侵染贵州番茄的辣椒褪绿病毒分子鉴定与分析 (1).pdf

病毒学报 Chinese Journal of Virology ISSN 1000 8721 CN 11 1865 R 病毒学报 网络首发论文 题目 侵染贵州番茄的辣椒褪绿病毒分子鉴定与分析 作者 田雨 李淳 吴石平 黄露 安星宇 王莉爽 DOI 10 13242 ki bingduxuebao 004472 收稿日期 2023 10 28 网络首发日期 2024 03 15 引用格式 田雨 李淳 吴石平 黄露 安星宇 王莉爽 侵染贵州番茄的辣椒褪绿病 毒分子鉴定与分析 J OL 病毒学报 https doi org 10 13242 ki bingduxuebao 004472 网络首发 在编辑部工作流程中 稿件从录用到出版要经历录用定稿 排版定稿 整期汇编定稿等阶 段 录用定稿指内容已经确定 且通过同行评议 主编终审同意刊用的稿件 排版定稿指录用定稿按照期 刊特定版式 包括网络呈现版式 排版后的稿件 可暂不确定出版年 卷 期和页码 整期汇编定稿指出 版年 卷 期 页码均已确定的印刷或数字出版的整期汇编稿件 录用定稿网络首发稿件内容必须符合 出 版管理条例 和 期刊出版管理规定 的有关规定 学术研究成果具有创新性 科学性和先进性 符合编 辑部对刊文的录用要求 不存在学术不端行为及其他侵权行为 稿件内容应基本符合国家有关书刊编辑 出版的技术标准 正确使用和统一规范语言文字 符号 数字 外文字母 法定计量单位及地图标注等 为确保录用定稿网络首发的严肃性 录用定稿一经发布 不得修改论文题目 作者 机构名称和学术内容 只可基于编辑规范进行少量文字的修改 出版确认 纸质期刊编辑部通过与 中国学术期刊 光盘版 电子杂志社有限公司签约 在 中国 学术期刊 网络版 出版传播平台上创办与纸质期刊内容一致的网络版 以单篇或整期出版形式 在印刷 出版之前刊发论文的录用定稿 排版定稿 整期汇编定稿 因为 中国学术期刊 网络版 是国家新闻出 版广电总局批准的网络连续型出版物 ISSN 2096 4188 CN 11 6037 Z 所以签约期刊的网络版上网络首 发论文视为正式出版 第40卷 第 2 期 2024 年3月 病 毒 学 报 CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY Vol 40 No 2 March 2024 侵染贵州番茄的辣椒褪绿病毒分子鉴定与 分析 田雨 1 2 李淳 2 吴石平 2 黄露 2 安星宇 2 王莉爽 2 1 贵州大学生命科学学院 农业生物工程研究员院 山地植物资源保护与种质创新教育部 重点实验室 贵阳 550025 2 贵州省农业科学院 植物保护研究所 贵阳 550006 摘要 辣椒褪绿病毒 Capiscum chlorosis virus CaCV 是正番茄斑萎病毒属 Orthotospovirus 的重要成员 能够侵染 辣椒 番茄等作物并造成严重危害 为明确贵州番茄CaCV分离物基因组分子结构特征及其进化起源 本研究通过 RT PCR技术扩增和测定了CaCV的N NSs和NSm基因的全长片段 分别获得长度约828bp 1320bp和927bp的目 标条带 经过序列比对和进化树构建等方法进行遗传进化分析发现 贵州番茄CaCV分离物的N NSs和NSm基 因与CaCV其他分离物核苷酸的相似性分别在85 5 99 4 82 7 98 9 和83 1 98 7 之间 根据系统 发育树结果 贵州番茄CaCV分离物N基因和NSs基因与中国云南分离物的亲缘关系较近 NSm基因与中国海南 和广州分离物的亲缘关系近 推测贵州CaCV可能是由于番茄 辣椒的品种引进 及蓟马带毒传播进入 这是贵州 省CaCV侵染番茄的首次报道 对监测CaCV在我国的扩散具有重要意义 关键词 番茄 辣椒褪绿病毒 病毒鉴定 序列分析 中图分类号 S436 412 1 1 文献标识码 A 文章编号 1000 8721 2024 02 0402 10 辣 椒 褪 绿 病 毒 Capiscum chlorosis virus CaCV 是布尼亚病毒目 Bunyaviruses 番茄斑萎病 毒 科 Tospoviridae 正 番 茄 斑 萎 病 毒 属 Orthotospovirus 的重要成员之一 1 2 1999年 在 澳大利亚首次报道CaCV侵染番茄和辣椒 3 随后 在中国 4 7 伊朗 8 印度 9 泰国 10 希腊 