兰州百合组培快繁体系的构建.pdf

浙江农业学报Acta Agriculturae Zhejiangensis 6 z ny b cn 柯义强 郭鹏辉 马洪鑫 等 兰州百合组培快繁体系的构建 J 浙江农业学报 6 DO 6 issn 6 收稿日期 基金项目 甘肃省国际科技合作项目 YF W 66 科技部援助项目 Y 长江学者和创新团队发展计划 创新团队 RT R 西北民族大学本科生创新项目 Y 甘肃省科技计划 JR R 6 西北民族大学中央高校基本科研业务费资金 西北民族大学中央高校基本科研业务费专项资金资助研究生项目 Y m 6 作者简介 柯义强 男 宁夏固原人 硕士研究生 研究方向为食品质量安全与控制 m i 6 6 qq com 通信作者 高丹丹 m i g od n 6 com 兰州百合组培快繁体系的构建 柯义强 郭鹏辉 马洪鑫 杨许花 高丹丹 刘湘君 马忠仁 丁功涛 西北民族大学生命科学与工程学院 甘肃兰州 西北民族大学生物医学研究中心 甘肃兰州 摘 要 以兰州百合新鲜鳞茎为外植体 选择 S和 S培养基为基本培养基 采用正交设计研究不同消 毒剂组合对外植体存活率 不同植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导率和发芽率的影响 并用响应面法优化 不同激素组合对生根率的影响 结果表明 最佳消毒剂组合为 乙醇消毒 s 次氯酸钠溶液浸 泡 min 外植体成活率可达 6 愈伤组织诱导最佳培养基配方为 S mg N mg 6 B 诱导率可达 6 促进发芽的最佳培养基配方为 S mg N mg 6 B 发芽率可达 促进生根的最佳培养基配方为 S mg N mg 6 B mg 活性炭 生根率可达 本研究建立的组培快繁体系可用于兰州百合的快速大量繁殖 可为兰州百 合组培苗的工厂化生产提供参考 关键词 兰州百合 快繁体系 植物组培 响应面 中图分类号 S6 Q 文献标志码 文章编号 6 Rapid propagation system establishment of Lanzhou lily Yiqi ng GUO Peng ui ong in Y NG Xu u G O D nd n U Xi ng un Z ong en D NG Gong o College of Life Science and Engineering Northwest Minzu University Lanzhou 730124 China Biomedical Research Center Northwest Minzu University Lanzhou 730030 China Abstract To so ve e s o ge o nz ou i y seed ings mic o o g ion sys em o m ss oduc ion o nz ou i y seed ings s discussed in is s udy F es bu bs o nz ou i y e e used s e ini i n m e i nd S nd S medium e e used s e b sic medium T e o ogon design s used o s udy e e ec s o di e en disin ec n s on su viv e o e n s nd di e en n g o egu o s on c us nd c us e ed s oo s induc ion T e es onse su ce me od so s used o eve e e ec s o di e en o mones combin ions on oo ing T e esu s e e s o o s T e bes disin ec n combin ion s co o disin ec ion o s sodi um y oc o i e so u ion o min T e su viv e o e n s 6 T e bes medium o mu ion o c us induc ion s S mg N mg 6 B nd e induc ion e cou d e c 6 T e bes medium o mu o omo e c us e ed s oo s induc ion s S mg N mg 6 B nd e induc ion e cou d e c