辣椒烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的脱毒方法.pdf

2020 年 第 61 卷 第 8 期 1 5 0 3 收 稿 日 期 2 0 2 0 0 6 1 8 作 者 简 介 曾 祥 亮 1 9 8 3 男 安 徽 阜 阳 人 本 科 从 事 植 物 保 护 工 作 E m a i l 2 7 6 7 4 1 2 4 4 q q c o m 文 献 著 录 格 式 曾 祥 亮 余 冬 冬 黄 星 锋 等 辣 椒 烟 草 花 叶 病 毒 和 黄 瓜 花 叶 病 毒 的 脱 毒 方 法 J 浙 江 农 业 科 学 2 0 2 0 6 1 8 1 5 0 3 1 5 0 5 D O I 1 0 1 6 1 7 8 j i s s n 0 5 2 8 9 0 1 7 2 0 2 0 0 8 0 6 辣 椒 烟 草 花 叶 病 毒 和 黄 瓜 花 叶 病 毒 的 脱 毒 方 法 曾 祥 亮 1 2 余 冬 冬 1 黄 星 锋 1 李 永 军 1 1 龙 港 市 信 实 庄 稼 医 院 浙 江 龙 港 3 2 5 8 0 0 2 浙 江 农 艺 师 学 院 浙 江 杭 州 3 1 0 0 2 1 摘 要 辣 椒 病 毒 病 是 一 种 世 界 性 病 害 其 发 病 率 近 1 0 0 其 中 以 烟 草 花 叶 病 毒 T M V 病 和 黄 瓜 花 叶 病 毒 C M T 病 为 主 实 践 证 明 种 子 繁 殖 或 化 学 防 治 无 法 脱 除 这 两 大 病 毒 本 项 目 采 用 辣 椒 茎 尖 组 培 结 合 热 处 理 获 得 T M V 和 C M V 脱 毒 苗 实 现 防 治 辣 椒 病 毒 病 的 预 期 目 标 关 键 词 辣 椒 病 毒 病 脱 毒 热 处 理 中 图 分 类 号 S 4 3 6 4 1 8 文 献 标 志 码 B 文 章 编 号 0 5 2 8 9 0 1 7 2 0 2 0 0 8 1 5 0 3 0 3 辣 椒 是 中 国 五 大 蔬 菜 作 物 之 一 有 很 高 的 营 养 价 值 药 用 价 值 和 经 济 价 值 辣 椒 病 毒 病 又 称 辣 椒 花 叶 病 是 辣 椒 的 主 要 病 害 之 一 春 秋 两 季 均 有 发 生 严 重 影 响 辣 椒 的 产 量 和 质 量 引 起 辣 椒 病 毒 病 的 病 毒 有 多 种 但 主 要 为 烟 草 花 叶 病 毒 T M V 和 黄 瓜 花 叶 病 毒 C M V 患 病 辣 椒 主 要 表 现 为 花 叶 黄 化 矮 化 坏 死 畸 形 等 症 状 其 中 三 落 落 叶 落 花 落 果 现 象 最 为 严 重 据 不 完 全 统 计 每 年 因 病 毒 病 危 害 辣 椒 可 减 产 3 0 5 0 已 有 研 究 发 现 种 子 可 携 带 病 毒 辣 椒 烟 草 花 叶 病 毒 和 黄 瓜 花 叶 病 毒 的 钝 化 温 度 在 5 5 以 上 而 辣 椒 种 子 温 汤 处 理 的 耐 温 阈 限 在 55 以 下 常 规 热 处 理 无 法 钝 化 上 述 2 种 病 毒 常 规 种 子 消 毒 法 化 学 处 理 法 对 辣 椒 烟 草 花 叶 病 毒 和 黄 瓜 花 叶 病 毒 的 处 理 效 果 较 差 本 试 验 采 用 茎 尖 培 养 结 合 热 处 理 旨 在 研 究 辣 椒 种 子 脱 毒 的 新 途 径 1 材 料 与 方 法 1 1 材 料 试 验 辣 椒 品 种 为 大 果 早 丰 1 2 方 法 挑 选 粒 大 饱 满 的 早 丰 1 号 辣 椒 种 子 浸 泡 6 8 h 用 自 来 水 冲 洗 1 2 h 75 的 酒 精 处 理 2 m i n 无 