7种微型月季组培快繁及叶片直接再生技术探究_张荦麒.pdf

7 种微型月季组培快繁及叶片直接再生技术探究 张荦麒 1 庄玥莹 1 刘鑫颖 1 冯策婷 1 隋云吉 2 郭润华 2 于 超 1 1 北京林业大学园林学院 北京海淀 100083 2 新疆应用职业技术学院 新疆奎屯 833200 摘 要 为筛选出不定芽诱导率最高的品种和最优培养条件 为微型月季规模化生产提供科学依据和理论基础 null以 7 个微型月季 品种茎段为外植体 建立组培快繁体系 对叶片直接再生的影响因子进行研究 结果表明 不同微型月季品种表现出增殖 null生根和 再生能力上的差异 null微型月季茎段最佳消毒方式为 75 酒精冲洗 30s 5 NaClO 冲洗 6min 最适腋芽萌发培养基为 MS 3 0mg L 6 BA 0 5mg L NAA 萌芽率 81 8 平均每个外植体萌芽 1 4 个 不定芽增殖最佳培养基为 MS 2 0mg L 6 BA 0 1mg L NAA 增殖系数为 1 97 最适生根培养基为 1 2MS 0 5mgL IBA 0 25mg L NA 生根率达到 81 9 7 个微型月季品种中能够通过叶 片直接发生不定芽的是 null灌木小伊甸园 null 最适合的诱导培养基为 MS 1 0mg L TDZ 0 5mg L NA 10 mg L AgNO 3 100mg L CH 暗培养 12d 不定芽诱导率为 23 58 null 关键词 微型月季 快繁体系 激素 直接再生 不定芽 为红色系 null粉色系 null黄色系 null白色系 null紫色系 null绿色系 null复 色系等 14 从中选择 7 个常见品种作为试验材料 以当 年生茎段为外植体 进行组培技术研究 建立高效的快 繁体系 为微型月季快速繁殖提供参考 以不同基因型 的微型月季叶片为材料 筛选出不定芽诱导率较高的 品种 初步研究了影响再生的因素 为创制月季矮化品 种提供基因资源 为建立遗传转化体系奠定基础 null 1 材料与方法 1 1 试验材料 本试验采用 7 个微型月季品种 如图 1 材料保 存于北京林业大学人工气候室 null 微型月季为蔷薇科 Rosacea 蔷薇属 R o s a L 多 年生木本植物 是现代月季五大类群之一 由小月季花 R o s a c h i n e n s i s v a r m i n i m a 与小姊妹月季 P o l y a n t h a R o s e 反复杂交培育而成 1 3 植株株形紧凑 花直径 2 5cm 常为重瓣 枝密花繁多季开花 4 null它不仅可以作 为微型花篱 null地被应用于花境 null草坪 还可以作为盆景 与枯木山石搭配应用于阳台 null庭院等场景 是优良的多 年生园林绿化材料 5 null随着园艺花卉盆栽化 null小型化 null多 头化的发展 微型植物景观成为市场新宠 null作为立体花 坛材料 需要植物株型低矮 null花色丰富 null花朵覆盖率高 null 有一定的抗病耐寒性 以及易于繁殖成活 null目前 用于 立体花坛的月季品种还比较有限 因此急需选育和繁 殖更多优秀的品种 null虽然经过长期杂交选育 已经培育 出了大量的月季品种 但是由于现代月季遗传背景狭 窄 还存在基因组复杂和远缘杂交不亲和等阻碍 引入 更多的优良基因已经变得非常困难 增加了杂交育种 的难度 null而组织培养和分子生物学技术日趋成熟 有望 突破传统月季育种方法的限制 通过转基因定向改良 性状 6 null 在微型月季组织培养方面 null埃斯托里尔 null喜悦阳 台 null等品种可通过茎段诱导丛生芽繁殖 7 但目前还没 有适用于大多数品种的组织培养方式 nullHsia 8 对微型月 季愈伤组织和体细胞胚的诱导进行研究 null冯欢 9 以微型 月季幼叶为外植体 建立了愈伤组织途径的再生体系 null 但是蔷薇属植物的再生受基因型影响大 不同品种在 愈伤诱导 null胚状体及芽器官等的发生方面具有较大差 异 10 11 只有少数的品种 如 null萨曼莎 null月月红 null 能获得 相对高频率的再生植株 12 13 null 本研究统计市面上流行的微型月季品种 将其分 基金项目 北京高校高精尖学科建设项目 null 作者简介 张荦麒 197 女 