25种药剂处理对西瓜种传细菌性果斑病菌的抑制效果.pdf

中 中 国 国 瓜 瓜 菜 菜 2021 34 11 17 23 试验研究 收 稿 日 期 2021 05 24 修 回 日 期 2021 08 11 基 金 项 目 国 家 重 点 研 发 计 划 2020YFD1000300 西 甜 瓜 产 业 技 术 体 系 CARS 25 作 者 简 介 唐 思 琪 女 在 读 硕 士 研 究 生 主 要 从 事 种 子 生 产 与 加 工 E mail tsq t 通 信 作 者 戴 思 慧 女 副 教 授 主 要 从 事 西 瓜 甜 瓜 种 子 生 产 与 加 工 E mail daisihui 细 菌 性 果 斑 病 Bacterialfruitblotch BFB 是 为 害 西 甜 瓜 的 重 要 病 害 之 一 也 是 我 国 对 内 和 对 外 的 检 疫 对 象 其 病 原 菌 是 西 瓜 噬 酸 菌 Acidovorax citrulli Ac 属 于 革 兰 氏 染 色 阴 性 菌 是 一 种 活 体 营 养 型 细 菌 该 病 是 典 型 的 种 传 病 害 严 重 影 响 瓜 果 品 质 和 产 量 在 很 多 国 家 和 地 区 都 有 发 生 目 前 在 我 国 的 河 南 内 蒙 古 山 东 陕 西 甘 肃 新 疆 海 南 等 省 自 治 区 均 有 该 病 的 报 道 1 Ac 不 仅 能 侵 染 25 种 药 剂 处 理 对 西 瓜 种 传 细 菌 性 果 斑 病 菌 的 抑 制 效 果 唐 思 琪 孙 小 武 何 长 征 兰 相 祎 蔡 雁 平 戴 思 慧 湖南农业大学园艺学院 长沙 410128 摘 要 细 菌 性 果 斑 病 是 一 种 为 害 西 瓜 生 产 的 种 传 病 害 病 原 菌 为 西 瓜 噬 酸 菌 种 子 消 毒 是 防 治 细 菌 性 果 斑 病 的 首 要 措 施 采 用 平 板 抑 菌 圈 法 从25 种 杀 菌 剂 中 筛 选 出8 种 对 西 瓜 噬 酸 菌 抑 菌 效 果 好 的 药 剂 其 中5000mg L 1 杀 菌 剂1 号AS 平 均 抑 菌 圈 直 径 最 大 用 这 些 药 剂 对 带 菌 西 瓜 种 子 进 行 处 理 结 果 表 明 5000 2500 1250mg L 1 的 杀 菌 剂1 号AS 1000 2000mg L 1 的25 寡 糖 乙 蒜 素ME 100000mg L 1 的80 乙 蒜 素EC 和300 150mg L 1 的3 噻 霉 酮WP 都 有 较 好 的 杀 菌 效 果 其 中25 寡 糖 乙 蒜 素ME 和 杀 菌 剂1 号AS 虽 有 杀 菌 作 用 但 浓 度 过 高 会 影 响 种 子 萌 发 100000mg L 1 80 乙 蒜 素EC 处 理 的 种 子 发 芽 率 与 对 照 相 比 提 高 了22 22 300 150mg L 1 的3 噻 霉 酮WP 处 理 的 种 子 发 芽 率 分 别 比 对 照 提 高58 73 53 97 试 验 结 果 表 明 乙 蒜 素 和 噻 霉 酮 对 西 瓜 嗜 酸 菌 有 抑 菌 作用的同时不会抑制种子萌发 噻霉酮促生效果更佳 可初步作为防治细菌性果斑病的种子处理剂 关键词 西瓜 细菌性果斑病 平板抑菌法 种子处理 杀菌剂 中图分类号 S651 S482 2 文献标志码 A 文章编号 1673 2871 2021 11 017 07 Inhibitory effect of 25 bactericide on watermelon bacterial fruit blotch byseedtreatment TANGSiqi SUNXiaowu HEChangzheng LANXiangyi CAIYanping DAISihui HunanAgriculturalUniversityCollegeofHorticulture Changsha410128 Hunan China Abstract Bacterial fruit blotch Acidovorax citrulli is a highly harmful seed borne disease on watermelon Once the disease occurs it will cause serious loss of watermelon