青枯病生防深色有隔内生真菌的筛选鉴定及其防治效果_龙艳艳.pdf

南方农业学报 Journal of Southern Agriculture 2025 56 11 3432 3441 ISSN 2095 1191 CODEN NNXAAB http nfnyxb xml DOI 10 3969 j issn 2095 1191 2025 11 012 青枯病生防深色有隔内生真菌的筛选鉴定 及其防治效果 龙艳艳 1 曾凤花 1 赵惠莉 1 陈艳露 1 农 倩 1 张 艳 1 陈路通 2 谢 玲 1 周生茂 3 1 广西农业科学院植物保护研究所 农业农村部华南果蔬绿色防控重点实验室 广西作物病虫害生物学重点实验室 广西南宁 530007 2 广西物宝农业科技集团有限责任公司 广西南宁 573000 3 广西农业科学院蔬菜研究所 广西南宁 530007 摘要 目的 筛选对番茄和生姜青枯病同时具有良好生防效果的深色有隔内生真菌 DSE 并明确其分类地位 为DSE在植物病害生物防治中的应用提供理论依据 方法 采用茄子苗诱捕法从甘蔗根围土壤中分离DSE 以分离 到的DSE为供试材料 通过与番茄苗平皿共生培养的促生特性测定及菌株的根部定殖特征显微观察 筛选出能与宿 主互惠共生的DSE 通过温室盆栽试验测定DSE对番茄和生姜青枯病的生防效果 通过形态学特征及其ITS和28S rRNA序列的分子系统发育分析对防治效果理想的DSE菌株进行物种分类鉴定 结果 从甘蔗根围土壤中分离到6株 内生真菌 番茄共生菌株筛选结果显示 菌株L8和LC8处理的番茄干重极显著 P0 05 下同 乳酸酚棉蓝染色观察到菌株L8 LC8和LC3在 番茄苗根部定殖 显微观察发现典型的DSE结构 番茄青枯病盆栽生防效果试验结果显示 菌株LC3处理对青枯 病的防治效果最佳 防效达63 2 极显著高于菌株LC8 34 2 和L8 14 7 处理 菌株LC3处理的青枯病发病率 33 3 也极显著低于菌株L8 LC8和CK处理 生姜青枯病盆栽生防效果试验结果显示 接种病原菌10和55 d时 菌 株LC3处理的病情指数均极显著低于CK 防效分别为42 6 和52 4 且接种病原菌55 d后植株存活率 株高和分蘖 数均极显著高于CK 菌株LC3的形态特征与Cladophialophora immunda相吻合 与Cladophialophora immunda模式 菌株的ITS和28S rRNA序列相似度分别为98 1 和99 7 在系统发育树上与包含模式菌株在内的5株Cladophia lophora immunda菌株聚为一个单系的进化支 结论 共生DSE菌株LC3为Cladophialophora immunda 该菌株对作物 青枯病具有良好的生防潜力 关键词 青枯雷尔氏菌 深色有隔内生真菌 生物防治 形态学 系统发育分析 中图分类号 S436 32 文献标志码 A 文章编号 2095 1191 2025 11 3432 10 Screening and identification of dark septate endophytic fungi for bacterial wilt control and its control effects LONG Yan yan 1 ZENG Feng hua 1 ZHAO Hui li 1 CHEN Yan lu 1 NONG Qian 1 ZHANG Yan 1 CHEN Lu tong 2 XIE Ling 1 ZHOU Sheng mao 3 1 Plant Protection Research Institute Guangxi Academy of Agricultural Science Key Laboratory of Green Prevention and Control on Fruits and Vegetables in South China Ministry of Agriculture and Rural Affairs Guangxi Key Laboratory of Biology for Crop Diseases and Insect Pests Nanning Guangxi 530007 China 2 Guangxi Wubao Agricultural Technology Group Co Ltd Nanning Guangxi 573000 China 3 Vegetable Research Institute Guangxi Academy of Agricultural Sciences Nanning Guangxi 530007 China 收稿日期 2025 04 17 基金项目 广西重点研发计划项目 桂科AB21238002 桂农科AB241484049 广西自然科学基金项目 2025GXNSFAA069948 广西作物病虫害生物学重点实验室自主课题 22 035 31 23ST03 通信作者 谢玲 1977 https orcid org 0000 0001 