硕士 研究方向 观赏植物资源与育 种 null 通信作者 于超 1986 男 博士 教授 博士生导师 研究方向 观 赏植物资源与育种 null 图 1 7 个微型月季品种 1 2 试验方法 1 2 1 不同消毒方式对外植体的影响 null以品种 null紫色时 代 null为材料 选取健康植株上当年生生长旺盛茎段 饱 和洗洁精溶液浸泡 20min 用毛刷轻轻刷去表面污物 流水冲洗 1h null在超净工作台中酒精冲洗 30s 无菌水冲 洗 2 次 置于 5 的次氯酸钠溶液分别冲洗 2 null4 null6min 再用无菌水冲洗 4 次 接种于 MS 培养基 null每个处理接 种 10 瓶 重复 3 次 2 周后记录污染率和存活率 null 1 2 2 不同激素处理对腋芽萌发的影响 null选取健康植株 上带饱满芽点的茎段 消毒后接种于初代培养基上 null以 MS 为基本培养基 添加 6 BA 1 0 null2 0 null3 0mg L 和 NA 0 5mg L 组成初代培养基配方 A 1 A 3 以不添 加植物激素的 MS 培养基为对照组 CK null每个处理接种 10 瓶 重复 3 次 30d 后记录腋芽萌发率 null 1 2 3 不同激素处理对丛生芽增殖的影响 null待初代培养 中腋芽萌发 30d 后切下 接种到继代培养基上 null以 MS 为基本培养基 添加 6 BA 0 5 null1 0 null1 5 null2 0mg L 和 NA 0 1mg L 组成继代培养基配方 B 1 B 4 以不添加 试验研究 现代园艺 2024 年第 7 期 null DOI 10 14051 ki xdyy 2024 07 044 植 物激素的 MS 培养基为对照组 CK null每个处理接种 10 瓶 重复 3 次 30d 后记录增殖情况 null 1 24 不同激素处理对生根的影响 null将株高大于 3cm 的组培苗接种到生根培养基上 null以 1 2MS 为基本培养 基 添加 IBA 0 null0 25 null0 5 null1 0mg L 和 NAA 0 null0 25 null 0 5 null1 0mg L 组成生根培养基配方 G 1 G 5 null每个处理 接种 5 瓶 重复 3 次 30d 后统计生根率 null生根数量和 根长度 null 1 2 5 基因型对叶片不定芽诱导率的影响 null将 7 个品种 微型月季无菌苗叶片 接种于诱导培养基 MS 0 05mg L NAA 2 0mg L TDZ 上 暗培养 10d 后转光照 培养 null每个处理接种 10 个叶片 重复 3 次 30d 后统计 不定芽诱导率 筛选出诱导率最高的品种 null 1 2 6 TDZ nullNA 浓度和暗培养时间对不定芽诱导率 的影响 null以诱导率最高品种 null灌木小伊甸园 null的组培苗 叶片为外植体 每叶留约 1m 长叶柄 接种在诱导培 养基上 null以 MS 为基本培养基 添加 10mg L Ag NO 3 100mg L CH TDZ 1 0 null1 5 null2 0mg L 和 NAA 0 05 null 0 1mg L 组成诱导培养基配方 E 1 E 6 null暗培养时间分 别设置为 10d 和 12d 然后转入光照条件下培养 null每个 处理接种 10 个叶片 设置 3 次重复 30d 后统计诱导 率 null 1 3 数据分析 用 Excel 对试验数据进行处理 SP 26 0 进行单 因素方差分析 在分析之前 对百分数数据进行反正弦 转换 y sin 1 nullx 表中数据表示为平均值 null标准差 不同字母表示在 P 0 05 水平上差异显著 null 污染率 受到污染的外植体数 外植体接种 数 null100 存活率 存活的外植体数 外植体接种数 null 100 腋芽萌发率 萌发腋芽的外植体数 外植体 接种数 null100 增殖系数 增殖芽总数 外植体接种数 null100 生根率 生根的外植体数 外植体接种数 null 100 不定芽诱导率 发生不定芽叶片数 接种叶 片数 null100 2 2 6 BA 和 NAA 对腋芽萌发能力的影响 外植体接种到初代培养基上 12d 左右开始萌发新 芽 null如图 2 