11 和美国 12 等国家均有发生为害的报道 CaCV对辣椒 番茄 和西葫芦等蔬菜作物的危害较大 一些经济作物 观 赏植物和杂草也是该病毒的自然寄主 如 菠萝 苦 杏仁 百合 马蹄莲 蜡花 胜红蓟 一点红 苦苣菜 印加孔雀草等 13 15 目前已报道能传播CaCV病毒 的蓟马主要有 烟蓟马 Thrips tabaci Lindeman 棕 榈 蓟 马 Thrips palmi Karny 和 苏 花 蓟 马 Frankliniella schultzei 16 此外 Sun 等人 17 在 2022年报道线虫也可传播CaCV病毒 CaCV具有三个单链 ss RNA片段组成的负义 或双义基因组 分别命名为小 S 中 M 和大 L S RNA和M RNA 均为双义RNA 有2个ORF S RNA大小约3kb 编码非结构蛋白 Nonstructural protein NSs 和核衣壳蛋白 Nucleocapsid protein N M RNA大小约5kb 编码非结构运动蛋白 Nonstructural movement protein NSm 和糖蛋白前 体 Glycoprotein precursor GP L RNA为负链 含 单个开放阅读框架 ORF 大小约9kb 编码 RNA 依 赖 性 RNA 聚 合 酶 RNA dependent RNA polymerase 简称L蛋白 18 21 目前 克隆分析番茄 斑萎病毒属的多基因片段 能丰富病毒的遗传多样 性 为今后CaCV抗病育种提供指导 22 2021年在贵州省关岭县断桥镇发现番茄叶片 和果实有褪绿 斑点等疑似病毒病的症状 影响了番 茄的品质 因此 本研究对疑似病毒病样品进行田 间症状观察 RT PCR扩增 序列测定 明确毒源为 CaCV 基于CaCV的N NSs和NSm构建了国内 外不同地区不同寄主的CaCV分离物系统发育树 分析贵州番茄分离物CaCV其他地区分离物的系统 进化关系 为阐明CaCV的遗传机制提供理论依据 并为贵州番茄辣椒褪绿病毒的科学防控提供依据 材料与方法 1 试验材料 2021年秋季在贵州关岭采集褪绿 斑驳 斑点 收稿日期 2023 10 28 接受日期 2024 02 01 基金项目 贵州省农业科学院青年英才培育项目 项目号 黔农 科院青年科技基金 2020 01号 题目 贵州蔬菜番茄斑萎病毒属病 毒的发生动态及防控技术研究 贵州省科研机构创新能力建设专项 资金 项目号 黔科合服企 2023 011 题目 农业入侵物种绿色防 控创新能力建设 作者简介 田雨 1998 女 主要从事植物保护研究 Email 1294955729 通讯作者 王莉爽 1985 女 副研究员 主要从事植物病害 防治工作 Email wwllss520 开放科学 OSID DOI 10 13242 ki bingduxuebao 004472 网络首发时间 2024 03 15 21 46 13 网络首发地址 2 期 田 雨 等 侵 染 贵 州 番 茄 的 辣 椒 褪 绿 病 毒 分 子 鉴 定 与 分 析 和 环 斑 等 典 型 病 毒 病 症 状 的 番 茄 叶 片 在 田 间 采 集 样 品 放 入 泡 沫 冰 盒 在 实 验 室 进 行 拍 照 分 装 处 理 后 置 于 80 冰 箱 备 用 以 C aC V 侵 染 发 病 的 番 茄 植 株 叶 片 作 为 阳 性 对 照 以 未 发 病 的 健 康 番 茄 植 株 叶 片 作 为 阴 性 对 照 2 试 验 方 法 2 1 番 茄 植 物 总 R N A 的 提 取 及 c D N A 合 成 采 用 U niversal T otal R N A K it 通 用 总 R N A 提 取 试 剂 盒 北 京 全 式 金 生 物 技 术 股 份 有 限 公 司 R 013 50 提 取 番 茄 植 物 总 R N A 具 体 操 作 步 骤 如 下 将 植 物 组 织 在 液 氮 中 磨 碎 每 50 100m g 植 物 组 织 加 1m L 裂 解 液 R L 涡 旋 15s 将 匀 浆 样 品 在 室 温 下 放 置 5m in 12000r m in 离 心 5m in 转 移 上 清 液 至 新 的 离 心 管 中 向 上 清 液 中 加 入 等 体 积 的 无 水 乙 醇 混 匀 此 时 可 能 会 出 现 沉 淀 将 溶 液 和 沉 淀 一 起 转 入 R N A 吸 附 柱 中 