茄子斑驳皱缩病毒病病原物的鉴定及分子进化分析.pdf

江 苏 农 业 学 报 邵 宇 纯 仲 健 新 路 云 爽 等 茄 子 斑 驳 皱 缩 病 毒 病 病 原 物 的 鉴 定 及 分 子 进 化 分 析 江 苏 农 业 学 报 茄 子 斑 驳 皱 缩 病 毒 病 病 原 物 的 鉴 定 及 分 子 进 化 分 析 邵 宇 纯 仲 健 新 路 云 爽 宋 美 娜 陈 雅 寒 甘 肃 农 业 大 学 植 物 保 护 学 院 甘 肃 兰 州 收 稿 日 期 基 金 项 目 甘 肃 农 业 大 学 省 级 大 学 生 创 新 创 业 训 练 计 划 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 甘 肃 省 自 然 科 学 基 金 项 目 甘 肃 省 高 等 学 校 创 新 基 金 项 目 甘 肃 农 业 大 学 人 才 启 动 资 金 项 目 作 者 简 介 邵 宇 纯 女 山 西 太 原 人 本 科 生 研 究 方 向 为 植 物 病 理 学 通 讯 作 者 陈 雅 寒 摘 要 为 了 鉴 定 引 起 茄 子 斑 驳 皱 缩 病 毒 病 的 病 原 物 利 用 高 通 量 测 序 技 术 结 合 生 物 信 息 学 的 方 法 发 现 个 表 现 斑 驳 和 皱 缩 的 茄 子 样 品 中 存 在 蚕 豆 萎 蔫 病 毒 号 葡 萄 病 毒 和 烟 草 花 叶 病 毒 采 用 技 术 对 该 结 果 进 行 验 证 个 样 品 中 均 检 测 到 和 未 检 测 到 通 过 对 外 壳 蛋 白 大 亚 基 基 因 进 行 测 序 和 分 子 进 化 分 析 获 得 了 条 的 基 因 片 段 条 基 因 的 核 苷 酸 序 列 及 其 编 码 的 氨 基 酸 序 列 一 致 性 分 别 为 和 与 中 已 发 表 的 个 基 因 核 苷 酸 序 列 及 其 编 码 的 氨 基 酸 序 列 一 致 性 分 别 为 和 基 于 基 因 核 苷 酸 序 列 进 行 种 群 结 构 和 遗 传 多 样 性 分 析 结 果 表 明 在 系 统 发 育 进 化 树 中 可 分 为 两 大 支 不 同 寄 主 基 因 的 遗 传 距 离 在 关 键 词 茄 子 斑 驳 皱 缩 病 毒 病 蚕 豆 萎 蔫 病 毒 号 烟 草 花 叶 病 毒 基 因 中 图 分 类 号 文 献 标 识 码 文 章 编 号 茄 子 为 茄 科 茄 属 植 物 据 统 计 近 年 来 中 国 茄 子 种 植 面 积 约 占 产 量 约 为 所 带 来 的 经 济 效 益 十 分 可 观 随 着 种 植 面 积 的 不 断 增 加 病 毒 病 严 重 影 响 了 茄 子 的 产 量 和 品 质 蚕 豆 萎 蔫 病 毒 号 属 于 豇 豆 花 叶 病 毒 科 蚕 豆 病 毒 属 在 自 然 界 主 要 通 过 多 种 蚜 虫 非 持 续 性 传 播 可 侵 染 科 属 种 植 物 被 侵 染 后 植 物 多 表 现 为 不 同 程 度 的 变 色 畸 形 萎 蔫 且 叶 片 多 附 有 黑 褐 色 坏 死 斑 点 严 重 影 响 了 植 物 的 正 常 生 长 基 因 组 由 段 单 链 分 子 组 成 表 达 蛋 白 酶 辅 因 子 解 旋 酶 结 合 基 序 蛋 白 酶 和 依 赖 性 聚 合 酶 等 种 功 能 蛋 白 质 主 要 参 与 基 因 组 的 复 制 和 表 达 表 达 运 动 蛋 白 外 壳 蛋 白 大 亚 基 和 外 壳 蛋 白 小 亚 基 等 种 功 能 蛋 白 质 目 前 检 测 植 物 病 毒 的 方 法 有 传 统 病 毒 血 清 学 鉴 