丝瓜新品种(系)对枯萎病抗性的鉴定与评价.pdf

2022 8 试验研究 丝瓜 Lufa cylindrica 是夏季主要瓜类蔬菜作物 之一 在各蔬菜产区均有种植 长期以来 枯萎病一 直是丝瓜生产上的主要病害之一 1 该病害是由尖孢 镰刀菌丝瓜专化型null染所致 属土传病害 2 16 枯萎病 菌可以在作物种子上越冬 主要以菌丝 菌核 厚垣 孢子在土壤 病残体上及未经高温腐熟的肥料中越 冬 17 19 该菌在土壤中能存活 5 年或更长时间 腐生 性强 前人研究表明 用农药化学防治该病效果欠 佳 目前最有效 经济的措施是选育和种植抗病品 种 20 26 为了解本所选育的丝瓜品种 系 对枯萎病的 抗性水平 采用室内人工接种方法鉴定 初步评价丝 瓜新品种 系 对枯萎病的抗性水平 以期为丝瓜枯 萎病的抗性遗传改良 选育抗病新品种和砧木新品 种提供抗性材料 1 材料与方法 1 1 供试材料 1 1 1 供试丝瓜自交系及品种 3 个新品种及 11 个 自交系都是福建省农业科学院作物研究所自行选 育 自 2005 年起陆续从国内外收集丝瓜种质资源经 过自交纯化按照育种目标筛选 供试丝瓜品种 系 来源及系统序号见表1 丝瓜新品种 系 对枯萎病 抗性的null 与null 基金项目 福建省属公益类专项 2019R1031 2 财政部和农业农村部国家大宗蔬菜产业技术体系福州综合试验站 CARS 23 G 53 财 政部和农业农村部国家特色蔬菜产业技术体系项目 CARS 24 G 07 福建省农业科学院科技创新平台专项 CXPT202001 作者简介 康玉妹 1972 女 本科 助理研究员 研究方向为蔬菜遗传育种栽培 E mail 396538074 通讯作者 薛珠政 1971 男 本科 研究员 研究方向为蔬菜育种与栽培 E mail 369654817 康玉妹 薛珠政 李永平 马慧斐 黄 昊 福建省蔬菜遗传育种重点实验室 福建省农业科学院作物研究所 福建省蔬菜工程技术研究中心 福建福州350013 摘要 为鉴定与评价丝瓜自交系及新品种的枯萎病抗性水平 通过室内人工接种 鉴定了 11 个丝 瓜自交系及3个杂交种 结果表明 SP08012 SP09001和SP08006这 3个自交系对枯萎病表现为中 抗 SP05008 SP11012 15006 15007和SP15008这5个自交系对枯萎病表现为高感 福研 2 号 福研 3号 福研 6号这3个新品种对枯萎病表现为中抗 说明目前选育的丝瓜新品种 系 大多数对枯萎 病表现为抗或中抗 可为丝瓜抗病育种提供新材料 关键词 丝瓜品种 自交系 枯萎病 抗性 表 1 供试丝瓜新品种 系 试验编号 系统序号 产地来源 1 SP08012 广州市绿霸种苗有限公司 2 SP09001 农友种苗 3 SP05008 汕头金韩种业有限公司 4 SP08006 江西华农种业有限公司 5 SP11012 香港田友农业联合公司 6 SP15008 福建省农业科学院资源所 7 SP11027 福建省农业科学院农业良种公司 8 SP11011 East West Seed 9 SP15006 福建龙岩 10 SP15007 福建龙岩 11 SP16015 广东省农业科学院蔬菜研究所 12 福研 2号 福建省农业科学院作物研究所 13 福研 3 号 福建省农业科学院作物研究所 14 福研 6 号 福建省农业科学院作物研究所 126 试验研究 2022 8 1 1 2 供鉴定的病原菌菌株 采自广州市钟落谭镇 丝瓜产区的丝瓜枯萎病样 经过广东省农业科学院 植物保护研究所单孢分离 获得丝瓜枯萎病菌菌株 通过室内人工接种测定上null菌株的致病性 保存致 病力中等的菌株待用 挑取少量带菌丝的培养基至 PDA上 活化培养 保存待用 编号为SPK 3 1 2 抗病性鉴定方法 1 2 1 育苗 准备接种用丝瓜苗 每个品种 系 选 完全成熟 籽粒饱满的种子 200 粒 清洗后用温水浸 泡8 10 h 之后将清洗干净的种子用湿布包裹 