所示 当培养基不添加植物激素时 腋芽萌 发率为 52 48 平均萌芽数量仅为 1 07 null添加植物激 素后 腋芽萌发率和平均萌芽数量均有一定增长 其中 A 3 0 5mg L NA 3 0mg L 6 BA 培养基中的腋芽萌 发率达到 81 0 平均每个外植体的萌芽数达到 1 4 个 null与对照组相比 添加植物激素有利于茎段腋芽萌 发 且 6 BA 浓度与腋芽萌发率和平均芽数量呈正相 关 null 由表 2 可知 不同品种微型月季腋芽萌发能力有 很大差异 null在添加外源植物激素后 大多数品种的腋芽 萌发率在 80 以上 萌发率 在 6 BA 浓度 为 3 0mg L 时 达到最高 null 2 3 不同浓度 6 BA 对丛生 芽增殖能力的 5 2 43 33 null5 77ab 60 00 null10 00a 4 60 00 null20 00a 73 33 null15 26a 6 20 00 null10 00b 70 00 null17 32a 2 50 00 null17 32ab 13 33 null11 55b 表 1 不同次氯酸钠浓度和消毒时间对外植体消毒的影响 次氯酸钠 浓度 消毒时长 min 污染率 存活率 4 40 00 null10 11ab 3 33 null5 77b 6 33 33 null23 09ab 0 00 null0 00b 10 注 同列数据后无相同小写字母表示差异显著 P 0 05 下同 null LZYJ YB XNH GZYT XYDY ZSSD FFBS 均值 CK 60 13 null14 2b 48 15 null3 2b 59 56 null6 5ab 63 25 null7 1b 34 67 null12 7c 35 32 null4 6b 66 07 null4 3b 52 48 A 1 79 16 null11 8ab 46 54 null6 7b 53 33 null5 8b 51 11 null1 9b 60 33 null19 6b 41 82 null20 2ab 100 00 null0 0a 61 76 A 2 83 75 null12 8ab 75 79 null18 0a 59 21 null4 9ab 59 96 null1 6b 69 67 null18 5b 65 28 null2 4a 100 00 null0 0a 73 38 A 3 100 00 null0 0a 87 30 null13 6a 69 74 null15 9a 87 67 null10 8a 77 18 null20 2a 50 72 null15 8ab 100 00 null0 0a 81 80 表 2 7 个微型月季品种腋芽萌发的差异 编号 腋芽萌发率 均值 注 LZYJ 为 null铃之妖精 null YB 为 null樱坂 null XNH 为 null小女孩 null GZYT 为 null果汁阳台 null XYDY 为 null灌木小伊甸园 null ZSSD 为 null紫色时代 null FFBS 为 null芬芳宝石 null 下同 null 80 81 64 44 60 46 65 50 60 46 48 28 91 52 图 2 不同植物激素配比对微型月季腋芽萌发的影响 2024 年第 7 期 现代园艺 试验研究 2 结果与分析 2 1 消毒方式对外植体的影响 由表 1 可知 当次氯酸钠浓度为 5 时 污染率 null存 活率均呈先升高后降低趋势 消毒 6min 时污染率最 低 为 20 各组存活率无显著差异 当次氯酸钠浓度 为 10 时 随着消毒时间的延长 材料污染率呈下降 趋势 但存活率显著降低 null对于微型月季茎段 10 次 氯酸钠由于浓度过高 外植体难以存活 5 次氯酸钠 消毒效果更优 null null L ZYJ ZSSD GZYT FFBS XYDY XNH YB 均值 G 1 53 33 null0 07c 73 33 null0 09bc 40 00 null0 00b 46 67 null0 06b 53 33 null0 07c 80 00 null0 00b 80 00 null0 0b 60 00 G 2 80 00 null0 00ab 86 67 null0 