12000r m in 离 心 1m in 弃 废 液 向 吸 附 柱 内 加 入 500 L 去 蛋 白 液 R E 12000r m in 离 心 1m in 弃 收 集 管 中 废 液 向 吸 附 柱 内 加 入 500 L 去 漂 洗 液 R W 12000r m in 离 心 1m in 弃 收 集 管 中 废 液 重 复 步 骤 一 次 将 R N A 吸 附 柱 放 回 空 收 集 管 中 12000r m in 离 心 2m in 将 离 心 吸 附 柱 置 于 一 个 新 的 1 5m L 离 心 管 中 加 入 60 L 的 R N ase free ddH 2 O 洗 脱 室 温 放 置 2m in 12000r m in 离 心 1m in 离 心 管 溶 液 即 R N A 将 R N A 置 于 80 保 存 R N A 用 G oldenstar T M R T 6 cD N A S ynthesis K it 北 京 擎 科 生 物 科 技 有 限 公 司 T S K 301S 进 行 cD N A 反 转 录 具 体 操 作 步 骤 如 下 5 G oldenstar T M R eaction B uffer 4 L G oldenstar T M R T 6 200U L 1 L R andom er 50 m ol L 1 L dN T P M ix 10m m ol L 1 L D T T 1 L R N ase free W ater 8 L T otal R N A 4 L 总 体 积 为 20 L 轻 轻 混 匀 后 25 孵 育 10 m in 42 孵 育 30 m in 85 加 热 5m in 产 物 置 于 20 保 存 2 2 C a C V 引 物 合 成 根 据 文 献 报 道 及 N C B I 上 的 序 列 合 成 引 物 用 于 扩 增 出 包 含 番 茄 斑 萎 病 毒 属 通 用 引 物 dtospo 以 及 C aC V N N S s 和 N S m 基 因 的 目 的 片 段 引 物 序 列 由 重 庆 擎 科 兴 业 生 物 技 术 有 限 公 司 合 成 引 物 序 列 见 表 1 2 3 R T P C R 扩 增 及 克 隆 以 cD N A 为 模 板 用 2 H ieff P C R M aster M ix W ith D ye 上 海 翌 圣 生 物 科 技 有 限 公 司 10102E S 03 进 行 R T P C R 扩 增 反 应 体 系 如 下 T em plate 2 L 2 H ieff P C R M aster M ix 25 L F orw ard P rim er 10 m ol L 2 L R everse P rim er 10 m ol L 2 L N uclease free W ater 19 L 总 体 积 50 L 反 应 程 序 预 变 性 94 5 m in 变 性 94 30 s 退 火 53 30 s 延 伸 72 30 s 35 个 循 环 72 最 终 延 伸 510 m in 反 应 结 束 后 用 1 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 验 R T P C R 扩 增 结 果 将 P C R 产 物 回 收 目 的 片 段 与 T 载 体 连 接 后 转 化 大 肠 杆 菌 D H 5 挑 取 阳 性 克 隆 送 至 重 庆 擎 科 兴 业 生 物 技 术 有 限 公 司 进 行 双 向 测 序 2 4 构 建 系 统 发 育 树 测 序 结 果 利 用 N C B I B L A S T https blast ncbi nlm nih gov B last cgi 进 行 序 列 比 对 从 3 个 C aC V 分 离 物 测 序 结 果 中 挑 选 基 因 序 列 N O R 334399 O R 345476 O R 334398 N S s O R 334403 O R 334405 O R 334404 N S m O R 334401 O R 334402 O R 334400 与 已 报 道 的 不 同 国 家 不 同 寄 主 的 分 离 物 相 关 基 因 用 D N A M A N 表 1 辣 椒 褪 绿 病 毒 不 同 基 因 引 物 序 列 表 T able 1 S equences