催null 于 28 30 光照 300 mol m 2 s 的恒温生化培养 箱中 在每天早晚清洗种子各1次 当80 种子露白 及时播于育苗盘 规格为5 cm 10 cm 于2021年7月 26 日播种 干湿适中的育苗土覆盖 1 cm 2叶1心苗 龄进行人工接种 土壤均经消毒处理后用于育苗 1 2 2 枯萎病菌培养 从菌种保存箱中取出病原菌 SPK 3菌株活化培养 于PDA试管斜面上接种 待菌 丝长出后 用接种针取出一小块接种于盛有PDA培养 基的三角瓶中 然后振荡培养3 d 25 180 r min 用双 层纱布过滤培养液 去除菌丝 以2 500 3 000 r min离 心10 min后 滤液去上清液 然后灭菌水洗出沉淀的 孢子 制成母液 用纽鲍尔 Neubauer 血球计数板在 显微镜下观察 80 个格 对每个小格的孢子进行观察 计数 以其平均数乘以4 000 000 得到孢子的数量 每毫升悬浮液中孢子量 将母液用双蒸无菌水稀 释 每毫升含1 10 6 个孢子悬浮液 待用 1 2 3 接种方法 采用苗期抗性鉴定技术进行人工 接种抗性鉴定丝瓜枯萎病 接种方法为伤浸根法 带 土拔起 2 叶 1 心幼苗 用接种剪刀 轻轻伤根 然后 在孢子悬浮液中浸入根系 20 min 于营养盆中移植 每个品种 系 每个重复 30 株苗 以双蒸无菌水作对 照 3次重复 1 3 病情调查与评价 接种后 瓜苗病害发生情况null天观察记录 1 次 瓜苗充分发病 null止调查 统计病情指数 DI 调查 结果用DMRT 法 根据病情指数进行差异显著性分 析 评价品种抗性水平 丝瓜病株病情分级标准 0级 无病症 1 级 生长正常 胚轴或子叶出现轻微病症 3级 影响生长 胚轴或子叶出现明显坏死斑 或1片 子叶黄化 5 级 2 片子叶黄化 或 1 片子叶枯死 7 级 植株部分萎蔫或null止生长 2 片子叶生长僵化 9级 整株萎蔫 倒伏或枯死 病情指数计算公式 DI 病株数 该级代 表值 总株数 最高级代表值 l00 丝瓜群体抗性水平评价标准如下 高抗 HR 0 DI l5 抗 R 15 DI 35 中抗 M 35 DI 55 感 S 55 DI 75 高感 HS 75 DI 1 4 统计分析方法 应用 DPS 统计软件处理原始数据 差异显著性 分析采用Duncan氏新复极差法 2 结果与分析 2 1 丝瓜枯萎病的显微镜观察情况 先直接观察菌落形态 将菌株筛选分离后 接种 于PDA平板上 28 培养3 d 发现其菌丝具有条纹 菌丛呈淡紫色絮状 整个菌落中央淡紫色 平板背面 带有深紫色的色素 用倒置显微镜400null观察 可见 其菌丝及分生孢子 分生孢子梗呈瓶颈状 小型分生 孢子较多 呈椭圆至卵圆形 小型分生孢子具有 1 个 分null 大型分生孢子有2 3个分null 形似镰刀 图1 2 2 丝瓜枯萎病发病症状及分级标准 接种枯萎病菌的丝瓜苗 其植株发病症状表现 为由下至上子叶 真叶黄化 叶脉逐渐变黄 随后叶 片变黄 萎蔫 茎基部褐色到褐色开裂 湿度大时长 淡紫色菌丝霉状物 植株枯死 病株根尖及维管束变 色不明显 参考罗方芳等 1 的丝瓜枯萎病病情分级方 法 根据症状特征建立分级标准 表2 丝瓜群体抗 性水平评价标准见表3 分为HR R M S HS 2 3 枯萎病病原菌致病性鉴定中丝瓜苗病害发生 情况 于丝瓜幼苗上接种分离到的尖孢镰刀菌孢子悬 液 结果表明 该菌株对丝瓜具有强致病性 丝瓜植 株接种孢子悬液 3 d 后开始出现发病症状 7 d 后发 病趋于严重 发病时丝瓜由叶null开始 逐渐向中脉扩 展 病叶萎蔫 随后1 2 d恢复 然后萎蔫病叶不再恢 复 呈现萎蔫 自下而上发展 最下部叶片及其叶鞘 图 1 丝瓜尖孢镰刀菌在倒置显微镜下观察情况 127 2022 8 试验研究 表 4 丝瓜自交系对枯萎病抗性鉴定结果 系统序号 病情指数 0 05水平显著性 抗性水平 SP08012 3 3 c HR SP09001 