37b 66 67 null0 20a 60 00 null0 00ab 93 33 null0 37a 86 67 null0 37b 93 33 null0 26ab 74 29 G 3 86 67 null0 11bc 100 00 null0 00a 46 67 null0 17b 73 33 null0 09a 73 33 null0 09bc 100 00 null0 00a 100 00 null0 00a 81 90 G 4 66 67 null0 08c 60 00 null00 0c 53 3 null0 07ab 53 33 null0 13b 86 67 null0 37ab 86 67 null0 11b 86 67 null0 37ab 75 24 G 5 60 00 null0 13a 86 67 null0 11b 40 00 null0 00b 46 67 null10 06b 66 67 null0 08bc 100 00 null0 00a 86 67 null0 37ab 70 48 均值 69 33 81 33 49 33 53 33 74 67 90 67 88 00 表 5 7 个微型月季品种组培苗生根的差异 编号 生根率 LZYJ YB XNH GZYT XYDY ZSSD FFBS 均值 CK 1 19 null0 12b 1 04 null0 06c 1 07 null0 06c 1 07 null0 06b 1 01 null0 02d 1 14 null0 13c 1 03 null0 05c 1 08 B 1 1 65 null0 48ab 1 36 null0 32bc 1 36 null0 31bc 1 22 null0 08ab 1 18 null0 11cd 1 43 null0 14bc 1 40 null0 17bc 1 37 B 2 1 49 null0 31ab 1 57 null0 35bc 1 35 null0 09bc 1 45 null0 24ab 1 45 null0 18bc 1 58 null0 18b 1 69 null0 36b 1 51 B 3 1 83 null0 22a 2 03 null0 20ab 1 96 null0 47ab 1 55 null0 49ab 1 97 null0 18a 2 07 null0 12a 1 53 null0 26ab 1 85 B 4 1 64 null0 08ab 2 54 null0 40a 1 87 null0 13a 1 79 null0 37a 1 60 null0 15b 2 17 null0 38a 2 13 null0 15a 1 97 表 3 7 个微型月季品种丛生芽增殖的差异 编号 增殖系数 均值 注 A 在 CK 0mg L NAA 0mg L 6 BA 的增殖培养 B 在 0 1mg L NAA 2mg L 6 BA 的增殖培养 null 1 56 1 71 1 52 1 42 1 44 1 68 1 52 影响 由表 3 可知 不同植物激素浓度对 7 种微型月季 丛生芽增殖效果影响较大 null在添加相同浓度 NAA 的情 况下 增殖系数随 6 BA 浓度增大而提高 植株叶片更 小 株型更为紧凑 图 3 在不添加外源激素的培养基 中生长的植株减少了分化增殖 更利于壮苗成熟 null不同 基因型受外源激素影响的效果不同 null樱坂 null果汁阳 台 null紫色时代 null芬芳宝石 null在 6 BA 浓度 2mg L 时 增 殖系数最大 分别为 2 54 null1 79 null2 17 null2 13 nullnull铃之妖精 null null小女孩 null灌木小伊甸园 null在 6 BA 浓度 1 5mg L 时 增 殖系数最大 分别为 1 83 null1 96 null1 97 null 2 4 IBA 和 NAA 对组培苗生根能力的影响 由表 4 可知 经过 30d 培养后 G 3 0 25mg L I BA 0 25mg L NA 培养基中的生根率最高 为 81 90 null在 G 4 1 0mg L IBA 培养基中 植株平均根数 最多 为 5 73 条 此时平均根长也最长 为 2 01cm