海南地区樱桃番茄上番茄黄化曲叶病毒病鉴定与分析.pdf

现 代 农 业 科 技 2 0 2 5 年 第 3 期 植 物 保 护 植 物 营 养 海 南 地 区 樱 桃 番 茄 上 番 茄 黄 化 曲 叶 病 毒 病 鉴 定 与 分 析 严 婉 荣 吉 训 聪 王 宝 谭 诗 梦 魏 莹 赵 志 祥 海 南 省 农 业 科 学 院 植 物 保 护 研 究 所 海 南 省 农 业 科 学 院 农 产 品 质 量 安 全 与 标 准 研 究 中 心 海 南 省 植 物 病 虫 害 防 控 重 点 实 验 室 农 业 农 村 部 海 口 作 物 有 害 生 物 科 学 观 测 实 验 站 海 南 海 口 5 7 1 1 0 0 摘 要 番 茄 黄 化 曲 叶 病 毒 病 严 重 威 胁 海 南 省 樱 桃 番 茄 的 生 产 为 了 明 确 该 病 在 海 南 省 不 同 种 植 区 的 感 染 率 和 危 害 程 度 采 集 了 6 个 市 县 的 6 5 个 樱 桃 番 茄 样 本 通 过 小 R N A 深 度 测 序 共 获 得 1 5 条 与 番 茄 黄 化 曲 叶 病 毒 T Y L C V 相 关 的 序 列 明 确 了 每 个 市 县 T Y L C V 及 其 分 离 物 在 所 有 病 毒 中 的 比 例 统 计 了 不 同 分 离 物 在 不 同 地 区 出 现 的 频 次 结 果 表 明 昌 江 县 T Y L C V 及 其 分 离 物 占 总 病 毒 数 量 的 4 9 4 4 有 4 个 分 离 物 在 6 个 地 区 均 检 测 到 通 过 P C R 验 证 所 有 地 区 均 检 测 到 T Y L C V 陵 水 的 检 出 率 高 达 到 1 0 0 0 0 对 3 个 分 离 物 进 行 了 测 序 比 对 分 析 发 现 海 南 省 分 离 物 多 且 复 杂 从 地 理 关 系 上 很 难 确 定 其 来 源 及 所 属 关 系 关 键 词 樱 桃 番 茄 番 茄 黄 化 曲 叶 病 毒 小 R N A 深 度 测 序 P C R 验 证 检 出 率 海 南 地 区 D O I 1 0 3 9 6 9 j i s s n 1 0 0 7 5 7 3 9 2 0 2 5 0 3 0 1 9 开 放 科 学 资 源 服 务 标 识 码 O S I D 番 茄 黄 化 曲 叶 病 毒 t o m a t o y e l l o w l e a f c u r l v i r u s T Y L C V 属 于 双 生 病 毒 科 G e m i n i v i r i d a e 菜 豆 金 色 花 叶 病 毒 属 B e g o m o v i r u s 最 早 于 2 0 世 纪 5 0 年 代 后 期 在 阿 拉 伯 半 岛 发 现 随 后 在 世 界 范 围 内 大 面 积 暴 发 1 文 献 检 索 发 现 该 病 毒 主 要 集 中 在 1 9 9 7 2 0 0 7 年 开 始 出 现 侵 染 番 茄 的 报 道 我 国 于 2 0 0 6 年 在 上 海 首 次 检 测 到 T Y L C V 2 随 后 该 病 毒 在 全 国 范 围 大 面 积 流 行 T Y L C V 是 现 阶 段 番 茄 生 产 上 最 具 毁 灭 性 的 病 毒 3 2 0 1 9 年 汤 亚 飞 等 4 首 次 在 海 南 樱 桃 番 茄 上 检 测 到 了 T Y L C V 目 前 海 南 樱 桃 番 茄 主 要 种 植 区 均 检 测 到 该 病 毒 T Y L C V 是 一 种 单 链 闭 合 环 状 D N A s i n g e l s t r a n d e d D N A s s D N A 病 毒 在 自 然 条 件 下 只 能 由 烟 粉 虱 以 持 久 方 式 传 播 番 茄 是 T Y L C V 的 主 要 宿 主 研 究 表 明 T Y L C V 也 可 侵 染 蚕 豆 矮 牵 牛 和 桔 梗 5 该 病 毒 可 引 起 番 茄 叶 缘 黄 化 叶 片 皱 缩 卷 曲 生 长 缓 慢 节 间 变 短 早 期 染 病 影 响 开 花 结 果 后 期 染 病 影 响 产 量 和 品 质 6 T Y L C V 与 番 茄 褪 绿 病 毒 t o m a t o c h l o r o s i s v i r u s T o