25 6 c R SP05008 28 2 R SP08006 44 4 c M SP11012 43 1 M SP15008 40 0 a M SP11027 68 9 b S SP11011 85 2 b HS SP15006 94 4 HS SP15007 95 2 HS SP16015 98 9 d HS 处黄色 随后其他叶片相继发黄 萎蔫 植株倒伏 直 至全株枯死 茎基部褐色至黑褐色开裂 湿度大时长 淡紫色菌丝霉状物 病株根茎剖开 即可见褐色或淡 紫色斑点状坏死病变 越近茎基部颜色越深 病变 一直延伸到根茎部 接种孢子悬液的处理植株移栽 10 d后 死亡率高达70 其中有90 丝瓜发病 发 病植株与健康植株相比较显著矮小 生长逐渐null止 接种该菌株的丝瓜植株移栽10 d后 其地上部鲜重 地下部鲜重 株高和茎围与对照处理均达到差异显 著水平 从发病部位重新分离病原菌 接种于尖孢镰 刀菌加了蛋白胨的选择性培养基再次进行显微观 察 鉴定为尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum f sp melonis 根据科赫法则 证实该病原菌是被接入的 尖孢镰刀菌菌株 2 4 丝瓜自交系抗性鉴定 丝瓜自交系人工接种试验结果见表 4 参试的 11 个丝瓜自交系接种枯萎病菌 SPK 3 菌株 10 d 后 病情基本稳定 其中 SP15008 与 SP11027 SP11011 自交系间病情指数差异显著 SP11027 SP11011自交 系间病情指数差异不显著 但这 2 个自交系与 SP08012 SP09001 SP08006 3 个自交系间病情指数 差异显著 SP08012 SP09001 SP08006 3 个自交系间 病情指数差异不显著 但均与 SP16015 自交系差异 极显著 SP05008 SP11012 SP15006 SP15007品系间 病情指数差异不显著 根据丝瓜枯萎病抗性水平评价标准 参试的11个 丝瓜自交系中 SP15008 对丝瓜枯萎病表现为高抗 SP11027 SP11011 对丝瓜枯萎病表现为抗病 SP08012 SP09001 SP08006 对丝瓜枯萎病表现为中 抗病 SP16015 对丝瓜枯萎病表现为感病 SP05008 SP11012 SP15006 SP15007 对丝瓜枯萎病表现为 高感 2 5 丝瓜新品种抗性鉴定 丝瓜新品种人工接种试验结果见图2 参试的丝 瓜新品种福研 2 号 福研 3 号 福研 6 号接种枯萎病 菌SPK 3菌株10 d后病情基本稳定 3个新品种病 情指数分别为 47 7 40 2 57 5 差异不显著 35接种浓度 接种时 期 4叶1心期与2叶1心期接种无显著性差异 考 虑到更早的时期进行鉴定则瓜苗较弱 接种后不容 易缓苗 而在较早的时期进行鉴定可以节省时间和 空间 接种适合在瓜苗2叶1心期时进行 影响抗病 鉴定的关键因子是接种方法 用1 10 6 CFU mL左右的 枯萎病孢子悬浮液可获得较好的鉴定效果 说明伤浸 根法对接种浓度的高低不敏感 即采用伤浸根法接 种效果最好 进行伤灌根接种时采用 1 10 7 CFU mL 或更高浓度才能达到较好的接种效果 而仅仅直接 将菌液灌入土壤中接种效果较差 所以要求较高的 病原菌孢子浓度用于伤灌根接种 由于浸根法和伤 灌根法均存在植株根系伤口 因此如果采用灌根法 为了省工省力 则必须应用 1 10 7 CFU mL 或更大的 接种浓度以保证足够的病原菌数量 同时人为制造 根系伤口 以加速病原菌null入 根系受伤能够加速 丝瓜枯萎病病原镰刀菌的null染和症状表现 丝瓜枯 萎病抗性鉴定接种的推荐方法 综合考虑各因素 采用伤浸根法接种 接种时期为苗龄 2 叶 1 心期 在1 10 6 CFU mL的孢子悬浮液中浸泡 由于丝瓜种 植具有多年不间断种植和区域性特点 目前推广种 植的丝瓜品种以抗和中抗枯萎病品种为主 在长期 