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植物根际促生菌普城沙雷菌 A21-4 对黄瓜 生长及土壤微生态的影响 丁方丽 1李 嫚 2刘东平 1张忠良 1孙治强 2朴凤植 2*申顺善 1* ( 1 河南农业大学植物保护学院,河南郑州 450002; 2 河南农业大学园艺学院,河南郑州 450002) 摘 要:为探讨植物根际促生菌普城沙雷菌A21-4在黄瓜上的应用效果,将A21-4菌悬液灌注到黄瓜根际土壤,调查其对 黄瓜生长发育和根际土壤微生态的影响。结果表明,根部灌注A21-4能显著促进苗期和田间生育期黄瓜生长发育,并显著 提高根系活力、产量和品质,黄瓜产量比对照增加32.22%,且黄瓜果实中蛋白质、可溶性糖和VC含量均比对照显著增加; 同时,A21-4对黄瓜根际土壤具有明显的调节作用,显著提高了黄瓜根际土壤脲酶、磷酸酶、蔗糖酶和过氧化氢酶活性,还 提高了黄瓜根际土壤细菌和放线菌的数量及黄瓜根际土壤速效氮、磷、钾的含量。 关键词:植物根际促生菌(PGPR);普城沙雷菌A21-4;黄瓜;根区灌注;生长;土壤微生态 丽 等,2015) 。由于PGPR具有促进植物生长、防 治植物病害和改善植物根际土壤微生态环境的优 良特性,因此,很多学者都积极投入到PGPR的开 发、应用研究中。邱勤等(2011)研究指出,将 PGPR菌剂施于土壤后,能显著促进苜蓿的生长, 同时增加土壤中细菌、真菌、放线菌等微生物的 数量,进而提高土壤养分。普城沙雷菌(Serratia plymuthica)A21-4是从洋葱根际土壤中分离出的 辣椒疫病生防菌,能有效定殖在辣椒根系及根际土 壤,抑制辣椒疫病的发生(Shen et al.,2005),同时, 能显著促进辣椒生长,改善辣椒根际土壤微生态环 境(吕雅悠 等,2016)。在前期A21-4对辣椒的促 生作用研究的基础上,本试验探究了A21-4对黄瓜 生长及根际土壤微生态环境的影响,以期为A21-4 在黄瓜实际生产中的应用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 试验材料 A21-4的利福平标记菌株(100 LmL -1 ) 由河南农业大学植物病害生物防治研究室在-80 超低温冰箱保存备用;黄瓜品种为寒育6号(河南 豫艺种业科技发展有限公司选育) ;供试培养基为 TSA培养基(Tryptic Soy Broth Difco. 30 g,琼脂 18 g,蒸馏水1 000 mL)、AIA培养基(Actinomycete 丁方丽,女,硕士研究生,主要从事植物病害生物防治研究,E-mail: 332134220qq.com *通讯作者(Corresponding authors) :申顺善,女,教授,硕士生导师, 主要从事植物病害生物防治研究,E-mail:shen0426163.com;朴凤 植,男,教授,硕士生导师,主要从事设施蔬菜栽培与生理学研究, E-mail:piao1203163.com 收稿日期:2017-12-04;接受日期:2018-02-05 基金项目:国家重点研发计划项目(2016YFD0201008),国家农业产业 技术体系建设专项(CARS-25-C-06) 植物根际促生细菌(plant growth promoting rhizobacteria,简称PGPR)是指自由存在于植物根 际范围中的一类可促进植物生长、防治病害、增加 产量的细菌的统称(Kloepper et al.,1980)。PGPR 菌株可通过溶磷、解钾、固氮、产生植物激素等作 用,直接促进植物生长,提高产量;还可以通过产 生嗜铁素和抗生素等抑制病原物的生存与繁殖,进 而减轻作物病害,改善植物根际土壤微生态环境, 间接促进植物生长(Jung et al.,2007;李冰 等, 2015) 。如:从辣椒根际分离得到的具有产生IAA 能力的枯草芽孢杆菌NJAU-G10能显著促进辣椒 幼苗的生长和根系发育(张杨 等,2015) ;枯草芽 孢杆菌QM3能显著增加番茄植株叶片数,促进番 茄株高及根系发育,且有效防治番茄早疫病(胡青 平 等,2011) ;在大豆根际同时接种慢生大豆根瘤 菌和胶质类芽孢杆菌后,土壤酶活性显著提高(刘 36 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 36 研究论文 中 国 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 2018(5):36 - 41 Isolation Agar Difco. 