T e bes medium o mu o oo ing s S mg N mg 6 B mg c iv ed c bon e oo ing e cou d e c Key words nz ou i y id o g ion sys em n issue cu u e es onse su ce me od 兰州百合属球根作物 为多年生单子叶草本 植物 是全国唯一能够食用的甜百合 兰州百 合色泽洁白如玉 味道甜美 个头大 纤维含量 低 富含秋水仙碱 矿物质 微量元素和氨基 酸等多种营养成分 具有清热解毒 润肺美容 止 咳化痰 止痛止血 抗癌和增强人体免疫力等作 用 近年来 随着其市场需求和种植面积增 加 兰州百合相关产品的加工也初具规模 但由 于传统育种存在耗时长 耗费劳动力 受限当地 的气候条件和地理位置等缺点 使得其不能在短 时间内大批量生产 这已成为制约兰州百合相关 产业持续发展的瓶颈 与传统繁殖方法相比 植物组织培养技术可以突破外界环境与传统繁 殖难生根 年龄效应等限制因素 能够保持 品种的优良特性 缩短育种周期 降低生产成本 提高成活率 满足农业生产中大批量 高标准的 种苗生产要求 本研究以兰州百合为研究对象 研究基础培 养基 不同消毒剂与消毒时间 增殖与生根阶段 激素种类和浓度对兰州百合组培快繁体系建立 的影响 探索最适合兰州百合的消毒方法 以及 愈伤组织诱导 发芽 生根的最佳激素配比 以期 为兰州百合组培苗的工厂化发展提供参考 材料与方法 材料 市售兰州百合 购于兰州市城关区榆中街 市场 方法 培养基 基本培养基 S和 S培养基 根据需 要添加不同种类植物生长调节剂 其中 S培养 基中蔗糖为 g S培养基中蔗糖为 g 种培养基中各添加琼脂 g 为 6 培养基在 灭菌 min备用 外植体消毒 取兰州百合新鲜外植体自来水流水冲洗 min 再加入洗涤剂冲洗 min 将外植体切成 cm cm的小块 置于超净工作台中 采 用 正交试验设计 试验因子与测试水平见 表 研究 种不同消毒剂 乙醇 次氯酸钠 溶液 有效氯浓度 gC 溶液 相互 组合处理对外植体存活率的影响 所有组合处 理过的外植体均接种于含 S培养基的三角瓶 中 每个组合 瓶 每瓶外植体 个 d转接 转接 次 于 d后统计外植体存活率 成活率 存活外植体总数接种外植体总数 愈伤组织诱导与丛芽发生 取存活的外植体分别置于添加不同浓度梯 度N 6 B 和 D的 S培养基上 室温下 培养 试验采用 正交试验设计 试验因子 与测试水平见表 优化激素添加种类和水平 以不加任何激素的 S培养基为对照组 试验共 设置 个组合 每个组合 瓶 每瓶外植体 个 于 d后统计愈伤组织诱导率和发芽率 诱导率 愈伤组织诱导数接种总数 不定芽生根 将高 cm 具有 片叶的不定芽切 下 分别接种到含有不同浓度梯度的N 6 B 和活性炭的 S培养基上 室温培养 采用响 应面试验设计 试验因子与测试水平见表 以 生根率为指标 优化植物生长调节剂添加种类和 表1 外植体灭菌的因素与水平 Table 1 F c o s nd eve s o e n s e i iz ion 水平 eve s 因素F c o s A 乙醇 e no s B 次氯酸钠 N C O min C 氯化汞 gC min 表2 愈伤组织诱导与丛芽发生影响因子和水平 Table 2 F c o s nd eve s o c us induc ion nd c us e ed s oo s induc ion mg 水平 eve s 因素F c o s A 萘乙酸 N B 6 苄氨基嘌呤 6 B C 二氯苯氧乙酸 D 柯义强 等 兰州百合组培快繁体系的构建 表3 不定芽生根的影响因子与水平 Table 3 F c o s nd eve s o oo ing mg 水平 eve s 因素F c o s A 萘乙酸 N B 6 苄氨基腺嘌呤 6 B C 活性炭 c iv ed c bon 添加量 以不含任何激素的 S培养基为对 照组 试验共设 个组合 每个组合 瓶 每 瓶 个外植体 于 d后统计生根率 生根率 生根数接种总数 数据分析 采用 ce 进行数据整理 SPSS 进行方差分析 Design e 6 进行响 应面处理 结果与分析 外植体灭菌 如表 和表 所示 个因素对外植体存活 率影响大小依次为 乙醇 次氯酸钠 gC 对照组R值大于 gC 小于 乙醇和 次氯酸钠 说明 乙醇和次氯酸钠对外植体存 活率影响显著 表6显著性分析也表明 乙醇和次氯酸钠在兰州百合外植体的灭菌 