与寄主作物互作过程中 丝瓜品种的抗病性降低 枯 萎病菌发生致病性变异 试验结果表明 选育的丝瓜 品种 系 中多数具有抗枯萎病基因 但还有待于下 一步分析这些抗病基因的种类及抗性机制等 为此 需对资源的抗性水平与抗性机制进行研究 为丝瓜 生产的持续发展 广泛收集丝瓜种质资源 有针对性 地培育出一系列具有不同抗性基因的丝瓜品种 参考文献 1 罗方芳 何自福 虞皓 等 广东丝瓜主要品种对枯萎病抗性的 鉴定与评价 J 广东农业科学 2009 12 49 50 63 2 虞凡枫 赵进 孙铭悦 等 黄瓜枯萎病拮抗null孢杆菌 A7 3 14 的筛选及鉴定 J 北方园艺 2022 3 41 46 3 罗龙辉 王继承 刘吉平 桑细菌性枯萎病病原菌的分离鉴定 与全基因组序列分析 J 植物保护 2022 48 1 44 51 89 4 邓晓娟 陆小双 陈琴 等 沉默 GbGSTU7 基因对海岛棉枯萎 病抗性的影响 J 农业生物技术学报 2022 30 3 434 441 5 张涵 赵莹 仲荣荣 等 生防细菌 TB17 的筛选 鉴定及其对苦 瓜枯萎病的生防作用 J 河南农业大学学报 2022 01 11 网 络首发 1 15 6 null大志 王咏坤 陈捷 等 海藻渣复配微生物菌剂防治黄瓜苗 期枯萎病的协同增效作用 J 中国生物防治学报 2022 38 1 97 107 7 吴美艳 罗兴录 刘珊廷 等 木薯叶片 5 种防御null活性与细 菌性枯萎病抗性的关系 J 中国农业大学学报 2022 27 1 109 115 8 呼李乐 黄晓null null晓红 等 不同抗性黄瓜品种连作对枯萎病 菌群体遗传分化的影响 J 植物病理学报 2021 12 21 网络 首发 1 11 9 赵曾强 郭文婷 张析 等 棉花抗枯萎病相关基因 GhERF5 4D的克隆及功能分析 J 生物技术通报 2022 38 4 193 201 10 王艳玮 曾凡云 漆艳香 等 香蕉枯萎病菌比卡菌素聚酮合 null编码基因 Bik1 的鉴定以及作为内源报告基因在 CRISPR Cas9体系中的可行性评估 J 热带作物学报 2021 11 30 网 络首发 1 15 11 王瑶 张丹 王晓梅 黄瓜枯萎病拮抗真菌的筛选与鉴定 J 北方园艺 2021 22 46 52 12 null宜静 王光null 任国华 等 不同品种砧木抗病性鉴定及嫁 图 2 丝瓜新品种抗性鉴定 品种 129 2022 8 试验研究 接对番茄植株生长和果实品质的影响 J 上海农业学报 2021 37 6 108 113 13 柴丹 韩帅 郭江洪 等 不同丝瓜种质资源对枯萎病的抗性 鉴定与评价 J 长江蔬菜 2021 22 71 73 14 关峰 张景云 石博 等 苦瓜枯萎病病原的鉴定与防治药剂 筛选 J 江西农业学报 2021 33 11 68 72 15 林永胜 张武null 周先治 等 43 个丝瓜种质资源枯萎病抗性 的鉴定与评价 J 福建农业科技 2021 52 5 28 32 16 彭家柱 乔燕春 李莲芳 等 节瓜和丝瓜枯萎病菌的分离及 ITS分子检测 J 分子植物育种 2020 18 21 7120 7125 17 郭康迪 苦瓜枯萎病菌的分离鉴定 遗传多样性分析及其拮 抗细菌的筛选 D 郑州 河南农业大学 2019 18 黄爱政 陈仕军 温健新 有棱丝瓜江秀 8号的选育与应用 J 浙江农业科学 2019 60 5 730 731 735 19 陈渝文 赵荣茺 null慕洁 等 甜瓜抗枯萎病的遗传分析 J 分 子植物育种 2022 3 1 18 20 梁金兰 王null正 黄瓜枯萎病菌专化型鉴定及其防治研究 J 河南农业大学学报 1991 3 259 263 21 杨侃侃 刘晓虹 陈宸 等 黄瓜枯萎病研究进展 J 湖南农业 科学 2019 6 121 124 22 Li M Ma G S Lian H et al The effects of Trichoderma on pre