上海地区草莓枯萎病病菌的鉴定及对4类杀菌剂的敏感性.pdf

书 书 书 许 媛 成 玮 颜 伟 中 等 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 菌 的 鉴 定 及 对4 类 杀 菌 剂 的 敏 感 性 J 江 苏 农 业 科 学 2020 48 4 115 121 doi 10 15889 j issn 1002 1302 2020 04 019 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 菌 的 鉴 定 及 对4 类 杀 菌 剂 的 敏 感 性 许 媛 1 成 玮 2 颜 伟 中 2 肖 婷 1 王 建 华 1 吉 沐 祥 1 杨 敬 辉 1 1 江 苏 丘 陵 地 区 镇 江 农 业 科 学 研 究 所 江 苏 句 容212400 2 上 海 市 农 技 推 广 中 心 上 海200000 摘 要 为 阐 明 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 原 菌 分 类 地 位 及 对 药 剂 的 敏 感 性 运 用 真 菌 形 态 学 和 分 子 生 物 学 分 类 方 法 对 上 海 地 区 不 同 草 莓 种 植 区 分 离 得 到 的34 株 病 原 菌 进 行 鉴 定 并 采 用 菌 丝 生 长 速 率 法 测 定 了 病 原 菌 群 体 对4 种 不 同 作 用 机 制 杀 菌 剂 的 敏 感 性 结 果 表 明 34 株 病 原 菌 均 鉴 定 为 尖 孢 镰 刀 菌 Fusarium oxysporum 病 原 菌 群 体 对 多 菌 灵 咪 鲜 胺 戊 唑 醇 和 吡 唑 醚 菌 酯 的 抑 制 中 浓 度 EC 50 范 围 分 别 为0 3027 0 5562 0 001 1 0 1482 0 036 1 0 2997 0 0368 1 7216mg L 病 原 菌 群 体 对 多 菌 灵 和 戊 唑 醇 的EC 50 比 值 分 别 为1 8 8 3 而 对 咪 鲜 胺 和 吡 唑 醚 菌 酯 的EC 50 比 值 分 别 达134 7 46 8 上 海 市 域 范 围 内 不 同 地 区 间 的 尖 孢 镰 刀 菌 对 同 种 杀 菌 剂 的 敏 感 性 之 间 无 显 著 性 差 异 对4 类 不 同 作 用 机 制 杀 菌 剂 之 间 的 敏 感 性 也 无 显 著 相 关 性 P 0 05 本 研 究 结 果 明 确 了 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 原 菌 的 分 类 地 位 可 以 为 合 理 选 用 杀 菌 剂 防 治 病 害 及 病 原 菌 抗 药 监 测 提 供 参 考 关 键 词 草 莓 枯 萎 病 病 菌 病 原 菌 鉴 定 多 菌 灵 戊 唑 醇 咪 鲜 胺 吡 唑 醚 菌 酯 敏 感 性 中 图 分 类 号 S436 68 4 文 献 标 志 码 A 文 章 编 号 1002 1302 2020 04 0115 06 收 稿 日 期 2018 12 26 基 金 项 目 江 苏 省 第 五 期 333 工 程 培 养 基 金 编 号 BRA2017149 上 海 市 农 业 委 员 会 示 范 推 广 计 划 编 号 沪 农 推 字 2015 第2 7 号 江 苏 省 农 业 工 程 编 号 SXGC 2017 214 作 者 简 介 许 媛 1991 女 江 苏 兴 化 人 硕 士 助 理 研 究 员 主 要 从 事 植 病 生 防 和 化 保 方 面 的 研 究 Tel 0511 80978081 E mail xyyuan007 通 信 作 者 杨 敬 辉 博 士 研 究 员 主 要 从 事 农 作 物 病 害 防 控 方 面 的 研 究 Tel 0511 80978081 E mail yjhnn32 上 海 地 区 草 莓 种 植 面 积 约 为2000hm 2 主 要 分 布 在 嘉 定 青 浦 金 山 和 浦 东 等 地 区 近 几 年 在 上 海 地 区 部 分 大 棚 草 莓 移 栽 初 期 土 传 病 害 危 害 严 重 尤 其 以 枯 黄 萎 病 为 盛 发 病 植 株 地 上 部 分 新 生 心 叶 呈 黄 绿 色 不 对 称 呈 大 小 叶 状 地 下 根 呈 黑 褐 色 严 重 时 整 株 枯 死 对 大 棚 草 莓 的 产 量 和 品 质 造 成 了 极 大 的 影 响 由 于 该 病 田 间 危 害 症 状 与 