保 证外植体存活方面具有极显著影响 P 结果 表明 采用 乙醇和次氯酸钠溶液消毒外植 体是防治污染 保证外植体存活的关键因素 通过以上分析可以看出 防止外植体污染 提高 存活率的最佳组合为 B 即 乙醇灭菌 s 次氯酸钠溶液浸泡 min 外植体存活率可 达 6 表4 外植体灭菌存活率正交试验设计方案与结果 Table 4 O ogon e e imen design nd esu o e n s e i iz ion su viv e 培养基 edium 试验设计方案 e imen design A B C D 存活率 Su viv e 6 6 6 6 6 6 表5 极差分析结果 Table 5 Resu o nge n ysis 因素 F c o s k k k R 最优水平 O im eve A 乙醇 6 66 no B 次氯酸钠6 6 6 6 N C O C 氯化汞 gC 6 6 6 66 D 对照Con o 6 6 植物生长调节剂对愈伤组织诱导与丛芽发 生的影响 表 为愈伤组织诱导与丛芽发生正交试验 结果 由表 的R值可以看出 N 6 和 6 B 为外植体诱导愈伤组织的最主要影 响因子 其次是 D 个因素的极差值 都大于对照组 由k值可以看出 因素A N 的最优水平为A 因素B 6 B 的最优 水平为B 方差分析 表 表明N 和6 B 对诱导兰州百合外植体愈伤组织分化有极显著 影响 P 同时N 和6 B 的平方和远大于 D 且大 于对照组 说明诱导外植体愈伤组织分化的最佳 表6 外植体灭菌存活率方差分析结果 Table 6 i nce n ysis esu s o e n s e i iz ion su viv e 变异来源 Sou ce 平方和 Sum o squ e D 均方 e n squ e F显著性 Signi ic nce 乙醇 C C O 次氯酸钠N C O 6 gC 6 6 对照Con o 6 R D 自由度 表示在 水平上差异显著 下同 D Deg ee o eedom indic ed e signi ic n di e ence eve T e s me s be o 浙江农业学报 第 卷 第6期 激素组合为A B 所以愈伤组织诱导的最佳培养 基配方为 S mg N mg 6 B 愈伤组织诱导率最高达 6 由表 中k值可以看出 D对丛芽发生 的促进作用较小 N 和6 B 是主要的影响因 子 个因素对丛芽发生的影响大小依次为N 6 B D 方差分析 表 显示 N 和 6 B 对诱导外植体发芽方面有极显著影响 P 因此 与 诱导外植体愈伤组织分化的最佳激素组合一样 诱导愈伤组织发芽的最佳激素配比也是 B 最 佳培养基配方为 S mg N mg 6 B 发芽率可达 植物生长调节剂对不定芽生根的影响 多元二次方程模型的建立与检验 选择 个对生根影响显著的因素 N 6 B 和活性炭 进行兰州百合不定芽诱导响应面 分析试验 根据Bo Bekn en中心组合原理设计 表7 愈伤组织诱导与丛芽发生正交试验设计方案与结果 Table 7 O ogon e e imen design nd esu o c us nd c us e ed s oo s induc ion 序号 No 试验设计方案 e imen design A B C D 愈伤组织诱导率 R e o c us induc ion 丛芽发生率 R e o c us e ed s oo s induc ion 6 6 6 6 6 6 6 6 6 6 66 6 表8 极差分析结果 Table 8 Resu o nge n ysis 因素 F c o s 愈伤组织诱导率R e o c us induc ion k k k R 最优水平 O im eve 丛芽发生率R e o c us e ed s oo s induc ion k k k R 最优水平 O im eve A N 6 66 6 6 6 B 6 B 6 6 6 C D 6 6 6 D 对照Con o 6 表9 愈伤组织诱导率方差分析结果 Table 9 n ysis o v i nce o c us induc ion e 变异来源 Sou ce 平方和 Sum o squ e D 均方 e n squ e F显著性 Signi ic nce A N 6 B 6 B 6 6 C D 6 误差 o 6 表10 丛芽发生率方差分析结果 Table 10 n ysis o v i nce o c us e ed s oo s