22 g,蒸馏水1 000 mL)和PDA 培养基(Potato Dextrose Broth Difco. 24 g,琼脂18 g, 蒸馏水1 000 mL)。 1.2 试验方法 本试验于2017年16月在河南省郑州市毛庄 绿园蔬菜基地进行。1月17日在日光温室穴盘播 种育苗,2月17日移栽到大棚,施肥按照蔬菜基 地常规管理进行,6月15日拉秧结束。 1.2.1 A21-4菌悬液的配制及处理 将A21-4在 TSA培养基上培养48 h后,用0.1 molL -1MgSO 4 无菌溶液配制成10 8 cfumL -1 的A21-4菌悬液。黄 瓜育苗期和田间生育期分别用A21-4菌悬液处理, 在育苗期,第1片真叶展开时,用A21-4菌悬液 进行灌根处理(50 mL株 -1 ) ;移栽10 d后再用 A21-4菌悬液进行灌根处理(200 mL株 -1 ), 以 清水处理为对照,每个处理设3次重复,每个重复 150株(6行重复 -1 ,25 株行 -1 )。 1.2.2 黄瓜生育指标和生理指标的测定 2月17 日,即黄瓜播种后30 d,每个重复选9株,每个处 理3次重复,测定黄瓜苗期株高、茎粗、地上部鲜 质量、根鲜质量和第3片真叶的叶绿素含量;3月 19日,即移栽后30 d,每个重复取5株,每个处 理3次重复,测定黄瓜开花期株高、茎粗、叶片数、 叶面积和开花数;在黄瓜苗期(2月17日) 、开花 期(3月19日) 、初果期(4月7日) 、盛果期(5 月2日)和采收后期(6月7日)分别测定根系活 力。叶绿素含量的测定采用分光光度法,根系活力 的测定采用氯化三苯基四氮唑法(高俊凤,2006)。 1.2.3 黄瓜产量和品质相关指标的测定 黄瓜采收 期,每个重复选取30株(6行重复 -1 ,5 株行 -1 ), 每个处理3次重复,采集黄瓜果实,采用称重法测 定单株黄瓜果实质量,直至结果期完结后,计算单 株产量和每667 m 2 产量。黄瓜初果期、盛果期和 采收后期分别测定品质相关指标,VC含量采用2,6- 二氯酚靛酚滴定法测定,蛋白质含量采用考马斯亮 蓝G250法测定,可溶性糖含量采用蒽酮比色法测 定(苍晶和赵会杰,2013)。 1.2.4 黄瓜根际土壤酶活性的测定 在黄瓜开花 期、初果期、盛果期和采收后期分别测定根际土壤 脲酶、磷酸酶、过氧化氢酶和蔗糖酶活性。黄瓜根 际土壤样品的采集:轻轻拨开黄瓜表层土壤,收集 黄瓜根际土壤,过60目筛,每处理3次重复。脲 酶活性采用苯酚钠-次氯酸钠比色法测定,磷酸酶 活性采用磷酸苯二钠比色法测定,过氧化氢酶活性 采用高锰酸钾滴定法测定,蔗糖酶活性采用3,5- 二硝基水杨酸比色法测定(关荫松,1986)。 1.2.5 黄瓜根际土壤微生物数量的测定 在黄瓜开 花期、初果期、盛果期和采收后期分别测定黄瓜根 际土壤细菌、真菌和放线菌的数量。土壤样品的采 集方法同1.2.4,根际土壤微生物的测定采用稀释 平板涂布法。称取1 g土样,倒入装有100 mL无菌 水的三角瓶中,充分振荡,然后用无菌水进行梯度 稀释,配制成一系列浓度梯度的稀释液,将0.1 mL 的稀释液均匀涂布在含PCNB的TSA平板上,置于 28 恒温箱中培养3 d后调查细菌数量;将0.1 mL 的稀释液均匀涂布在含乳酸的PDA平板上,置于 26 恒温箱中培养5 d后调查真菌数量;将0.1 mL 的稀释液均匀涂布在含乳酸的AIA平板上,置于 28 恒温箱中培养7 d后调查放线菌数量。调查细 菌和真菌采用新鲜土样,调查放线菌采用自然风干 的土样。 1.2.6 黄瓜根际土壤速效氮、磷、钾的测定 在黄 瓜开花期、初果期、盛果期和采收后期分别测定黄 瓜根际土壤速效氮、磷和钾的含量。土壤样品的采 集方法同1.2.4,速效氮含量的测定采用碱解扩散 法,速效磷含量的测定采用碳酸氢钠法,速效钾含 量的测定采用乙酸铵浸提,火焰光度法(鲍士旦, 1999)。 1.3 数据处理与分析 采用Excel 2003和SPSS 13.0软件进行数据分 析,采用Duncan氏新复极差法(SSR法)进行显 著性检验。 2 结果与分析 2.1 A21-4对黄瓜生育指标和生理指标的影响 A21-4处理能显著促进苗期和田间生育期黄 瓜生长发育。