌酯 nullnullnull 啶酰菌胺 以上原药均由河北威远 生物化学有限公司提供 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull 取 nullnullnullnull 去皮切片的新鲜马铃薯煮沸并过 滤 加入 nullnullnull 葡萄糖和 nullnullnull 琼脂 然后定容至 nullnull 分装三角瓶 nullnullnullnull 高压灭菌 nullnullnullnullnull 备用 nullnullnullnull 试验方法 nullnullnullnullnullnull 病原菌的分离 纯化 辣椒炭疽病样品用无菌水清洗后 在超净工作 台内用灭菌的剪刀剪取病健交界处的组织块 nullnullnull nullnullnullnull 大小 用 nullnullnull 乙醇消毒后于次氯酸钠溶液 中浸泡 nullnullnullnull 最后无菌水漂洗 null 次 将表面水分晾 干后 放入事先准备好的 nullnullnull 平板中 在恒温培养 箱中 nullnullnull 培养 待组织块在 nullnullnull 平板上培养 null null nullnull 长出菌丝后 挑取边缘菌丝进一步纯化并编号 于 nullnullnull 恒温培养箱暗培养 nullnullnull 置于 nullnull 冰箱保存 备用 nullnullnullnullnullnull 病原菌形态学鉴定 选取纯化的代表性菌株 nullnullnullnull 和 nullnullnullnull 接种于 nullnullnull 培养基 每个菌株重复 null 次 nullnullnull 黑暗条件下 培养 null 后观察记录菌落形态 颜色及孢子形状等 特征 nullnullnullnullnullnull 分离菌株 nullnullnullnull 和 nullnullnullnull 对辣椒的致病性 测定 nullnull 选取健康无病斑的辣椒果实 用无菌水洗净后 nullnullnull 乙醇对全果进行表面消毒 并用无菌牙签在已 消毒部位刺出 nullnullnull 的伤口面 将新鲜的供试菌株 菌饼中有菌丝的一面紧挨着伤口面进行接种 以无 菌的 nullnullnull 培养基块为对照 在接种处用湿棉球进行 保湿 然后将接种完的材料放入 nullnullnull 恒温培养箱 中 每天观察果实的发病情况 nullnull 后对病斑组织中 的真菌进行再分离培养和鉴定 nullnullnullnullnullnull 病原菌的分子生物学鉴定 将菌株菌 nullnullnullnull 和 nullnullnullnull 分别接种在铺有灭菌 玻璃纸的 nullnullnull 平板上进行培养 nullnull 后收集菌丝 采 用 nullnullnullnull 法提取菌株基因组 nullnullnull 对病原菌的 nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnull 进行 nullnullnull 扩增 所用 引物见表 null nullnullnull 扩增反应程序设置为 nullnullnull 预变性 nullnullnull nullnull卷第null期 朱亚楠等 保定辣椒炭疽病菌鉴定及对 null种药剂的敏感性 表null null 用于炭疽病菌多基因联合鉴定的引物 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 引物 nullnullnullnullnullnull 序列 nullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull 参考文献 nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnull 变性 nullnullnullnull nullnullnullnullnull 退火 nullnullnullnullnullnull 根据引 物而定 nullnullnull 延伸 nullnullnullnull nullnull 个循环 最后 nullnullnull 延伸 nullnullnullnull 扩增产物采用 nullnullnullnull 琼脂糖凝胶进行电泳检 测 检测合格后将扩增产物送上海生工生物工程技 术有限公司进行测序 将测序所得核苷酸序列在 nullnullnullnullnullnullnull 数据库中进行比对 根据比对结果 参照 nullnullnullnull 等 nullnull 的研究选取相关炭疽菌株基因序列 将 多基因序列首尾相接后 利用 nullnullnullnullnullnullnullnullnull 进行序列 比对 然后用 nullnullnullnullnullnull 软件构建系统发育树 nullnullnullnullnullnull 药剂室内毒力测定 采用菌丝生长速率法 nullnull 测定药剂对平头炭疽 菌 nullnullnullnull 和斯高威尔炭疽菌 nullnullnullnull 的毒力 在对供 试菌株进行活化培养 nullnull 之后 在菌落边缘打取直 径 nullnullnull 的菌饼 分别接种到含有不同浓度杀菌剂的 nullnullnull 培养基平板的中心位置 每一种杀菌剂都设置了 null 个不同的浓度梯度 表 null 以不含药 nullnullnull 培养基上 生长的菌落作为空白对照 每处理 null 次重复 将其放 入 nullnullnull 恒温培养箱中培养 在第 null 天时 使用十字交 叉法量取菌落直径 计算出在不同药剂浓度下的菌丝 生长抑制率 根据杀菌剂浓度的对数值 null 和抑菌生 长率的几率值 null 采用 nullnullnull 进行数据处理 获得抑制 中浓度 nullnullnullnull nullnullnull 置信区间 nullnullnullnullnullnullnull 等参数 利用 nullnullnullnull 软件进行卡方检验 根据 nullnullnullnull 分析比较不同杀 菌剂对供试病原菌的毒力 进一步通过菌丝生长速 率法测定不同地方分离到的优势致病菌 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull 对生产中常用药剂苯醚甲环唑的敏感性 菌丝生长抑制率 null 对照组菌落直径 null 处理组 菌落直径 对照组菌落直径 nul