番茄茎基腐病病原菌分离及其防治药剂筛选.pdf

山东农业科学 2020 52 5 105 109 Shandong Agricultural Sciences DOI 10 14083 j issn 1001 4942 2020 05 020 收稿日期 2019 12 27 基金项目 山东省重点研发计划项目 2018GNC111013 作者简介 尉菊萍 1992 女 山西大同人 硕士 助理农艺师 主要从事蔬菜栽培研究 E mail yjpsmile 163 com 番茄茎基腐病病原菌分离及其防治药剂筛选 尉菊萍 王洪梅 刘磊 吕令华 菏泽市农业科学院 山东菏泽 274000 摘要 为筛选防治番茄茎基腐病的有效药剂 本研究从番茄病株中分离病原菌 测定其致病性 同时评价 9种市售药剂对该病病原菌的室内毒力 并从中选择室内毒力大的药剂进行番茄茎基腐病的田间防效试验 结果表明 番茄茎基腐病的病原菌归属于细菌 9种供试药剂中 50 琥铜 霜脲氰WP的毒力最大 EC50为 432 76 mg L 高浓度下的抑制率可达100 田间试验结果表明该药剂防治茎基腐病的效果最好 能显著降 低病株率 防效达85 71 因此 50 琥铜 霜脲氰WP对番茄茎基腐病病原菌具有较好的抑制作用 可作 为田间防治该病的候选药剂 关键词 番茄茎基腐病 致病性测定 毒力测定 防治效果 中图分类号 S482 2 文献标识号 A 文章编号 1001 4942 2020 05 0105 05 Pathogen Isolation of Tomato Stem Based Rot and Screening of Control Bactericides Yu Juping Wang Hongmei Liu Lei L Linghua Heze Academy of Agricultural Sciences Heze 274000 China Abstract In order to screen out effective bactericides for tomato stem based rot the pathogenic strains were isolated from infected plants and their pathogenicity was determined The effect of 9 common bacteri cides in the market on tomato stem based rot was determined in laboratory in order to screen the effective one for field tests The results showed that the pathogen of tomato stem based rot belonged to bacteria Among the 9 tested bactericides 50 cuprous succinate hydrocyanide had the most virulence with the EC50 as 432 76 mg L and its inhibition rate was 100 under high concentration The results of field experiment also showed that 50 cuprous succinate hydrocyanide WP had the best control effect on stem based rot which could significantly decrease the diseased plant rate with the control efficiency as 85 71 Therefore 50 cuprous succinate hydrocyanide WP had better inhibitory effect on the pathogen of tomato stem based rot so it could be