production Seed disinfection is the first measure to prevent and control bacterial fruit blotch In this experiment the plate inhibition zone was used to screen out 8 agents with good antibacterial effect on AC from 25 fungicides Among them 5000 mg L 1 fungicidal No 1 had the largest average bacteriostaticzone Afterthetreatmentofwatermelonseedswiththeseagents itwasfoundthat5000mg L 1 2500mg L 1 1250 mg L 1 fungicide AS 1000 mg L 1 and 2000 mg L 1 25 oligosaccharide Elicin ME The 100 000 mg L 1 80 acetallicinEC 300mg L 1 and150mg L 1 3 thiamethanoneWPshowedgoodgermicidaleffectonnewseeds Although 25 oligosaccharide acetallicin ME and fungicide No 1 AS had germicidal effect they would inhibit new seed germination with too high concentration Compared with the control the germination rate of 100 000 mg L 1 80 ethyl allicin EC was increased by 22 22 and the 3 thiamethanone WP of 300 mg L 1 and 150 mg L 1 were increased by more than 50 Moreover the germination of seeds was obviously promoted by 80 ethyl allicin EC It was found that both ethicallin and thiamelone had antibacterial effect on acidophagocytes and did not inhibit new seed germination thiamelonehadbettereffectonpromotinggrowthandcouldbeusedasseedtreatmentagentforpreventingandcontrolling bacterialfruitblotch Keywords Watermelon Bacterialfruitblotch Platebacteriostatic Seedtreatment Bactericide 17 中 国 瓜 菜 第34 卷 试验研究 葫 芦 科 作 物 在 番 茄 茄 子 等 茄 科 植 物 的 种 子 中 与 西 瓜 套 种 的 甘 薯 中 也 曾 被 检 测 到 2 3 西 瓜 的 苗 期 和 成 株 期 皆 可 发 病 染 病 初 期 子 叶 和 叶 缘 会 出 现 坏 死 斑 点 随 后 感 染 真 叶 形 成 病 斑 果 实 染 病 后 果 皮 会 出 现 斑 点 逐 渐 扩 大 成 片 状 并 深 入 果 肉 感 病 处 可 能 会 出 现 白 色 的 细 菌 分 泌 物 或 渗 出 物 并 伴 随 着 其 他 杂 菌 侵 染 最 终 造 成 全 果 腐 烂 3 BFB 主 要 的 带 菌 媒 介 是 种 子 其 次 是 感 病 植 株 果 实 土 壤 等 其 可 附 着 在 种 子 表 面 并 可 在 种 皮 下 外 胚 乳 层 存 活4 5 个 月 4 染 菌 种 子 是 该 病 害 远 距 离 传 播 的 主 要 途 径 建 立 安 全 有 效 的 种 子 消 毒 处 理 技 术 是 防 控 瓜 类 细菌性果斑病的首要环节 目 前 生 产 中 常 用 的 防 治 细 