C V 复 合 侵 染 非 常 普 遍 两 者 具 有 协 同 作 用 复 合 侵 染 时 会 导 致 病 害 指 数 升 高 发 生 程 度 加 重 3 5 7 在 T Y L C V 的 侵 染 与 扩 散 中 研 究 者 也 分 离 鉴 定 了 不 同 地 区 的 分 离 物 国 内 分 离 物 亲 缘 关 系 较 近 且 与 伊 朗 阿 巴 代 及 阿 曼 T o m 4 8 分 离 物 亲 缘 关 系 较 远 8 9 本 文 利 用 小 R N A 深 度 测 序 技 术 和 P C R 技 术 对 海 南 地 区 樱 桃 番 茄 上 T Y L C V 进 行 鉴 定 与 分 析 明 确 该 病 毒 在 海 南 地 区 的 侵 染 和 危 害 程 度 1 材 料 与 方 法 1 1 病 样 采 集 与 保 存 2 0 2 1 2 0 2 3 年 在 陵 水 县 定 安 县 昌 江 县 澄 迈 县 文 昌 市 和 琼 海 市 采 集 樱 桃 番 茄 病 毒 病 病 样 及 正 常 叶 片 采 集 前 用 7 5 乙 醇 喷 洒 清 洗 叶 片 用 无 菌 剪 刀 直 接 将 叶 片 剪 至 无 R N A s e 的 冻 存 管 内 做 好 标 记 表 1 迅 速 置 于 干 冰 内 暂 存 置 于 8 0 冰 箱 内 待 用 1 2 樱 桃 番 茄 样 本 小 R N A 深 度 测 序 对 采 集 的 叶 片 进 行 小 R N A 深 度 测 序 根 据 采 集 的 样 本 对 相 同 地 区 样 本 进 行 混 样 设 置 未 表 现 症 状 样 本 作 为 对 照 组 3 次 重 复 提 取 样 本 总 R N A 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 分 析 R N A 降 解 程 度 以 及 是 否 有 污 染 N a n o d r o p 检 测 R N A 样 本 的 纯 度 Q u b i t 2 0 精 确 定 量 R N A 样 本 的 浓 度 A g i l e n t 2 1 0 0 生 物 分 析 器 精 确 检 测 R N A 样 本 的 完 整 性 样 品 检 测 合 格 后 使 用 S m a l l R N A S a m p l e P r e p a r a t i o n K i t s I l l u m i n a 公 司 构 建 文 库 使 用 A g i l e n t 2 1 0 0 对 文 库 的 D N A 片 段 i n s e r t s i z e 进 行 检 测 使 用 Q P C R 方 法 对 文 库 的 有 效 浓 度 进 行 准 确 定 量 在 库 检 合 格 之 后 利 用 测 序 仪 I l l u m i n a H i S e q 基 金 项 目 海 南 省 省 属 科 研 院 所 技 术 创 新 专 项 j s c x 2 0 2 0 1 3 海 南 省 重 大 科 技 计 划 项 目 Z D K J 2 0 2 1 0 0 7 第 一 作 者 严 婉 荣 1 9 8 6 女 硕 士 副 研 究 员 研 究 方 向 植 物 病 理 学 通 信 作 者 收 稿 日 期 2 0 2 4 0 6 1 1 7 2表 1 樱 桃 番 茄 病 毒 病 样 本 信 息 样 本 编 号 L S 1 L S 2 L S 3 L S 4 L S 5 L S 6 L S 7 L S 8 L S 9 L S 1 1 L S 1 0 D A 1 D A 2 D A 3 D A 4 D A 5 D A 6 D A 8 D A 9 D A 1 0 D A 7 C J 1 C J 3 C J 4 C J 6 C J 7 C J 8 C J 9 C J 1 1 C J 1 2 C J 1 3 C J 2 C J 5 C J 1 0 C M 1 C M 2 C M 4 C M 3 W C 1 W C 3 W C 2 D A 1 1 D A 1 2 D A 1 3 D A 1 4 Q H 2 Q H 3 Q H 1 L S 1 2 L S 1 4 L S 1 5 L S 1 6 L S 1 3 采 集 地 点 陵 水 县 光 坡 镇 大 补 山 陵 水 县 光 坡 镇 大 补 山 陵 水 县 光 坡 镇 大 补 山 陵 水 县 光 坡 镇 大 补 山 陵 水 