used as a candidate agent for controlling tomato stem based rot in field Keywords Tomato stem based rot Pathogenicity test Toxicity determination Control effect 近年来 农业产业结构调整以及市场需求的 增加促进了设施番茄产业的发展 但由于全球气 候变暖 同时缺乏合理的轮作倒茬制度 番茄茎基 腐病发生程度逐年加重 果实品质和产量受到严 重影响 这已成为限制设施生产的重要问题 番 茄茎基腐病主要危害植株茎基部 一般在第1 3 穗果时发生 发病初期茎基部土表以上3 5 cm 处出现深褐色病斑 1 茎秆发病部位向内凹陷 皮层腐烂 地上部叶片变黄 出现中午萎蔫 早晚 恢复的现象 2 但后期萎蔫不能恢复 直至整株 枯死 3 4 病部常形成黑褐色 大小不一的菌 核 5 可蔓延至主侧根 湿度大时上有白色霉层 出现 6 该病是土传病害 病菌在土壤中越冬 腐生性强 可在土中生存2 3年 7 8 导致番茄植株发生茎基腐病的因素有很多 如高温 田间管理粗放 根茎部有伤口等 另外 秧苗定植后浇水过多 土壤黏重 通风排湿不畅等 也会引起该病发生 2 特别是大棚越夏番茄定 植时 正处于高温时期 土壤水分蒸发快 加之浇 水过多 可形成高温高湿的棚内环境 极易引起植 株发病 轻者病株率为5 10 一般为 20 30 严重时达50 以上 目前 化学防 治仍是防治番茄茎基腐病的主要方法 祁凯 等 3 研究不同药剂对番茄茎基腐病室内活性的 影响时发现 双胍三辛烷基苯磺酸盐抑菌活性最 强 可应用于生产 王广印等 9 采用 可立克 药 肥对秋番茄秧苗进行喷灌根处理后茎基腐病发病 率为零 棉隆 生物菌 处理土壤可使发病率降 低79 62 本研究对番茄茎基腐病病原菌进行 分离和致病性测定 评价9种市售药剂对该病病 原菌的室内毒力 并选择室内毒力大的药剂进行 番茄茎基腐病的田间防效试验 以期筛选出有效 可用于生产的番茄茎基腐病防治药剂 1 材料与方法 1 1 试验材料 供试番茄品种菏粉2号 正常植株和病株均 种植于菏泽市农业科学院蔬菜试验田 病株具有 典型茎基腐病表现 供试YEB液体培养基 每升含牛肉浸膏5 0 g 酵母浸膏1 0 g 蛋白胨5 0 g 蔗糖5 0 g Mg SO4 H2O 0 5 g YEB固体培养基 在上述配方 基础上加入15 0 g琼脂 以上两种培养基均经 121 灭菌20 min后用于病原菌的分离 纯化及 培养 1 2 主要试剂 供试药剂 25 嘧菌酯悬浮剂 江西欧美生物 科技有限公司产品 32 5 苯甲 嘧菌酯悬浮剂 江西众和化工有限公司产品 240 g L噻呋酰胺 悬浮剂 江西众和化工有限公司产品 30 烯酰 甲霜灵水分散粒剂 广东中迅农科股份有限公司 产品 50 琥铜 霜脲氰可湿性粉剂 河北省万泉 农药厂产品 50 氯溴异氰尿酸可溶粉剂 南京南 农农药科技发展有限公司产品 30 恶霉灵水剂 中农立华 天津 农用化学品有限公司产品 30 甲霜 噁霉灵水剂 中农立华 天津 农用化学品 有限公司产品 12 中生菌素可湿性粉剂 福建凯 立生物制品有限公司产品 1 3 试验方法 1 3 1 病原菌的分离与纯化 将病株在自来水 下冲洗干净 75 酒精浸泡30 s 再置于无菌操作 台中 用灭菌刀片切取茎基部病健交界处1 cm左 右茎段 放入YEB液体培养基 于37 200 r min摇床中振荡培养12 h 使用灭菌接种环蘸 取上述培养溶液 采用平板划线法 涂布于YEB 固体培养基上 28 黑暗 倒置培养12 h 挑选 具有代表性的单菌落进行纯化培养 对纯化后的 目标菌株编号 并采用斜面保存法 4 保存备用 1 3 2 病原菌致病性测定 根据柯赫氏法则进 行接种试验 10 测定纯化菌株的致病性 具体步 骤如下 将纯化菌株培养12 h后配制成菌悬液 接种前浇足水 用玻璃棒在距茎基部2 cm处扎1 个深约3 cm的孔 用移液枪将10 mL菌悬液注入 孔内 11 以无菌水为对照 重复3次 每重复包含 10株幼苗 接种后置于温室中培养 白天24 27 夜间20 22 