induc ion e 变异来源 Sou ce 平方和 Sum o squ e D 均方 e n squ e F显著性 Signi ic nce A N 6 B 6 B 6 C D 6 误差 o 6 柯义强 等 兰州百合组培快繁体系的构建 了 组试验 包括 组重复试验 结果如表 所示 利用Design e 6 软件对表 中的试验数据进行多元回归拟合 得到生根率 Y 与植物生长调节剂N A 6 B B 和活 性炭 C 的实际值全变量二次多元回归方程为 Y B C A B C 由表 可以看出 本模型所选用的二次多 项模型具有显著性 P 说明该试验方法 是可行的 本模型的二次方程能够模拟真实 因素 水平的试验结果 其决定系数R R d 说明二次多项模型可解释 的响 应值变化 仅有总模型的 不能用该二次多 项式解释 表明此模型拟合度好 解释本试验方 法是可靠的 适合用于兰州百合的生根优化 由表 可以看出 模型所选用的二次多项 式模型在 水平内极显著 P 表明该 试验方法是可行的 交互项BC在 水平内显 著 P 表明6 B 和活性炭两因素交互作 用对兰州百合外植体生根有显著的影响 A 和 B 都在 水平内极显著 P 说明活性炭对兰州百 合生根影响较小 响应面分析和优化 响应曲面图可直观反应出各因素之间交互 作用的强弱 响应曲面坡度越陡峭 说明各因素 间的交互作用越显著 响应曲面越平缓 说明各 因素的交互作用越弱 图 为6 B 和N 之间的交互作用 当6 B 作用浓度一定时 随着 N 浓度的增加 生根率先增加后减小 响应曲 面显著 有明显峰值 图 B为6 B 和活性炭之 间的交互作用 当6 B 浓度一定时 随着活性炭 表11 Bo Be nken试验设计与结果 Table 11 Bo Be nken design nd e e e imen esu 培养基 edium 植物激素P n o mone A N mg B 6 B mg C 活性炭 c iv ed c bon mg 生根率 Roo ing e C C C C 6 C 6 6 6 C6 C 6 6 C C 6 6 C 6 C C C C 6 C C 6 6 C 表12 二次多项模型方差分析结果 Table 12 i nce n ysis o e i ed qu d ic o ynomi mode 方差来源 Sou ce 平方和 Sum o squ e D 均方 e n squ e F显著性 Signi ic nce 模型 ode 66 失拟项 ck o i 6 纯误差Pu e o 总和Co To 66 66 6 R R d 浙江农业学报 第 卷 第6期 表13 响应面回归方程系数显著性检验结果 T b e 13 Reg ession coe icien s nd ei signi ic nce o e qu d ic mode 方差来源 Sou ces o v i nce 平方和 Sum o squ e D 均方 e n squ e F P显著性 Signi ic nce 模型 ode 66 A 6 6 6 B C 6 6 AB 6 AC 6 6 BC A 6 66 6 66 6 B C 6 6 6 表示在 水平上差异显著 表示在 水平上差异显著 indic ed e signi ic n di e ence eve indic ed e signi ic n di e ence eve 图1 各因素响应面 D图 Fig 1 D es onse su ce o e c c o 浓度的增加 生根率先增加后减小 过高的活性 炭浓度会抑制生根率 图 C为N 和活性炭之 间的交互作用 生根率随着两者浓度的增加先升 高后降低 有明显的最大值 模型验证试验 Design e 6 软件分析结果显 示 各因素的最优值为 N A mg 6 B B mg 活性炭 C mg 理论生根率为 但实际操作中C 培养基的生根率达 超过预测值 说明用响 应面法优化兰州百合外植体生根条件是可行的 优化后的兰州百合组培过程 兰州百合组培主要分为外植体灭菌 愈伤组 织诱导 发芽和生根 部分 图 是采用本研究 优化的最佳消毒方法和培养基进行兰州百合组 培的结果 其中 图 中外植体经 乙醇消 毒 s 次氯酸钠溶液浸泡 min 未发生污 染 图 B和图 C为最佳培养基 S mg N mg 6 B 中兰州百合外植体的 愈伤组织诱导和发芽情况 图 D为最佳培养基 S mg N mg 6 B mg 活性炭中兰州百合的生根情况 结论与讨论 本试验中 不对外植体做任何消毒处理的对 