县 光 坡 镇 坡 村 仔 陵 水 县 光 坡 镇 坡 村 仔 陵 水 县 椰 林 镇 鞍 马 洋 陵 水 县 椰 林 镇 鞍 马 洋 陵 水 县 椰 林 镇 鞍 马 洋 陵 水 县 椰 林 镇 联 丰 村 陵 水 县 椰 林 镇 联 丰 村 定 安 县 定 城 镇 罗 温 村 定 安 县 定 城 镇 罗 温 村 定 安 县 定 城 镇 罗 温 村 定 安 县 定 城 镇 罗 温 村 定 安 县 定 城 镇 罗 温 村 定 安 县 定 城 镇 坡 上 村 定 安 县 定 城 镇 坡 上 村 田 洋 村 定 安 县 定 城 镇 坡 上 村 田 洋 村 定 安 县 定 城 镇 坡 上 村 田 洋 村 定 安 县 定 城 镇 坡 上 村 田 洋 村 昌 江 县 十 月 田 镇 姜 园 村 昌 江 县 十 月 田 镇 姜 园 村 昌 江 县 十 月 田 镇 姜 园 村 昌 江 县 十 月 田 镇 五 丰 村 昌 江 县 十 月 田 镇 五 丰 村 昌 江 县 十 月 田 镇 南 岭 村 昌 江 县 十 月 田 镇 南 岭 村 昌 江 县 红 林 农 场 昌 江 县 红 林 农 场 昌 江 县 红 林 农 场 昌 江 县 十 月 田 镇 姜 园 村 昌 江 县 十 月 田 镇 姜 园 村 昌 江 县 红 林 农 场 澄 迈 县 永 发 镇 农 科 院 基 地 澄 迈 县 永 发 镇 农 科 院 基 地 澄 迈 县 永 发 镇 金 安 农 场 澄 迈 县 永 发 镇 农 科 院 基 地 文 昌 县 东 阁 镇 李 六 村 文 昌 县 东 阁 镇 李 六 村 文 昌 县 东 阁 镇 李 六 村 定 安 县 定 城 镇 高 龙 村 定 安 县 定 城 镇 高 龙 村 定 安 县 定 城 镇 高 龙 村 定 安 县 定 城 镇 高 龙 村 琼 海 市 嘉 积 镇 龙 寿 洋 琼 海 市 嘉 积 镇 龙 寿 洋 琼 海 市 嘉 积 镇 下 岭 村 陵 水 县 光 坡 镇 武 山 村 陵 水 县 光 坡 镇 武 山 村 陵 水 县 光 坡 镇 武 山 村 陵 水 县 光 坡 镇 武 山 村 陵 水 县 光 坡 镇 武 山 村 生 长 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 后 期 中 期 中 期 中 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 后 期 地 理 坐 标 东 经 1 1 0 0 6 1 1 0 0 6 1 1 0 0 7 1 1 0 0 6 1 1 0 0 7 1 1 0 0 7 1 1 0 0 4 1 1 0 0 4 1 1 0 0 5 1 1 0 0 5 1 1 0 0 5 1 1 0 2 8 1 1 0 2 8 1 1 0 2 8 1 1 0 2 8 1 1 0 2 8 1 1 0 2 9 1 1 0 3 3 1 1 0 3 3 1 1 0 3 3 1 1 0 3 3 1 0 8 8 7 1 0 8 8 6 1 0 8 8 6 1 0 8 8 7 1 0 8 8 7 1 0 8 9 5 1 0 8 9 5 1 0 8 9 5 1 0 8 9 6 1 0 8 9 6 1 0 8 8 6 1 0 8 8 6 1 0 8 9 6 1 1 0 2 0 1 1 0 2 0 1 1 0 1 1 1 1 0 2 0 1 1 0 8 6 1 1 0 8 6 1 1 0 8 6 1 1 0 3 5 1 1 0 3 5 1 1 0 3 4 1 1 0 3 4 1 1 0 5 0 1 1 0 5 0 1 1 0 5 0 1 1 0 0 6 1 1 0 0 6 1 1 0 0 6 1 1 0 0 6 1 1 0 0 6 北 纬 1 8 5 6 1 8 5 6 1 8 5 6 1 8 5 7 1 8 5 7 1 8 5 7 1 8 4 9 1 8 4 9 1 8 4 9 1 8 4 9 1 8 4 9 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 6 7 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 6 8 1 9 2 9 1 9 2 9 1 9 2 9 1 9 3 0 1 9 3 0 1 9 3 8 1 9 3 8 1 9 3 3 1 9 3 3 1 9 3 3 