黄 萎 病 极 其 相 似 仅 从 田 间 表 现 形 态 上 难 以 准 确 区 分 因 此 本 研 究 对 从 上 海 地 区 草 莓 主 产 区 显 枯 黄 症 草 莓 植 株 上 分 离 得 到 病 原 菌 群 体 进 行 鉴 定 并 检 测 病 原 菌 群 体 对4 种 不 同 作 用 机 制 杀 菌 剂 的 敏 感 性 旨 在 为 探 明 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 原 菌 群 体 的 分 类 地 位 明 确 病 原 菌 群 体 对 不 同 作 用 机 制 杀 菌 剂 的 敏 感 性 现 状 以 及 为 科 学 防 控 和 抗 药 性 监 测 提 供 参 考 1 材 料 与 方 法 1 1 供 试 培 养 基 马 铃 薯 琼 脂 培 养 基 potatodextrose agar 简 称 PDA 用 于 病 原 菌 的 分 离 保 存 鉴 定 和 药 剂 敏 感 性 测 定 1 2 菌 株 采 集 与 分 离 于2016 年9 月 草 莓 移 栽 初 期 从 上 海 市 嘉 定 区 青 浦 区 和 金 山 区 大 棚 草 莓 园 内 采 集 初 发 病 症 的 新 鲜 草 莓 根 部 组 织 洗 净 并 用 乙 醇 表 面 消 毒 后 采 用 常 规 的 组 织 分 离 方 法 1 每 个 大 棚 分 离3 5 株 经 单 孢 纯 化 后 共 得 到34 株 菌 株 将 各 菌 株 编 号 并 保 存 于PDA 斜 面 上 置4 冰 箱 保 存 备 用 1 3 供 试 药 剂 97 09 多 菌 灵 原 药 由 上 海 升 联 化 工 有 限 公 司 提 供 95 2 咪 鲜 胺 由 江 苏 辉 丰 农 化 股 份 有 限 公 司 提 供 95 戊 唑 醇 由 江 苏 盐 城 利 民 农 化 有 限 公 司 提 供 95 吡 唑 醚 菌 酯 由 德 国 巴 斯 夫 股 份 中 国 有 限 公 司 提 供 多 菌 灵 用0 1 mol L 盐 酸 溶 解 其 余 原 药 均 用 丙 酮 溶 解 各 药 剂 均 配 制 成10000mg L 的 母 液 99 水 杨 肟 酸 salicylhydroxamic acid 简 称 SHAM 购 自Sigma Aldrich 公 司 用 甲 醇 配 制 成 20000mg L 的 母 液 所 有 母 液 均 置 于4 保 存 备 用 5 1 1 江 苏 农 业 科 学 2020 年 第48 卷 第4 期 表1 草 莓 枯 萎 病 病 菌 菌 株 信 息 采 样 地 点 菌 株 数 株 菌 株 编 号 上 海 市 嘉 定 区 5 16cf01 16cf02 16cf03 16cf04 16cf05 上 海 市 青 浦 区 9 16cf07 16cf08 16cf09 16cf10 16cf11 16cf12 16cf13 16cf14 16cf17 上 海 市 金 山 区 20 16cf18 16cf19 16cf20 16cf21 16cf22 16cf24 16cf25 16cf26 16cf27 16cf28 16cf29 16cf30 16cf 31 16cf33 16cf34 16cf35 16cf36 16cf37 16cf38 16cf39 1 4 病 原 菌 形 态 观 察 将 经 单 孢 分 离 得 到 的 菌 株 移 置 于PDA 培 养 基 上 置 于25 黑 暗 条 件 下 培 养 并 观 察 其 菌 落 形 态 颜 色 质 地 等 特 征 1 5 病 原 菌 的 致 病 性 测 定 1 5 1 病 原 菌 分 生 孢 子 液 的 制 备 沿 病 原 菌 25 PDA 上 培 养5d 边缘 打 取 直 径 为4mm 的 菌 饼 每 个 菌 株 分 别 挑 取4 块 菌 饼 置 于 装 有80mL 马 铃 薯 液 体 培 养液 的 体 积 为250mL 的 三 角 瓶 中 每 个 病 原 菌 接 种1 个 三 角 瓶 置 于25 120r min 条 件 下 振 荡 培 养5d 培 养 液 经 双 层 无 菌 纱 布 过 滤 后 于 显 微 镜 下 用 血 球 计 数 板 计 数 并 用 无 菌 水 稀 释 菌 液 分 生 孢 子 浓 度 至1 10 5 3 10 5 个 mL 每 个 病 原 菌 保 留 100mL 稀 释 好 的 孢 子 悬 浮 液 置 于4 冰 箱 备 用 1 5 2 病 原 菌 的 接 种 方 法 取 红 颊 草 莓 幼 苗 洗 净 根 部 将 苗 浸 于 上 述 1 5 1 节 孢 子 