8526 5216 博士 研究员 主要从事植物内生菌与植物病害生物防治研 究工作 E mail 76613413 周生茂 1970 https orcid org 0009 0008 8149 7157 博士 副研究员 主要从事 蔬菜育种与栽培研究工作 E mail 907388929 第一作者 龙艳艳 1984 https orcid org 0000 0001 6275 5239 博士 副研究员 主要从事植物内生真菌的资源收集与利用研 究工作 E mail longyy2014 11期 龙艳艳等 青枯病生防深色有隔内生真菌的筛选鉴定及其防治效果 Abstract Objective This study aimed to screen dark septate endophytic fungi DSE with biocontrol effects against bacterial wilt of both tomato and ginger and to clarify their taxonomic status thereby providing a theoretical basis for the application of DSE in plant disease biocontrol Method DSE were isolated from the root zone soil of sugarcane by using eggplant seedling trapping method and the isolated DSE were used as the test materials Through determining growth promoting characteristics of co culture with tomato seedling on plates and observing root colonization characteristics by microscopy the DSE that could form mutualistic symbiosis with the host were screened The biocontrol effects of DSE against bacterial wilt of tomato and ginger were evaluated through greenhouse pot experiments Based on morphological characteristics and molecular phylogenetic analysis of ITS and 28S rRNA sequences the DSE strains with ideal control effects were classified and identified Result Six endophytic fungi were isolated from the root zone soil of sugarcane Screening results of symbiotic strains of tomato showed that for tomatoes treated with strains L8 and LC8 their dry weight was significantly higher than that of the control without inoculation with endophytic fungi CK P0 05 the same below Laccophenol cotton blue staining showed that strains L8 LC8 and LC3 colonized tomato seedling roots and microscopic observation showed that they had typical DSE structures The pot biocontrol experiment of tomato bacterial wilt showed that the LC3 treatment had the best control effects against the disease reaching 63 2 which was significantly higher than that of LC8 34 2 and L8 14 7 the incidence of LC3 treatment 33 3 was significantly lower than that of L8 LC8 and CK The pot biocontrol experiment of ginger bacterial wilt showed that at 10 and 55 d after pathogen inoculation