of prim ers of different genes of capsicum chlorosis virus P rim er nam e dT ospo F 2 dT ospo R 2 C aC V N F C aC V N R C aC V N S s F C aC V N S s R C aC V N S m F C aC V N S m R S equence5 3 G A T C A A T C N A A R T G G T C D G C W T C C A T D G C A C A A G A R T G R T A V A C W G A A T G T A C A A C T A T T T A A A T T A C A C C T C A G A C G T T T C C A T A G T A A A C A C C A T G T C T A C T G T G A A G A G T G C T T A T T G G A G C T C C A C A G T G A A T G T C T C G C T T T T C T A A C G T T T T C A T G A A A T T T C A A G T A A G T T A T C F ragm ent size bp 300bp 828bp 1320bp 927bp A nnealing tem perature 52 52 52 52 source 23 D esign according to N C B I existing sequences 403 病 毒 学 报 40 卷 6 0 和 B ioE dit进 行 分 析 整 理 利 用 M E G A 7 0 及 邻 近 算 法 N J N eighbor joining 对 贵 州 不 同 辣 椒 T S W V 分 离 物 进 行 序 列 相 似 性 分 析 和 系 统 进 化 树 构 建 结 果 1 病 毒 危 害 番 茄 的 田 间 症 状 感 病 的 番 茄 叶 片 和 果 实 表 现 出 多 种 症 状 果 实 出 现 圆 形 环 斑 有 褐 色 斑 块 图 1A 果 实 出 现 深 绿 色 线 条 纹 状 深 绿 和 浅 绿 相 间 不 均 图 1B 叶 片 出 现 黄 褐 色 小 点 图 1C 叶 片 沿 叶 脉 褪 绿 花 叶 图 1D 此 外 感 染 病 毒 的 番 茄 植 株 生 长 缓 慢 个 别 出 现 矮 化 现 象 2 番 茄 斑 萎 病 毒 属 鉴 定 利 用 检 测 番 茄 斑 萎 病 毒 属 属 病 毒 的 通 用 引 物 dT ospo F 2 dT ospo R 2 对 采 集 的 40 份 疑 似 病 毒 病 样 进 行 R T P C R 检 测 结 果 从 15 份 疑 似 病 样 中 均 扩 增 到 1 条 与 目 的 片 段 大 小 300bp 一 致 的 特 异 性 条 带 阴 性 对 照 中 未 扩 增 出 任 何 片 段 图 2 表 明 贵 州 番 茄 病 样 中 存 在 番 茄 斑 萎 病 毒 属 病 毒 3 辣 椒 褪 绿 病 毒 分 子 鉴 定 为 进 一 步 验 证 番 茄 斑 萎 病 毒 属 通 用 引 物 检 测 结 果 的 可 靠 性 根 据 已 报 道 的 C aC V 序 列 F J947156 K X 108864 设 计 N N S s 和 N S m 基 因 的 全 长 片 段 图 1 疑 似 感 染 辣 椒 褪 绿 病 毒 的 番 茄 叶 片 和 果 实 田 间 症 状 F igure 1 F ield sym ptom s of tom ato leaves and fruits suspected to be infected by C apiscum chlorosis virus C aC V 图 2 番 茄 通 用 引 物 d t o s p o 的 R T P C R 鉴 定 结 果 注 M D L 2000 m arker P 阳 性 对 照 N 阴 性 对 照 泳 道 1 15 检 测 样 品 F igure 2 R T P C R identification results of a universal prim er dtospo of tom atoes N otes M D L 2000 m arker P P ositive