液 中30s 后 移 栽 于 装 有 灭 菌 基 质 与 田 土 混 合 体 积 比 为2 8 的 草 莓 苗 钵 中 每 个 菌 株 接 种3 株 草 莓 苗 以 无 菌 水 浸 根 草 莓 苗 作 对 照 苗 钵 置 于 草 莓 大 棚 内 培 养 21d 后 调 查 发 病 情 况 取 样 接 种 发 病 的 草 莓 根 部 组 织 参 照 柯 赫 氏 法 则 进 行 病 原 菌 的 再 分 离 1 6 rDNA ITS 基 因 部 分 序 列 的 测 定 1 6 1 基 因 组DNA 的 提 取 在PDA 平 板 上 新 鲜 生 长 的 分 离 菌 边 缘 处 打 取 直 径 为4mm 的 菌 块 接 种 于 置 有 灭 菌 玻 璃 纸 的PDA 平 板 上 25 暗 培 养 72h 将 玻 璃 纸 上 的 新 鲜 菌 丝 刮 下 置 于1 5 mL 离 心 管 中 于65 烘 箱 中 烘 干 用 镊 子 捣 碎 备 用 真 菌 基 因 组 的 提 取 参 照 MEGA 真 菌 基 因 组 提 取 试 剂 盒 说 明 书 进 行 1 6 2 PCR 扩 增 及 生 物 信 息 学 分 析 rDNA ITS 引 物 采 用 真 菌rDNA ITS 序 列 的 通 用 引 物 2 ITS1 ITS4 5 TCCGTAGGTGAACCTGCGG TCCTC CGCTTATTGATATGC 3 预 期 扩 增 长 度 为 570bp PCR 反 应 程 序 95 预 变 性4min 94 变 性40s 55 退 火40s 72 延 伸1min 共 进 行40 个 循 环 最 后72 延 伸10min 取5 L 扩 增 产 物 经1 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 检 测 后 送 至 南 京 金 斯 瑞 生 物 科 技 有 限 公 司 进 行 纯 化 和 测 序 将 所 得 序 列 用 BLAST 搜 索 软 件 在NCBI 数 据 库 中 进 行 同 源 性 搜 索 比 对 分 析 1 7 草 莓 枯 萎 病 病 菌 对4 种 杀 菌 剂 的 敏 感 性 测 定 采 用 菌 丝 生 长 速 率 法 3 将 保 留 的 供 试 菌 种 移 植 到PDA 平 板 中 25 活 化96h 然 后 在 菌 落 边 缘 用 打 孔 器 制 取 直 径 为4mm 的 菌 块 移 到 含 系 列 梯 度 药 剂 浓 度PDA 平 板 正 中 央 多 菌 灵 系 列 浓 度 为 0 05 0 10 0 20 0 40 0 80 1 60 3 20mg L 咪 鲜 胺 系 列 浓 度 为0 005 0 010 0 020 0 040 0 080 0 160 0 320mg L 戊 唑 醇 系 列 浓 度 为0 05 0 10 0 20 0 40 0 80 1 60 3 20mg L 吡 唑 醚 菌 酯 系 列 浓 度 为 0 625 1 250 2 500 5 000 10 000 20 000mg L 吡 唑 醚 菌 酯 测 定 时 所 有 平 板 中 都 含 100mg LSHAM 采 用 无 菌 水 作 对 照 每 个 处 理 重 复3 次 25 培 养72h 后 用 十 字 交 叉 法 测 量 各 处 理 的 菌 落 直 径 cm 计 算 各 处 理 的 菌 落 直 径 平 均 值 并 按 照 下 列 公 式 计 算 菌 丝 生 长 平 均 抑 制 率 菌 丝 生 长 平 均 抑 制 率 对 照 菌 落 直 径 均 值 处 理 菌 落 直 径 均 值 对 照 菌 落 直 径 均 值 接 种 菌 饼 直 径 100 利 用DPS 软 件 通 过 浓 度 对 数 值 x 与 抑 制 率 概 率 值 y 之 间 的 线 性 回 归 关 系 求 出 毒 力 回 归 方 程 和 有 效 抑 制 中 浓 度 EC 50 2 结 果 与 分 析 2 1 病 害 症 状 及 病 原 菌 培 养 性 状 观 察 发 病 草 莓 植 株 地 上 部 分 复 叶 呈 黄 绿 色 卷 曲 呈 现 大 小 叶 状 叶 缘 变 褐 萎 蔫 至 枯 死 地 下 部 分 呈 黑 褐 色 维 管 束 变 褐 采 用 组 织 分 离 法 从 上 海 市 嘉 定 区 青 浦 区 金 山 区 的 不 同 草 莓 大 棚 的 草 莓 病 株 根 颈 内 组 织 上 共 分 离 纯 化 得 到34 株 单 孢 菌 株 表1 分 离 株 在PDA 培 养 基 上 菌 丝 形 态 呈 白 色 质 密 絮 状 图1 6 1 1 江 苏 农 业 科 