the disease index in the LC3 treatment was significantly lower than that in the CK with control effects of 42 6 and 52 4 respectively furthermore at 55 d after pathogen inoculation the plant survival rate plant height and tiller number in the LC3 treatment were significantly higher than those in the CK The morphological characteristics of strain LC3 were consistent with Cladophialophora immunda and the similarities of ITS and 28S rRNA sequences between LC3 and Cladophialophora immunda type strain were 98 1 and 99 7 respectively In the phylogenetic tree LC3 also clustered into a monophyletic clade with five Cladophialophora immunda strains including the type strain Conclusion The symbiotic DSE strain LC3 is Cladophialophora immunda which shows a good biocontrol potential against bacterial wilt Key words Ralstonia solanacearum dark septate endophytes biocontrol morphology phylogenetic analysis Foundation items Guangxi Key Research and Development Plan Project Guike AB21238002 Guinongke AB2414 84049 Guangxi Natural Science Foundation 2025GXNSFAA069948 Project of Guangxi Key Laboratory of Biology for Crop Diseases and Insect Pests 22 035 31 23ST03 0 引言 研究意义 青枯病是番茄 生姜等作物的毁灭 性病害 具有发病急 蔓延快 死亡率高的特点 其 病原菌青枯雷尔氏菌 Ralstonia solanacearum 的寄 主范围广 可侵染50余科200余种植物 能在土壤中 长期存活并通过农具 流水等传播 防治困难 常造 成重大经济损失 皮静等 2020 张楚 2023 桑素玲 等 2024 目前 该病的防治手段有农业防治 栽培 措施 土壤改良等 化学防治 抗病品种选育及生物 防治等 胡星磊等 2024 慕雪男等 2025 然而 农 业和化学防治常面临时空限制 农药残留和环境污 染等问题 抗病品种选育则面临抗性与劣性基因连 锁 商品性状不佳等问题 而无性繁殖作物 如生姜 的抗病育种难度更大 王海平等 2022 相比之下 生物防治以生防菌为核心 兼具防效与环保优势 是 农业可持续发展的关键策略 因此 筛选生防菌对 青枯病的绿色防控具有重要意义 前人研究进展 目前报道的青枯病生防菌包括木霉属 Trichoderma 孙彩云等 2002 芽孢杆菌属 Bacillus 李伟杰和 姜瑞波 2007 汪茜等 2023 张楚 2023 Chandwani et al 2023 崔文艳等 2024 裂解噬菌体 Lytic bacte riophage Fujiwara et al 2011 lvarez et al 2022 Wang et al 2022 假单胞菌属 Pseudomonas 常琳 等 2014 张亮等 2017 党柯柯等 2023 球黑孢菌 Nigrospora 张祖姣等 2018 链霉菌 Streptomyces Ling et al 2020 彭成慧 2021 和阿氏肠杆菌 Enterobacter asburiae 党柯柯等 2023 等 然而 由于田间土壤环境复杂及青枯病菌生理小种分化严 重 这些生防菌常面临定殖能力不足 防效不稳定等 问题 深色有隔内生真菌 DSE 是一类能与植物互 惠共生的土壤真菌 其典型特征是在植物组织内 形成暗色有隔菌丝和微菌核 Mandyam and Jump ponen 2005 研究表明 DSE不仅能增强植物抗 逆性 刘燕霞等 2021 Xiao et al 2021 还具有显 著生防潜力 如福廷瓶头霉 Phialocephala fortinii 