菌 性 果 斑 病 的 种 子 处 理 方 法 有 物 理 防 治 和 化 学 防 治 物 理 防 治 中 干 热 处 理 是 较 常 见 的 方 式 通 常 将 种 子 70 干 热 处 理72h 对 种 子 外 部 和 内 部 的 病 菌 都 有 一 定 的 消 毒 作 用 5 6 也 有 人 将 处 理 温 度 提 高 至75 处 理 时 间 缩 短 至48h 就 可 以 完 全 杀 灭 西 瓜 细 菌 性 果 斑 病 菌 且 不 抑 制 种 子 萌 发 7 但 干 热 处 理 受 种 子 颗 粒 大 小 限 制 且 会 影 响 种 子 的 耐 贮 藏 性 不 宜 久 放 5 只 能 当 年 种 所 以 物 理 消 毒 并 不 是 最 广 泛 的 应 用 方 法 化 学 药 剂 处 理 是 防 治 种 子 带 菌 的 主 要 措 施 之 一 通 常 在 播 种 前 用40 甲 醛 盐 酸 双 氧 水 过 氧 乙 酸 酸 性 电 解 水 浸 泡 西 瓜 种 子 达 到 杀 菌 目 的 3 8 这 种 方 法 操 作 简 便 成 本 低 但 由 于 药 剂 本 身 的 毒 性 杀 菌 效 果 强 的 药 剂 可 能 会 抑 制 种 子 萌 发 甚 至 给 周 围 环 境以及人畜带来污染 笔 者 选 择 了 常 用 于 防 治 细 菌 性 病 害 的25 种 药 剂 并 对 其 进 行 抑 菌 种 子 发 芽 指 标 测 定 以 期 筛 选 出 安 全 高 效 的 种 子 杀 菌 处 理 剂 为 该 病 害 的 防 治 提 供依据 1 材料与方法 1 1 材料 供 试 品 种 为 黑 媚 娘 有 籽 西 瓜 种 子 由 湖 南 雪 峰 种 业 有 限 公 司 提 供 供 试 病 原 菌 西 瓜 噬 酸 菌 菌 株 Ac 由 中 国 农 业 科 学 院 植 物 保 护 研 究 所 提 供 供 试 培 养 基 KB 培 养 基 蛋 白 胨20g L 1 琼 脂18g L 1 硫 酸 镁1 5g L 1 磷 酸 二 氢 钾1 5g L 1 甘 油10mL L 1 制 做 平 板 时 加15mg L 1 氨 苄 青 霉 素 供 试 药 剂 见 表1 1 2 方法 试 验 于2020 年8 11 月 在 湖 南 农 业 大 学 蔬 菜 瓜类研究所内进行 1 2 1 染 菌 种 子 制 备 1 西 瓜 噬 酸 菌 菌 悬 液 制 作 在 超 净 工 作 台 操 作 用 无 菌 接 种 环 从KB 固 体 培 养 基 上 挑 取 少 许 培 养48h 左 右 的Ac 单 菌 落 轻 弹 于 装 了 35 mLKB 液 体 培 养 基 的 无 菌 离 心 管 中 密 封 好 置 于28 摇 床220r min 1 振 荡 培 养48h 用 分 光 光 度 计 测 定OD600 值 达 到0 6 左 右 备 用 2 制 备 染 菌 种 子 采 用 针 刺 接 种 法 即 用75 酒 精 将 已 成 熟 的 健 康 黑 媚 娘 西 瓜 果 实 表 皮 消 毒 后 用 无 菌 刀 片 切 开 大 小 为4cm 4cm 的 小 孔 将 配 制 好 的 菌 悬 液 用 无 菌 注 射 器 注 入 西 瓜 内 部 然 后 用 保 鲜 膜 封 住 西 瓜 表 皮 伤 口 28 温 度 下 放 置2 4d 西 瓜 表 皮 出 现 病 斑 后 即 为 发 病 可 收 获 染 菌 种 子 洗 净 风 干 后 备 用 3 试 纸 条 初 筛 使 用 燕 麦 嗜 酸 菌 检 测 试 纸 条AISK14800 0025 进 行 检 测 将20 粒 染 菌 西 瓜 种 子 放 入 装 有 20 mL 无 菌 水 的 锥 形 瓶 中 置 于 28 摇 床220r min 1 振 荡 培 养4h 后 倒 入 样 品 袋 将 试 纸 条 放 入 样 品 袋 中 30 min 后 观 察 结 果 测 试 线 与 质 控 线 皆 呈 现 红 色 则 为 阳 性 表 示 种 子 表 面 带 有 Ac 9 4 PCR 法 将 3 中 的 菌 液 作 为 PCR 模 板 10 11 使 用 特 异 性 引 物WBF1 WBF2 对Ac 进 行 扩 表1 供试药剂 编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 名称 15 恶霉灵AS 40 喹啉铜SC 50 多抗 喹啉铜WP 3 