venting cucumber fusarium wilt and regulating cucumber physi ology J Journal of Integrative Agriculture 2019 18 3 607 617 23 Zhang H Zhang Q Wang Y et al Characterization of salt tol erance and Fusarium wilt resistance of a sweetpotato mutant J Journal of Integrative Agriculture 2017 16 9 1946 1955 24 Siamak S B Zheng S J Banana fusarium wilt Fusarium oxys porum f sp cubense control and resistance in the context of developing wilt resistant bananas within sustainable produc tion systems J Horticultural Plant Journal 2018 4 5 208 218 25 Liu Z J Du G F Niu Y et al Fusarium wilt resistance iden tification and genetic analysis of Momordica charantia L germplasm J Asian Agricultural Research 2019 11 9 70 72 26 Liu Z J Du G F Niu Y et al Occurrence and control technology of bitter gourd fusarium wilt J Plant Diseases and Pests 2019 10 4 4 6 创两优 450 是湖南鑫盛华丰种业科技有限公司 利用湖南金耘水稻育种研究有限公司与湖南农业大 学共同选育的两系核不育系创 5S 与恢复系 R450 杂 交配组选育而成的两系优质中稻组合 2019年通过湖 南省审定 审定编号 湘审稻20190029 该品种在湖 南省作迟熟中稻栽培 全生育期 133 8 d 比对照Y 两 优1 号短0 3 d 株高114 9 cm 亩有效穗16 8万穗 每穗总粒数 214 7 粒 结实率 82 3 千粒重 23 3 g 区试抗性检测结果 叶瘟 3 7 级 穗瘟 5 4 级 穗瘟损 失率 2 7 级 稻瘟病综合抗性指数 3 3 白叶枯病 施肥水平对创两优450产量的影响初探 摘要 优质中稻新品种创两优 450 在岳阳市种植推广已有 2 年 面积逐年增加 为了明确其适宜肥 料施用量 2021年在君山区广兴洲镇开展了创两优450肥料施用量的大田试验 结果表明 增加基 肥和追肥施用量对创两优 450 有增产作用 创两优 450 作一般栽培时 以每公顷施基肥 750 kg 史 丹利复合肥 追施160 kg尿素最佳 作高产栽培时 以每公顷施基肥 750 kg 复合肥 追施 325 kg 尿 素产量最高 实收产量可达11 06 t hm 2 关键词 创两优450 尿素 复合肥 施肥水平 产量 作者简介 姜林 1972 男 本科 农艺师 从事农业技术推广工作 通讯作者 邓松 1981 男 高级农艺师 从事优质水稻育种工作 E mail 375521770 姜 林 1 周春霞 2 李永林 3 邓 松 4 余 敏 5 黄 雄 5 邓 猛 5 1 岳阳市君山区钱粮湖镇社会事务服务中心 湖南君山414008 2 湖南省岳阳县农业种子技术推广站 湖南岳阳414100 3 湖南省岳阳县农业农村局 湖南岳阳414100 4 湖南龙窖山生态农业股份有限公司 湖南临湘414300 5 湖南鑫盛华丰种业科技有限公司 湖南岳阳414000 130