和Cladophiaphora cheatospira分别对芦笋腐烂病和 草莓根腐病有疗效 Surono and Narisawa 2018 Har sonowati et al 2020 枝孢属 Cladosporium 和链格 孢属 Alternaria alternata DSE可防治枸杞根腐病 陈思杰等 2022 而DSE新属Polydomus karsseni 甚至能寄生线虫 Ashrafi et al 2023 本课题组前 期研究发现 枝孢瓶霉属 Cladophialophora spp 能 稳定定殖于番茄植株体内并诱导系统抗性 从而显 3433 56卷南 方 农 业 学 报 著提高其对青枯病的抗病能力 Wei et al 2024 其 合成菌群对生姜青枯病表现出持久的田间防效 曾 凤花等 2025 本研究切入点 现有研究多聚焦于 生防菌对单一作物的防治效果 本课题组前期研究 发现DSE合成菌群的田间防病效果显著优于单一 菌株 为构建高效的人工合成菌群需进一步筛选和 鉴定优良生防菌株 拟解决的关键问题 通过室内 共生培养和根部定殖镜检筛选与植物互惠共生的 DSE菌株 利用盆栽试验评价DSE菌株对番茄和生 姜青枯病的生防效果 并通过形态学特征及分子系 统发育分析对优良生防菌株进行物种鉴定 以期为 DSE在植物病害生物防治中的应用提供理论依据 1 材料与方法 1 1 试验材料 1 1 1 供试生物材料 DSE菌株分离土样采集自 广西柳州地区的甘蔗根围 谢玲 2018 番茄青枯 病病土取自广西农业科学院里建科研基地青枯病病 圃 生姜青枯劳尔氏菌菌株Gg24分离自广西桂林 市临桂区五通镇黄坡生姜根际土壤 由广西大学农 学院袁高庆教授团队惠赠 供试番茄品种为艺丰一 代优良品种 购自南宁市艺丰农业科技有限公司 生姜品种为桂姜290 系脱毒脱菌组培一代种姜 1 1 2 供试培养基 分离培养基 1 2 CM 麦芽汁 玉米培养基 CMMY 燕麦培养基 OA 1 5 琼脂 培养基 WA 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 PDA 马 铃薯葡萄糖液体培养基 PDB LA琼脂培养基 Luria Agar LB液体培养基 Luria Bertani 的配制 参考谢玲 2018 和曾凤花等 2025 1 1 3 DSE和生姜青枯病菌菌液制备 菌液的制 备方法参考曾凤花等 2025 1 1 4 番茄青枯病病土制备 将病土与基质按照 质量比1 2混合均匀 每盆分装等量病土备用 1 2 试验方法 1 2 1 内生真菌诱捕和纯化 参照谢玲 2018 的 方法 以茄子苗为诱饵植物诱捕土样中的内生真菌 茄子种子经表面消毒 75 酒精和1 次氯酸钠分别 振荡消毒30 s 后置于WA培养基上催芽 将土样与 灭菌育苗基质以2 1体积比混匀后装入直径为7 cm 的培养杯中 将催芽后露白的种子播种于培养杯中 培养50 d左右收获 每杯播种3粒种子 每处理5个 重复 共计15棵苗 对茄子苗根部组织进行清洗和 表面消毒 分别用0 005 吐温20和无菌水振荡消毒 3次 每次1 min 后置于1 2 CM培养基上 于25 下 培养 待菌落长出后 及时挑取菌落转接至CMMY 培养基进行培养获得纯菌株 1 2 2 番茄共生菌株筛选 将内生真菌接种于OA 培养基 每皿3块菌块 培养7 14 d后备用 参照谢 玲 2018 的方法 以番茄为宿主植物 番茄种子经表 面消毒后置于WA培养基上催芽 待种子发芽成幼 苗后分别移栽至培养好的菌落上 每个菌落分别移 栽1株无菌苗 每皿3株苗 将培养皿放入组培瓶中 置于26 光照强度8000 lx 光照时间16 h d的 MJX 250B 培养箱 天津市泰斯特仪器有限公司 中共培养 每处理3个重复 每重复9株番茄苗 以未 接种内生真菌的处理为对照 CK 培养14 d后记 录宿主植物的生长情况 将宿主植物根部洗净后放 入50 烘箱中烘烤3 d并称量干重 对未表现病症 生物量未明显低于CK的番茄苗根部进行切片和 乳酸酚棉蓝 1 棉蓝1 mL 50 醋酸溶液199 mL 染色 在显微镜下观察菌丝在根部的定殖情况 对根 部的内生真菌进行再分离 确定再分离菌株是否为 原接种菌株 1 2 3 DSE对番茄青枯病的盆栽生防试验 试验 在广西农业科学院植物保护研究所大棚内进行 用 60 温水浸泡番茄种子2 h后置于光照培养箱 28 湿度80 无光照 中催芽72 h 待种子发芽 后 挑选芽长一致 生长饱满的种苗 用DSE菌液浸 泡30 min 以等量灭菌水浸泡为对照 CK 播种至 育苗盘 每株种苗灌根接种10 mL菌液作为定根 水 置于光照培养架上培养 光照16 h d 光照强度 30000 lx 育苗25 d后移栽至装有2 3病土的花 盆 20 6 cm 17 5 cm 15 0 cm 并置于大棚中 温度 30 5 相对湿度 80 5 自然光照 每重复 30株番茄苗 每处理3次重复 于移栽病土后45 d 调查青枯病发病情况 参照NY T 1464 32 2010 农药田间药效试验准则第32部分 