定 法 透 射 电 镜 法 酶 联 免 疫 吸 附 测 定 法 逆 转 录 环 介 导 等 温 扩 增 技 术 和 聚 合 酶 链 式 反 应 法 等 这 些 方 法 仅 适 用 于 对 已 知 病 原 物 的 病 毒 检 测 而 对 未 知 病 原 物 的 检 测 则 受 到 了 极 大 的 限 制 高 通 量 测 序 技 术 与 传 统 的 病 原 检 测 方 法 不 同 是 利 用 高 通 量 测 序 技 术 检 测 病 毒 产 生 的 序 列 并 对 测 序 结 果 进 行 拼 接 与 数 据 库 进 行 比 对 从 而 筛 选 和 鉴 定 病 毒 种 类 其 灵 活 性 高 适 用 性 强 本 研 究 利 用 高 通 量 测 序 技 术 对 年 月 在 甘 肃 省 临 洮 市 采 集 到 的 株 表 现 斑 驳 和 皱 缩 等 疑 似 病 毒 病 症 状 的 茄 子 样 品 进 行 深 度 测 序 采 用 技 术 对 测 序 结 果 进 行 验 证 旨 在 明 确 引 起 茄 子 斑 驳 皱 缩 病 毒 病 的 病 毒 种 类 为 茄 子 斑 驳 皱 缩 病 毒 病 的 快 速 诊 断 和 防 控 提 供 科 学 的 理 论 依 据 材 料 与 方 法 试 验 材 料 年 月 在 甘 肃 省 临 洮 县 采 集 到 株 表 现 斑 驳 和 皱 缩 等 疑 似 病 毒 病 症 状 的 茄 子 叶 片 图 液 氮 速 冻 保 存 于 超 低 温 冰 箱 备 用 图 健 康 茄 子 叶 片 和 染 病 茄 子 叶 片 样 品 总 的 提 取 及 测 序 按 照 说 明 书 提 取 样 品 总 利 用 微 量 核 酸 分 析 仪 美 国 测 定 浓 度 提 取 的 送 至 北 京 百 迈 客 生 物 科 技 有 限 公 司 完 成 的 分 离 高 通 量 测 序 以 及 文 库 的 构 建 测 序 平 台 为 病 毒 种 类 筛 选 对 测 序 得 到 的 粗 序 列 进 行 过 滤 去 除 质 量 值 低 无 接 头 序 列 和 插 入 片 段 的 筛 选 长 度 在 的 使 用 软 件 对 所 得 进 行 拼 接 将 拼 接 所 得 进 行 分 类 注 释 具 体 方 法 如 下 将 获 得 的 与 茄 子 基 因 组 序 列 进 行 比 对 去 除 寄 主 基 因 组 序 列 用 将 剩 余 的 与 进 行 比 对 获 得 高 度 同 源 的 序 列 用 将 中 未 注 释 到 的 与 进 行 比 对 获 得 部 分 同 源 的 序 列 选 出 高 度 同 源 和 部 分 同 源 序 列 中 值 最 小 的 分 别 与 核 酸 数 据 库 和 蛋 白 质 数 据 库 进 行 比 对 筛 选 和 鉴 定 病 毒 种 类 的 检 测 及 克 隆 测 序 高 通 量 测 序 结 果 显 示 样 品 中 存 在 葡 萄 病 毒 和 烟 草 花 叶 病 毒 种 病 毒 根 据 中 收 录 的 和 基 因 组 全 序 列 使 用 软 件 设 计 对 简 并 引 物 的 特 异 性 引 物 表 参 考 已 报 道 文 献 引 物 委 托 西 安 擎 科 生 物 科 技 有 限 责 任 公 司 合 成 邵 宇 纯 等 茄 子 斑 驳 皱 缩 病 毒 病 病 原 物 的 鉴 定 及 分 子 进 化 分 析按 照 说 明 书 将 总 反 转 录 成 反 应 体 系 取 为 模 板 加 入 补 全 至 反 应 程 序 合 成 的 保 存 于 冰 箱 备 用 以 为 模 板 进 行 扩 增 反 应 产 物 经 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 