1 9 2 9 1 9 2 9 1 9 3 3 1 9 7 5 1 9 7 5 1 9 7 7 1 9 7 5 1 9 7 0 1 9 7 0 1 9 7 0 1 9 7 1 1 9 7 1 1 9 7 1 1 9 7 1 1 9 2 2 1 9 2 2 1 9 2 5 1 8 5 6 1 8 5 6 1 8 5 6 1 8 5 6 1 8 5 6 海 拔 高 度 m 1 8 6 1 8 0 1 7 1 2 8 4 2 1 6 2 4 0 5 4 8 9 6 8 4 7 9 3 2 3 6 2 2 0 2 0 8 1 8 8 1 7 8 1 8 6 1 7 6 1 9 3 2 0 8 1 6 5 4 8 4 4 8 5 4 8 6 5 7 1 5 4 8 5 9 2 6 4 2 9 2 0 9 4 4 9 0 6 4 5 5 5 1 8 9 3 0 1 7 2 2 4 5 2 0 5 2 4 5 1 2 8 5 8 5 1 1 5 5 7 4 7 4 4 0 7 0 7 1 2 1 1 1 1 7 5 1 7 0 1 7 1 1 0 2 症 状 描 述 斑 驳 卷 曲 皱 缩 小 叶 黄 化 卷 曲 小 叶 起 泡 黄 化 卷 叶 黄 化 卷 叶 椭 圆 花 瓣 卷 曲 黄 化 卷 叶 畸 形 矮 小 小 叶 黄 化 卷 曲 黄 化 卷 曲 畸 形 黄 化 卷 曲 畸 形 轻 度 黄 化 正 常 黄 化 斑 驳 小 叶 轻 微 黄 化 花 叶 斑 驳 黄 化 斑 驳 卷 曲 黄 化 斑 驳 皱 缩 叶 缘 尖 黄 化 斑 驳 小 叶 黄 化 轻 度 斑 驳 畸 形 卷 曲 黄 化 小 叶 畸 形 正 常 小 叶 皱 缩 黄 化 小 叶 皱 缩 斑 驳 黄 化 斑 驳 黄 化 小 叶 斑 驳 黄 化 小 叶 斑 驳 斑 驳 皱 缩 小 叶 斑 驳 皱 缩 小 叶 小 叶 黄 化 皱 缩 斑 驳 小 叶 皱 缩 斑 驳 小 叶 皱 缩 斑 驳 正 常 正 常 正 常 小 叶 皱 缩 曲 叶 小 叶 黄 化 小 叶 正 常 黄 化 曲 叶 小 叶 小 叶 曲 叶 正 常 小 叶 卷 曲 黄 化 小 叶 黄 化 卷 曲 黄 化 皱 缩 尖 叶 小 叶 黄 叶 卷 曲 黄 化 正 常 小 叶 卷 曲 黄 化 黄 化 小 叶 斑 驳 皱 缩 黄 化 卷 曲 小 叶 正 常 严 婉 荣 等 海 南 地 区 樱 桃 番 茄 上 番 茄 黄 化 曲 叶 病 毒 病 鉴 定 与 分 析 7 3现 代 农 业 科 技 2 0 2 5 年 第 3 期 植 物 保 护 植 物 营 养 4 0 0 0 进 行 深 度 测 序 将 测 序 组 装 后 的 拼 接 序 列 C o n t i g s 与 G e n B a n k V i r u s R e f S e q 病 毒 核 酸 数 据 库 进 行 比 对 对 比 对 结 果 进 行 注 释 测 序 过 程 及 结 果 分 析 均 由 北 京 百 迈 客 生 物 科 技 有 限 公 司 完 成 1 3 樱 桃 番 茄 样 本 T Y L C V 的 P C R 验 证 采 用 多 糖 多 酚 植 物 总 D N A 提 取 试 剂 盒 提 取 番 茄 样 本 总 D N A 板 利 用 T Y L C V 特 异 性 引 物 T Y L C V F 5 T A A T C T G T T G T A A G G G C C C G T G A C T 3 T Y L C V R 5 A T G T A A T C A G A G C A G T T G A T C A T G 3 7 8 0 b p 进 行 P C R 扩 增 P C R 反 应 体 系 3 0 L D N A 1 0 L 2 T a q m i x 1 0 L T Y L C V F 引 物 1 0 L T Y L C V R 引 物 1 0 L d d H 2 O 1 2 L 扩 增 条 件 9 4 预 变 性 5 m i n 9 4 变 性 3 0 s 5 5 退 火 3 0 s 7 2 延 伸 1 m i n 3 0 个 循 环 7 2 延 伸 1 0 m i n 4 保 存 扩 增 产 物 连 接 到 p L B v e c t o r 上 转 化 大 肠 杆 菌 D H 5 菌 株 在 含 有 氨 苄 青 霉 素 浓 度 为 1 0 0 g m L 的 L B 平 板 上 挑 