学 2020 年 第48 卷 第4 期 2 2 病 原 菌 致 病 性 测 定 在 人 工 接 种 草 莓 幼 苗21d 后 地 上 部 分 新 生 心 叶 变 黄 呈 现 大 小 叶 或 叶 缘 变 褐 出 现 萎 蔫 症 状 病 情 进 一 步 发 展 后 植 株 死 亡 剖 开 根 颈 可 见 内 部 变 褐 与 田 间 观 察 到 的 症 状 一 致 从 接 种 发 病 的 草 莓 根 颈 内 分 离 得 到 的 菌 株 与 接 种 所 用 菌 株 的 菌 落 形 态 相 似 由 此 可 见 接 种 所 用 的 菌 株 是 引 起 草 莓 枯 萎 病 的 病 原 菌 图2 2 3 rDNA ITS 的PCR 扩 增 及 序 列 测 定 菌 株rDNA ITS 的PCR 扩 增 产 物 电 泳 结 果 表 明 所 有 菌 株 的 扩 增 条 带 都 清 晰 明 亮 大 小 均 约 为 570bp 的 片 段 而 且 不 见 明 显 的 非 特 异 性 杂 带 符 7 1 1 江 苏 农 业 科 学 2020 年 第48 卷 第4 期 合 预 期 的 扩 增 结 果 测 序 和 同 源 性 序 列 进 行 比 对 分 析 结 果 表 明 所 有 菌 株 均 为 尖 把 镰 刀 菌 Fusarium oxysporum 2 4 草 莓 枯 萎 病 病 菌 对4 种 杀 菌 剂 的 敏 感 性 检 测 采 用 菌 落 生 长 直 径 法 测 得 多 菌 灵 咪 鲜 胺 戊 唑 醇 和 吡 唑 醚 菌 酯 对34 株 草 莓 枯 萎 病 病 菌 的EC 50 值 分 别 为 0 4494 0 077 7 0 025 5 0 031 6 0 1227 0 059 1 0 4675 0 4159 mg L 34 株 草 莓 枯 萎 病 群 体 对 多 菌 灵 和 戊 唑 醇 的 敏 感 性 差 异 较 小 最 大 和 最 小EC 50 比 值 分 别 为1 8 8 3 而 对 咪 鲜 胺 和 吡 唑 醚 菌 酯 的 敏 感 性 差 异 较 大 最 大 和 最 小EC 50 比 值 分 别 为134 7 46 8 2 5 不 同 地 理 来 源 菌 株 对4 种 杀 菌 剂 的 敏 感 性 差 异 分 别 比 较 取 自 嘉 定 区 青 浦 区 和 金 山 区 的 草 莓 枯 萎 病 菌 对 供 试 药 剂 的 敏 感 性 差 异 结 果 图3 表 明 对 多 菌 灵 的 敏 感 性 表 现 为 金 山 区 青 浦 区 嘉 定 区 图3 A 对 咪 鲜 胺 戊 唑 醇 和 吡 唑 醚 菌 酯 的 敏 感 性 均 表 现 为 嘉 定 区 金 山 区 青 浦 区 不 同 地 区 来 源 的 草 莓 枯 萎 病 病 菌 对 同 种 杀 菌 剂 的 敏 感 性 之 间 存 在 差 异 但 上 述 差 异 均 未 达 显 著 水 平 P 0 05 2 6 草 莓 枯 萎 病 病 菌 对4 种 杀 菌 剂 敏 感 性 的 相 关 性 通 过 敏 感 性 EC 50 线 性 回 归 分 析 图4 得 出 多 菌 灵 与 咪 鲜 胺 多 菌 灵 与 戊 唑 醇 多 菌 灵 与 吡 唑 醚 菌 酯 咪 鲜 胺 与 戊 唑 醇 咪 鲜 胺 与 吡 唑 醚 菌 酯 及 戊 唑 醇 与 吡 唑 醚 菌 酯 的 决 定 系 数 分 别 为0 0046 0 0114 0 0631 0 2009 0 0468 0 0076 在P 0 05 水 平 上 均 不 显 著 表 明 草 莓 枯 萎 病 病 菌 对 这4 种 不 同 作 用 机 制 的 杀 菌 剂 的 敏 感 性 之 间 均 无 显 著 相 关 性 3 结 论 与 讨 论 植 物 病 原 菌 的 鉴 定 及 对 药 剂 的 室 内 敏 感 性 测 定 与 筛 选 工 作 是 正 确 指 导 田 间 病 害 防 治 的 前 提 本 研 究 首 次 系 统 分 离 了 上 海 市 主 要 草 莓 产 区 呈 现 草 莓 枯 黄 萎 综 合 症 样 株 的 病 原 菌 种 群 并 采 用 传 统 的 形 态 学 和 现 代 分 子 生 物 学 相 结 合 的 方 法 对 病 原 菌 进 行 鉴 定 鉴 定 结 果 表 明 所 有 分 离 菌 株 均 属 尖 孢 镰 刀 菌 其 分 类 地 位 为 半 知 菌 亚 门 瘤 座 菌 科 镰 孢 属 尖 孢 镰 刀 菌 F oxysporum 该 结 果 与 吴 祥 等 的 报 道 4 7 相 一 致 值 得 与 同 行 探 讨 的 是 本 研 究 取 样 时 间 为 草 莓 定 植 期 初 期 取 样 病 