染 色 观 察 结 果 并 拍 照 用 胶 回 收 试 剂 盒 将 目 标 产 物 切 胶 回 收 纯 化 产 物 经 连 接 转 化 单 克 隆 挑 选 和 摇 菌 后 筛 选 阳 性 克 隆 鉴 定 为 阳 性 的 菌 液 提 取 质 粒 质 粒 送 至 西 安 擎 科 生 物 科 技 有 限 责 任 公 司 测 序 表 本 研 究 用 到 的 引 物 信 息 检 测 病 毒 引 物 名 称 引 物 序 列 长 度 参 考 文 献 蚕 豆 萎 蔫 病 毒 号 葡 萄 病 毒 烟 草 花 叶 病 毒 序 列 一 致 性 分 析 和 系 统 进 化 分 析 将 获 得 的 两 段 序 列 用 软 件 进 行 校 正 和 拼 接 将 得 到 的 基 因 序 列 提 交 核 酸 数 据 库 进 行 序 列 比 对 分 析 采 用 软 件 中 的 算 法 进 行 核 苷 酸 序 列 及 其 编 码 的 氨 基 酸 序 列 一 致 性 分 析 以 南 芥 菜 花 叶 病 毒 为 外 群 采 用 软 件 构 建 系 统 发 育 树 选 择 邻 近 法 进 行 系 统 进 化 分 析 自 展 校 正 值 设 定 为 遗 传 距 离 分 析 和 基 因 交 流 分 析 使 用 软 件 中 模 型 计算 分 离 物 不 同 分 组 之 间 的 遗 传 距 离 参 数 默 认 为 使 用 软 件 分 析 分 离 物 不 同 分 组 之 间 的 基 因 交 流 以 种 群 基 因 差 异 值 和 基 因 流 值 为 参 考 来 衡 量 种 群 间 的 遗 传 分 化 程 度 和 基 因 交 流 一 般 介 于 至 当 表 明 这 两 个 分 组 之 间 存 在 频 繁 的 基 因 交 流 当 表 明 这 两 个 分 组 之 间 基 因 交 流 的 频 率 很 低 当 表 明 这 两 个 分 组 之 间 存 在 可 以 基 因 交 流 的 渠 道 结 果 与 分 析 样 品 高 通 量 测 序 分 析 经 测 序 得 到 的 粗 序 列 进 行 筛 选 后 获 得 的 总 数 为 表 其 中 长 度 分 布 结 果 如 图 本 研 究 中 序 列 长 度 主 要 集 中 于 表 明 样 本 文 库 质 量 较 高 使 用 软 件 将 进 行 拼 接 后 所 组 装 的 数 为 将 拼 接 所 得 的 进 行 分 类 注 释 筛 选 出 与 病 毒 同 源 的 数 目 结 果 见 表 包 括 和 种 病 毒 与 同 源 的 数 目 最 高 为 与 和 同 源 的 数 目 依 次 为 和 其 中 和 的 值 分 别 为 表 明 出 现 假 阳 的 概 率 最 小 但 还 需 进 一 步 验 证 才 能 明 确 引 起 茄 子 斑 驳 皱 缩 病 毒 病 的 病 毒 种 类 表 测 序 数 据 质 量 统 计 项 目 粗 序 列 长 度 小 于 读 段 长 度 大 于 读 段 低 质 量 干 净 的 读 段 个 数 占 比 江 苏 农 业 学 报 年 第 卷 第 期图 长 度 分 布 表 样 品 文 库 与 已 知 病 毒 同 源 的 检 测 结 果 病 毒 名 称 同 源 数 目 期 望 值 与 比 对 参 考 序 列 的 相 似 度 得 分 见 表 注 样 品 病 毒 检 测 结 果 以 为 模 板 利 用 特 异 性 引 物 进 行 检 测 结 果 显 示 份 疑 似 病 毒 病 的 茄 子 样 品 中 扩 增 出 条 大 小 约 为 和 的 目 标 条 带 图 表 明 茄 子 样 品 中 含 有 和 种 病 毒 并 未 检 测 到 序 列 一 致 性 分 析 和 系 统 进 化 分 析 将 