海城地区温室蔬菜灰霉病菌对6种药剂的抗药性检测

辽宁农业科学 2019( 1) : 42 44Liaoning Agricultural Sciences文章编号 : 1002 1728( 2019) 01 0042 03 doi: 103969/j issn1002 1728201901010海城地区温室蔬菜灰霉病菌对6种药剂的抗药性检测*赵 杨 ， 孙柏欣 ， 陈 乐 ， 苗则彦( 辽宁省农业科学院植物保护研究所 /辽宁省农作物有害生物控制重点实验室 ， 辽宁 沈阳 110161)摘要 : 采用菌丝生长速率法 ， 对辽宁省海城地区温室蔬菜灰霉病菌进行 6 种药剂抗药性检测 。结果表明 ， 灰霉病菌对嘧霉胺表现高抗 ， 建议生产上暂停使用 ; 对腐霉利 、啶酰菌胺 、咯菌腈的 EC50最高值及平均值较已报道数值均有提高 ， 应加强抗药检测及治理 。对氟啶胺和氟吡菌酰胺的 EC50范围分别为 0 013 0 066 g/ml 和0027 5434 g/ml， 平均 EC50分别为 0035 g/ml 和 0 963 g/ml， 对氟啶胺和氟吡菌酰胺均表现敏感 ， 可做为主要防治药剂科学使用 。关键词 : 灰霉病菌 ( Botrytis cinerea) ; 抗药性检测 ; 毒力测定中图分类号 : S4364121+3 文献标识码 : B由灰葡萄孢 ( Botrytis cinerea Pers ) 引起的灰霉病 ， 是温室蔬菜的重要病害之一 ， 病原菌寄主多达 230 余种 ， 可侵染茎 、叶 、花和果实 ， 为害十分严重 ， 生产上主要以化学药剂防治为主 。由于该病原菌具有高度异质性 ， 变异速度快 ， 因此 ， 极易产生抗药性 。辽宁沈阳 、大连 、鞍山等地区菌株对嘧霉胺表现高抗 1。研究发现 ， 2017 年辽宁省内番茄灰霉病菌对腐霉利抗药性呈加重趋势 ， 中抗菌株占主体地位 ， 且在部分地区发现高抗菌株 2。武汉地区出现抗啶酰菌胺菌株 ， 山东地区出现中抗啶酰菌胺菌株 ， 但辽宁菌株对啶酰菌胺表现敏感 3 5。山东地区已出现低抗咯菌腈菌株 ， 辽宁地区菌株对咯菌腈表现敏感 6 7。目前 ， 氟啶胺是国际上防治灰霉病的主要药剂之一 ，中国主要登记根肿病 、晚疫病及早疫病等病害防治 ， 尚未在灰霉病上登记 。山东省 、河北省和福建省已建立灰葡萄孢对氟啶胺的敏感基线 ， 且相继报道氟啶胺与嘧霉胺 、多菌灵 、异菌脲 、乙霉威 、啶酰菌胺 、腐霉利 、啶氧菌酯之间不存在交互抗性 8 9。2017 年上海地区的 20%番茄灰霉病菌菌株对氟吡菌酰胺表现高抗 10。辽宁省海城地区温室蔬菜种植时间长 ， 面积逐年增加 ， 一些药剂常年使用 ， 防效逐年下降 ， 因此 ， 抗药性检测十分必要 。明确灰霉病菌对几种药剂的抗性水平 ， 为更有效地指导田间灰霉病防治提供理论依据 。1 材料与方法1. 1 试验材料1. 1. 1 供试菌株2017 2018 年从辽宁海城地区温香镇 、望台镇 、耿庄镇 、腾鳌镇采集温室蔬菜灰霉病病样 ， 分离纯化后于 4 低温保存备用 。1. 1. 2 供试药剂及培养基982%嘧霉胺原药 ， 昆山瑞泽农药股份有限公司 ;93%腐霉利原药 ， 连云港优士化学品有限公司 ; 97% 咯菌腈原药 ， 山东奥得利化工有限公司 ; 98% 氟啶胺原药 ， 山东申达作物科技有限公司 ; 98% 啶酰菌胺原药 ， 河北美星化工有限公司 ; 417% 氟吡菌酰胺德国拜耳作物科学公司 。除嘧霉胺试验用 L-asp 培养基外 ， 其他药剂试验均用PDA 培养基 。1. 2 试验方法1. 2. 1 室内毒力测定方法采用菌丝生长速率法 。将原药溶于少量丙酮 ， 用无菌水配成浓度为 100 g/ml 的母液 ， 再用无菌水稀释成系列浓度的药液 ， 制备药剂质量浓度分别为嘧霉胺 ( 3 500、7000、14 000、28 000、56 000、112 000 g/ml) ; 腐霉利( 00064、0032、0 160、0 800、4 000、20 000 g/ml) ; 啶酰菌胺 ( 1 600、2 400、3 600、5 400、8 100、12 150 g/ml) ; 咯菌腈 ( 0 080、0 208、0 541、1 406、3 656、9 505g/ml) ; 氟啶胺 : ( 0 011、0 019、0 034、0062、0 111 和* 收稿日期 : 2018 12 21基金项目 : 辽宁省村级综合服务平台建设项目作者简介 : 赵杨 ( 1983 ) 男 ， 辽宁省沈阳人 ， 助理研究员 ， 主要从事蔬菜病害防治研究 。