照组存活率几乎为 没有样品产生愈伤组织 d内无外植体存活 但经过消毒剂处理的样品 柯义强 等 兰州百合组培快繁体系的构建 消毒后的外植体 B 愈伤组织诱导 C 丛芽发生 D 生根诱导 S e i ized e n s B C us induc ion C C us e ed s oo s induc ion D Roo ing induc ion 图2 兰州百合组培过程 Fig 2 Tissue cu u e o nz ou i y 存活率最高可达 6 这与梁小敏等 的研 究结果吻合 说明消毒在组培试验中是控制植物 组培死亡率的关键 不同消毒剂组合对外植体 存活率影响不一 常用的消毒剂有乙醇 次氯 酸钠溶液 过氧化氢 gC 溶液等 本研 究使用了 种消毒剂相互组合 通过与对照组比 较 确定外植体消毒的主要影响因素为乙醇和次 氯酸钠溶液 次要影响因素是 gC 溶液 有报 道指出 最适合垂花百合外植体的消毒剂组合是 乙醇处理 s gC 溶液浸泡 min 周非 研究发现 药百合的最佳消毒剂 为 乙醇 本研究结果与此一致 但本研究中 乙醇浓度为 另一消毒剂为消毒效果更强的 次氯酸钠溶液 推测可能是本试验在冬季进行 取材不是植物生长的最佳季节 相较于 gC 溶 液 次氯酸钠在溶液中释放出的氯离子可以更有 效的杀死菌体 从而提高外植体存活率 百合植物组织培养过程中较常用的植物生 长调节剂有N 6 B 和 D等 本研究 发现 在愈伤组织诱导和不定芽分化的试验中 N 和6 B 是显著影响因子 D对愈伤组 织诱导和不定芽分化影响较小 这与前人研究结 果一致 极低浓度的植物生长调节剂就能够对 外植体生长起明显的促进作用 有研究发 现 在培养基中添加 mg 的N 对百合 愈伤组织诱导和发芽都有明显的促进作用 本试验得出的结果与此一致 但柳玉晶等 发 现 最适合东方百合的N 质量体积分数为 mg 这与本试验的结果相差较大 分析可能 原因为不同品种百合所适用的植物生长调节剂 浓度略有不同 也可能是因为本试验是在冬季进 行的 外植体尚处在休眠期 需要提高N 的浓 度来促进愈伤组织诱导和不定芽分化 研究发 现 普通的植物生长调节剂同样对组培苗根的发 育有促进作用 本研究在常规植物生长调节 剂的基础上加入活性炭 并用响应面分析的方法 探究其对外植体生根的影响 结果表明 适宜浓 度的活性炭可显著提高外植体的生根率 这是因 为活性炭在提供暗环境的同时可以有效吸附培 养基中的抑制物 这与潘得林等 的研究结果 6 浙江农业学报 第 卷 第6期 一致 但是当浓度不合适时 反而会抑制生根 率 6 本研究中也遇到了类似问题 例如表 中的C 组合 当活性炭浓度最大时生根率仅有 6 C 培养基中生根率仅为 可能 是活性炭在吸附培养基中抑制物的同时 也会吸 附培养基中的植物生长调节剂 导致根系不能吸 收足够的营养成分 从而降低生根率 活性炭对 生根培养的具体作用机理 有待今后进一步 研究 综上 获得成活率高的组培苗可以从以下 方面着手 第一 尽量选取当季新鲜的外植体 外 植体消毒可选用不同消毒剂组合消毒 但时间不 可过长 第二 后续愈伤组织诱导 发芽和生根 的过程中 组培苗对激素的反应较灵敏 选择合 适的激素浓度配比会显著提高成活率 参考文献 References 丁书荣 兰州百合系列研究 J 甘肃农业 D NG S R nz ou i y se ies ese c J Gansu Agricul ture in C inese 吴国锋 汪玉明 焦学荣 等 兰州百合粉的研制 J 食 品研究与开发 WU G F W NG Y J O X R e S udy in Lilium da vidii v unicolor S isb o de J Food Research and De velopment in C inese i ng is bs c 马君义 赵小亮 张继 等 兰州百合的研究进展 J 塔 里木大学学报 6 J Y Z O X Z NG J e P og ess in ese c o Lilium davidii v unicolor J Journal of Tarim University of Agricultural Reclamation 6 in C inese i ng is bs c 田世龙 袁丽卿 甘肃省几种主要蔬菜不同品种营养成分 分析 J 甘肃农业科技 T N S YU N Q n ysis o nu i ion com onen s o seve m in