噻霉酮WP 46 氢氧化铜WG 50 氯溴异氰尿酸SP 25 寡糖 乙蒜素ME 5 春雷 中生WP 47 春雷 王铜WP 20 吗胍 乙酸铜WP 45 精甲霜灵 王铜WP 杀菌剂1 号AS 枯 草 芽 孢 杆 菌 第 一 细 AS 枯草芽孢杆菌DP 解淀粉芽孢杆菌DP 地衣芽孢杆菌DP 荧光假单胞杆菌DP 0 3 四霉素AS 72 链霉素WP 20 噻菌铜SC 20 噻唑锌SC 30 噻唑锌SC 20 噻森铜SC 8 春雷 噻霉酮WG 80 乙蒜素EC 生产厂家 济南金地农药有限公司 陕西美邦药业集团股份有限公司 兴农药业有限公司 陕西西大华特科技实业有限公司 美国杜邦公司 河北上瑞生物科技有限公司 海南正业中农高科技股份有限公司 陕西标正作物科学有限公司 山东荣邦化工有限公司 黑 龙 江 省 齐 齐 哈 尔 四 友 化 工 有 限 公 司 浙江禾本科技有限公司 中国农业科学院植物保护研究所 广 东 植 物 龙 生 物 技 术 股 份 有 限 公 司 北海强兴生物科技有限公司 北海强兴生物科技有限公司 北海强兴生物科技有限公司 报喜康生物科技有限公司 辽宁微科生物工程股份有限公司 青岛润天生物科技有限公司 浙江龙湾化工有限公司 浙江新农化工股份有限公司 浙江新农化工股份有限公司 浙江东风化工有限公司 陕西西大华特科技实业有限公司 开封大地农化生物科技有限公司 18 第11 期 等 果斑病菌的抑制效果 试验研究 增 引 物 由 长 沙 博 仪 生 物 技 术 有 限 公 司 合 成 PCR 反 应 体 系 上 下 游 引 物 各1 L TaqPCRMasterMix 10 L 无 菌 水 7 L 模 板 1 L 共 20 L 扩 增 程 序 98 预 变 性 3 min 98 变 性 10 s 62 退 火 10s 72 延 长30s 35 个 循 环 72 再 延 长5min 4 保 存 5 苗 期 观 察 随 机 选 取 45 粒 染 菌 西 瓜 种 子 播 种 于 规 格 为 5 10 孔 的 穴 盘 中 使 用 保 湿 盒 隔 离 放 置 于 室 外 生 长 温 度 22 28 观 察 并 记 录 发 病 状 况 以 健 康 西 瓜 种 子 在 同 一 条 件 下 播 种 作为对照 1 2 2 平 板 抑 菌 法 筛 选 药 剂 将 待 测 药 剂 用 纯 水 稀 释4 个 浓 度 备 用 挑 取Ac 单 菌 落 接 种 于KB 液 体 培 养 基 中 置 于 28 摇 床 220 r min 1 振 荡 培 养 36 h 用 无 菌 水 将 菌 悬 液 浓 度 调 至 OD6000 3 0 4 OD6000 3 10 8 cfu mL 1 12 备 用 将 制 备 好 的 菌 悬 液 和 降 温 至40 45 的KB 培 养 基 按1 10 混 匀 每 个 培 养 皿 倒 入 约 20 mL 的 混 菌 KB 培 养 基 凝 固 备 用 每 个 混 菌 培 养 基 中 放 入4 片 直 径5mm 的 灭 菌 滤 纸 片 让 其 轻 轻 贴 附 于 平 板 表 面 其 中 3 片 分 别 滴 入 10 L 相 同 浓 度 的 药 剂 1 片 滴 入 10 L 无 菌 水 作 为 阴 性 对 照 每 个 药 剂 浓 度 3 次 重 复 即 每 个 药 剂 浓 度 设 置 3 个 平 板 培 养 皿 将 封 好 的 培 养 皿 放 入28 恒 温 箱 培 养20h 后 用 十 字 交 叉 法 两 条 直 径 的 平 均 值 测 量 抑 菌 圈 直 径 平 均 抑 菌 圈 直 径 为 5 mm 时 表 明 药 剂 无 抑 菌 作 用 大 于 5 mm 则 表 示 有 抑 菌 作 用 试 验 数 据 采 用Excel2007 SPSS 26 软件处理 1 2 3 药 剂 处 理 染 菌 种 子 的 检 测 通 过 以 上 平 板 试 验 筛 选 得 到 有 显 著 抑 菌 效 果 的 药 剂 对 西 瓜 种 子 进 行 处 理 进 一 步 测 定 种 子 带 菌 量 和 萌 发 情 况 用 不 同 浓 度 的 药 剂 浸 泡 染 菌 种 子 20 30 min 而 后 用 流 水 冲 洗10min 左 右 以 清 水 处 理 种 子 作 为 对 照 每 个 处 理50 粒 种 子 处 理 后 阴 干 备 用 其 中20 粒 进 行 种 子 表 面 带 菌 量 检 测 将 种 子 分 别 