株 为 枯 黄 萎 病 综 合 症 病 株 即 发 病 幼 苗 新 生 叶 失 绿 变 黄 或 弯 曲 畸 形 复 叶 上 的 两 侧 小 叶 不 对 称 呈 畸 形 典 型 的 大 小 叶 叶 色 黄 化 的 病 株 而 非 萎 蔫 枯 死 的 枯 萎 病 症 株 组 织 分 离 均 8 1 1 江 苏 农 业 科 学 2020 年 第48 卷 第4 期 用 根 颈 内 部 的 褐 色 组 织 所 有 分 离 菌 株 从 菌 落 培 养 特 征 上 可 以 初 步 判 定 为 镰 孢 霉 属 Fusariumspp 没 有 一 个 菌 株 的 菌 落 形 态 类 似 轮 枝 孢 属 Verticilliumspp 类 似 的 从 江 苏 省 苏 南 地 区 镇 江 市 苏 州 市 和 无 锡 市 的 显 枯 黄 复 合 症 病 株 上 也 只 分 离 得 镰 孢 霉 属 致 病 真 菌 为 此 从 上 述 病 原 菌 分 离 鉴 定 结 果 似 乎 可 以 得 出 苏 南 和 上 海 地 区 危 害 草 莓 根 部 显 枯 黄 萎 病 症 的 病 原 菌 都 是 镰 孢 霉 属 真 菌 而 非 轮 枝 孢 属 真 菌 本 研 究 检 测 了 上 海 市 嘉 定 区 青 浦 区 和 金 山 区 3 个 草 莓 主 产 区 的 草 莓 枯 萎 病 病 菌 群 体 对 目 前 生 产 上 常 用 的 苯 并 咪 唑 类 咪 唑 类 甾 醇 脱 甲 基 抑 制 剂 类 和 甲 氧 基 丙 烯 酸 酯 类 杀 菌 剂 的 敏 感 性 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 菌 种 群 对 多 菌 灵 的EC 50 均 值 为 0 4494mg L 略 小 于 顾 春 波 等 报 道 的 山 东 省 草 莓 枯 萎 病 病 菌 对 多 菌 灵 的 敏 感 基 线 EC 50 均 值 0 561mg L 8 而 与 陈 宏 州 等 报 道 的 江 苏 省 草 莓 枯 萎 病 病 菌 抗 多 菌 灵 菌 株 的 EC 50 均 值 24 2783mg L 9 和 杨 焕 青 等 报 道 的 山 东 省 抗 多 菌 灵 的 草 莓 枯 萎 病 病 菌 菌 株 的 EC 50 49 4900mg L 有 极 显 著 性 差 异 10 本 研 究 中 草 莓 枯 萎 病 病 菌 种 群 间 对 多 菌 灵 的 最 大 与 最 小EC 50 的 比 值 只 有1 8 0 3027 0 5562mg L 且 菌 株 敏 感 性 频 率 分 布 呈 连 续 性 单 峰 曲 线 可 以 把EC 50 均 9 1 1 江 苏 农 业 科 学 2020 年 第48 卷 第4 期 值 0 4494mg L 作 为 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 种 群 抗 药 性 检 测 的 敏 感 基 线 综 上 分 析 可 以 得 出 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 菌 种 群 对 多 菌 灵 敏 感 裴 龙 飞 等 报 道112 株 蔬 菜 尖 孢 镰 刀 菌 F oxysporum 对 咪 鲜 胺 的 平 均EC 50 为0 0301mg L 并 将 此 值 定 为 抗 性 检 测 的 敏 感 基 线 11 本 研 究 取 样 的34 个 菌 株EC 50 均 值 0 0255mg L 小 于 报 道 的 敏 感 基 线 值 但 菌 株 间 的 最 大 和 最 小EC 50 比 值 达 到134 7 0 0011 0 1482mg L 且 菌 株 敏 感 性 频 率 呈 不 连 续 分 布 因 此 种 群 中 可 能 产 生 了 敏 感 性 下 降 的 亚 群 体 本 研 究 取 样 菌 群 中 只 有6 株 菌 株 的 EC 50 0 0406 0 1482mg L 超 过 报 道 值 其 余28 株 菌 株 中 EC 50 值 小 于 0 01 mg L 0 0010 0 0099mg L 的 有13 株 菌 株 有15 株 菌 株 的EC 50 在0 0100 0 0298mg L 之 间 基 于 上 述 原 因 在 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 菌 对 咪 鲜 胺 的 敏 感 基 线 EC 50 的 确 立 时 应 取 去 除EC 50 陡 然 增 高 的2 株 菌 株 16cf25 和16cf04 后 