取 阳 性 克 隆 送 至 北 京 天 一 辉 远 生 物 科 技 有 限 公 司 进 行 测 序 测 序 结 果 在 N C B I 上 进 行 B l a s t 分 析 试 验 所 用 试 剂 盒 和 大 肠 杆 菌 D H 5 菌 株 均 购 自 天 根 生 化 科 技 北 京 有 限 公 司 2 结 果 与 分 析 2 1 样 本 采 集 情 况 共 计 采 集 到 6 5 个 樱 桃 番 茄 样 本 包 含 6 个 市 县 的 2 1 个 不 同 地 点 其 中 陵 水 县 样 本 1 6 个 定 安 县 样 本 1 4 个 昌 江 县 样 本 1 3 个 澄 迈 县 样 本 8 个 文 昌 市 和 琼 海 市 样 本 均 为 7 个 分 别 记 录 每 个 样 本 的 名 称 采 集 时 间 地 点 及 症 状 病 毒 病 症 状 主 要 有 皱 缩 斑 驳 小 叶 卷 曲 畸 形 黄 化 等 多 发 于 植 株 上 部 发 生 严 重 地 块 整 株 畸 形 矮 小 每 个 相 同 样 本 采 集 3 管 分 别 用 于 小 R N A 深 度 测 序 R T P C R 检 测 验 证 和 预 留 备 用 为 了 检 测 病 毒 的 丰 富 度 采 集 每 个 地 方 不 同 症 状 的 样 本 进 行 混 样 对 混 样 样 本 进 行 编 号 送 至 相 关 公 司 进 行 小 R N A 深 度 测 序 2 2 樱 桃 番 茄 T Y L C V 小 R N A 深 度 测 序 结 果 采 用 小 R N A 深 度 测 序 后 获 得 了 樱 桃 番 茄 每 个 样 本 中 可 能 存 在 的 所 有 与 病 毒 相 关 的 C o n t i g s 拼 接 序 列 G e n B a n k 数 据 库 比 对 后 与 T Y L C V 相 关 的 序 列 进 行 归 纳 总 结 结 果 表 明 6 个 市 县 共 测 得 1 5 条 与 T Y L C V 相 关 的 序 列 陵 水 县 共 获 得 1 2 条 数 据 占 陵 水 县 总 病 毒 数 量 的 2 3 3 5 其 中 T Y L C V A x a r q u i a 分 离 物 所 占 比 例 最 高 T Y L C V 次 之 T Y L C V S a r d i n i a 比 例 最 低 定 安 县 共 获 得 1 0 条 数 据 占 定 安 县 总 病 毒 数 量 的 1 6 0 6 其 中 T Y L C V 分 离 物 所 占 比 例 最 高 T Y L C V A x a r q u i a 次 之 T Y L C V I n d o n e s i a 比 例 最 低 昌 江 县 共 获 得 1 2 条 数 据 占 昌 江 县 总 病 毒 数 量 的 4 9 4 4 其 中 T Y L C A x V S i c 1 分 离 物 所 占 比 例 最 高 T Y L C V 次 之 T Y L C V T h a i l a n d 和 T Y L C V S a r d i n i a 比 例 最 低 澄 迈 县 共 获 得 8 条 数 据 占 澄 迈 县 总 病 毒 数 量 的 2 9 5 3 其 中 T Y L C V 分 离 物 所 占 比 例 最 高 T Y L C A x V S i c 1 次 之 T Y L C V S a u d i 比 例 最 低 文 昌 市 共 获 得 7 条 数 据 占 文 昌 市 总 病 毒 数 量 的 5 6 1 其 中 T Y L C V T h a i l a n d 分 离 物 所 占 比 例 最 高 T Y L C V S h u a n g b a i 次 之 T Y L C V V i e t n a m 比 例 最 低 琼 海 市 共 获 得 6 条 数 据 占 琼 海 市 总 病 毒 数 量 的 3 1 0 其 中 T Y L C V O m a n 分 离 物 所 占 比 例 最 高 T Y L C V A x a r q u i a 次 之 T Y L C V S a u d i 所 占 比 例 最 低 从 地 区 来 看 昌 江 地 区 的 T Y L C V 各 类 分 离 物 检 出 比 例 最 高 占 比 几 乎 接 近 所 有 病 毒 的 5 0 说 明 昌 样 本 编 号 W C 4 W C 5 