浸 泡 于 装 有 20 mL 无 菌 水 的 锥 形 瓶 中 加 入 2 3 滴 吐 温 20 封 口 后 放 置 于4 冰 箱24h 取 上 述 种 子 浸 泡 液20 L 涂 布 于 含 有15mg L 1 氨 苄 青 霉 素 的KB 固 体 培 养 基 中 28 培 养48h 后 统 计 菌 落 量 每 个 处 理3 次 重 复 取30 粒 种 子 进 行 发 芽 试 验 每10 粒 为1 次 重 复 将 种 子 放 于9mm 培 养 皿 内 的 湿 润 滤 纸 上 滤 纸 下 面 放 适 量 干 净 的 白 沙 用 于 保 湿 并 在 种 子 上 加 盖 一 层 湿 润 的 滤 纸 放 入28 恒 温 培 养 箱 黑 暗 培 养 每 12 h 加 水 1 次 保 证 种 子 湿 润 每 隔 24 h 拍 照 统 计 3d 揭 掉 表 面 覆 盖 的 滤 纸 并 统 计 发 芽 势 5d 测定根长计算活力指数 7d 测定发芽率 测 定 公 式 1 种 子 表 面 菌 落 量 测 定 N 代 表 每 个培养皿上的菌落个数 1 代表N 0 代表0 N 10 代表10 N 100 代表100 N 500 能看清单菌落 代表N 500 菌落连成一片 2 发芽指标测定 发芽势 3d 种子发芽数 供试种子数 100 发芽率 7d 发芽种子数 供试种子数 100 发芽指数 Gt Dt 活力指数 发芽率 根长 其中 Gt 为7d 内每日发芽数 Dt 为发芽日数 2 结果与分析 2 1 染菌种子验证 从 图 1 可 看 出 接 种 4 d 后 西 瓜 表 皮 出 现 明 显 病 症 由 图2 可 知 采 用 试 纸 条 对 染 菌 种 子 进 行 检 测 检 测 样 本 与 阳 性 对 照 试 纸 条 的 测 试 线 皆 显 示 红 色 表明样本上携带Ac 图1 接 种 后 发 病 西 瓜 表 皮 注 1 为阴性对照 2 为阳性对照 3 为检测样品 图2 试纸条检测结果 唐思琪 等 25 种药剂处理对西瓜种传细菌性果斑病菌的抑制效果 19 中 国 瓜 菜 第34 卷 试验研究 由 图3 可 知 以 染 菌 种 子 液 作 为 模 板 对Ac 特 异 性 引 物WBF1 WBF2 扩 增 出 来 的PCR 产 物 进 行 琼 脂 糖 电 泳 检 测 结 果 显 示 无 菌 水 对 照 无 条 带 而 染 菌 种 子 液 均 扩 增 到 条 带 条 带 大 小 为 462 bp 与 阳 性 对 照 位 置 条 带 大 小 一 致 表 明 种 子 表 皮 存 在 Ac 播 种 后 每 隔 5 d 观 察 西 瓜 幼 苗 染 菌 西 瓜 种 子 的 幼 苗 子 叶 首 先 出 现 圆 形 晕 圈 小 点 真 叶 长 出 后 也 出 现 多 个 圆 形 斑 点 对 照 未 发 现 上 述 症 状 取 发 病 叶 片 样 品 进 行 细 菌 分 离 试 验 证 明 确 为 Ac 图 4 注 左图为发病西瓜叶面 右图为健康西瓜叶面 图4 发病西瓜与健康西瓜叶片比较 注 M 为Marker 泳 道1 为 无 菌 水 对 照 泳 道2 为 阳 性 对 照 泳 道3 13 为染菌种子液模板条带 图3 染菌种子电泳结果 综 上 所 述 分 别 用 试 纸 条 法 PCR 扩 增 法 苗 期 观 察 法 确 定 了 采 用 针 刺 法 接 种 病 原 菌 于 健 康 西 瓜 可以模拟自然侵染环境 获得带菌的西瓜种子 2 2 不同药剂的平板抑菌效果 由 表2 可 知 在 平 板 抑 菌 筛 查 试 验 中 72 链 霉 素WP 46 氢 氧 化 铜WG 枯 草 芽 孢 杆 菌 第 一 细 AS 地 衣 芽 孢 杆 菌 DP 50 多 抗 喹 啉 铜 WP 20 吗 胍 乙 酸 铜 WP 47 春 雷 王 铜 WP 45 精 甲 霜 灵 王 铜 WP 20 噻 菌 铜 SC 20 噻 唑 锌 SC 30 噻 唑 锌 SC 和 20 噻 森 铜 SC 等 12 种 药 剂 的 平 均 抑菌圈直径 均为5mm 与CK 相同 为无效抑菌 圈 表 明 这 12 种 杀 菌 剂 在 试 验 条 件 下 对 Ac 完 全 没 有 抑 制 效 果 解 淀 粉 芽 孢 杆 菌 DP 枯 草 芽 孢 杆 菌 DP 40 喹 啉 铜 SC 15 恶 霉 灵 AS 50 氯 溴 异 氰 尿 酸SP 等5 种 药 剂 对Ac 有 较 小 的 