null高 浓度的 IBA 有利于根数量和根长度增加 但是茎基部 愈伤组织较多 而且根更细 null表面易黑化 过长的根在 炼苗移栽过程中容易折断 null总体来看 添加 IBA 比 NAA 效果更优 IBA 和 NAA 组合使用比单一使用生长 素 效 果 更 优 null因 此 生 根 最 佳 培 养 基 配 方 为 1 2MS 0 25mg L IBA 0 25mg L NAA 能有效促进根系 生长 提高组培苗生根率 根系更为健壮 根生长情况 见图 4 null 由表 5 可知 不同微型月季品种生根能力存在差 异 但是添加植物激素后 各个品种生根率均有显著提 高 其中 null铃之妖精 null小女孩 null紫色时代 null芬芳宝石 null null樱坂 null在 G 3 培养基中生根率最高 null果汁阳台 null灌木 小伊甸园 null在 G 2 中生根率最高 null 图 3 null紫色时代 null增殖培养株型差异 G 1 0 0 5 60 00 null0 08b 4 67 null2 39ab 1 55 null1 50ab 根粗而短 黑色 基部少量愈伤组织 G 2 0 5 0 74 29 null0 17a 4 64 null3 26ab 1 37 null0 84b 根粗而短 白色 基部少量愈伤组织 G 3 0 25 0 25 81 90 null0 13a 5 49 null3 31ab 1 81 null2 06ab 根粗而长 褐色 基部少量愈伤组织 G 4 1 0 0 75 24 null0 02a 5 73 null3 37a 2 01 null0 98a 根细而长 黑色 基部较多愈伤组织 G 5 0 1 0 70 48 null0 14ab 4 36 null2 33b 1 49 null0 87ab 根细而短 褐色 基部大量愈伤组织 表 4 不同植物激素配比对微型月季生根的影响 编号 IBA mg L NAA mg L 生根率 平均根数 条 平均根长 cm 生长状态 图 4 微型月季组培快繁过程 注 A null小女孩 null腋芽萌发 B null芬芳宝石 null不定芽增殖 15d C null芬芳宝 石 null不定芽增殖 30d D null樱坂 null继代出现花苞 E1 5 null灌木小伊甸园 null 生根培养基 G1 G5 中根系生长状态 试验研究 现代园艺 2024 年第 7 期 null 2 5 基因型对叶片发生不定芽的影响 7 个品种微型月季无菌苗叶片 接种到分化培养 基上 30d 后发现 null灌木小伊甸园 null紫色时代 null和 null樱 坂 null有不定芽分化 叶柄切口的愈伤组织较少 出愈率 低而不定芽诱导率更高 以 null灌木小伊甸园 null诱导率最 高 达 10 05 null紫色时代 null和 null樱坂 null诱导率为 3 34 见表 6 null 2 6 TDZ nullNAA 浓度和暗培养时间对诱导率的影响 将 null灌木小伊甸园 null叶片接种于含不同浓度 TDZ 的分化培养基上 分别暗培养 10d 和 12d 然后转入光 照条件下培养 30d 后从叶柄处分化出不定芽 图 5 null 由表 7 可知 培养基中 TDZ 和 NA 的配比是产生不 定芽的关键 当 TDZ 浓度为 1 0mg L nullNAA 浓度为 0 05mg L 时 诱导率最高为 23 58 null当 TDZ 浓度达到 2 0mg L NAA 浓度达到 0 05mg L 时 叶柄处分化出芽 的速度变慢 芽体小部分表现有畸形 图 5 D 不利于 继续生长培养 null 将叶片接种于相同的培养基 分别暗培养 10d 和 12d 然后转入光照条件下培养 结果如表 7 所示 null暗培 养 12d 时 各激素浓度组合处理下的诱导率均高于暗 培养 10d 的处理组 null 3 结论与讨论 3 1 微型月季组培快繁 外源植物激素对丛生芽增殖起关键作用 多数月 季在添加适量细胞分裂素 6 BA 的培养基中可以实现 组培苗增殖 15 16 null低浓度 6 BA 可显著提高微型月季组 培苗增殖速度 但随浓度升高 出现叶片发黄 null植株弱 小 null生长缓慢的问题 7 null在本研究中 随 6 BA 浓度增 