菌 水 冲 洗 2 3 次 0 1 氯 化 汞 消 毒 5 7 m i n 再 用 无 菌 水 冲 洗 5 6 次 播 于 1 2 M S 无 激 素 固 体 培 养 基 培 养 条 件 为 光 照 黑 暗 1 4 h 10 h 光 照 强 度 2 000 l ux 白 天 温 度 26 1 夜 晚 温 度 23 1 待 无 菌 苗 出 现 2 片 以 上 真 叶 时 用 汁 液 摩 擦 接 种 进 行 指 示 法 病 毒 检 测 无 菌 水 处 理 的 作 为 对 照 以 M S 为 基 本 培 养 基 加 入 3 的 蔗 糖 0 7 的 琼 脂 p H 5 8 6 0 并 在 培 养 基 中 添 加 不 同 浓 度 的 生 长 调 节 剂 建 立 适 宜 辣 椒 生 长 的 离 体 培 养 技 术 体 系 1 取 病 毒 检 测 为 阳 性 的 试 材 待 无 菌 苗 有 2 3 片 真 叶 时 切 取 其 上 端 接 种 在 上 述 培 养 基 上 进 行 继 代 增 殖 培 养 分 别 采 用 辣 椒 的 子 叶 胚 轴 真 叶 接 种 在 上 述 培 养 基 上 进 行 诱 导 再 生 培 养 2 经 初 代 培 养 后 根 据 分 化 程 度 配 不 同 的 继 代 培 养 基 以 促 茎 叶 和 根 的 生 长 或 愈 伤 组 织 分 化 成 苗 将 培 养 获 得 的 辣 椒 试 管 苗 移 栽 到 盛 有 消 毒 营 养 土 的 花 盆 中 上 扣 小 烧 杯 温 室 内 培 植 数 日 后 移 栽 防 虫 网 室 采 用 植 物 指 示 检 测 脱 毒 效 果 2 结 果 与 分 析 2 1 辣 椒 继 代 培 养 影 响 因 素 以 辣 椒 无 毒 苗 切 段 每 节 至 少 1 个 腋 芽 为 外 殖 体 进 行 快 速 繁 殖 找 出 适 宜 辣 椒 继 代 增 殖 的 激 素 组 分 和 培 养 条 件 以 M S 培 养 基 为 基 本 培 养 基 在 其 中 分 别 添 加 吲 哚 乙 酸 I A A 吲 哚 丁 酸 I B A 奈 乙 酸 N A A 6 苄 基 氨 基 嘌 呤 6 B A 赤 霉 素 G A 等 不 同 生 长 激 素 如 表 1 所 示 培 养 基 中 仅 加 生 长 素 I A A N A A 或 添 加 高 浓 度 的 I A A 低 浓 度 B A 易 形 成 1 5 0 4 2020 年 第 61 卷 第 8 期 愈 伤 组 织 但 不 能 分 化 成 苗 说 明 生 长 素 在 适 宜 浓 度 区 间 可 以 促 进 组 织 分 化 但 浓 度 过 大 时 便 会 抑 制 根 的 发 生 高 浓 度 B A 与 低 浓 度 I A A 有 利 于 诱 导 出 芽 但 伸 长 较 慢 且 生 根 也 很 慢 需 将 伸 长 的 苗 转 到 根 诱 导 培 养 基 中 如 表 2 所 示 I B A 浓 度 越 高 越 容 易 形 成 愈 伤 组 织 同 时 也 促 进 生 根 G A 的 浓 度 越 高 有 利 于 促 进 芽 的 萌 发 培 养 基 中 加 入 0 2 5 m g L 1 G A 和 0 1 m g L 1 I B A 后 较 适 合 辣 椒 的 继 代 增 殖 可 一 次 成 苗 成 苗 率 高 表 1 培 养 基 中 添 加 N A A I A A B A 对 辣 椒 切 断 培 养 的 影 响 处 理 激 素 m g L 1 组 织 形 态 N A A I A A B A 愈 伤 组 织 苗 根 1 5 0 5 0 0 很 旺 无 无 2 1 0 5 0 0 很 旺 无 无 3 5 0 1 0 0 很 旺 无 无 4 0 1 0 0 1 0 很 旺 无 无 5 0 0 5 1 0 