在苗期,株高、茎粗、地上部鲜质 量和根鲜质量分别比对照增加48.17%、3.62%、 111.25%和53.03%,叶绿素含量比对照增加 27.84%(表1) ;在开花期,黄瓜株高、茎粗、叶 片数、叶面积和开花数分别比对照增加27.57%、 13.63%、22.35%、36.64%和23.42%(表2)。同时, 37 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 37 研究论文 中 国 蔬 菜 CHINA VEGETABLES A21-4处理显著提高了黄瓜各生育期的根系活力, 在苗期、开花期、初果期、盛果期和采收后期,分 别比对照提高70.83%、40.50%、73.58%、112.61% 和50.00%(表3)。 2.2 A21-4对黄瓜产量和果实品质相关指标的影响 A21-4显著提高了黄瓜产量,每667 m 2 产量 达到2 512.74 kg,比对照增产32.22%(表4)。 同时,A21-4显著增加了黄瓜果实的蛋白质、可 123.44%、11.76%和59.06%(表5)。 2.3 A21-4对黄瓜根际土壤酶活性的影响 A21-4显著提高了黄瓜根际土壤酶活性。 在黄瓜开花期、初果期、盛果期和采收后期, A21-4处理的黄瓜根际土壤脲酶活性分别比对照提 高15.05%、20.05%、14.37%和29.29%,磷酸酶活 性分别比对照提高36.28%、57.77%、146.02%和 115.74%,蔗糖酶活性分别比对照提高10.26%、 25.69%、208.33%和55.56%,过氧化氢酶活性分别 比对照提高70.00%、 62.50%、 14.77%和20.97% (图1)。 2.4 A21-4对黄瓜根际土壤微生物数量的影响 A21-4能显著增加黄瓜根际土壤细菌(采收 后期除外)和放线菌的数量,显著减少真菌的数 量。在黄瓜开花期、初果期、盛果期和采收后期, A21-4处理的黄瓜根际土壤细菌的数量分别比对 照增加25.75%、26.19%、18.31%和10.49%,放 线菌的数量分别比对照增加63.00%、64.86%、 11.66%和106.75%,而真菌的数量分别比对照减少 36.40%、36.81%、26.55%和45.81%(表6) 。 2.5 A21-4对黄瓜根际土壤速效氮、磷、钾含量 的影响 A21-4显著增加了黄瓜根际土壤速效氮(开 花期除外) 、磷和钾的含量(图2) 。在黄瓜开花 期、初果期、盛果期和采收后期,A21-4处理的 表 1 A21-4对黄瓜苗期生育指标和叶绿素含量的影响 处理 株高/cm 茎粗/mm 地上部鲜质量/g 根鲜质量/g 叶绿素含量/mgg -1 A21-4 15.410.57 a 5.720.02 a 6.950.02 a 1.010.00 a 3.490.04 a 清水(CK) 10.400.06 b 5.520.02 b 3.290.04 b 0.660.01 b 2.730.01 b 注:表中同列数据后不同小写字母表示差异显著(P0.05),下表同。 表 2 A21-4对黄瓜开花期生育指标的影响 处理 株高/cm 茎粗/mm 叶片数 叶面积/cm 2 株 -1 开花数 A21-4 107.440.58 a 8.920.13 a 11.550.29 a 4 086.22143.26 a 4.110.29 a 清水(CK) 84.220.98 b 7.850.33 b 9.440.11 b 2 990.57111.85 b 3.330.00 b 表 3 A21-4对黄瓜根系活力的影响 处理 根系活力/mgg -1 h -1 苗期 开花期 初果期 盛果期 采收后期 A21-4 0.2870.001 a 0.2810.001 a 0.3350.113 a 0.2360.001 a 0.0930.001 a 清水(CK) 0.1680.001 b 0.2000.002 b 0.1930.068 b 0.1110.002 b 0.0620.001 b 表 4 A21-4对黄瓜产量的影响 处理 单株产量/kg 每667 m 2 产量/kg 增产率/% A21-4 0.970.03 a 2 512.7468.12 a 32.22 清水(CK) 0.730.01 b 1 900.4810.05 b 溶性糖和VC含量,在黄瓜初果期、盛果期和采 收后期,蛋白质含量分别比对照增加150.51%、 17.51%和25.65%,可溶性糖含量分别比对照增加 1.07%、3.51%和13.75%,VC含量分别比对照增加 