control N N egative control L anes 1 15 T est sam ples 404 2 期 田 雨 等 侵 染 贵 州 番 茄 的 辣 椒 褪 绿 病 毒 分 子 鉴 定 与 分 析 阳 性 样 品 经 R T P C R 检 测 结 果 图 3 5 表 明 病 株 样 品 可 扩 增 出 长 度 约 828 bp 的 N 基 因 927 bp 的 N S m 基 因 和 1320 bp N S s 基 因 而 健 康 样 品 无 目 标 条 带 结 果 表 明 侵 染 贵 州 番 茄 的 番 茄 斑 萎 属 病 毒 主 要 为 C aC V 4 不 同 来 源 C a C V 分 离 物 与 贵 州 分 离 物 序 列 分 析 将 贵 州 关 岭 采 集 的 番 茄 样 本 经 测 序 后 选 取 3 个 不 同 植 株 的 样 本 扩 增 出 C aC V 的 N N S s 和 N S m 基 因 的 全 长 片 段 上 传 到 N C B I N 基 因 登 录 号 分 别 为 O R 334398 O R 334399 和 O R 345476 N S s 基 因 登 录 号 分 别 为 O R 334403 O R 334404 和 O R 334405 N S m 基 因 登 录 号 分 别 为 O R 334400 O R 334401 和 O R 334402 选 取 已 报 道 的 国 内 外 不 同 寄 主 和 不 同 地 理 来 源 的 C aC V 分 离 物 与 贵 州 番 茄 分 离 物 进 行 同 源 性 比 较 以 同 属 不 同 种 的 番 茄 环 纹 斑 点 病 毒 T om ato zonate spot virus T ZS V M Z404609 M Z404610 作 为 外 缘 序 列 结 果 表 明 N 基 因 与 已 报 道 的 C aC V 各 分 离 物 N 基 因 核 苷 酸 的 相 似 性 在 85 5 99 4 氨 基 酸 的 相 似 性 在 92 4 100 0 表 2 贵 州 C aC V 番 茄 分 离 物 N S s 基 因 与 C aC V 各 分 离 物 核 苷 酸 相 似 性 在 82 7 98 9 之 间 氨 基 酸 的 相 似 性 在 86 3 98 9 表 3 N S m 基 因 与 C aC V 各 分 离 物 核 苷 酸 相 似 性 在 83 1 98 7 之 间 氨 基 酸 的 相 似 性 在 89 9 99 0 表 4 基 于 贵 州 番 茄 C aC V 分 离 物 N 基 因 核 苷 酸 序 列 构 建 系 统 进 化 树 结 果 表 明 图 4 17 条 不 同 地 理 来 源 不 同 C aC V 分 离 物 聚 为 五 支 贵 州 番 茄 C aC V 分 离 物 与 云 南 中 国 台 湾 荷 兰 以 及 泰 国 C aC V 分 离 物 F J947156 F J947157 聚 为 一 支 group 印 度 和 澳 大 利 亚 C aC V 分 离 物 聚 为 一 支 group 湖 北 和 泰 国 C aC V 分 离 物 D Q 256123 N C 008301 聚 为 一 支 group 海 南 和 广 东 C aC V 分 离 物 聚 为 一 支 group 伊 朗 C aC V 分 离 物 单 独 聚 为 一 支 group 其 中 贵 州 番 茄 3 条 C aC V 分 离 物 与 云 南 C aC V 图 3 番 茄 C a C V N C a C V N S s C a C V N S m 的 R T P C R 鉴 定 结 果 注 M D L 2000 m arker P 阳 性 对 照 N 阴 性 对 照 泳 道 1 15 检 测 样 品 F igure 3 R T P C R identification results of N N S s and N S m of C aC V in tom atoes N otes M D L 2000 m arker P P ositive control N N egative control L anes 1 15 T est sam ples 405 病 毒 学 报 40 卷 分 离 物 K Y 994103 单 独 形 成 一 个 独 立 的 分 支 表 明 贵 州 番 茄 C aC V 分 离 物 与 