0 少 强 壮 多 少 生 根 慢 6 0 2 0 1 0 0 少 强 壮 多 少 生 根 慢 7 0 0 5 1 2 0 少 强 壮 多 少 生 根 慢 8 0 0 5 8 0 少 强 壮 多 少 生 根 慢 表 2 培 养 基 中 添 加 G A I B A 对 辣 椒 切 断 培 养 的 影 响 处 理 激 素 m g L 1 G A I B A 外 殖 体 数 个 侧 芽 萌 发 数 个 侧 芽 长 出 数 个 成 株 率 叶 色 增 殖 系 数 愈 伤 组 织 长 势 1 0 0 8 7 6 6 2 5 绿 2 5 少 良 好 2 0 2 0 0 8 7 6 6 2 5 绿 2 5 少 良 好 3 0 1 0 0 0 5 8 8 6 6 2 8 绿 2 5 较 少 良 好 4 0 1 0 0 1 0 8 7 5 5 0 0 绿 2 0 较 少 一 般 5 0 1 0 0 1 5 8 5 双 芽 4 3 7 5 绿 1 5 旺 盛 一 般 6 0 1 0 0 2 0 8 4 4 5 0 0 绿 2 0 较 多 一 般 7 0 2 5 0 0 5 8 8 7 5 0 0 淡 绿 2 5 较 少 一 般 8 0 2 5 0 1 0 8 8 7 8 7 5 绿 3 5 少 良 好 9 0 2 5 0 1 5 8 5 双 芽 4 5 0 0 绿 2 0 较 多 差 1 0 0 2 5 0 2 0 8 4 4 5 0 0 淡 绿 1 5 较 多 一 般 2 2 植 物 生 长 调 节 剂 对 辣 椒 子 叶 离 体 培 养 的 影 响 如 表 3 所 示 6 B A I B A 在 1 1 25 1 2 5 时 器 官 分 化 率 较 高 6 B A I B A 在 1 1 7 15 时 器 官 分 化 率 较 低 表 3 不 同 6 B A I B A 浓 度 对 辣 椒 子 叶 器 官 分 化 的 影 响 处 理 激 素 m g L 1 6 B A I B A 外 殖 体 数 个 器 官 分 化 数 个 褐 变 数 个 器 官 分 化 率 褐 变 率 a 1 3 0 0 2 1 8 7 0 3 8 9 0 a 2 3 0 0 4 2 3 1 8 1 2 7 8 3 5 2 2 a 3 3 0 0 6 1 6 1 2 3 7 5 0 1 8 8 a 4 3 0 0 8 1 6 8 6 5 0 0 3 7 5 b 1 5 0 0 2 1 5 7 1 4 6 7 6 7 b 2 5 0 0 4 2 3 1 9 2 2 8 2 6 9 5 7 b 3 5 0 0 6 2 1 1 9 1 5 9 0 5 7 1 4 b 4 5 0 0 8 1 9 1 8 1 4 9 4 7 7 3 7 c 1 7 0 0 2 1 8 1 1 1 1 6 1 1 6 1 1 c 2 7 0 0 4 2 0 1 6 1 8 8 0 0 9 0 0 c 3 7 0 0 6 2 0 1 4 1 4 7 0 0 7 0 0 c 4 7 0 0 8 1 5 1 0 1 3 6 6 7 8 6 7 d 1 9 0 0 2 1 8 1 5 6 8 3 3 3 3 3 d 2 9 0 0 4 2 2 1 8 2 1 8 1 8 9 5 5 d 3 9 0 0 6 1 8 7 1 6 3 8 9 8 8 9 d 4 9 0 0 8 1 6 1 5 1 4 9 3 8 8 7 5 2 3 植 物 生 长 调 节 剂 对 辣 椒 胚 轴 离 体 培 养 的 影 响 采 用 大 果 早 丰 辣 椒 品 种 的 下 胚 轴 分 别 离 体 培 养 在 附 加 不 同 种 类 和 浓 度 的 植 物 生 长 调 节 剂 的 M S 培 养 基 上 研 究 其对 辣 椒 胚 轴 愈 伤 组 织 的 诱 导 及 再 生 情 