测 序 后 所 获 得 的 原 始 序 列 采 用 软 件 进 行 了 校 正 和 拼 接 获 得 条 的 序 列 并 将 其 命 名 为 后 进 行 序 列 一 致 性分 析 结果表 明 本 研 究 中 所获 得的 条 分 离 物 核 苷 酸 序 列 及 其 编 码 的 氨 基 酸 序 列 一 致 性 分 别 为 和 与 中 已 发 表 的 个 分 离 物 核 苷 酸 序 列 及 其 编 码 的 氨 基 酸 序 列 一 致 性 分 别 为 和 表 表 其 中 与 新 加 坡 分离 物 登 录 号 的 核 苷 酸 序 列 一 致 性 最 低 为 与 中 国 分 离 物 登 录 号 的 核 苷 酸 序 列 一 致 性 最 高 为 与 新 加 坡 分 离 物 登 录 号 的 氨 基 酸 序 列 一 致 性 最 低 为 与 中 国 分 离 物 登 录 号 的 氨 基 酸 序 列 一 致 性 最 高 为 说 明 本 研 究 所 获 得 的 核 苷 酸 序 列 及 其编码 的 氨 基 酸 序 列 与 为 为 阴 性 对 照 和 为 为 和 为 和 为 见 表 注 图 样 品 中 病 毒 的 检 测 结 果 中 已 收 录 的 核 苷酸序 列 及其编 码的氨 基 酸 序 列 有 较 高 的 一 致 性 将 获 得 的 核 苷 酸 序 列 与 中 已 发 表 的 个 核 苷 酸 序 列 进 行 系 统 进 化 分 析 以 为 外 群 使 用 构 建 系 统 发 育 进 化 树 系 统 发 育 进 化 树 图 表 明 核 苷 酸 序 列 可 分 为 两 大 支 以 来 自 中 国 的 和 韩 国 的 和 等 为 组 其 他 序 列 聚 为 组 与 亲 缘 关 系 较 近 遗 传 差 异 分 析 不 同 寄 主 间 基 因 的 遗 传 距 离 介 于 表 其 中 寄 主 为 红 辣 椒 和 赤 苞 花 的 遗 传 距 离 最 高 为 遗 传 差 异 显 著 寄 主 为 辣 椒 和 菠 菜 的 遗 传 距 离 最 低 为 遗 传 差 异 不 显 著 但 由 于 本 研 究 邵 宇 纯 等 茄 子 斑 驳 皱 缩 病 毒 病 病 原 物 的 鉴 定 及 分 子 进 化 分 析采集 到的 样本 数量 较 少 无法 判 断 不 同 的 寄 主 是否会 对 鉴 定 到 的 遗 传 有 影 响 还 需 进 一 步 研 究 表 与 其 他 分 离 物 的 核 苷 酸 序 列 及 其 编 码 的 氨 基 酸 序 列 相 似 性 序 号 序 列 号 寄 主 国 家 相 似 度 核 苷 酸 序 列 氨 基 酸 序 列 蚕 豆 中 国 辣 椒 韩 国 辣 椒 韩 国 辣 椒 韩 国 辣 椒 韩 国 蚕 豆 韩 国 蚕 豆 韩 国 辣 椒 韩 国 辣 椒 韩 国 豌 豆 中 国 辣 椒 韩 国 辣 椒 中 国 菠 菜 中 国 菠 菜 韩 国 菠 菜 韩 国 辣 椒 中 国 红 辣 椒 中 国 益 母 草 韩 国 辣 椒 韩 国 蚕 豆 中 国 太 子 参 中 国 太 子 参 中 国 赤 苞 花 新 加 坡 表 与 其 他 分 离 物 的 核 苷 酸 序 列 及 其 编 码 的 氨 基 酸 序 列 相 似 性 序 号 序 列 号 寄 主 国 家 相 似 性 核 苷 酸 序 列 氨 基 酸 序 列 蚕 豆 中 国 辣 椒 韩 国 辣 椒 韩 国 辣 椒 韩 国 辣 椒 韩 国 蚕 豆 韩 国 蚕 豆 韩 国 辣 椒 韩 国 辣 椒 韩 国 豌 豆 中 国 辣 椒 韩 国 江 苏 农 业 学 报 年 第 卷 第 期续 表 序 号 序 列 号 寄 主 国 家 相 似 性 核 苷 酸 序 列 氨 基 酸 序 列 辣 椒 中 国 菠 菜 中 