云 南 的 亲 缘 关 系 较 近 基 于 贵 州 番 茄 C aC V 分 离 物 N S s 基 因 核 苷 酸 序 列 构 建 系 统 进 化 树 结 果 表 明 图 5 28 条 不 同 地 理 来 源 不 同 的 C aC V 分 离 物 聚 为 五 支 贵 州 番 茄 C aC V 分 离 物 与 云 南 中 国 台 湾 荷 兰 印 度 F I011449 以 及 泰 国 C aC V 分 离 物 F J947156 F J947157 E F 602030 E F 488164 E F 990562 聚 为 一 支 group 印 度 C aC V 分 离 物 M N 707997 M N 708000 M N 707995 M N 707996 M N 707998 M N 707999 聚 为 一 支 group 海 南 和 广 东 C aC V 分 离 物 聚 为 一 支 group 伊 朗 湖 北 和 广 东 C aC V 分 离 物 聚 为 一 支 group 湖 北 和 泰 国 C aC V 分 离 物 D Q 256123 N C 008301 聚 为 一 支 group 结 果 表 明 贵 州 番 茄 C aC V 分 离 物 与 泰 国 云 南 荷 兰 分 离 物 的 亲 缘 关 系 近 进 一 步 推 测 侵 染 贵 州 番 茄 的 C aC V 分 离 物 可 能 是 从 云 南 等 地 引 进 番 茄 或 辣 椒 种 苗 及 蓟 马 带 毒 进 入 贵 州 地 区 基 于 贵 州 番 茄 C aC V 分 离 物 N S m 基 因 核 苷 酸 序 列 构 建 系 统 进 化 树 结 果 表 明 图 6 21 条 不 同 地 表 2 N 基 因 序 列 一 致 性 T able 2 S equence consistency of the N gene 注 在 M egA lign 中 使 用 C lustalW 方 法 计 算 基 因 在 核 苷 酸 左 下 和 氨 基 酸 右 上 水 平 上 的 序 列 一 致 性 N otes T he C lustalW m ethod w as used in M egA lign to calculate the sequence consistency of genes at nucleotide bottom left and am ino acid top right levels 表 3 N S s 基 因 序 列 一 致 性 T able 3 S equence consistency of the N S s gene 注 在 M egA lign 中 使 用 C lustalW 方 法 计 算 基 因 在 核 苷 酸 左 下 和 氨 基 酸 右 上 水 平 上 的 序 列 一 致 性 N otes T he C lustalW m ethod w as used in M egA lign to calculate the sequence consistency of genes at nucleotide bottom left and am ino acid top right levels 406 2 期 田 雨 等 侵 染 贵 州 番 茄 的 辣 椒 褪 绿 病 毒 分 子 鉴 定 与 分 析 理 来 源 不 同 的 C aC V 分 离 物 聚 为 五 支 贵 州 番 茄 C aC V 分 离 物 与 澳 大 利 亚 海 南 广 东 和 中 国 台 湾 聚 为 一 支 group 印 度 C aC V 分 离 物 K X 499515 M N 707975 M N 707978 聚 为 一 支 group 荷 兰 云 南 泰 国 K X 108864 以 及 印 度 C aC V 分 离 物 M N 707979 F J011450 聚 为 一 支 group 伊 朗 C aC V 分 离 物 单 独 聚 为 一 支 group 泰 国 C aC V 分 离 物 D Q 256125 N C 008303 聚 为 一 支 group 结 果 表 明 贵 州 分 离 物 与 海 南 广 州 澳 大 利 亚 和 中 国 台 湾 分 离 物 的 亲 缘 关 系 较 近 与 地 区 来 源 和 寄 主 作 物 存 在 一 定 的 差 异 讨 论 本 研 究 用 O rthotospovirus 通 用 引 物 及 C