vege b e v ie ies in G nsu P ovince J Gansu Agricultural Science and Teshnology in C inese 孙凤茹 李红军 兰州百合品牌战略包装研究 J 中国 包装工业 6 SUN F R J Rese c on nz ou i y b nd s egic ck ging J China Packaging Industry 6 in C inese 6 刘静 兰州百合快速繁殖研究 J 南方农业学报 U J O imiz ion o ig y e icien n egene ion sys em o Lilium davidii v unicolor oog co on J Jour nal of Southern Agriculture in C inese i ng is bs c 郝雪 植物细胞全能性和组织培养方法 的教学设计 J 中学生物学 O X Te c ing design o n ce o i o ency nd issue cu u e me od J Middle School Biology in C inese 曾洪学 张小华 植物细胞全能性理论在中国的研究与实 践 J 分子植物育种 6 Z NG X Z NG X Rese c nd ic ion o n ce o i o ency in C in J Molecular Plant Breeding 6 in C inese i ng is bs c 谷瑞升 蒋湘宁 郭仲琛 植物离体培养中器官发生调控 机制的研究进展 J 植物学通报 GU R S J NG X N GUO Z C dv nces in e s udies on e mec nism o n o g nogenesis in vitro J Chinese Bulletin of Botany in C inese i ng is bs c 林小苹 赖钟雄 黄浅 光质对植物离体培养的影响 J 亚热带农业研究 N X P Z X U NG Q ec s o ig qu i y on n issue cu u e J Subtropical Agriculture Research in C inese i ng is bs c 贾敬芬 陈刚 郝建国 葱属植物离体培养和遗传操作 J 农业生物技术学报 J J F C N G O J G In vitro cu u e nd gene ic m ni u ion in Allium s ecies J Journal of Agricultural Biotechnology in C inese i ng is bs c 王林 甜瓜未受精胚珠离体培养研究 D 武汉 华中农 业大学 W NG In vitro cu u e o un e i ized ovu es o muskme on D Wu n u z ong g icu u Unive si y in C inese i ng is bs c 梁小敏 罗赣丰 亳州芍药组织培养的关键技术 J 北 方园艺 6 NG X UO G F ey ec no ogy o issue cu u e o Boz ou i e eony oo seed ings J Northern Horticulture 6 in C inese i ng is bs c 王刚 杜捷 李桂英 等 兰州百合和野百合组织培养及 快速繁殖研究 J 西北师范大学学报 自然科学版 6 W NG G DU J G Y e S udy on issue cu u e nd c on o g ion o Lilium davidii v unicolor oog Co on nd Lilium brownii F B o n e ie ez J Journal of Northwest Normal University Natural Science Edition 6 in C inese i ng is bs c 柯义强 等 兰州百合组培快繁体系的构建 王震 西葫芦花药离体培养初步探究 D 郑州 河南农 业大学 6 W NG Z P im y s udy in vitro cu u e o summe squ s D Z engz ou en n g icu u Unive si y 6 in C inese i ng is bs c 6 杨克相 唐容 吕建伟 等 花生组织培养研究进展 