杀菌剂防治番 茄青枯病 计算发病率和防治效果 发病率 发病植株数 植株总数 100 防治效果 对照组发病率 处理组发病率 对照组发病率 100 1 2 4 DSE对生姜青枯病的盆栽生防试验 盆栽 试验在广西农业科学院植物保护研究所大棚内 进行 选取健壮 长势一致的生姜苗 移栽前先用 DSE菌液浸根30 min 以浸根等量灭菌水为对照 CK 移栽后将浸根剩余的菌液或灭菌水作为定 根水浇到花盆的育苗基质 将花盆置于大棚中 温度 30 5 相对湿度 90 5 自然光照 移栽35 d 后接种病原菌 采用直径为0 4 mm的大头针刺伤 生姜的茎基部后 每株灌根接种100 mL病原菌 3434 11期 龙艳艳等 青枯病生防深色有隔内生真菌的筛选鉴定及其防治效果 Gg24菌液 每盆种植3株 每重复3盆生姜苗 每 处理3次重复 分别于接种病原菌10和55 d后调 查发病情况 计算病情指数和防效 最后一次调查 发病情况时调查植株的存活率 分蘖数和株高 生姜青枯病 姜瘟病 病情指数分级标准参照 NY T 1464 31 2010 农药田间药效试验准则 第31 部分 杀菌剂防治生姜姜瘟病 执行 病情指数 各病级株数 各级代表值 调查 总株数 最高级代表值 100 防治效果 对照组病情指数 处理组病情 指数 对照组病情指数 100 存活率 存活盆数 总盆数 100 平均分蘖数 每盆存活分蘖数 每盆原始总株数 1 2 5 DSE形态鉴定 参照谢玲 2018 和Das等 2019 的方法并进行适当优化 将DSE菌株接种 至CMMY培养基上 培养14 d后观察菌落形态特 征 同时 将灭菌盖玻片置于WA培养基上 盖玻片 中央放置1块0 5 cm 0 5 cm的OA培养基 将目标 菌株接种于OA培养基上并盖上另1片灭菌盖玻片 于28 下培养14 d后 放入4 冰箱低温刺激产孢 7 d后取出盖玻片置于奥林巴斯BX53显微镜下观察 菌丝 产孢结构和分生孢子形态 1 2 6 DSE分子鉴定 DSE菌株在PDA培养基活 化后 刮取菌丝体并使用真菌DNA试剂盒 北京天 根生化科技有限公司 提取菌株基因组DNA 以提 取的DNA为模板 使用真菌通用引物ITS1 5 TCC GTAGGTGAACCTGCGG 3 ITS4 5 TCCTCCGCT TATTGATATGC 3 和LROR 5 GTACCCGCTGAA CTTAAGC 3 LR5 5 TCCTGAGGGAAACTTCG 3 分别对ITS和28S rRNA序列进行PCR扩增 PCR 反应体系和扩增程序参照曾凤花等 2025 PCR扩 增产物经0 8 琼脂糖凝胶电泳检测正确后送至北 京六合华大基因科技有限公司测序 将所得序列上 传NCBI数据库 通过BLAST比对确认菌株的大概 属级分类地位 再从NCBI下载该属已知物种代表 模式菌株及其近缘种代表菌株的ITS和28S rRNA 序列 通过MEGA 11 0以邻接法 Neighbor joining NJ 构建ITS与28S rRNA的联合系统发育树 确定 目标菌株的分类学地位 通过NCBI的BLAST比对 计算菌株间的ITS和28S rRNA序列相似度 1 3 统计分析 试验数据采用Excel 2016和DPS 7 05进行统计 分析 采用单因素方差分析中的Duncan s新复极差 法进行差异显著性检验 使用GraphPad Prism 8作图 所有结果均以平均值 标准差表示 2 结果与分析 2 1 番茄共生菌株筛选 采用茄子苗诱捕法从甘蔗根围土壤中分离到 6株内生真菌 分别为L31 L8 LC3 LC8 LC126和 LZ2 与番茄苗共培养14 d后 菌株L8 LC8和LC3 处理的番茄苗均能正常生长 图1 其他菌株处理表 现出明显黄化和矮化等发病症状 其中L8和LC8处 理组的番茄苗长势明显优于CK 生物量测定结果 图2 显示 菌株L8和LC8处理的番茄植株干重极 显著高于CK P0 05 下同 乳酸酚 棉蓝染色结果 图3 显示 菌株L8 LC8和LC3均能 成功定殖于番茄根部 显微观察发现典型DSE结构 表皮层细胞内形成深色有隔菌丝 图3 A和图3 B 观察到微菌核结构 图3 C ITS序列比对证实再分 离菌株与原接种菌株100 匹配 CK处理未检测到 任何DSE定殖结构 图3 D 共培养试验结果显 示 3株DSE菌株L8 LC8和LC3与番茄苗互作表现 出明显的共生特性 基于上述结果 本研究选择菌株 L8 LC8和LC3进行后续青枯病生防效果评价 图1 番茄苗与DSE菌株共培养14 d的长势 Fig 1 Growth of tomato seedlings co cultured with DSE strains at 14 d CKCKCK L8 LC8 LC3 3435 56卷南 方 农 业 学 报 A L8 50 m B 10 m LC3 D CK 50 m cC aA bB cC dD eE eE CK L8 LC8 LC3 LZ2 L31 LC126 2 2 DSE菌株对番茄青枯病的盆栽防治效果 番茄苗移栽青枯病病土45 d后 菌株LC3处理 