国 菠 菜 韩 国 菠 菜 韩 国 辣 椒 中 国 红 辣 椒 中 国 益 母 草 韩 国 辣 椒 韩 国 蚕 豆 中 国 太 子 参 中 国 太 子 参 中 国 赤 苞 花 新 加 坡 图 和 与 已 发 表 个 分 离 物 基 因 核 苷 酸 序 列 的 系 统 发 育 进 化 树 邵 宇 纯 等 茄 子 斑 驳 皱 缩 病 毒 病 病 原 物 的 鉴 定 及 分 子 进 化 分 析表 不 同 寄 主 病 毒 基 因 间 的 遗 传 距 离 分 析 组 群 辣 椒 豌 豆 菠 菜 红 辣 椒 益 母 草 蚕 豆 太 子 参 赤 苞 花 茄 子 辣 椒 豌 豆 菠 菜 红 辣 椒 益 母 草 蚕 豆 太 子 参 赤 苞 花 茄 子 不 同 寄 主 间 基 因 的 遗 传 差 异 介 于 表 其 中 寄 主 辣 椒 和 蚕 豆 基 因 的 遗 传 差 异 最 低 为 其 数 值 介 于 表 明 这 两 个 寄 主 病 毒 之 间 存 在 频 繁 的 基 因 交 流 寄 主 茄 子 和 太 子 参 基 因 的 遗 传 差 异 最 高 为 其 数 值 介 于 表 明 这 两 个 寄 主 病 毒 基 因 交 流 的 频 率 很 低 不 同 寄 主 基 因 之 间 基 因 流 介 于 其 中 寄 主 茄 子 和 太 子 参 病 毒 的 基 因 流 最 低 为 其 数 值 表 明 这 两 个 寄 主 病 毒 之 间 存 在 可 以 基 因 交 流 的 通 道 表 不 同 寄 主 病 毒 基 因 间 的 遗 传 差 异 和 基 因 流 寄 主 统 计 量 基 因 分 化 系 数 遗 传 差 异 基 因 流 辣 椒 与 菠 菜 辣 椒 与 蚕 豆 辣 椒 与 茄 子 辣 椒 与 太 子 参 菠 菜 与 蚕 豆 菠 菜 与 茄 子 菠 菜 与 太 子 参 蚕 豆 与 茄 子 蚕 豆 与 太 子 参 茄 子 与 太 子 参 江 苏 农 业 学 报 年 第 卷 第 期 讨 论 为 明 确 引 起 茄 子 斑 驳 和 皱 缩 的 病 毒 种 类 本 研 究 对 表 现 出 斑 驳 和 皱 缩 的 茄 子 样 品 进 行 高 通 量 测 序 和 检 测 检 测 结 果 表 明 表 现 出 斑 驳 和 皱 缩 的 茄 子 样 品 中 含 有 和 采 用 种 方 法 联 合 鉴 定 病 毒 种 类 显 著 提 高 了 筛 查 的 效 率 和 准 确 度 这 与 柴 阿 丽 等 通 过 进 行 高 通 量 测 序 和 技 术 鉴 定 出 侵 染 茄 子 的 烟 草 轻 型 绿 花 叶 病 毒 和 番 茄 斑 驳 花 叶 病 毒 和 陈 雅 寒 等 利 用 高 通 量 测 序 技 术 和 技 术 鉴 定 出 侵 染 杏 的 亚 洲 李 属 病 毒 和 亚 洲 李 属 病 毒 的 研 究 方 法 相 似 虽 然 高 通 量 测 序 在 茄 子 样 品 中 检 测 出 但 是 未 检 测 到 的 存 在 原 因 可 能 是 高 通 量 测 序 过 程 中 添 加 多 个 核 苷 酸 时 插 入 和 删 除 等 测 序 错 误 造 成 的 假 阳 性 本 研 究 检 测 出 和 说 明 甘 肃 省 临 洮 县 茄 子 斑 驳 皱 缩 症 状 是 由 多 种 病 毒 复 合 侵 染 造 成 的 原 因 可 能 是 由 于 传 毒 介 体 与 病 毒 之 间 互 作 所 致 也 有 可 能 是 由 于 寄 主 感 染 其 中 一 种 病 毒 后 失 去 抵 御 另 外 一 种 病 毒 的 能 力 为 明 确 基 因 序 列 的 遗 传 多 样 性 和 分 子 进 化 关 系 将 获 得 的 和 个 寄 主 来 源 不 同 的 