不同干热处理对西瓜种子带菌量的研究.pdf

150 150 实验研究 不同干热处理对西瓜种子带菌量的研究 李 曼 河北省衡水市武邑县职教中心 河北 衡水 053400 摘 要 本实验以西瓜品种 懒汉地瓜王 种子为材料 研究 65 70 75 不同温度干热处理 24 h 后对西瓜种 子带菌量的影响 实验结果表明 适宜的干热处理对表面带菌的种子灭菌率非常明显 随着处理温度的不 断升高西瓜种子的带菌量明显降低 同一温度下 不同浓度梯度之间细菌数量成一定的倍比关系 同一浓 度下 不同温度之间细菌数量差异性也十分显著 65 70 75 三个温度处理的灭菌率分别是 57 80 95 因此综合考虑西瓜同一时间不同温度对灭菌率的影响 适宜于西瓜种子干热处理的最佳组合是 75 处理 24 h 本实验为干热处理广泛应用在减少西瓜种子带菌量提供了一些理论依据 关键词 温度 干热处理 西瓜 种子活力 文章编号 ISSN2096 0743 2021 09 0150 1 材料与方法 1 1 供试材料 1 1 1 供试西瓜种子 懒汉地瓜王 西瓜种子 千瑞种业公司生产 1 1 2 供试培养基 NA 培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 琼脂 an20g 1000ml 水 NB 培养基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g 氯化钠 5g 1000ml 水 1 2 实验仪器 灭菌锅 SQ810C 恒温培养箱 BSG 250 摇床 HNY 2102C 干燥箱 DZF 6090 1 3 实验方法 1 3 1 西瓜种子的处理 采用干热处理法将种子在阳光下暴晒 使其充分干 燥 然后在恒温干燥箱内进行处理 准备 3 个干燥箱 设 65 70 75 3 个温度处理 每处理 3 次重复 每重 复 3 粒种子 将种子置于灭菌培养皿中 干燥箱内烘干 24h 对照 CK 为不经过干热处理的种子 1 3 2 培养基的选择 采用了水和 NB 培养液两种培养液对本实验进行了研 究 用平板涂布法对两种培养液培养出的菌落进行了比较 实验 根据得出的结果 在正式实验中选用 NB 培养基更 加合理 确保实验的准确性和严谨性 1 3 3 菌悬液的培养 NA 和 NB 培养基的配制方法是将几种物质分别称量 后放入 1000 ml 烧杯中 按比例加水 定容 搅匀 分装 放入 121 高压灭菌锅中灭菌 15 min 干热处理后的种子 在超净工作台中接到灭好菌的三角瓶中 超净作台紫外线 灭菌 15 分钟 灭菌结束后吹风 10 分钟左右后进行实验操 作 采用振荡培养法将不同温度干热处理后的种子加入到 灭菌的 NB 培养液中 160 rpm 的摇床中振荡培养 24 h 1 3 4 西瓜种子带菌量的测定 将灭菌凝固后的 NA 培养液在微波炉内加热 直至 呈液态 在超净工作台中倒入培养皿中 然后吸取 1 ml 菌悬液依次稀释 10 1 10 2 10 3 10 4 和 10 5 倍 再从 10 3 10 4 10 5 的稀释液中取 100 L 在培养基上涂板 用三角玻璃环涂匀 每个处理 3 皿 以未进行干热处理的 种子作为对照 待涂好板的培养基表面风干后 倒置于 28 恒温培 养箱中黑暗培养 24 h 观察并用活细胞计数法计数 100 对照灭菌数 处理灭菌数 对照灭菌数 灭菌效果 1 4 数据处理 用 Excel 2007 软件对所有数据进行整理作图 并将得 到的实验数据用 SPSS 22 0 进行分析 2 结果与分析 2 1 培养基质的测定结果 为了保证实验的准确性和严谨性 我们采用了以水和 NB 培养液两种培养液对本实验进行了研究 用平板涂布 法对两种培养液培养出的菌落进行了比较实验 结果如图 3 1 所示 NB培养液 水 图3 1 选择培养液对照 从两种培养液的成分来看 其中 NB 培养液含有牛肉 膏 蛋白胨 氯化钠 营养成分相对较多 为菌落生长提 151 151 实验研究 供了较好的环境 而以水作为培养液 没有营养成分 菌 落生长缓慢 得出的结果显而易见 NB 培养液生长出来 的菌落非常多 而水培养出来的菌落比较稀少 综上 NB 培养液是适合本实验的培养液 但是菌落数量庞大 需要对菌悬液进行更大的倍比稀释 保证实验的准确性 2 2 不同温度干热处理下对种子带菌量的测定 在预备实验中 我们选择了 10 1 10 2 10 3 得到的 细菌菌落非常多 难以统计 二次实验 在制备菌悬液时 没有选用培养液培养 虽然灭菌率显著 但是得到的结果 没有对比性 