J 农技服务 6 Y NG X T NG R YU J W e Rese c og ess o e nu issue cu u e J Agricultural Technology Services 6 in C inese 吕爽 王超 结球甘蓝离体培养的研究进展 J 北方园 艺 6 YU S W NG C dv nces o c bb ge in vitro cu u e J Northern Horticulture 6 in C inese 雷家军 徐莹 垂花百合鳞片离体培养研究 J 东北农 业大学学报 6 J J XU Y S udy on bu b sc e cu u e in vitro o Lilium cernuum om J Journal of Northeast Agricultural Univer sity 6 in C inese i ng is b s c 周非 药百合组织培养条件的优化 D 合肥 安徽大 学 Z OU F O imiz ion o condi ions o id o g ion o Lilium speciosum unb G o iosoides b ke D e ei n ui Unive si y in C inese i ng is b s c 刘进平 吴繁花 木薯外植体表面消毒和启动培养的研 究 J 广西热带农业 U J P WU F S udy on su ce disin ec ion nd s u cu u e o c ss v e n s J Guangxi Tropical Agricul ture in C inese 林海 张芳 郝慧敏 不同激素水平对百合愈伤组织诱 导研究 J 北方园艺 N Z NG F O S udy on e induc ion con di ions o c us o Lilium candidum J Northern Horticul ture in C inese i ng is b s c 张璐 潘远智 刘柿良 等 宜昌百合胚性愈伤组织诱导 及植株再生体系的研究 J 植物研究 6 Z NG P N Y Z U S e mb yonic c us in duc ion nd n egene ion o Lilium leucanthum J Bulletin of Botanical Research 6 in C inese i ng is bs c 柳玉晶 龚束芳 樊金萍 等 百合愈伤组织的诱导及植 株再生 J 东北农业大学学报 U Y J GONG S F F N J P e mb yoidgenesis nd n egene ion o Lilium s J Journal of Northeast Ag ricultural University in C inese i ng is bs c 陈勤 王斐 琚淑明 杉科植物组培生根机理研究综述 J 林业实用技术 C N Q W NG F JU S Revie on e mec nism o issue cu u e nd oo ing o T odi ce e J Practical For estry Technology in C inese 潘德林 贾展慧 黄胜男 等 红阳 猕猴桃外植体不定 芽诱导及生根培养激素配方筛选 J 中国南方果树 P N D J Z U NG S N e Se ec ion o o mone o mu ion o inducing dven i ious buds nd oo s om ongy ng ki i ui e n J South China Fruits in C inese 6 刘雅楠 兰州百合不同外植体培养及其优化研究 D 兰州 甘肃农业大学 U Y N T e cu u e o e Lilium davidii v Unico o e n s D nz ou G nsu g icu u Unive si y in C inese i ng is bs c 付艳华 卢君 杨慧莹 等 百合组培苗试管外生根技术 研究 J 浙江农业科学 FU Y U J Y NG Y e S udy on in vitro oo ing ec no ogy o i y issue cu u e seed ings J Journal of Zhe jiang Agricultural Sciences in C i nese 责任编辑 侯春晓 浙江农业学报 第 卷 第6期