分 离 物 基 因 核 苷 酸 序 列 进 行 一 致 性 分 析 核 苷 酸 序 列 及 其 编 码 的 氨 基 酸 序 列 一 致 性 分 别 为 和 这 表 明 虽 然 的 基 因 有 很 高 的 保 守 性 但 仍 具 一 定 程 度 的 分 子 变 异 以 为 外 群 构 建 系 统 发 育 进 化 树 并 对 不 同 寄 主 分 离 物 进 行 遗 传 距 离 和 遗 传 差 异 分 析 结 果 显 示 本 研 究 寄 主 茄 子 和 太 子 参 基 因 之 间 遗 传 交 流 的 频 率 很 低 这 与 系 统 发 育 树 中 聚 类 结 果 显 示 一 致 说 明 的 分 离 物 之 间 有 一 定 的 寄 主 差 异 参 考 文 献 中 国 科 学 院 中 国 植 物 志 编 辑 委 员 会 中 国 植 物 志 北 京 科 学 出 版 社 崔 彦 玲 无 公 害 茄 子 标 准 化 生 产 北 京 中 国 农 业 出 版 社 周 颖 张 瑞 郭 颂 等 北 京 地 区 地 黄 花 叶 病 病 原 的 分 子 鉴 定 植 物 保 护 学 报 匡 云 波 陈 满 足 陆 伊 荣 等 太 子 参 芜 菁 花 叶 病 毒 和 蚕 豆 萎 蔫 病 毒 的 双 重 检 测 园 艺 学 报 寇 丽 莎 赵 慧 琪 王 德 富 等 药 用 植 物 柴 胡 病 毒 病 病 原 物 的 分 子 鉴 定 病 毒 学 报 严 丹 侃 郑 红 英 张 海 珊 等 蚕 豆 萎 蔫 病 毒 号 安 徽 分 离 物 全 基 因 组 序 列 测 定 与 分 析 植 物 保 护 李 梁 杨 彩 霞 侯 秋 实 等 蚕 豆 萎 蔫 病 毒 号 辽 宁 藜 分 离 物 的 鉴 定 沈 阳 农 业 大 学 学 报 王 浩 军 王 芳 姚 忠 达 等 利 用 高 通 量 测 序 技 术 检 测 烟 草 病 毒 中 国 烟 草 学 报 牛 颜 冰 时 晓 丽 张 西 梅 等 侵 染 白 术 的 蚕 豆 萎 蔫 病 毒 号 的 分 子 检 测 与 序 列 分 析 病 毒 学 报 丛 倩 倩 兰 玉 菲 崔 晓 等 利 用 高 通 量 测 序 技 术 检 测 平 菇 病 毒 中 国 食 用 菌 王 宝 霞 齐 永 红 辛 敏 等 蚕 豆 萎 蔫 病 毒 号 板 蓝 根 分 离 株 全 基 因 组 序 列 测 定 与 分 析 中 国 生 物 化 学 与 分 子 生 物 学 报 柴 阿 丽 陈 利 达 曹 金 强 等 利 用 高 通 量 测 序 和 技 术 鉴 定 引 起 茄 子 斑 驳 紫 花 病 的 病 毒 种 类 园 艺 学 报 邵 宇 纯 等 茄 子 斑 驳 皱 缩 病 毒 病 病 原 物 的 鉴 定 及 分 子 进 化 分 析 刘 勇 李 凡 李 月 月 等 侵 染 我 国 主 要 蔬 菜 作 物 的 病 毒 种 类 分 布 与 发 生 趋 势 中 国 农 业 科 学 贺 振 李 文 凤 李 世 访 云 南 蔗 区 甘 蔗 线 条 花 叶 病 毒 分 离 物 基 因 形 成 新 簇 微 生 物 学 报 甘 海 锋 陈 雯 陈 夕 军 等 水 仙 黄 条 病 毒 和 水 仙 退 化 病 毒 的 种 群 结 构 及 遗 传 多 样 性 特 征 植 物 保 护 学 报 陈 雅 寒 马 强 孙 平 平 等 杏 衰 退 萎 黄 病 病 毒 的 高 通 量 测 序 和 鉴 定 园 艺 学 报 马 晓 春 李 建 设 高 艳 明 等 宁 夏 地 区 不 同 品 系 番 茄 主 要 病 毒 病 种 类 鉴 定 及 复 合 侵 染 研 究 西 南 农 业 学 报 责 任 编 辑 成 纾 寒 江 苏 农 业 学 报 年 第 卷 第 期