E-mail: 15940065218126 com通讯作者 : 苗则彦 ( 1968 ) ， 女 ， 研究员 ， 主要从事蔬菜病害研究 。E-mail: mzyln aliyun com第 1 期 赵 杨等 : 海城地区温室蔬菜灰霉病菌对 6 种药剂的抗药性检测0200 g/ml) ; 氟吡菌酰胺 ( 0 012、0 047、0 188、0 750、3 000 和 12 000 g/ml) 的含药平板 。将病原菌分别在PDA 平板上培养 3 d 后 ， 沿菌落边缘打取直径为 5 mm 的菌饼 ， 菌丝面朝下接种于配制的含药平板中央 ， 每皿 1 个菌饼 ， 以不加药的平板为对照 ， 每处理 4 次重复 ， 25 培养 3 d， 用十字交叉法测量菌落直径 ， 根据各处理的平均菌落直径净增长值 ， 利用 DPS 软件求出各种药剂对各菌株的毒力回归方程和 EC50。1. 2. 2 抗性水平测定嘧霉胺敏感性基线为 0 0911 g/ml 11; 腐霉利敏感性基线为 ( 031 0 08) g/ml 12; 啶酰菌胺敏感性基线为 ( 1 9731 1 0011) g/ml 5; 咯菌腈敏感性基线为( 00073 0 0454) g/ml 7; 氟啶胺敏感性基线为( 00221 0 0098) g/ml 9; 氟吡菌酰胺敏感性基线为( 194 155) g/ml 13。抗性水平 = 供试菌株 EC50值 /敏感性基线抗性水平 5 为敏感菌株 ; 5 抗性水平 10 为低抗菌株 ; 10 抗性水平 40 为中抗菌株 ; 抗性水平 40 为高抗菌株 1。2 结果与分析灰霉病菌对嘧霉胺的 EC50范围为 10 044 79 398g/ml， 平均 EC50为 31 523 g/ml， 全部样品对嘧霉胺均表现高抗 。2014 年鞍山地区 ( 海城 、台安 、岫岩 ) 番茄灰霉病菌对嘧霉胺的 EC50值为 25 481 39 613 g/ml、平均EC50值为 33 057 g/ml， 目前 ， 样品的最高 EC50值提高200倍 ， EC50平均值提高 0 95 倍 1。4 个样品对腐霉利抗药性表现敏感其余为低抗和中抗 ， EC50范围为 0305 12208 g/ml， 平均 EC50为 4 180 g/ml。2014 年鞍山地区番茄灰霉病菌对腐霉利的 EC50值为 1 237 3 89 g/ml、EC50平均值为 2903 g/ml， 目前 ， 样品的最高 EC50值提高 3 138 倍 ， EC50平均值提高 1 44 倍 1。6 个样品对啶酰菌胺表现为低抗其余为敏感 ， EC50范围为 5 227 13353 g/ml， 平均 EC50为 8 87 g/ml， 2015 年鞍山地区番茄灰霉病菌对啶酰菌胺的 EC50值为 12785 3 0818g/ml， EC50平均值为 1 9305 g/ml， 目前 ， 样品的最低EC50值升高 4 09 倍 ， 最高 EC50值升高 4 33 倍 ， EC50平均值升高 460 倍 5。6 个样品对咯菌腈抗药性表现敏感其余为低抗和中抗 ， EC50范围为 0 002 0 155 g/ml， 平均EC50为 0 056 g/ml， 2014 年海城地区病菌对咯菌腈的EC50值为 0 0016 0 0244 g/ml、平均 EC50值为 0 009g/ml， 未出现抗性菌株 7。近几年 ， 随着咯菌腈在海城地区的大面积使用 ， 目前样品的最高 EC50值提高 6 35倍 ， 平均值提高 622 倍 ; 病菌对氟啶胺表现敏感 ， EC50范围为 0 013 0 066 g/ml， 平均 EC50为 0 035 g/ml; 病菌对氟吡菌酰胺表现敏感 ， EC50范围为 0027 5434 g/ml， 平均 EC50为 0963 g/ml( 见表 1) 。