况 3 试 验 结 果 显 示 在 培 养 基 中 添 加 5 m g L 1 6 B A 和 0 8 m g L 1 I B A 后 培 养 基 对 芽 的 诱 导 率 较 高 表 4 表 4 不 同 6 B A I B A 浓 度 对 芽 诱 导 的 影 响 处 理 激 素 m g L 1 6 B A I B A 芽 个 叶 状 体 比 例 根 个 褐 变 率 a 1 3 0 0 2 1 1 1 8 1 2 3 5 a 2 3 0 0 4 0 6 3 0 3 1 3 a 3 3 0 0 6 1 3 3 3 3 6 0 0 a 4 3 0 0 8 0 3 5 3 1 5 5 8 b 1 5 0 0 2 0 3 0 0 2 3 5 0 b 2 5 0 0 4 0 4 4 4 3 5 0 0 b 3 5 0 0 6 0 3 5 0 0 5 0 0 b 4 5 0 0 8 0 4 6 2 0 5 3 8 c 1 7 0 0 2 0 2 2 2 0 3 8 9 c 2 7 0 0 4 0 2 9 4 0 5 2 9 c 3 7 0 0 6 0 3 5 3 0 7 0 5 c 4 7 0 0 8 0 5 9 0 4 7 1 d 1 9 0 0 2 0 1 6 7 0 4 4 4 d 2 9 0 0 4 0 7 3 3 0 9 3 3 d 3 9 0 0 6 0 3 3 3 0 8 0 0 d 4 9 0 0 8 0 3 5 3 0 6 4 7 2 4 热 处 理 温 度 对 脱 毒 效 果 的 影 响 曾 祥 亮 等 辣 椒 烟 草 花 叶 病 毒 和 黄 瓜 花 叶 病 毒 的 脱 毒 方 法 1 5 0 5 如 表 5 所 示 随 着 处 理 温 度 的 增 加 和 处 理 时 间 的 延 长 处 理 植 株 的 成 活 率 逐 步 降 低 当 温 度 高 于 40 时 植 株 均 不 能 长 时 间 存 活 当 温 度 低 于 38 时 植 株 均 能 较 好 生 长 在 一 定 温 度 范 围 内 温 度 越 高 病 毒 的 钝 化 效 果 越 好 在 不 影 响 辣 椒 存 活 的 前 提 下 随 着 热 处 理 温 度 的 升 高 植 株 的 脱 毒 效 果 也 就 越 好 实 验 结 果 表 明 38 的 热 处 理 4 6 周 时 辣 椒 脱 毒 效 果 最 佳 表 5 不 同 处 理 温 度 对 植 株 成 活 率 的 影 响 处 理 温 度 成 活 率 1 周 2 周 4 周 1 4 2 0 0 0 2 4 0 0 0 0 3 3 8 1 0 0 9 6 7 9 0 0 4 3 6 1 0 0 1 0 0 9 3 3 3 讨 论 由 于 辣 椒 外 植 体 中 不 具 有 足 够 的 内 源 激 素 只 有 附 加 不 同 浓 度 的 激 素 才 能 促 进 辣 椒 外 植 体 芽 分 化 和 芽 伸 长 4 培 养 基 中 添 加 的 激 素 种 类 不 同 激 素 配 比 及 其 他 生 长 因 子 对 辣 椒 外 植 体 分 化 和 再 生 芽 伸 长 影 响 较 大 已 有 研 究 发 现 培 养 基 中 添 加 4 6 m g L 1 6 B A 对 辣 椒 外 植 体 芽 诱 导 效 果 最 好 5 本 研 究 结 果 表 明 较 高 的 6 B A 与 I B A 比 值 有 利 于 不 定 芽 的 诱 导 和 分 化 影 响 辣 椒 再 生 植 株 的 关 键 问 题 是 分 化 的 芽 不 能 进 一 步 伸 长 大 多 只 能 见 到 一 团 叶 片 由 于 选 材 及 其 他 原 因 的 影 响 多 数 试 验 中 植 株 再 生 频 率 低 不 定 芽 生 长 能 力 差 有 的 甚 至 停 留 在 芽 诱 导 阶 段 不 能 进 