高 丛生芽数量增多 但是植株节间缩短矮化 叶片变 小卷曲 部分品种 如 null樱坂 null果汁阳台 null 出现玻璃化 和叶片黄化 后续生长缓慢 null与前人研究结果相似 17 18 细胞分裂素和生长素之比例过大 容易诱发丛生芽的 玻璃化现象出现 而细胞分裂素和生长素比例过小 容 易在植株基部形成更多愈伤组织 阻碍幼苗吸收水分 null 营养 null针对这一问题 王钱钱 19 的研究证实 在 6 BA 和 NAA 浓度适宜时 加入 GA 3 能改善植株黄化和玻璃化 问题 可在后续研究中对微型月季增殖系数提高作进 一步探究 null 生根培养是组织培养形成完整植株的重要一步 null 根系的发生与伸长过程中会出现生长素峰值 20 在生 根阶段添加生长素 可使组培苗薄壁细胞脱落形成愈 伤组织 接着长出不定根 21 常用的植物生长调节剂是 NAA 或 IBA 22 null李彦江 7 的研究表明 单独添加 0 5mg L IBA 微型月季生根率高达 97 5 null而本研究中 单独添 加 IBA 或 NAA 生根率较低 只有 76 2 和 62 9 这 一现象可能是基因型差异导致的 null对于某些植物而言 单一生长素虽然能起到生根作用 但是 2 种激素配合 使用会有更好的生根效果 23 这在本研究同样得到了 印证 IBA 与 NAA 组合生根率高达 81 9 根数量和 长度也有增加 优于单一生长素对微型月季组培苗生 根的作用效果 null 继代增殖过程中出现花芽分化现象 图 4 D 不 同微型月季品种出现开花的频率不同 在本研究中发 现 null芬芳宝石 null果汁阳台 null樱坂 null灌木小伊甸园 null在 培养过程中更容易开花 null目前有部分关于微型月季试 管开花的报道 25 国外有研究 24 26 认为 椰子水中含大 LZYJ 64 75 null0 13bc 0 00 少量黄绿色愈伤组织团 ZSSD 86 67 null0 06a 3 34 null0 06b 大量淡黄绿色颗粒状水润愈伤 GXYT 27 02 null0 06d 0 00 叶柄生长少量绿色硬质愈伤 FFBS 16 83 null0 12d 0 00 伤口发黑 null几乎没有愈伤 XYDY 56 36 null0 07c 10 05 null0 10a 少量愈伤 null呈灰褐色 XNH 83 27 null0 16b 0 00 浅绿色硬质较干燥愈伤 YB 13 39 null0 06d 3 34 null0 06b 少量绿色硬质愈伤 表 6 不同基因型微型月季不定芽诱导情况 基因型 出愈率 不定芽诱导 率 生长状况 E 1 10 1 0 0 01 0 00 E 2 1 5 0 01 10 02 null0 00bcd E 3 2 0 0 01 6 68 null0 06cd E 4 1 0 0 05 20 21 null0 10ab E 5 1 5 0 05 6 68 null0 06cd E 6 2 0 0 05 10 02 null0 00bcd E 1 12 1 0 0 01 0 00 E 2 1 5 0 01 13 39 null0 06abc E 3 2 0 0 01 13 39 null0 06abb E 4 1 0 0 05 23 58 null0 06a E 5 1 5 0 05 10 02 null0 00bcd E 6 2 0 0 05 16 67 null0 06abc 表 7 植物激素浓度和暗培养时长对 null灌木小伊甸园 null不定芽诱导的影响 编号 暗培养时长 d TDZ mg L NAA mg L 不定芽诱导率 图 5 微型月季 null灌木小伊甸园 null再生 注 A 组培苗叶片接种 30d B 接种 30d 发生不定芽 C 不定芽生长 壮大 D 生长畸形的不定芽 2024 年第 7 期 现代园艺 试验研究 null 量 细胞分裂素和糖类物质 有利于试管苗开花 未来有 望对微型月季花芽分化和开花的分子生物学机制展开 更深入研究 null 3 2 null灌木小伊甸园 null器官发生途径的植株再生 根据细胞全能性理论 植物细胞有形成完整植株 的潜力 但是在实践中发现 基因型依然是影响再生能 力的重要因素 任桂芳等 27 对 13 个月季品种小叶再生 