抑 制 效 果 最 高 浓 度 的 平 均 抑 菌 圈 直 径 均 小 于10mm 随 着 供 试 浓 度 的 降 低 抑 菌 效 果 逐 渐 消 失 8 春 雷 噻 霉 酮 WG 杀 菌 剂 1 号 AS 3 噻 霉 酮 WP 0 3 四 霉 素 AS 5 春 雷 中 生 WP 25 寡 糖 乙 蒜 素 ME 80 乙 蒜 素EC 和 荧 光 假 单 胞 杆 菌DP 等8 种 药 剂 随 着 药 剂 浓 度 的 增 加 平 均 抑 菌 圈 直 径 呈 现 正 增 长 最 高浓度的平均抑菌圈直径均大于10mm 由 表 3 可 知 筛 选 出 平 均 抑 菌 圈 直 径 大 于 10mm 的 有 效 药 剂 及 其 浓 度 即 质 量 浓 度 下 同 为 80 000 mg L 1 的 8 春 雷 噻 霉 酮 WG 5000 2500 1250mg L 1 的 杀 菌 剂1 号AS 300 150mg L 1 的 3 噻 霉 酮 WP 3000 1500 mg L 1 的 0 3 四 霉 素 AS 50000 25000mg L 1 的5 春 雷 中 生WP 2000 mg L 1 的 25 寡 糖 乙 蒜 素 ME 100 000 50000mg L 1 的80 乙 蒜 素EC 和10 10 6 40 10 5 20 10 5 mg L 1 的 荧 光 假 单 胞 杆 菌DP 将 此8 种 有 效 药 剂 及 其 供 试 浓 度 和 清 水 对 照 进 行 邓 肯 分 析 可 知 此 8 种 药 剂 对 Ac 的 抑 菌 效 果 均 与 对 照 达 到 显 著 差 异 水 平 其 中 5000 mg L 1 杀 菌 剂 1 号 AS 抑 菌 效 果 最 好 其 次 是10 10 6 mg L 1 荧 光 假 单 胞 杆 菌DP 2 3 不同药剂处理西瓜染菌种子的结果 将 以 上 平 板 试 验 筛 选 得 到 的 抑 菌 效 果 达 到 显 著 差 异 的8 种 药 剂 进 行 进 一 步 发 芽 试 验 表4 剔 除 发 芽 率 为 0 的 药 剂 筛 选 得 到 杀 菌 剂 1 号 AS 20 第11 期 等 果斑病菌的抑制效果 试验研究 表2 不同药剂的平板抑菌圈直径 药剂名称 40 喹啉铜SC 15 恶霉灵AS 5 春雷 中生WP 3 噻霉酮WP 25 寡糖 乙蒜素ME 50 氯溴异氰尿酸SP 荧光假单胞杆菌DP 0 3 四霉素AS 杀菌剂1 号AS 47 春雷 王铜WP 20 噻森铜SC 30 噻唑锌SC 80 乙蒜素EC 质量浓度 mg L 1 400000 200000 100000 5000 150000 75000 37500 18750 50000 25000 12500 6250 300 150 75 37 5 2000 1000 500 250 500000 250000 125000 62500 10 10 6 40 10 5 20 10 5 10 10 5 3000 1500 750 357 5000 2500 1250 625 470000 235000 117500 58750 200000 100000 50000 25000 300000 150000 75000 37500 100000 50000 25000 12500 平均抑菌圈直径 mm 7 75 7 92 7 60 6 41 9 66 8 00 5 00 5 00 12 47 10 19 5 00 5 00 16 26 11 03 9 09 5 00 10 75 7 30 7 35 5 00 8 76 6 91 5 00 5 00 19 59 14 39 14 78 10 00 18 30 12 64 8 99 8 31 24 53 18 43 13 72 8 73 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 16 81 11 89 9 11 6 44 药剂名称 46 氢氧化铜WG 枯草芽孢杆菌 第一细 AS 枯草芽孢杆菌DP 地衣芽孢杆菌DP 解淀粉芽孢杆菌DP 50 多抗 喹啉铜WP 20 吗胍 乙酸铜WP 72 链霉素WP 45 精甲霜灵 王铜 WP 20 噻菌铜SC 8 春雷 噻霉酮WG 20 噻唑锌SC CK 质量浓度 mg L 1 460000 230000 115000 57500 60 10 5 12 10 