在我们不断的测试中 选择了在制备菌悬液 时选择 NB 培养液 然后选择 10 3 10 4 10 5 的稀释液 得到的数据如表 表3 1 处理后种子带菌数量 温度 浓度 重复 1 个 重复 2 个 重复 3 个 平均数量 个 65 10 3 47500 45800 47700 47000 10 4 4200 4450 4850 4500 10 5 465 450 485 366 70 10 3 13500 15400 14900 14600 10 4 1300 1450 1750 1500 10 5 165 180 150 166 75 10 3 3950 4300 4150 4100 10 4 400 375 365 380 10 5 40 21 39 33 CK 10 3 78000 86000 89500 84500 10 4 7900 8300 900 8400 10 5 850 915 920 895 如表 3 1 所示 6 5 7 0 和 7 5 各个温度下的 10 3 10 4 10 5 三个浓度梯度细菌数量由低到高成一定的 倍比关系 符合实验结果的发展规律 同一浓度下 各个 温度梯度细菌的数量差异性也非常显著 在 65 24 h 干热处理下 西瓜种子带菌量还较高 与对照相比 灭菌率 57 在 70 24 h 干热处理温度下 西瓜种子带菌量显著降低 灭菌率 80 在 75 24 h 干 热处理温度下 西瓜种子灭菌已经非常明显 灭菌率高达 95 以 10 5 为例 用 SPSS22 0 做方差分析 结果如下表 表3 2 10 5 浓度下菌落个数分析 温度 重复 1 个 重复 2 个 重复3 个 均数 个 标准差 P 0 05 65 465 450 485 466 67 17 56 a 70 165 180 150 165 00 15 b 75 40 21 39 33 33 10 69 c CK 850 915 920 895 00 39 05 注 在 P 0 05 水平上同列数据后标不同小写字母 表示差异显著 以 10 5 浓度做方差分析研究不同干热处理对西瓜种 子带菌量影响的结果表明 如表 3 2 所示 65 70 和 75 的处理和对照比较均有显著性差异 同一时间下三个 温度的干热处理对西瓜种子带菌量均有不同程度的影响 其中 75 24 h 干热处理温度对西瓜种子带菌量抑制 效果最显著 平均细菌数量 33 个 其次是 70 24 h 对其 的抑制效果 平均细菌数量 165 个 与对照组相比效果最 差的是 65 24 h 的处理 其平均细菌数量还存在 467 个 带菌量检测结果表明 同一时间下不同温度组合干热 处理对种子表面病菌的灭菌率明显 随着干热处理温度升 高 灭菌率明显增加 带菌量下降 表明西瓜种子带菌量 随着干热处理温度升高呈显著降低趋势 3 结论与讨论 3 1 结论 由上面得到的结果表明 懒汉地瓜王 西瓜种子 经 NB 培养液培养后 干热处理对西瓜种子的灭菌率明 显 随着干热处理温度升高 灭菌率明显 65 70 和 75 三个处理温度的灭菌率分别是 57 80 和 95 所以 在实际生产中 75 24 h 的干热处理是最适宜西 瓜种子的处理 本实验为干热处理广泛应用在减少西瓜种 子带菌量提供了一些理论依据 3 2 讨论 现有选择的培养基在种子实际带菌量较低的情况下 由于培养基的灵敏度有限或实验不规范导致培养基上长出 来的全部是假阳性菌落 常常可能导致检测不到真实的病 菌 导致错误检测结果 所以注意自身安全 规范实验操 作 减少实验误差 在研究中发现控制和消除病害的早期 污染源是预防植物病害的关键技术 但目前还没有发现发 生西瓜病害的流行规律 病害的早期污染源等 有研究结 果表明 由于感染病菌的主要原因是接种源是感染病菌的 种子 但是 关于病菌的种子的带菌机制的研究还没有完 善 通过什么方法处理带菌的种子是最有效的 这些都是 生产上待解决的问题 今后西瓜的重要种传病害研究方向集中于以下几个方 面 深入了解种子如何感染病菌 病菌的种子传播和生存 机制 有助于完善种子检测的规程和处理种子的技术 现 在的检测方法在应用中各有优点和缺点 发展快速 准确 的可以确认病菌的活力的高质量检测方法 在种子处理中 找到能够提高种子的活力和易于操作 普及的方法同时有 效地去除西瓜种子内部的病菌 建立完善的种子采后保存 处理规程 参考文献 1 浙江农业大学主编 蔬菜栽培学各论 M 北京 中国农业 出版社 2000 2 李逸龙 西瓜种传细菌性果斑病的快速检测及种子消毒 方法的研究 D 上海 华东师范大学 2016