能力进行研究 只有 6 个品种能不同程度地实现再生 null 在本研究的 7 个微型月季品种中 仅 null灌木小伊甸园 null 和 null樱坂 null能够再生不定芽 并且两者在相同培养条件 下的诱导率有显著差异 null李敬蕊 28 认为不同月季品种 与植物激素浓度互作效应是特定的 null在本研究中选用 再生率较高的品种 null灌木小伊甸园 null为材料 成功获得 了再生植株 null TDZ 发挥细胞分裂素活性的同时也促进了植物内 源生长调节剂的合成与积累 导致其在离体叶片诱导 过程中表现出高效再生的效果 29 null但是 TDZ 浓度并不 是越高越好 在本研究中 TDZ 浓度过高 不定芽会出 现畸变 不利于继续生长 null内源激素含量是导致分化的 主要原因 后续可以测量再生过程中外植体细胞分裂 素含量变化 进一步分析相关激素的基因表达差异 从 而阐述再生的机制 null此外 暗培养也是诱导不定芽的关 键因素之一 可以减少酚类物质的产生 防止褐化 而 暗培养时间过长会促进愈伤生长 时间过短则不能产 生不定芽 15 在本研究中暗培养 12d 高于 10d 时的诱 导率 null 综上 本研究从外源植物激素的组合 null质量浓度与 暗培养时长等方面优化了微型月季的组培快繁配方 结果表明 微型月季适宜的消毒方式为 75 酒精处理 30s 5 NaClO 消毒 6min 腋芽萌发的最适培养基为 MS 0 05mg L NAA 3 0mg L 6 BA 培 养 基 MS 1 5 20mg L 6 BA 0 1mg L NA 可促进组培苗增殖 组培苗生根过程中 NA 与 IBA 组合使用显著优于单 一激素处理 叶片直接再生不定芽的品种以 null灌木小伊 甸园 null较为适宜 培养条件以暗培养 12d 培养基 MS 0 05mg L NAA 1 0mg L TDZ 10mg L AgNO 3 100mg L CH 为最佳 不定芽诱导率为 23 58 null本研究为微型月 季繁殖提供了完善的组培快繁方式 通过叶片诱导不 定芽的方式实现 null灌木小伊甸园 null的再生 为微型月季 多品种的推广生产和种质改良奠定基础 null 收稿 2023 05 11 参考文献 1 陈俊愉 中国花卉品种分类学 M 北京 中国林业出版社 2001 2 李淑斌 王炜佳 吴高琼 等 月季组学及其开花习性和花香性状研 究进展 J 园艺学报 2019 46 05 995 1010 3 钟光跃 黄平 杨敏 等 月季分类方法及其研究进展 J 南方农业 2020 14 31 69 4 孙宪芝 北林月季杂交育种技术体系初探 D 北京 北京林业大学 2004 5 武荣花 刘引 卜燕华 等 北京地区 138 个月季品种夏秋观赏效果 综合评价 J 中国园林 2021 37 10 118 122 6 王镭 张英杰 张京伟 等 月季组培快繁技术研究进展 J 黑龙江农 业科学 2019 06 179 182 7 李彦江 微型月季扦插与组培快繁体系的建立与优化 D 南京 南 京农业大学 2019 8 Hsia C Korban S S Organogenesis and somatic embryogenesis in callus cultures of Rosa hybrida and Rosa chinensis minima J Plant cell tissue and organ culture 1996 44 1 1 6 9 冯欢 易姝利 谢佳恒 等 微型月季愈伤组织诱导及植株再生 J 植 物学报 2014 49 05 595 602 10 Burger D W C U Liu L Zary K W et al Organogenesis and plant re generation from immature embryos of Rosa hybrida L J Plant cell tissue and organ culture 1990 21 2 147 152 11 Nguyen T H N Winkelmann T Debener T Genetic analysis of callus ation in a diversity panel of 96 rose genotypes J