的青枯病发病率为33 3 表现出最优的防治效果 其发病率极显著低于菌株LC8 60 0 L8 77 8 和CK 91 1 处理 表1 在防效方面 菌株LC3 处理的防效达63 2 极显著高于菌株LC8 34 2 和L8 14 7 处理 以上结果显示 不同DSE菌株 对番茄青枯病的防效存在极显著差异 基于菌株 LC3对番茄青枯病的防效超过60 0 选择该菌株进 一步评价其对生姜青枯病的生防潜力 2 3 菌株LC3对生姜青枯病的盆栽防治效果 采用盆栽试验进一步评价DSE菌株LC3对生 姜青枯病的防治效果 结果显示 接种病原菌10和 55 d时 菌株LC3处理的病情指数均极显著低于CK 分别较CK降低57 4 和47 8 防效分别达42 6 和52 4 呈随时间递增的趋势 图4 A和图4 B 接种病原菌55 d后 所有处理的早期分蘖均发病枯 死 菌株LC3处理有66 7 的植株能重新分蘖 其重 新分蘖植株占比极显著高于CK 33 3 菌株LC3 处理的生姜苗存活率极显著高于CK 图4 C 菌株 LC3处理新生分蘖的株高和分蘖数分别较CK增加 61 8 和164 3 图4 D和图4 E 以上结果表明 菌株LC3不仅对生姜青枯病具有稳定持久的防治效 果 还能极显著促进病后植株的恢复和生长 表现出 独特的 防治 修复 双重功能 2 4 菌株LC3鉴定结果 菌株LC3菌落在CMMY培养基上生长速度中 等 28 培养14 d后菌落直径为28 mm 灰色 绒毡 状 圆形 背面黑色 图5 A 菌丝透明至浅褐色 有隔 直径2 3 4 1 m 分生孢子梗和菌丝无明显 区别 比菌丝稍粗 直径为2 6 5 5 m 淡褐色 1 8个 分隔 常直立在T型基细胞上 分枝或不分枝 产孢 细胞水滴状 直径1 5 4 2 m 常分枝 其上的分生 孢子脱落后会留下明显齿状孢痕 图5 B 图5 G 分生孢子单细胞 顶生 常链生或呈头状排列 半透 明至浅褐色 球形 椭圆形至柠檬形 纺锤形或水滴 形 光滑 无分隔 部分孢子两端或一端有孢脐 非球 形孢子大小3 2 6 4 m 2 1 3 6 m 球形孢子直径 2 2 4 2 m 图5 B 图5 H 菌株LC3的形态特征 与Badali等 2008 对Cladophialophora immunda的 描述基本一致 因此将菌株LC3初步鉴定为Clado phialophora immunda 图2 番茄苗与DSE菌株共培养14 d的干重 Fig 2 Dry weight of tomato seedlings co cultured with DSE strains at 14 d 图柱上不同大 小写字母表分别表示差异极显著 P 0 01 和显著 P 0 05 图4同 Different uppercase and lowercase letters on the bars indicated extremely significant differences P 0 01 or significant differences P 0 05 respectively The same was applied in Fig 4 处理 Treatment 干重 mg Dry weight 20 15 10 5 0 C 10 mLC8 图3 DSE菌株在番茄根部的定殖结构 Fig 3 Colonization structures of DSE strains at tomato seed ling root A和B 深色有隔菌丝 C 微菌核 D 空白对照 A and B Dark septate hypha C Microsclerotium D Blank control 处理 Treatment LC3 LC8 L8 CK 发病率 Incidence 33 3dC 60 0cB 77 8bA 91 1aA 防效 Control effect 63 2aA 34 2bB 14 7cC 表1 移栽病土45 d时的番茄青枯病发病率和DSE菌株防效 Table 1 Incidence and control effects against DSE strains for tomato bacterial wilt after 45 d of transplanting infected soil 同列数据后不同大 小写字母分别表示差异极显著 P 0 01 和显著 P 0 05 Different uppercase and lowercase letters in the same column indicated extremely significant differences P 0 01 or significant differences P 0 05 respectively 3436 11期 龙艳艳等 青枯病生防深色有隔内生真菌的筛选鉴定及其防治效果 在NCBI数据库中的比对结果显示 与菌株 LC3 的 ITS 序列相似度最高的是Cladophialophora immunda FMR20179 二者之间的相似度为99 7 578 