5 60 10 4 30 10 4 10 10 6 20 10 5 10 10 5 50 10 4 10 10 6 20 10 5 10 10 5 50 10 4 10 10 6 20 10 5 10 10 5 50 10 4 500000 250000 125000 62500 200000 100000 50000 25000 720000 360000 180000 90000 450000 225000 112500 56250 200000 100000 50000 25000 80000 40000 20000 10000 200000 100000 50000 25000 清水 平均抑菌圈直径 mm 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 7 29 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 6 81 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 11 28 7 39 5 39 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 5 00 25 寡 糖 乙 蒜 素 ME 80 乙 蒜 素 EC 3 噻 霉 酮 WP 5 春 雷 中 生 等 5 种 药 剂 对 西 瓜 种 子 进 行 处 理 由 表 4 可 知 5 春 雷 中 生 WP 处 理 染 菌 种 子 后 平 板 菌 落 量 最 低 的 均 大 于 10 个 效 果 最 差 这 与 平 板 抑 菌 试 验 中 表 现 的 结 果 不 一 致 也 反 映 出 室 内 抑 菌 试 验 的 局 限 性 5000 2500 1250 mg L 1 的 杀 菌 剂 1 号 AS 1000 2000 mg L 1 的 25 寡 糖 乙 蒜 素 ME 100000mg L 1 的80 乙 蒜 素EC 和300 唐思琪 等 25 种药剂处理对西瓜种传细菌性果斑病菌的抑制效果 21 中 国 瓜 菜 第34 卷 试验研究 150mg L 1 的3 噻 霉 酮WP 的 平 板 菌 落 量 均 为0 这 4 种 药 剂 及 其 有 效 浓 度 在 平 板 抑 菌 和 实 际 处 理 染 菌 种 子 中 都 表 现 出 较 好 的 杀 菌 效 果 在 种 子 萌 发 方 面 当25 寡 糖 乙 蒜 素ME 的 供 试 浓 度 越 高 时 种 子 发 芽 率 就 越 低 供 试 最 高 浓 度 无 发 芽 种 子 杀 菌 剂1 号AS 对 种 子 杀 菌 效 果 最 好 但 对 种 子 萌 发 有 抑 制 与 对 照 相 比 100000mg L 1 80 乙 蒜 素 EC 处 理 种 子 后 发 芽 率 提 高22 22 活 力 指 数 提 高 100 93 300 150mg L 1 的3 噻 霉 酮WP 处 理 种 子 的 发 芽 率 与 对 照 相 比 分 别 提 高58 73 53 97 活 力 指 数 均 高 于 对 照 综 上 所 述 高 浓 度 的 噻 霉 酮 对 细 菌 性 果 斑 病 有 明 显 的 抑 制 效 果 同 时 对 种 子 发 芽没有影响 反而对种子有明显的促生效果 3 讨论与结论 在 试 验 中 研 究 者 们 多 数 使 用 浓 度 1 10 8 3 表4 药剂处理对西瓜染菌种子影响 药剂名称 杀菌剂1 号AS 25 寡糖 乙蒜素ME 80 乙蒜素EC 3 噻霉酮WP 5 春雷 中生WP CK 质量浓度 mg L 1 5000 0 2500 0 1250 0 625 0 2000 0 1000 0 500 0 250 0 100000 0 50000 0 25000 0 12500 0 300 0 150 0 75 0 37 5 50000 0 25000 0 12500 0 6250 0 0 0 带菌量 发芽势 0b 0b 10b 37ab 0b 3b 83a 97a 60ab 47ab 83a 87a 97a 93a 100a 90a 3b 0b 3b 3b 60ab 发芽率 0b 3b 40ab 43ab 0b 13b 83a 97a 77a 73a 93a 97a 100a 97a 100a 93a 17b 20b 27b 10b 63ab 发芽指数 