aC V 特 异 引 物 对 2021 年 采 自 贵 州 省 关 岭 县 表 现 出 斑 驳 褪 表 4 N S m 基 因 序 列 一 致 性 T able 4 S equence consistency of the N S m gene 注 在 M egA lign 中 使 用 C lustalW 方 法 计 算 基 因 在 核 苷 酸 左 下 和 氨 基 酸 右 上 水 平 上 的 序 列 一 致 性 N otes T he C lustalW m ethod w as used in M egA lign to calculate the sequence consistency of genes at nucleotide bottom left and am ino acid top right levels 图 4 基 于 N 基 因 序 列 构 建 辣 椒 褪 绿 病 毒 不 同 分 离 物 的 进 化 树 F igure 4 C onstruction of evolutionary trees of different isolates of pepper chlorosis virus based on N gene sequences 407 病 毒 学 报 40 卷 绿 症 状 的 番 茄 叶 片 和 果 实 进 行 了 R T P C R 检 测 结 果 发 现 有 15 份 样 品 检 测 到 了 C aC V 因 侵 染 番 茄 的 病 毒 病 种 类 较 多 采 集 样 品 仅 对 正 番 茄 斑 萎 病 毒 属 进 行 检 测 C aC V 检 出 率 为 37 5 这 些 样 品 中 可 能 还 存 在 其 他 病 毒 但 有 待 进 一 步 的 验 证 本 研 究 克 隆 了 3 个 样 品 C aC V 的 N N S s 和 N S m 基 因 的 全 长 片 段 经 测 序 鉴 定 其 大 小 分 别 为 828bp 1320bp 和 927bp 序 列 比 对 结 果 表 明 3 个 C aC V 贵 州 分 离 物 与 我 国 其 他 地 区 及 泰 国 印 度 澳 大 利 亚 伊 朗 等 国 家 的 不 同 寄 主 的 C aC V 分 离 物 的 核 苷 酸 相 似 性 均 较 高 说 明 侵 染 危 害 我 国 番 茄 的 C aC V 分 离 物 在 基 因 序 列 上 的 差 异 不 大 基 于 C aC V 分 离 物 N N S s 和 N S m 基 因 建 立 的 系 统 发 育 进 化 树 可 知 贵 州 番 茄 C aC V 分 离 物 N 基 因 与 中 国 云 南 分 离 物 的 亲 缘 关 系 较 近 与 广 州 蝴 蝶 兰 分 离 物 与 泰 国 分 离 物 的 亲 缘 关 系 近 的 结 论 不 一 致 24 这 可 能 与 传 播 来 源 有 关 N S s 基 因 与 中 国 云 南 泰 国 和 荷 兰 分 离 物 的 亲 缘 关 系 较 近 与 地 理 来 源 和 寄 主 植 物 存 在 一 定 的 差 异 性 N S m 基 因 与 中 国 海 南 和 广 州 分 离 物 的 亲 缘 关 系 近 推 测 贵 州 C aC V 可 能 是 从 番 茄 辣 椒 在 国 内 调 运 及 蓟 马 带 毒 传 播 进 入 也 可 能 是 进 口 其 他 国 家 的 种 子 苗 木 引 入 的 C aC V 侵 染 番 茄 后 导 致 番 茄 斑 驳 矮 小 甚 至 绝 产 极 大 地 影 响 了 番 茄 的 产 量 以 及 果 实 的 品 质 严 重 限 制 番 茄 产 业 的 可 持 续 发 展 造 成 了 巨 大 的 经 济 损 失 C aC V 的 主 要 传 播 介 体 是 蓟 马 蓟 马 能 够 广 泛 的 危 害 作 物 甚 至 可 以 侵 染 杂 草 16 25 因 此 在 应 当 警 惕 蓟 马 将 C aC V 传 播 给 其 他 作 物 并 且 加 强 对 于 贵 州 省 其 他 茄 科 作 物 上 的 C aC V 监 测 了 解 其 发 生 趋 势 以 及 为 害 范 围 为 保 障 番 茄 产 业 的 健 康 可 持 续 发 展 提 供 参 考 依 据 同 时 为 集 成 辣 椒 褪 绿 病 毒 的 防 控 技 术 奠 定 理 论 基 础 作 者 贡 献 声 明 田 雨 李 淳 王 莉 爽 方 案 设 计 