常规水分管理 7 d后调查 发病情况 观察是否出现褐色病斑 萎蔫和腐烂等 症状 并计算发病率 将发病部位按照1 2 1的 方法再进行分离培养 观察该部位分离得到的病 菌与接种菌是否一致 1 3 3 供试药剂的室内毒力测定 采用生长速 率法进行室内毒力测定 12 将各药剂用无菌水 分别配制成10倍于试验所需浓度 表1 的母液 以1 9的体积比分别加至不同的YEB培养基 灭 菌后冷却至45 中 充分摇匀后制成含药平板 以加入等量无菌水的为对照 重复3次 表1 供试药剂浓度 mg L 药剂低浓度中浓度高浓度 25 嘧菌酯SC 160 320 480 32 5 苯甲 嘧菌酯SC 320 640 960 240 g L噻呋酰胺SC 160 320 480 30 烯酰 甲霜灵WG 400 800 1200 50 琥铜 霜脲氰WP 480 960 1440 50 氯溴异氰尿酸SP 320 640 960 30 恶霉灵AS 100 200 300 30 甲霜 噁霉灵AS 160 320 480 12 中生菌素WP 160 320 480 取涂布培养病原菌的YEB固体培养基 用直 径0 5 cm的打孔器打取菌饼 再用接种针挑取菌 601 山东农业科学 第52卷 饼至含药平板中央 28 黑暗培养7 d后 采用 十字交叉法测量菌落直径 计算菌落生长抑制率 计算公式 菌落生长抑制率 对照菌落直径 处理菌落直径 对照菌落直径 菌饼直径 100 根据药剂浓度与菌落直径的关系 将药剂抑 制率转换成抑制几率值 y 药剂各浓度转换成 以10为底的对数值 x 计算毒力回归方程 相 关系数和EC50值 1 3 4 田间防治试验 于菏泽市农业科学院蔬 菜试验田大拱棚进行 选择室内毒力试验中毒力 较大的50 琥铜 霜脲氰WP 30 甲霜 噁霉 灵AS和30 恶霉灵AS 按照田间推荐使用浓度 配制上述药剂 即50 琥铜 霜脲氰WP 700倍 液 30 甲霜 噁霉灵AS 1 000倍液 30 恶霉 灵AS 1 000倍液 育苗前以1 500的比例拌入基 质土壤 并在定植当天灌至幼苗根部 11 每株灌 入50 mL 以浇等量水为对照 每处理重复3次 小区面积20 m2 定植75株番茄幼苗 随机区组排 列 15 d后记录发病株数 并计算病株率和防 效 13 计算公式 病株率 发病株数总株数 100 防效 对照区病株数 处理区病株数对照区病株数 100 1 4 数据分析 采用Microsoft Excel 2013和DPS 15 0软件 进行数据统计与分析 2 结果与分析 2 1 病原菌培养性状观察 在YEB固体培养基上28 黑暗 倒置培养 12 h后 病原菌单菌落直径为0 1 0 2 cm 菌落 呈圆形 乳白色 表面光滑隆起 边缘整齐 菌落聚 集区域培养基不变色 图1 图1 番茄茎基腐病病原菌的培养性状 2 2 病原菌致病性测定 由图2可以看出 接种7 d后 番茄幼苗表现 出明显的感病特征 与对照相比 感病幼苗发生 萎蔫 长势较弱 叶片变黄 茎基部中空纤细 出现 褐色病斑且有轻微腐烂现象 这与田间感染番茄 A 重复 B 重复 C 重复 D 对照 图2 接种病原菌后番茄幼苗的生长状况 701 第5期 尉菊萍 等 番茄茎基腐病病原菌分离及其防治药剂筛选 茎基腐病植株表现症状一致 经计算 3个重复 的发病率分别为80 90 80 平均发病率为 83 33 表2 表2 接种病原菌后番茄幼苗的发病情况 处理发病株数 株 发病率 对照0 0 重复 8 80 重复 9 90 重复 8 80 挑取上述病株发病部位进行病菌分离 培养 后发现 该病菌与接种菌形态基本一致 根据柯赫 氏法则 判定该菌为番茄茎基腐病病原菌 2 3 供试药剂室内毒力测定结果 由表3可以看出 培养7 d后 对照的菌落直 径为1 44 cm 各药剂处理的则在0 50 1 40 cm 之间 因此 不同药剂对菌落生长均有一定抑制作 用 药剂使用浓度越高 对番茄茎基腐病病原菌 的抑制率越大 且部分药剂在不同浓度下的抑制 率差异达显著水平 9种药剂中 50 琥铜 霜 脲氰WP对病原菌的抑制效果最好 高浓度 1 440 mg L 下的抑制率达到100 低浓度 480 mg L 