Plant cell tissue and organ culture 2020 142 3 505 517 12 杨莹莹 周云鹤 黄文镜 等 月季胚性愈伤的诱导及体细胞胚的发 生 J 分子植物育种 2020 18 23 7854 7859 13 包颖 月季不同途径再生体系的建立与优化及遗传转化的研究 D 武汉 华中农业大学 2010 14 温佳辛 王超林 冯慧 等 月季花色研究进展 J 园艺学报 2021 48 10 2044 2056 15 咸宏康 支秋娟 李卉 等 金樱子 Rosa laevigata Michx 叶片直接 再生不定芽体系的建立 J 北方园艺 2019 13 93 100 16 任杰 林榕王燕等 丰花月季杏花村组培快繁条件筛选 J 热带 农业科学 2021 41 10 66 72 17 Bredmose N Kristiansen K Nrbk R et al Changes in Concentrations of Cytokinins CKs in Root and Axillary Bud Tissue of Miniature Rose Suggest that Local CK Biosynthesis and Zeatin Type CKs Play Impor tant Roles in Axillary Bud Growth J Journal of plant growth regulation 2005 24 3 238 18 Xing W Bao M Qin H et al Micropropagation of Rosa rugosa Through Axillary Shoot Proliferation J Acta biologica cracoviensia Series Botanica 2010 52 2 69 19 王钱 五种月季品种的快繁和再生体系的优化探究 D 合肥 安 徽农业大学 2020 20 Pacurar D I Perrone I Bellini C et al Auxin is a central player in the hormone cross talks that control adventitious rooting J Physiologia plantarum 2014 151 1 83 96 21 张治 植物生理学 M 北京 中国农业出版社 2022 2 廖伟彪 张美玲 杨永花 等 植物生长调节剂浓度和处理时间对月 季扦插生根的影响 J 甘肃农业大学学报 2012 47 03 47 51 23 孙大宽 马莉 杨宏艳 等 3 种因素对木棉组培苗生根的影响 J 云 南农业大学学报 自然科学版 2022 37 01 137 144 24 周俊辉 杨寅桂刘义存等 微型月季的试管开花诱导研究 J 江西 农业大学学报 2008 03 504 508 25 Nguyen N H Van Le B A simple economical and high efficient pro tocol to produce in vitro miniature rose J In vitro cellular develop mental biology Plant 2020 56 3 362 365 26 Vu N H Anh P H Nhut D T The role of sucrose and different cy tokinins in the in vitro floral morphogenesis of rose hybrid tea cv nullFirst Prize null J Plant cell tissue and organ culture 2006 87 3 315 320 27 任桂芳 王建红冯慧等 现代月季 Rosa hybrida 叶片植株再生体 系的建立 J 园艺学报 2004 04 533 536 28 李敬蕊 月季再生体系的建立及叶盘法转化月季 null萨蔓莎 null的研究 D 武汉 华中农业大学 2006 29 张健 王璐 袁嘉玮 等 鲁丽苹果植株再生体系的建立 J 种子 2022 41 09 127 133 试验研究 现代园艺 2024 年第 7 期 null