W C 7 W C 6 Q H 4 Q H 5 Q H 6 Q H 7 C M 5 C M 6 C M 7 C M 8 采 集 地 点 文 昌 市 东 阁 镇 李 山 村 文 昌 市 东 阁 镇 凤 山 村 文 昌 市 东 阁 镇 李 山 村 文 昌 市 东 阁 镇 凤 山 村 琼 海 市 嘉 积 镇 龙 寿 洋 琼 海 市 嘉 积 镇 龙 寿 洋 琼 海 市 嘉 积 镇 龙 寿 洋 琼 海 市 嘉 积 镇 龙 寿 洋 澄 迈 县 永 发 镇 永 发 基 地 澄 迈 县 永 发 镇 永 发 基 地 澄 迈 县 永 发 镇 金 安 农 场 澄 迈 县 永 发 镇 金 安 农 场 生 长 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 中 期 经 纬 度 经 度 1 1 0 8 6 1 1 0 8 6 1 1 0 8 6 1 1 0 8 6 1 1 0 5 0 1 1 0 5 0 1 1 0 5 0 1 1 0 4 9 1 1 0 2 0 1 1 0 2 0 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 纬 度 1 9 7 0 1 9 7 0 1 9 7 0 1 9 7 0 1 9 2 4 1 9 2 4 1 9 2 4 1 9 2 3 1 9 7 5 1 9 7 5 1 9 7 7 1 9 7 7 海 拔 高 度 m 1 6 0 2 7 2 1 6 0 2 7 2 1 9 2 1 9 2 1 9 2 1 8 1 2 5 0 2 3 0 2 0 8 2 0 4 症 状 描 述 斑 驳 皱 缩 尖 叶 皱 缩 黄 化 黄 化 正 常 卷 曲 斑 驳 皱 缩 卷 曲 卷 曲 畸 形 黄 化 卷 曲 细 长 花 叶 卷 曲 叶 片 泡 状 突 起 突 起 部 分 变 浅 卷 曲 畸 形 黄 化 斑 驳 表 1 续 7 4江 地 区 T Y L C V 发 生 最 严 重 其 次 为 澄 迈 陵 水 定 安 和 文 昌 地 区 琼 海 地 区 T Y L C V 的 检 出 率 最 低 从 分 离 物 类 型 来 看 在 1 5 条 与 T Y L C V 相 关 的 序 列 中 T Y L C V A x a r q u i a T Y L C V O m a n T Y L C V M a l a g a 和 T Y L C V S a u d i 4 个 分 离 物 在 6 个 地 区 均 检 测 到 T Y L C V A l B a t i n a h 和 T Y L C V M a l i 在 除 文 昌 市 外 的 其 他 地 区 均 检 测 到 T Y L C V 和 T Y L C A x V S i c 1 在 除 文 昌 市 和 琼 海 市 外 的 其 他 地 区 均 检 测 到 T Y L C V V i e t n a m 在 陵 水 县 昌 江 县 和 文 昌 市 检 测 到 T Y L C V G u a n g d o n g 仅 在 陵 水 县 检 测 到 T Y L C V Y u n n a n 在 陵 水 县 和 昌 江 县 检 测 到 T Y L C V S a r d i n i a 在 陵 水 县 和 昌 江 县 检 测 到 T Y L C V S h u a n g b a i 在 定 安 县 和 文 昌 市 检 测 到 T Y L C V I n d o n e s i a 仅 在 安 定 县 检 测 到 2 3 樱 桃 番 茄 T Y L C V 的 P C R 的 验 证 及 分 析 P C R 验 证 结 果 表 明 6 5 个 樱 桃 番 茄 样 本 中 有 5 5 个 样 本 检 测 到 T Y L C V 总 体 检 出 率 为 8 4 6 2 陵 水 县 T Y L C V 的 检 出 率 为 1 0 0 0 0 定 安 县 T Y L C V 的 检 出 率 为 9 2 8 6 昌 江 县 T Y L C V 的 检 出 率 为 8 4 6 2 文 昌 市 T Y L C V 的 检 出 率 为 7 1 4 3 澄 迈 县 T Y L C V 的 检 出 率 为 7 5 0 0 琼 海 市 T Y L C V 的 检 出 率 为 5 7 1 4 部 分 检 测 结 果 见 图 1 选 取 陵 水 定 安 琼 海 