数 据 管 理 初 稿 写 作 提 供 资 源 田 雨 实 验 操 作 可 视 化 吴 石 平 王 莉 爽 获 取 资 助 项 目 管 理 监 督 指 导 审 查 和 编 辑 写 作 田 雨 黄 露 安 星 宇 有 效 性 验 证 提 供 资 源 作 者 利 益 冲 突 公 开 声 明 作 者 声 明 没 有 任 何 可 能 会 影 响 本 文 所 报 告 工 作 的 已 知 经 济 利 益 或 个 人 关 系 图 5 基 于 N S s 基 因 序 列 构 建 辣 椒 褪 绿 病 毒 不 同 分 离 物 的 进 化 树 F igure 5 C onstruction of evolutionary trees of different isolates of capsicum chlorosis virus based on N S s gene sequences 408 2 期 田 雨 等 侵 染 贵 州 番 茄 的 辣 椒 褪 绿 病 毒 分 子 鉴 定 与 分 析 参 考 文 献 1 洪 健 谢 礼 张 仲 凯 等 IC T V 最 新 十 五 级 分 类 阶 元 病 毒 分 类 系 统 中 的 植 物 病 毒 J 植 物 病 理 学 报 2021 51 02 143 162 D O I 10 13926 ki apps 000554 2 Zheng Y ouxiu C hen C hingchung Jan F uh Jyh C om plete nucleotide sequence of capsicum chlorosis virus isolated from phalaenopsis orchid and the prediction of the unexplored genetic inform ation of tospoviruses J A rch V irol 2011 156 3 421 432 D O I 10 1007 s00705 010 0874 y 3 L A M cM ichael D M P ersley J E T hom as T he first record of a serotype IV tospovirus in A ustralia J A ustralas P lant P athol 2000 29 2 149 D O I 10 1071 A P 00023 4 K C hen Z X u L Y an et al C haracterization of a new strain of capsicum chlorosis virus from peanut A rachis hypogaea L in C hina J J P hytopathol 2007 155 3 178 181 D O I 10 1111 j 1439 0434 2007 01217 x 5 C hen C C H uang C H C hen T C et al F irst report of capsicum chlorosis virus causing yellow stripes on calla lilies in T aiw an J P lant D is 2007 91 9 1201 D O I 10 1094 P D IS 91 9 1201C 6 L u C hen Jianw ei G uo R ex F rim pong A nane et al F irst report of capsicum chlorosis virus infecting chrom olaena odorata in Y unnan C hina J P lant D is 2022 106 3 1077 D O I 10 1094 P D IS 02 21 0341 P D N 7 Y in Y Y L i T T L u X et al F irst report of capsicum chlorosis virus infecting tom ato in Y unnan southw est of C hina J P lant D is 2016 100 1 230 230 D O I 10 1094 pdis 01 15 0088 pdn 8 H 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