0 00h 0 20h 3 00fh 11 00def 0 00h 1 20gh 19 33abcd 27 33a 15 75bcde 13 64cde 22 33abc 23 58ab 22 87abc 26 83a 25 00ab 23 42ab 1 33gh 1 39gh 2 17gh 0 58gh 8 92efh 活力指数 0 00c 0 00c 0 05c 0 25bc 0 00c 0 01c 1 56ab 2 83a 2 15a 0 94ab 2 03a 2 29a 3 28a 2 73a 2 94a 1 00ab 0 45abc 0 50a 0 77ab 0 25cb 1 07ab 表3 不 同 药 剂 的 平 板 抑 菌 圈 直 径 显 著 性 分 析 编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 药剂名称 5 春雷 中生WP 3 噻霉酮WP 25 寡糖 乙蒜素ME 0 3 四霉素AS 杀菌剂1 号 荧光假单胞杆菌DP 80 乙蒜素EC 8 春雷 噻霉酮WG CK 质量浓度 mg L 1 50000 25000 300 150 2000 3000 1500 5000 2500 1250 10 10 6 40 10 5 20 10 5 100000 50000 80000 0 平均抑菌圈直径 mm 12 47hij 10 19k 16 26de 11 03ijk 10 75jk 18 30bc 12 64ghi 24 53a 18 43bc 13 72fgh 19 59b 14 39fg 14 78ef 16 81cd 11 89ijk 11 28ijk 5 00l 注 表 中 同 列 数 字 后 不 同 小 写 字 母 表 示 处 理 间 在0 05 水 平 差 异 显著 下同 10 8 cfu mL 1 的 菌 液 浸 泡 种 子 1 2 h 来 制 备 染 菌 种 子 11 这 种 方 法 快 速 简 便 在 本 试 验 中 使 用 了 试 纸 条 法 PCR 法 幼 苗 检 测 法 3 种 方 法 检 测 针 刺 法 接 种 病 原 菌 于 健 康 西 瓜 中 的 侵 染 效 果 使 用 针 刺 法 接 种 西 瓜 可 以 模 拟 自 然 侵 染 环 境 使 西 瓜 表 皮 出 现 病 症 造 成 果 实 内 部 腐 烂 西 瓜 种 子 感 染 病 原 菌 由 此 表 明 针 刺 法 接 种 健 康 西 瓜 可 用 于 不 确 定 病 原 菌 是 否 有 活 性 的 情 况 3 d 左 右 即 可 观 察 到 西 瓜 发 病 状 况 同 时 能 够 达 到 观 察 病 原 菌 的 致 病 性 和 制 备 染 菌西瓜种子的目的 笔 者 采 用 室 内 平 板 抑 菌 圈 法 比 较 了 不 同 杀 菌 剂 对Ac 的 平 板 抑 菌 效 果 与 处 理 染 菌 种 子 的 杀 菌 效 果 试 验 结 果 表 明 46 氢 氧 化 铜 WG 20 吗 胍 乙 酸 铜 WP 47 春 雷 霉 素 王 铜 WP 45 精 甲 霜 22 第11 期 等 果斑病菌的抑制效果 试验研究 灵 王 铜 WP 20 噻 菌 铜 SC 和 20 噻 森 铜 SC 等 铜 制 剂 在 平 板 抑 菌 试 验 中 对Ac 没 有 表 现 出 抑 菌 效 果 不 过 有 些 铜 制 剂 在 西 甜 瓜 苗 期 和 成 株 期 使 用 能 够 起 到 一 定 防 治 作 用 12 也 有 学 者 发 现 纳 米 级 铜 制 剂 硫 酸 铜 氢 氧 化 铜 在 一 定 浓 度 时 能 对 Ac 产 生 抑 菌 作 用 其 中 氢 氧 化 铜 效 果 最 佳 能 够 使 菌 体 出 现 孔 洞 扭 曲 变 形 等 破 损 现 象 13 使 用 纳 米 级 原 料 或 许 是 农 药 制 药 的 一 个 新 方 向 生 物 菌 型 药 剂 地 衣 芽 孢 杆 菌 DP 枯 草 芽 孢 杆 菌 DP 抗 生 素 型 生 物 药 剂 72 链 霉 素 WP 对 Ac 没 有 抑 菌 效 果 这 与 现 有 的 枯 草 芽 孢 杆 菌 和 链 霉 素 防 治 Ac 的 报 道 有 差 异 14 猜 测 是 由 于 不 同 厂 家 生 产 菌 株 差 异 造 成 的 通 常 在 平 板 抑 菌 试 验 中 不 同 生 产 厂 家 同 一 厂 家