的 分 离 物 进 行 测 序 分 析 将 测 序 结 果 共 享 后 分 别 获 得 G e n B a n k 登 录 号 即 L S 2 3 O R 7 6 6 0 2 4 D A 2 2 O R 7 6 6 0 2 2 和 Q H 2 3 O R 7 6 6 0 2 5 比 对 发 现 L S 2 3 O R 7 6 6 0 2 4 与 海 南 分 离 物 M W 8 1 4 9 0 9 1 和 河 南 分 离 物 J N 9 9 0 9 2 5 1 的 相 似 率 均 达 到 9 9 7 4 与 广 东 分 离 物 P P 4 3 8 3 6 3 1 陕 西 分 离 物 K U 8 9 2 7 1 7 1 日 本 分 离 物 L C 7 9 0 4 7 2 1 等 的 相 似 率 均 为 9 9 6 1 与 广 东 分 离 物 M T 6 7 1 4 2 9 1 北 京 分 离 物 K M 5 0 6 9 4 8 1 海 南 分 离 物 O Q 4 2 8 1 8 2 1 澳 大 利 亚 分 离 物 K X 3 4 7 1 0 1 1 等 的 相 似 率 均 为 9 9 4 9 D A 2 2 O R 7 6 6 0 2 2 和 Q H 2 3 O R 7 6 6 0 2 5 与 广 东 分 离 物 P P 4 3 8 3 6 3 1 P P 4 3 8 3 5 4 1 的 相 似 率 均 为 1 0 0 0 0 与 澳 大 利 亚 分 离 物 K X 3 4 7 1 3 1 1 海 南 分 离 物 O R 6 7 0 9 4 9 1 M W 8 1 4 9 0 9 1 的 相 似 率 均 为 9 9 8 7 与 江 苏 分 离 物 M N 3 8 1 7 1 3 1 美 国 分 离 物 K Y 9 7 1 3 2 8 1 广 东 分 离 物 P P 4 3 8 3 4 0 1 等 的 相 似 率 均 为 9 9 6 1 从 比 对 结 果 来 看 陵 水 定 安 和 琼 海 T Y L C V 与 已 发 布 的 海 南 分 离 物 相 似 率 有 高 有 低 与 部 分 中 国 海 南 广 东 河 南 及 澳 大 利 亚 相 关 分 离 物 相 似 率 达 9 9 7 0 以 上 但 也 存 在 相 似 性 较 低 的 菌 株 这 说 明 T Y L C V 分 离 物 较 复 杂 从 地 理 关 系 上 也 很 难 确 定 其 来 源 存 在 地 理 位 置 较 远 但 亲 缘 关 系 较 近 以 及 地 理 位 置 较 近 但 亲 缘 关 系 较 远 的 a 中 1 2 4 分 别 为 L S 1 L S 2 L S 3 L S 4 L S 5 L S 6 L S 7 L S 8 L S 9 L S 1 0 L S 1 1 D A 1 D A 2 D A 3 D A 4 D A 5 D A 6 D A 8 D A 9 D A 1 0 C J 1 C J 4 C J 8 C J 9 M 为 D L 5 0 0 0 D N A M a r k e r b 中 1 2 0 分 别 为 C M 1 C M 2 C M 3 C M 4 W C 1 W C 2 W C 3 W C 4 D A 1 1 D A 1 2 D A 1 3 D A 1 4 Q H 1 Q H 2 Q H 3 L S 1 2 L S 1 3 L S 1 4 L S 1 5 L S 1 6 M 为 D L 5 0 0 0 D N A M a r k e r 5 0 0 0 b p 3 0 0 0 b p 2 0 0 0 b p 1 0 0 0 b p 7 5 0 b p 5 0 0 b p 2 5 0 b p 1 0 0 b p 5 0 0 0 b p 3 0 0 0 b p 2 0 0 0 b p 1 0 0 0 b p 7 5 0 b p 5 0 0 b p 2 5 0 b p 1 0 0 b p 7 8 0 b p 7 8 0 b p a b 图 1 不 同 地 区 样 本 T Y L C V 检 测 结 果 情 况 3 结 论 与 讨 论 本 研 究 采 集 了 海 南 省 6 个 市 县 樱 桃 番 茄 主 栽 区 的 病 毒 病 样 本 通 过 小 R N A 深 度 测 序 比 对 获 得 了 每 个 市 县 可 能 存 在 的 T Y L C V 相 似 分 离 物 统 计 了 不 同 地 区 