表 5 A21-4对黄瓜果实品质相关指标的影响 生育时期 处理 蛋白质/gg -1 可溶性糖/% VC/mgkg -1 初果期 A21-4 6.9090.043 a 0.7570.001 a 52.244.30 a 清水(CK) 2.7580.043 b 0.7490.001 b 23.380.66 b 盛果期 A21-4 39.1610.188 a 1.6820.004 a 94.532.49 a 清水(CK) 33.3250.284 b 1.6250.002 b 84.582.49 b 采收后期 A21-4 17.1550.377 a 0.6120.001 a 24.131.08 a 清水(CK) 13.6530.354 b 0.5380.001 b 15.172.47 b 表 5 A21-4对黄瓜果实品质相关指标的影响 生育时期处理 蛋白质/gg -1 可溶性糖/% VC/mgkg -1 初果期 A21-4 6.9090.043 a0.7570.001 a52.244.30 a 对照(CK)2.7580.043 b0.7490.001 b23.380.66 b 盛果期 A21-4 39.1610.188 a1.6820.004 a94.532.49 a 对照(CK)33.3250.284 b1.6250.002 b84.582.49 b 采收后期A21-4 17.1550.377 a0.6120.001 a24.131.08 a 对照(CK)13.6530.354 b0.5380.001 b15.172.47 b 38 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 38 研究论文 中 国 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 黄瓜根际土壤速效氮含量分别比对照增加1.47%、 8.86%、61.12%和22.59%,速效磷含量分别比对 照增加35.16%、26.94%、6.98%和10.02%,速效 钾含量分别比对照增加27.84%、9.66%、13.71% 图 1 A21-4对黄瓜根际土壤酶活性的影响 图柱上不同小写字母表示与对照差异显著(P0.05),下图同。 图 2 A21-4对黄瓜根际土壤速效氮、磷、钾含量的影响 表 6 A21-4对黄瓜根际土壤微生物的影响 微生物种类 处理 开花期 初果期 盛果期 采收后期 细菌/10 7cfug -1 A21-4 7.130.07 a 9.300.21 a 5.170.03 a 4.530.23 a 清水(CK) 5.670.17 b 7.370.19 b 4.370.09 b 4.100.06 a 放线菌/10 6cfug -1 A21-4 3.700.15 a 5.770.15 a 3.830.09 a 4.900.06 a 清水(CK) 2.270.15 b 3.500.25 b 3.430.15 b 2.370.03 b 真菌/10 5cfug -1 A21-4 9.330.67 b 4.000.58 b 1.300.33 b 1.230.12 b 清水(CK) 14.670.88 a 6.330.33 a 1.770.33 a 2.270.88 a 4.8 3.6 2.4 1.2 0 脲酶活性mgmL -1 g -1 10.0 7.5 5.0 2.5 0 磷酸酶活性mgmL -1 g -1 2.0 1.5 1.0 0.5 0 蔗糖酶活性mgmL -1 g -1 生育时期 开花期 初果期 盛果期 采收后期 1.2 0.9 0.6 0.3 0 过氧化氢酶活性mgmL -1 g -1 生育时期 开花期 初果期 盛果期 采收后期 b A21-4 清水(CK) a b a b a b a b a b a b a b a b a b b a a b b b b a a a a b a 240 180 120 60 0 速效氮mgkg -1 生育时期 180 135 90 45 0 速效磷mgkg -1 480 360 240 120 0 速效钾mgkg -1 开花期 初果期 盛果期采收后期 开花期 初果期 盛果期采收后期 开花期 初果期 盛果期采收后期 A21-4 清水(CK) b a b b a a b b a a b a b a b a b a b a b a a a 39 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 39 研究论文 中 国 蔬 菜 CHINA VEGETABLES 和29.33%。 