的EC 50 均 值 0 0188mg L 为 抗 药 性 检 测 的 敏 感 基 线 较 为 适 合 还 需 要 从 分 子 水 平 确 定EC 50 陡 然 增 高 的2 株 菌 株 是 抗 性 菌 株 还 是 种 群 间 的 极 端 变 异 株 菌 株 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 菌 取 样 种 群 对 戊 唑 醇 的EC 50 均 值 为0 1227mg L 低 于 顾 春 波 等 报 道 的 山 东 省 草 莓 枯 萎 病 菌 敏 感 菌 株 种 群 对 戊 唑 醇 的 EC 50 0 2130 0 3570 0 4705mg L 8 10 12 近 似 于 陈 宏 州 报 道 江 苏 省 草 莓 枯 萎 病 菌 对 戊 唑 醇 的 EC 50 0 1544mg L 9 本 研 究 中 草 莓 枯 萎 病 病 菌 种 群 间 对 戊 唑 醇 的 最 大 与 最 小EC 50 比 值 为8 3 0 0361 0 2997mg L 且 种 群 敏 感 性 频 率 分 布 呈 连 续 性 单 峰 曲 线 可 以 把 取 样 种 群EC 50 均 值 0 1227mg L 作 为 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 菌 对 戊 唑 醇 抗 药 性 检 测 的 基 线 并 指 出 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 菌 种 群 对 戊 唑 醇 敏 感 没 有 出 现 敏 感 性 下 降 的 亚 群 体 文 献 检 索 表 明 国 内 外 有 关 草 莓 枯 萎 病 病 菌 对 吡 唑 醚 菌 酯 敏 感 基 线 的 研 究 尚 未 见 报 道 本 研 究 中 取 样 种 群 对 吡 唑 醚 菌 酯 的EC 50 均 值 为0 4675mg L 种 群 间 对 吡 唑 醚 菌 酯 的 最 大 与 最 小EC 50 比 值 为46 78 0 0368 1 7216mg L 取 样 的34 株 菌 株 中 有 4 株 菌 株 的EC 50 陡 增 超 过1 0mg L 因 此 在 确 定 种 群 对 吡 唑 醚 菌 酯 的 敏 感 性 基 线 时 应 取 去 除 EC 50 陡 增 的4 株 菌 株 后 种 群 的EC 50 均 值 为 宜 本 研 究 中 确 定 的 草 莓 枯 萎 病 病 菌 对 吡 唑 醚 菌 酯 的 抗 药 性 检 测 基 线 的EC 50 为0 3347mg L 仅 供 参 考 取 样 种 群 病 菌 对 吡 唑 醚 菌 酯 的 敏 感 性 频 率 呈 不 连 续 分 布 说 明 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 对 吡 唑 醚 菌 酯 可 能 产 生 了 敏 感 性 下 降 的 亚 种 群 我 们 还 需 要 从 分 子 水 平 上 确 定EC 50 陡 增 的4 株 菌 株 是 抗 性 菌 株 还 是 极 端 变 异 菌 株 草 莓 枯 萎 菌 是 土 壤 传 播 病 害 病 原 菌 抗 药 性 在 跨 区 域 间 流 行 传 播 的 可 能 性 较 小 本 研 究 表 明 不 同 地 区 间 枯 萎 病 病 菌 种 群 对 同 一 药 剂 的 敏 感 性 间 有 天 然 异 质 性 差 异 除 试 验 操 作 外 的 可 能 性 但 相 邻 地 区 来 源 的 草 莓 枯 萎 病 病 菌 对 同 种 杀 菌 剂 的 敏 感 性 之 间 没 有 显 著 性 差 异 P 0 05 因 此 有 必 要 研 究 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 菌 种 群 对 药 剂 的 敏 感 性 便 于 与 其 他 省 份 的 报 道 相 对 比 本 研 究 中 确 定 的 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 菌 种 群 对 多 菌 灵 咪 鲜 胺 和 戊 唑 醇 的 敏 感 基 线 值 都 小 于 其 他 省 份 的 报 道 值 说 明 不 能 通 过 直 接 参 考 其 他 省 份 的 数 据 来 当 作 上 海 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 菌 种 群 对 药 剂 的 敏 感 性 基 线 在 本 研 究 中 虽 然 取 样 菌 株 不 是 