T Y L C V 及 其 分 离 物 在 所 有 病 毒 中 的 检 出 比 例 结 果 表 明 T Y L C V 及 其 分 离 物 在 所 有 病 毒 中 的 下 转 第 8 1 页 严 婉 荣 等 海 南 地 区 樱 桃 番 茄 上 番 茄 黄 化 曲 叶 病 毒 病 鉴 定 与 分 析 7 5 2 7 P E R N A S L B E A N C B O O T H R O Y D J C e t a l M i t o c h o n d r i a r e s t r i c t g r o w t h o f t h e i n t r a c e l l u l a r p a r a s i t e T o x o p l a s m a g o n d i i b y l i m i t i n g i t s u p t a k e o f f a t t y a c i d s J C e l l M e t a b o l i s m 2 0 1 8 2 7 4 8 8 6 8 9 7 e 4 2 8 G U Q N Y U A N Q F Z H A O D e t a l A c e t y l c o e n z y m e A s y n t h e t a s e g e n e C h A c s 1 i s e s s e n t i a l f o r l i p i d m e t a b o l i s m c a r b o n u t i l i z a t i o n a n d v i r u l e n c e o f t h e h e m i b i o t r o p h i c f u n g u s C o l l e t o t r i c h u m h i g g i n s i a n u m J M o l e c u l a r P l a n t P a t h o l o g y 2 0 1 9 2 0 1 1 0 7 1 2 3 2 9 L I Y Z H U J D H U J X e t a l F u n c t i o n a l c h a r a c t e r i z a t i o n o f e l e c t r o n t r a n s f e r r i n g f l a v o p r o t e i n a n d i t s d e h y d r o g e n a s e r e q u i r e d f o r f u n g a l d e v e l o p m e n t a n d p l a n t i n f e c t i o n b y t h e r i c e b l a s t f u n g u s J S c i e n t i f i c R e p o r t s 2 0 1 6 6 2 4 9 1 1 3 0 B H A M B R A G K W A N G Z Y S O A N E S D M e t a l P e r o x i s o m a l c a r n i t i n e a c e t y l t r a n s f e r a s e i s r e q u i r e d f o r e l a b o r a t i o n o f p e n e t r a t i o n h y p h a e d u r i n g p l a n t i n f e c t i o n b y M a g n a p o r t h e g r i s e a J M o l e c u l a r M i c r o b i o l o g y 2 0 0 6 6 1 1 4 6 6 0 3 1 W A N G Z Y T H O R N T O N C R K E R S H A W M J e t a l T h e g l y o x y l a t e c y c l e i s r e q u i r e d f o r t e m p o r a l r e g u l a t i o n o f v i r u l e n c e b y t h e p l a n t p a t h o g e n i c f u n g u s M a g n a p o r t h e g r i