3 结论与讨论 PGPR是定殖于植物根际环境中的一类能够促 进植物生长、提高作物产量和减轻植物病害等的有 益细菌。一般认为,PGPR菌株通过溶磷、固氮、 分泌生长激素等直接作用促进植物生长,也通过 抑制有害微生物而间接促进植物生长(田婧 等, 2016) 。李想等(2017)的研究表明,枯草芽孢杆 菌LX-4、地衣芽孢杆菌LX-5和解淀粉芽孢杆菌 LX-7不仅能通过产生生长素、细胞分裂素和赤霉 素等有效促进烟草的生长,还具有广谱抑菌效果。 环状芽孢杆菌XD-K-2能通过解钾作用显著促进 小白菜地上部生长,同时增加根际土壤中全钾含 量(陈易 等,2016) 。多黏类芽孢杆菌Cp-S316能 够通过产生肽类活性物质强烈抑制烟草赤星病菌菌 丝生长,进而促进烟草的健康生长(王智文 等, 2007) 。A21-4对辣椒具有促生长和增产效果,同 时能改善辣椒根际土壤微生态环境,并有效防治辣 椒疫病的发生(吕雅悠 等,2016) 。本试验结果表 明,A21-4对黄瓜生长同样具有显著的促进效果, 可以提高黄瓜品质、调节黄瓜根际土壤微生态环 境,是具有应用潜力的微生物资源。另外,之前的 室内试验结果表明,A21-4具有解磷和产生吲哚乙 酸的功能(张维娜,2013) ,能降低黄瓜根际土壤 疫霉菌和腐霉菌的密度,但A21-4发挥促生作用的 具体机制及其应用技术还需要进一步探讨。 植物根际土壤酶活性、土壤微生物、土壤理化 性质与寄主植物生长有密切关系。土壤酶活性反映 了土壤的健康状况,土壤过氧化氢酶能转化土壤中 有机质,土壤脲酶能促进氮素循环,土壤磷酸酶与 土壤有机磷的转化有关。土壤速效养分可直接被植 物吸收利用,与土壤酶活性密切相关(陈志芳 等, 2014) 。本试验中,A21-4显著提高了黄瓜根际土 壤过氧化氢酶、蔗糖酶、脲酶和磷酸酶的活性,进 而提高了辣椒根际土壤速效氮、磷和钾含量。另外, 土壤微生物也直接参与植物根际有机质的分解和养 分的转化,且和土壤酶活性密切相关。吴传万等 (2014)的研究结果表明,土壤磷酸酶活性与细菌 和放线菌数量具有显著正相关;脲酶、蔗糖酶和过 氧化氢酶活性与真菌数量极显著负相关,并与放线 菌数量极显著正相关。本试验结果表明,A21-4提 高了黄瓜根际土壤细菌和放线菌的数量,而减少了 真菌的数量,这与土壤酶活性和速效氮、磷、钾含 量的提高具有一定的正相关关系。A21-4对土壤酶 活性、土壤速效养分和土壤微生物的具体影响,及 其相关性有待进一步研究。 参考文献 鲍士旦1999土壤农化分析北京:中国农业出版社 苍晶,赵会杰2013植物生理学实验教程北京:高等教育出 版社 陈易,程永毅,郭涛,申鸿2016一株具紫色土亲和性解钾菌 的筛选及促生效应西南大学学报:自然科学版,38(5) : 58-65 陈志芳,刘金福,吴则焰2014不同海拔土壤理化性质与酶活性 研究河北北方学院学报:自然科学版,30(1):38-42 高俊凤2006植物生理学实验指导北京:高等教育出版社 关荫松1986土壤酶及其研究方法北京:中国农业出版社 胡青平,徐建国,程丽萍,田呈瑞2011枯草芽胞杆菌QM3防 治番茄早疫病和促进幼苗生长的研究植物保护,37(4) : 95-100 李冰,龚文秀,李清,孙乐妮,曹媛媛,唐欣昀2015植物根 际促生菌株对小麦根系发育的影响安徽农业大学学报,42 (2):276-282 李想,刘艳霞,夏范讲,蔡刘体,张恒,石俊雄2017烟草根际 促生菌(PGPR)的筛选、鉴定及促生机理研究中国烟草学 报,23(3):111-118 刘丽,马鸣超,姜昕,关大伟,杜秉海,曹凤明,李俊2015根 瘤菌与促生菌双接种对大豆生长和土壤酶活的影响植物营 养与肥料学报,21(3):644-654 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colonizing and biocontrol competency of Serratia plymuthica A21-4 against Phytophthora blight of pepperPlant Pathology Journal,21 (1):64-67 Effects of Plant Growth Promoting Rhizobacteria