580 在基于ITS和28S rRNA序列构建的联 合系统发育树上 图6 菌株LC3以71 0 的支持 率与包括模式菌株在内的 5 株 Cladophialophora immunda代表菌株聚在一个单系进化支上 其中菌 株LC3与模式菌株CBS 834 96以69 0 的支持率 聚成一个小进化支 菌株LC3和Cladophialophora immunda 模式菌株 CBS 834 96 之间的 ITS 和 28S rRNA序列相似度分别为98 1 和99 7 进一步证 明菌株LC3鉴定为Cladophialophora immunda的可 靠性 3 讨论 本研究从广西柳州地区甘蔗根围土壤中分离得 到6株内生真菌 其中3株为能与番茄互惠共生的 DSE菌株 并从中筛选出1株对番茄青枯病和生姜 青枯病均具有生防潜力的菌株LC3 广西作为我国 重要的农业大省 不仅是全国粮食主产区之一 也是 菜篮子 和 果盘子 的重要基地 拥有百色番茄 田 林生姜等特色优势作物 然而 蔬菜青枯病等病害 频发且日益严重 严重威胁着广西特色农业的可持 续发展 卢维宏等 2020 由于化学防治效果有限 且抗病 高产和品质在育种中难以兼顾 环境友好的 生物防治成为研究热点 利用生防菌的促生抗病功 能是减轻病害危害 减少化肥农药使用的重要途径 也是保障国家农产品安全和生态安全的重大战略 需求 根据CIC灼识咨询发布的 中国生物农药行业 报告 2015 2022年我国生物农药产品登记年均增 长率为8 8 呈现良好的上升态势 预计2024年微 生物农药市场容量将达到113亿元 未来3年将增长 58 至179亿元 市场前景广阔 然而 传统生防菌 筛选多以病原菌拮抗活性为目标 主要集中于芽孢 杆菌 木霉 链霉菌和假单胞菌等常见微生物 此 外 由于田间环境复杂 生防菌难以定殖并发挥功 效 导致当前生防菌剂产业存在产品单一 防治对象 专一 活性差 防效不稳定和成本高等问题 Tan et al 2015 Sol rzano et al 2025 因此 开发新型生 防菌剂 尤其是具有广谱抗病能力和环境适应性强 的内生真菌资源 成为解决产业痛点的关键方向 本研究筛选到的菌株LC3不仅具有广谱抗病潜力 还能与宿主植物互惠共生 为开发高效 稳定的新型 生防菌剂提供了重要资源 具有广阔的应用前景 本研究报道Cladophialophora immunda菌株LC3 可以与番茄苗共生 并对番茄青枯病和生姜青枯病 图4 菌株LC3对生姜青枯病的盆栽防治效果 Fig 4 Control effects of strain LC3 against ginger bacterial wilt in pot experiment 接菌后10 d 10 d after inoculation bacterium 接菌后55 d 55 d after inoculation bacterium 病情指数 Disease index 100 0 80 0 60 0 40 0 20 0 0 0 处理 Treatment aA aA bB bB CK LC3 CK LC3 10 55 防效 Control ef fect 60 0 40 0 20 0 0 0 存活率 Survival rate 80 0 60 0 40 0 20 0 0 0 株高 cm Plant height aA bB 接菌后时间 d Time after inoculation 处理 Treatment CK LC3 处理 Treatment CK LC3 处理 Treatment CK LC3 50 0 40 0 30 0 20 0 10 0 0 0 aA bB 分蘖数 Number of tillers 5 0 4 0 3 0 2 0 1 0 0 0 aA bB A B C D E 接菌后10 d 10 d after inoculation bacterium 接菌后55 d 55 d after inoculation bacterium 3437 56卷南 方 农 业 学 报 显示出良好的生防潜力 前人对枝孢瓶霉属菌株生 防作用的研究尚少 且目前还停留在单菌株水平上 如Harsonowati等 2020 研究发现 Cladophialophora chaetospira SK51对草莓枯萎病具有良好的生防作用 本研究团队前期探讨了Cladophialophora immunda 菌株LC3与另外3株同属不同物种组成的菌群T4 对生姜青枯病的生防效果 盆栽和大田试验均表现 出良好的治疗修复作用 防治效果稳定 曾凤花等 2025 本研究中菌株LC3比CK显示出更强的再生 能力 与之前的研究结果吻合 但菌群T4的治疗修 复作用是由菌株LC3单独引起还是由多个菌株的叠 加作用值得进一步探讨 前人研究的复合生防菌亲 缘关系普遍较远 甚至是跨越门级水平 本研究团队 用到的复合菌群T4则为枝孢瓶霉同属菌株 对生姜 青枯病的生防效果不仅在盆栽试验中得到体现 也 在大田试验中得到进一步验证 曾凤花等 2025 该 菌群对番茄青枯病的生防