下的抑制效果较差 30 甲霜 噁霉 灵AS的抑制效果次之 其在160 320 480 mg L 时的抑制率分别为38 21 58 80 78 23 12 中生菌素WP抑制效果最差 其在160 320 480 mg L时的抑制率仅为4 93 7 05 27 12 EC50可用来表示药剂的毒力大小 其值越小 毒力越大 由表3可以看出 30 烯酰 甲霜灵 WG的EC50值最高 为11 492 12 mg L 毒力最 小 50 琥铜 霜脲氰WP的EC50值为432 76 mg L 毒力最大 是30 烯酰 甲霜灵WG的27 倍 30 恶霉灵AS的EC50值为492 82 mg L 毒 力较大 是30 烯酰 甲霜灵WG的23倍 30 甲霜 噁霉灵AS的EC50值为569 39 mg L 毒力 也较大 其余药剂的毒力一般 2 4 田间防治试验结果 由表4可以看出 对照的番茄幼苗发病率较 高 病株率达28 00 显著高于施药处理 施药 15 d后 3种药剂对茎基腐病都有一定的防治效 果 其中 50 琥铜 霜脲氰的病株率最低 仅为 4 40 防效达85 71 显著高于其它药剂处 理 30 甲霜 噁霉灵与30 恶霉灵之间的防效 差异不显著 表3 不同浓度供试药剂对番茄茎 基腐病病原菌的室内毒力测定 药剂浓度 mg L 菌落直径 cm 抑制率 毒力回归方程相关系数r EC50 mg L CK 1 44 160 1 37 8 10 0 57c y 1 6216x 0 0400 0 8570 1282 33 25 嘧菌酯SC 320 1 33 12 33 0 49b 480 1 18 28 17 0 93a 320 1 19 27 64 0 67c y 1 1399x 1 5768 0 9480 1006 89 32 5 苯甲 嘧菌酯SC 480 1 03 44 02 1 30b 960 1 00 47 18 1 57a 160 1 16 30 28 2 05b y 0 6163x 3 0835 0 6863 1287 36 240 g L噻呋酰胺SC 320 1 15 31 34 2 03b 480 1 05 42 43 2 54a 400 1 32 13 91 1 88c y 0 7699x 1 8739 0 8080 11492 12 30 烯酰 甲霜灵WG 800 1 30 16 02 0 43b 1200 1 22 24 47 1 14a 480 1 00 48 29 2 89b y 10 169x 21 808 0 9269 432 76 50 琥铜 霜脲氰WP 960 0 53 97 36 1 71a 1440 0 50 100 00 0 00a 320 1 32 13 91 1 89c y 1 7629x 0 5204 0 9888 1353 32 50 氯溴异氰尿酸SP 640 1 20 26 59 1 82b 960 1 06 40 8 51 38a 100 1 19 27 64 2 01c y 1 3104x 1 4715 0 8955 492 82 30 恶霉灵AS 200 1 11 35 57 1 94b 300 0 95 52 47 1 18a 160 1 09 38 21 1 55c y 2 0887x 0 6548 0 9720 569 39 30 甲霜 噁霉灵AS 320 0 89 58 80 1 81b 480 0 73 78 23 2 48a 160 1 40 4 93 1 73b y 2 018x 1 2180 0 7591 1205 87 12 中生菌素WP 320 1 38 7 05 1 53b 480 1 19 27 12 2 03a 注 同一药剂抑制率后不同小写字母表示差异显著 P 0 05 表4 不同药剂对番茄茎基腐病的防效分析 处理病株数病株率 防效 CK 21 28 00 2 23a 50 琥铜 霜脲氰WP 3 3 4 40 0 77c 85 71 2 75a 30 甲霜 噁霉灵AS 7 9 31 1 30b 66 67 4 77b 30 恶霉灵AS 8 10 64 1 34b 61 90 4 77b 注 同列数据后不同字母表示处理间差异显著 P 0 