Serratia plymuthica A21-4 on Cucumber Growth and Soil Rhizosphere Microecology DING Fang-li 1 ,LI Man 2 ,LIU Dong-ping 1 ,ZHANG Zhong-liang 1 ,SUN Zhi-qiang 2 ,PIAO Feng-zhi 2* , SHEN Shun-shan 1* ( 1 College of Plant Protection,Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,Henan,China; 2 College of Horticulture,Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,Henan,China) Abstract:In order to investigate the effect of Serratia plymuthica A21-4 on cucumber growth and rhizosphere soil microecology,A21-4 suspension was applied to rhizosphere soil of cucumberThe results showed that the treatment of A21-4 could remarkably promote the cucumber growth and development both at seedling and field stages,improve root system activity,increase cucumber yield and qualityCompared with the control, treatment of A21-4 had increased cucumber yield by 32.22%,and the contents of protein,soluble sugar,and VC were significantly increasedAt the same time,A21-4 treatment could remarkably adjust cucumber rhizosphere soil,and significantly increase activities of urease,phosphatase,sucrase and catalase in cucumber rhizosphere soilBesides,A21-4 treatment could increase the amount of bacteria and antinomycetes in cucumber rhizosphere soil,and the available contents of N,P and K there Key words:PGPR;Serratia plymuthica A21-4;Cucumber;Root irrigation;Growth;Soil Microecology 该品种生长势强,耐低温弱光性好。主蔓结瓜为主,雌花始于主蔓第45节左右,雌花节率高、连 续结瓜能力强,瓜条生长速度快,商品性突出,瓜条顺直,整齐度好,瓜长36 cm左右,瓜把短,单瓜质 量约220 g左右;瓜色深绿、光泽度好,刺瘤密,无棱,无黄色条纹,畸形瓜率低于10%;瓜腔小,果肉 淡绿色,口感脆甜。早熟、丰产性好,不歇秧,产量稳定,每667 m 2 (1亩)产量可达20 000 kg以上。抗 枯萎病、病毒病,中抗霜霉病、白粉病和褐斑病。适宜我国北方地区日光温室各茬口栽培。 天津科润黄瓜研究所 地址:天津市南开区白堤路 295号 邮编:300192 传真:022-23006667 销售热线:022-23006666 23369517 推广热线:022-23005566 23005585 封面说明 津优 336 41 新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控 41 研究论文 中 国 蔬 菜 CHINA VEGETABLES
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