未 接 触 过 药 剂 的 野 生 菌 株 但 鉴 于 上 海 地 区 还 未 有 草 莓 枯 萎 病 病 菌 种 群 对 苯 并 咪 唑 类 咪 唑 类 甾 醇 脱 甲 基 抑 制 剂 类 和 甲 氧 基 丙 烯 酸 酯 类 杀 菌 剂 的 敏 感 性 研 究 因 此 可 以 把 本 研 究 中 草 莓 枯 萎 病 病 菌 种 群 的 平 均 EC 50 有 些 去 除 陡 增 大 的 值 作 为 抗 药 性 检 测 的 敏 感 基 线 需 指 出 的 是 由 于 任 何 敏 感 基 线 的 建 立 都 是 各 自 实 验 室 特 有 的 因 此 本 研 究 中 建 立 的 敏 感 基 线 值 仅 供 同 行 研 究 时 参 考 参 考 文 献 1 方中 达 植病研 究方法 M 北京 农业 出版社 1979 124 125 2 hiteTJ BrunsT LeeS etal Amplificationanddirectsequencing offungalribosomalRNAgenesforphylogenetics J PCRProtocols 1990 38 315 322 3 ChenL hu S Lu X et al Assessing the risk that Phytophthora meloniscandevelopapointmutation V1109L inCesA3conferring resistancetocarboxylicacidamidefungicides J PLoS ne 2012 7 7 e42069 4 吴 祥 姚 克 兵 吉 沐 祥 等 句 容 地 区 草 莓 枯 萎 病 病 原 菌 的 分 离 鉴 定 及 田 间 防 治 J 江 苏 农 业 学 报 2015 31 4 764 770 5 伊 海 静 陈 艳 刘 正 坪 等 草 莓 枯 萎 病 菌 的 分 离 鉴 定 及 防 治 药 剂 筛 选 J 西 北 农 业 学 报 2016 25 4 626 635 6 于 红 梅 赵 密 珍 王 静 等 草 莓 枯 萎 病 菌 的 分 离 鉴 定 及 生 物 学 特 性 J 江 苏 农 业 科 学 2013 41 11 124 127 7 王 振 华 张 建 坤 龚 国 祥 等 草 莓 枯 萎 病 菌 的 分 离 与 鉴 定 J 湖 北 农 业 科 学 2014 53 14 3297 3299 0 2 1 江 苏 农 业 科 学 2020 年 第48 卷 第4 期 书 书 书 櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄 櫄櫄櫄櫄 櫄櫄櫄櫄櫄 櫄櫄櫄 櫄 櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄 櫄櫄櫄櫄 櫄櫄櫄櫄櫄櫄 8 顾 春 波 史 晓 斌 姜 莉 莉 等 草 莓 枯 萎 病 菌 对 多 菌 灵 的 抗 性 及 其 抗 性 菌 株 生 物 学 特 性 J 植 物 保 护 学 报 2010 37 3 266 272 9 陈 宏 州 庄 义 庆 杨 敬 辉 黄 麻 链 霉 菌NF0919 菌 株 对 草 莓 枯 萎 病 的 生 防 活 性 初 探 J 江 西 农 业 学 报 2014 26 11 54 57 10 杨 焕 青 王 开 运 范 昆 等 草 莓 枯 萎 病 菌 的 生 物 学 特 性 及7 种 杀 菌 剂 对 其 抑 制 作 用 J 植 物 保 护 学 报 2008 35 2 169 174 11 裴 龙 飞 朱 发 娣 柴 阿 丽 等 中 国 华 北 地 区 瓜 类 尖 孢 镰 刀 菌 对 咪 鲜 胺 的 敏 感 性 及 抗 药 突 变 株 生 物 学 性 状 研 究 J 农 药 学 学 报 2016 18 5 575 581 12 林 才 华 王 开 运 顾 春 波 等 山 东 省 草 莓 枯 萎 病 菌 对 四 种 三 唑 类 杀 菌 剂 的 敏 感 性 检 测 J 植 物 保 护 学 报 2009 36 1 55 60 杨 吕 娟 张 子 俊 张 卫 红 新 疆 农 牧 区 拟 蛹 螺 属2 种 蜗 牛 形 态 特 征 和 分 子 数 据 的 比 较 研 究 J 江 苏 农 业 科 学 2020 48 4 121 126 doi 10 15889 j issn 1002 1302 2020 04 020 新 疆 农 牧 区 拟 蛹 螺 属2 种 蜗 牛 形 态 特 征 和 分 子 数 据 的 比 较 研 究 杨 吕 娟 张 子 俊 张 卫 红 新 疆 大 学 生 