05 3 讨论与结论 本试验通过对试验田内番茄茎基腐病病株进 行病原菌的分离纯化和柯赫氏法则验证 确定分 离菌株为番茄茎基腐病病原菌 经观察 该病原 菌的菌落形态同细菌一致 且病株病斑处无白色 霉层及菌核出现 进而推断其归属于细菌界 吴 801 山东农业科学 第52卷 丽敏 7 张怡 14 等认为番茄茎基腐病病原菌分别 为茄丝核菌 Rhizoctonia solani 和镰孢属茄镰孢 均属于真菌 这与本试验结果明显不同 分析其 原因可能是茎基腐病的病原菌并非仅有一种 可 能既包括细菌 也包括真菌 而本试验得到的病 原菌形态上更接近细菌 推测可能与植株移栽方 式 土壤环境及取样时期有关 后续研究将对该 病原菌进行分子生物学鉴定加以验证 本研究发现9种供试药剂对番茄茎基腐病病 原菌均有一定抑制作用 且抑制能力与药剂使用 浓度正相关 其中50 琥铜 霜脲氰WP表现 出较强的抑制效果 高浓度下的EC50值最低 毒 力最大 抑制率可达100 田间试验结果同样 表明50 琥铜 霜脲氰WP防治番茄茎基腐病 的效果最好 可有效降低病株率 防效达85 71 显著高于其它药剂 综合来看 9种供试药剂中 50 琥铜 霜脲氰WP对番茄茎基腐病的防治效 果最佳 30 恶霉灵AS和30 甲霜 噁霉灵AS 较好 50 琥铜 霜脲氰主治细菌性病害 生产上 多用于防治黄瓜霜霉病和细菌性角斑病 尚未有 关于防治番茄茎基腐病的研究报道 本研究中 番茄茎基腐病的病原菌属于细菌 所以该药剂的 防治效果较好 具体作用机理仍有待于进一步研 究 此外 霜脲氰在土壤中消解速度较快 属于易 降解农药 使用后对蔬菜较安全 15 16 因此 50 琥铜 霜脲氰可湿性粉剂可作为田间防治番 茄茎基腐病的候选药剂 但在生产中还应该结合 调整倒茬制度 加强田间管理等方法进行综合防 治 参 考 文 献 1 刘志恒 马家瑞 杨红 等 番茄茎基腐病病原菌的生物学特 性 J 植物保护 2010 36 2 94 97 101 2 刘志福 冀西北大棚越夏番茄茎基腐病综合防治技术 J 农业与技术 2015 35 7 105 106 3 祁凯 张博 张悦丽 等 几种药剂对番茄茎基腐病的室内和 田间防治效果 J 山东农业科学 2018 50 2 116 118 4 王欣 温室秋冬茬番茄茎基腐病的预防 J 农业技术与装 备 2017 8 56 57 5 陈永杰 陈涛 薄晓峰 等 药土围根法预防番茄茎基腐病的 效果 J 山西农业科学 2019 47 2 262 264 6 孙淑敏 警惕番茄茎基腐病发生 N 江苏农业科技报 2015 10 28 7 吴丽敏 安心 番茄茎基腐病致病菌的鉴定 J 吉林蔬菜 2014 1 38 39 8 王贵仁 4措施防治番茄茎基腐病 N 河北农民报 2016 03 01 9 王广印 郭卫丽 陈碧华 等 大棚秋番茄茎基腐病防控试验 J 西北农业学报 2019 28 1 66 78 10 王妮 尹显慧 彭丽娟 等 辣椒炭疽病病原鉴定及其杀菌剂 毒力测定 J 植物保护 2019 45 4 216 223 11 韩帅 张河庆 吴婕 等 四川主要辣椒栽培品种对疫病的抗 性鉴定及评价 J 中国蔬菜 2019 7 56 61 12 戴启东 李广旭 杨华 等 6种杀菌剂对蓝莓采后灰葡萄孢 菌的室内毒力测定 J 辽宁农业科学 2019 4 19 22 13 甘林 卢学松 兰成忠 等 9种除草剂对玉米田杂草的防除 效果及其安全性评价 J OL 农药学学报 1 12 2019 12 25 https doi org 10 16801 j issn 1008 7303 2020 0029 14 张怡 李幸 董正伟 等 番茄茎腐病菌的分子鉴定及致病力 检测 J 植物保护 2018 44 4 132 137 15 张汝美 王长强 陈永健 60 丙森锌 霜脲氰可湿性粉剂 对黄瓜霜霉病的防治效果 J 山东农业科学 2009 10 64 65 16 刘同金 李瑞娟 宋国春 等 25 甲霜灵 霜脲氰水分散 粒剂在辣椒和土壤中的残留行为及安全使用评价 J 山 东农业科学 2017 49 7 149 154 901 第5期 尉菊萍 等 番茄茎基腐病病原菌分离及其防治药剂筛选