一 步 生 长 这 主 要 与 外 植 体 的 不 同 生 理 状 态 及 培 养 基 成 分 有 关 随 着 处 理 温 度 的 增 加 和 处 理 时 间 的 延 长 处 理 植 株 的 成 活 率 逐 步 降 低 38 的 热 处 理 4 6 周 时 辣 椒 脱 毒 效 果 最 佳 参 考 文 献 1 邓 明 华 刘 志 敏 辣 椒 子 叶 培 养 研 究 进 展 J 中 国 辣 椒 2 0 0 2 1 3 6 2 王 玉 文 杨 美 珠 甜 椒 的 离 体 再 生 及 基 因 转 化 J 植 物 学 报 英 文 版 1 9 9 1 3 3 1 0 7 8 0 7 8 6 3 缪 武 刘 志 敏 辣 椒 离 体 培 养 研 究 进 展 J 辣 椒 杂 志 2 0 0 5 2 3 6 4 黎 定 军 张 宝 玺 赵 开 军 等 辣 椒 子 叶 高 效 植 株 再 生 体 系 的 建 立 J 园 艺 学 报 2 0 0 2 1 2 7 3 1 9 7 5 龙 凤 张 金 文 辣 椒 子 叶 和 下 胚 轴 的 离 体 培 养 及 高 效 再 生 体 系 的 建 立 J 甘 肃 农 业 大 学 学 报 2 0 0 5 1 3 2 3 8 责 任 编 辑 万 晶 上 接 第 1 5 0 2 页 治 重 点 提 升 村 容 村 貌 以 点 带 面 将 大 径 山 乡 村 休 闲 旅 游 示 范 园 融 入 当 地 优 美 的 自 然 生 态 环 境 为 茶 旅 融 合 发 展 打 好 基 础 4 2 激 发 闲 置 资 源 活 力 一 是 推 动 制 度 创 新 试 点 土 地 承 包 经 营 权 抵 押 在 农 村 土 地 承 包 经 营 权 确 权 登 记 颁 证 的 基 础 上 落 实 土 地 经 营 权 抵 押 贷 款 推 出 有 针 对 性 的 农 业 综 合 保 险 政 策 鼓 励 农 业 经 营 主 体 开 展 生 产 经 营 活 动 二 是 创 新 商 业 模 式 创 新 要 素 交 易 模 式 唤 醒 资 源 资 金 资 产 等 要 素 活 力 鼓 励 农 民 将 承 包 的 土 地 及 其 宅 基 地 等 以 资 产 形 式 入 股 参 与 农 旅 项 目 开 发 经 营 增 加 农 民 财 产 性 收 益 4 3 促 进 精 准 招 商 服 务 把 握 自 然 优 势 区 位 优 势 和 数 字 经 济 等 优 势 扩 大 招 才 引 智 吸 引 资 本 共 同 开 发 大 径 山 区 块 的 农 业 与 文 创 融 合 农 业 与 康 养 融 合 等 项 目 减 少 政 府 财 政 压 力 做 好 可 行 性 评 估 在 人 才 与 项 目 落 地 后 做 好 相 关 服 务 保 障 和 配 套 奖 励 工 作 激 发 人 才 创 新 创 业 热 情 参 考 文 献 1 许 艺 娜 吴 娜 培 周 鹭 岚 乡 村 产 业 振 兴 视 阈 下 安 溪 县 茶 旅 产 业 融 合 模 式 及 策 略 研 究 J 福 建 茶 叶 2 0 1 9 4 1 7 1 1 0 1 1 1 2 张 洪 瑞 茶 叶 变 茶 业 茶 区 变 景 区 四 川 省 万 源 市 探 索 茶 旅 融 合 新 路 子 记 J 经 营 管 理 者 2 0 1 9 1 1 3 6 3 7 3 刘 剑 云 吕 锋 刘 懿 等 汉 中 茶 旅 融 合 发 展 现 状 存 在 问 题 及 对 策 建 设 J 基 层 农 技 推 广 2 0 1 9 7 1 0 6 8 7 0 4 肖 正 广 屯 堡 地 区 茶 旅 融 合 创 意 产 品 发 展 路 径 初 探 基 于 旧 州 小 锅 茶 的 发 展 J 蚕 桑 茶 叶 通 讯 2 0 1 9 5 2 8 3 0 责 任 编 辑 张 瑞 麟