表 1 海城地区温室灰霉病菌对药剂的敏感性编号 地点嘧霉胺 腐霉利毒力方程EC50抗性评价毒力方程EC50抗性评价1 温香镇东高村 Y = 2029 +1721x 15092 H Y = 0429 +0529x 6481 M2 温香镇东高村 Y = 1906 +1059x 63202 H Y = 0594 +1382x 2694 L3 温香镇达连村 Y = 1591 +1114 x 26782 H Y = 1425 +1588x 7897 L4 望台镇邢家村 Y = 1681 +1093x 34543 H Y = 1319 +1318x 10024 M5 望台镇邢家村 Y = 1587 +1125x 25717 H Y = 0195 +1171x 1467 S6 望台镇官草村 Y = 2031 +1338x 32987 H Y = 0314 +1319x 1729 L7 望台镇官草村 Y = 2541 +1613x 37608 H Y = 1250 +1438x 7401 M8 望台镇前望台村 Y = 1778 +1391x 18974 H Y = 0464 +1406x 2140 L9 望台镇前望台村 Y = 1260 +1210x 10997 H Y =0385 +0746x 0305 S10 望台镇道沿村 Y = 1167 +1165x 10044 H Y = 0194 +0775x 1781 L11 耿庄镇古城村 Y = 1182 +1109x 11635 H Y = 0066 +1027x 1159 S12 耿庄镇古城村 Y = 2371 +1712x 24258 H Y =0359 +0697x 0305 S13 耿庄镇北耿村 Y = 1480 +0871x 50081 H Y = 1683 +1549x 12208 M14 腾鳌镇东新村 Y = 2435 +1281x 79398 H Y = 0509 +1089x 2933 L啶酰菌胺 咯菌腈1 温香镇东高村 Y = 0549 +0765x 5227 S Y =0461 +0231x 0010 S2 温香镇东高村 Y = 0761 +0941x 6440 S Y =0417 +0362x 0070 S3 温香镇达连村 Y = 1248 +1143x 12356 L Y =0383 +0332x 0070 S4 望台镇邢家村 Y = 0763 +0944x 6425 S Y =0428 +0162x 0002 S5 望台镇邢家村 Y = 0656 +0852x 5892 S Y =0296 +0330x 0127 L6 望台镇官草村 Y = 1013 +0997x 10363 L Y =0380 +0339x 0075 S7 望台镇官草村 Y = 0757 +0903x 6880 S Y =0520 +0405x 0052 S34辽 宁 农 业 科 学 2019 年编号 地点嘧霉胺 腐霉利毒力方程EC50抗性评价毒力方程EC50抗性评价8 望台镇前望台村 Y = 1002 +0979x 10564 L Y =1176 +0655x 0016 S9 望台镇前望台村 Y = 1148 +1020x 13353 L Y =0385 +0313x 0072 S10 望台镇道沿村 Y = 0909 +0925x 9607 S Y =0360 +0171x 0008 S11 耿庄镇古城村 Y = 1035 +1035x 10000 L Y =0244 +0301x 0155 L12 耿庄镇古城村 Y = 1311 +1168x 13232 L Y =0699 +0281x 0003 S13 耿庄镇北耿村 Y = 0798 +0935x 7124 S Y =0757 +0457x 0022 S14 腾鳌镇东新村 Y = 0794 +0960x 6727 S Y =0409 +0415x 0104 S氟啶胺 氟吡菌酰胺1 温香镇东高村 Y =1648 +1266x 0050 S Y =0365 +0497x 0185 S2 温香镇东高村 Y =2112 +1393x 0031 S Y =0023 +0690x 0927 S3 温香镇达连村 Y =1844 +0980x 0013 S Y = 0876 +0839x 1272 S4 望台镇邢家村 Y =1930 +1347x 0037 S Y =0176 +0800x 0601 S5 望台镇邢家村 Y =1711 +1138x 0031 S Y =0431 +0854x 0313 S6 望台镇官草村 Y =2044 +1401x 0035 S Y =0048 +0668x 0848 S7 望台镇官草村 Y =2626 +2048x 0052 S Y =0313 +0436x 0192 S8 望台镇前望台村 Y =2349 +1464x 0025 S Y =0020 +0689x 0937 S9 望台镇前望台村 Y =2425 +2051x 0066 S Y =0051 +0941x 0883 S10 望台镇道沿村 Y =1978 +1154x 0019 S Y =0198 +0845x 0584 S11 耿庄镇古城村 Y =2476 +1823x 0044 S Y =0339 +0847x 0398 S12 耿庄镇古城村 Y =2081 +1408x 0033 S Y = 0167 +0228x 5434 S13 耿庄镇北耿村 Y =2250 +1502x 0032 S Y =0420 +0268x 0027 S14 腾鳌镇东新村 Y =2093 +1320x 0026 S Y =0022 +0400x 0878 S注 : S 敏感菌株 ; L 低抗菌株 ; M 中抗菌株 ; H 高抗菌株3 结论与讨论海城温室蔬菜灰霉病菌对嘧霉胺表现高抗药性 ， 建议在生产上暂停使用 ， 同纪明山研究结果一致 1; 海城灰霉病菌对腐霉利的抗性水平升高 ， 应加强抗药性检测和并注意药剂轮换使用 ， 延缓病菌的抗药性产生 ; 病原菌对啶酰菌胺的敏感性降低而抗性提高 ， 啶酰菌胺可在海城使用 ， 但应适时进行抗药性检测 ， 注意药剂的合理轮换 。海城地区灰霉病菌对咯菌腈的敏感性降低 ， 出现低抗和中抗菌株 ， 应引起广泛注意 ， 加强药剂的科学使用并及时进行抗药性检测 。氟啶胺对番茄灰霉病菌菌丝生长的抑制作用强于嘧霉胺 、腐霉利 、啶酰菌胺 ， 且与上述杀菌剂不存在交互抗性 ， 应进一步明确田间使用量 、田间防效 、安全性等问题 ， 为其用于灰霉病防治提供理论基础 8 9。氟吡菌酰胺近几年开始在海城推广使用 ， 以 42 8% 氟菌肟菌酯悬浮剂 ( 214%氟吡菌酰胺 +21 4% 肟菌酯 ) 为代表 ， 主要用于温室蔬菜白粉 、叶霉 、炭疽和靶斑等叶部病害防治 ， 调查发现该药剂使用地区范围广 、应用作物种类多 、使用频率高 ， 应加强抗药性检测 、密切关注抗药性产生情况 。参考文献 : 1 纪明山 ， 刘妍 ， 朱赫 ， 等 辽宁省番茄灰霉病菌对常用杀菌剂的抗药性监测与交互抗药性 J 农药 ， 2017， 56( 9) : 676 678 2 杜颖 ， 付丹妮 ， 邹益泽 ， 等 2017 年辽宁省番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性现状及机制研究 J 中国蔬菜 ， 2018( 1) :58 65 3 范飞 ， 李娜 ， 李国庆 ， 等 湖北省草莓保护地灰霉病菌的抗药性研究 C 中国植物病理学会 2016 年学术年会论文集 4 徐大同 山东地区灰霉病菌对常用杀菌剂的抗性检测及对氟菌唑和氟啶胺的敏感性 D 泰安 : 山东农业大学 ， 2015 5 Yan LIU， Zhiqiu QI， BaoYan HAN， et al Baseline Sensitivi-tYof Botrytis cinerea from Liaoning Province to Boscalid J Agricultural Science Technology， 2015， 16( 11) : 2531 2534 6 刘超 果蔬灰霉病的抗药性检测及其生防菌的分离 D 济宁 : 曲阜师范大学 ， 2014 7 王智 ， 朱赫 ， 祁之秋 ， 等 辽宁省不同地区番茄灰霉病菌对咯菌腈的敏感性植物保护 J 2016， 42( 5) : 214 216 8 陈治芳 ， 王文桥 ， 韩秀英 ， 等 灰葡萄孢 ( Botrytis cinerea)对氟啶胺的敏感基线及对不同杀菌剂的交互抗性 J 河北农业大学学报 ， 2011， 34( 3) : 33 36 9 石妞妞 ， 杜宜新 ， 阮宏椿 ， 等 福建省番茄灰霉病菌对氟啶胺敏感基线建立及与不同杀菌剂的交互抗性 J 农药学学报 ， 2016， 18( 4) : 535 539 10 武文帅 ， 胡志宏 ， 刘鹏飞 ， 等 上海地区番茄灰霉病菌对几种重要杀菌剂的抗药性检测 C 中国植物病理学会 2017年学术年会论文集 11 纪明山 ， 祁之秋 ， 赵平 ， 等 番茄灰霉病菌对嘧霉胺抗药性的试验 J 沈阳农业大学学报 ， 2002， 33( 5) : 345 347 12 宋晰 ， 肖露 ， 刘西莉 ， 等 番茄灰霉病菌对腐霉利的抗药性检测及生物学性状研究 J 农药学学报 ， 2013， 15( 4) :398 404 13 张晓柯 ， 韩絮 ， 马薇薇 ， 等 江苏省草莓灰霉病菌对氟吡菌酰胺敏感性基线的建立及抗性风险评估 J 南京农业大学学报 ， 2015， 38( 5) : 810 81544