命 科 学 与 技 术 学 院 新 疆 乌 鲁 木 齐830046 摘 要 拟 蛹 螺 属 Pseudonapaeus 种 类 多 为 农 牧 业 的 害 虫 不 仅 危 害 各 种 蔬 菜 花 卉 其 中 某 些 种 类 还 是 家 畜 家 禽 双 腔 科 吸 虫 的 中 间 宿 主 本 研 究 主 要 探 究 该 属 形 态 相 似2 种 蜗 牛 的 形 态 解 剖 学 和 分 子 生 物 学 特 征 确 定 它 们 分 类 为 该 类 动 物 的 防 治 和 系 统 分 类 学 研 究 提 供 数 据 基 础 形 态 结 果 显 示 2 种 蜗 牛 的 生 境 贝 壳 质 地 大 小 和 颜 色 齿 舌 以 及 颚 片 的 形 态 结 构 相 似 但 贝 壳 形 状 壳 口 齿 数 生 殖 系 统 的 解 剖 特 征 等 存 在 显 著 差 异 其 中 一 种 为 钻 拟 蛹 螺 Pseudonapaeus miser Martens 1874 另 一 种 为 新 种 即 吐 尔 根 拟 蛹 螺 Pseudonapaeus tuegenensissp nov 分 子 结 果 显 示 1 基 于 CO 基 因 序 列 651bp 构 建 的 系 统 发 育 树 中 新 种 和 钻 拟 蛹 螺 以 高 支 持 率 后 验 概 率96 形 成 一 个 单 系 支 系A 显 示 二 者 有 密 切 的 亲 缘 关 系 但 是 钻 拟 蛹 螺3 个 个 体 以 高 支 持 率 后 验 概 率100 聚 为 一 支 与 新 种 产 生 分 异 2 基 于ITS1 基 因 序 列 610bp 新 种 与 钻 拟 蛹 螺 之 间 的 遗 传 距 离 为13 7 12 5 15 1 与 本 属 其 他 种 间 的 遗 传 距 离 更 大 显 著 高 于 种 内 遗 传 距 离2 5 1 3 3 5 结 合 CO 基 因 系 统 发 育 树 的 结 果 支 持 二 者 为 不 同 种 分 子 分 析 的 结 果 支 持 比 较 形 态 学 的 结 果 确 定 吐 尔 根 拟 蛹 螺 P tuegenensissp nov 不 同 于 钻 拟 蛹 螺 P miser Martens 1874 为 一 新 种 利 用 分 子 系 统 学 方 法 研 究 该 属 的 分 类 问 题 在 国 内 为 首 次 关 键 词 拟 蛹 螺 属 形 态 解 剖 CO 基 因 ITS1 新 种 新 疆 中 图 分 类 号 S433 89 文 献 标 志 码 A 文 章 编 号 1002 1302 2020 04 0121 06 收 稿 日 期 2018 11 17 基 金 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金 编 号 31260506 作 者 简 介 杨 吕 娟 1992 女 四 川 遂 宁 人 硕 士 主 要 从 事 贝 类 学 研 究 E mail YLJ687592 通 信 作 者 张 卫 红 硕 士 副 教 授 主 要 从 事 贝 类 学 研 究 E mail zwh6879a 拟 蛹 螺 属 Pseudonapaeus 由 esterlund 于 1887 年 建 立 隶 属 于 腹 足 纲 Gastropoda 柄 眼 目 Stylommatophora 艾 纳 螺 科 Enidae 该 属 的 多 数 种 类 是 农 业 和 畜 牧 业 的 害 虫 常 危 害 各 种 蔬 菜 花 卉 的 幼 芽 嫩 叶 等 其 中 某 些 种 类 为 家 畜 家 禽 及 野 生 动 物 双 腔 科 吸 虫 的 中 间 宿 主 1 2 陈 德 牛 等 报 道 双 腔 吸 虫 病 在 新 疆 牧 区 广 为 流 行 大 大 影 响 家 畜 的 体 膘 和 产 毛 量 甚 至 引 起 牲 畜 死 亡 其 中 间 宿 主 为 某 些 陆 生 螺 类 包 括 艾 纳 螺 科 的 一 些 种 类 3 拟 蛹 螺 属 地 理 分 布 较 窄 主 要 分 布 于 中 亚 以 及 印 度 半 岛 西 北 部 现 记 载 有40 余 种 4 我 国 对 该 属 的 研 究 相 对 不 足 到 目 前 为 止 仅 报 道 一 种 即 钻 拟 蛹 螺 P miser Martens 1874 该 种 在 国 外 分 布 于 塔 吉 克 斯 坦 哈 萨 克 斯 坦 吉 尔 吉 斯 斯 坦 俄 罗 斯 土 耳 其 等 地 区 在 我 国 仅 在 新 疆 阿 勒 泰 木 垒 库 尔 勒 乌 什 阿 克 苏 及 天 山 一 带 农 田 和 牧 区 有 分 布 5