黑龙江省马铃薯晚疫病菌的交配型和multi-locus基因型分析.pdf

黑龙江省马铃薯晚疫病菌的交配型和 multi -locus 基因型分析 张铉哲 韩晓旭 郭衍锦 李 璐 李媛媛 （东北农业大学农学院，黑龙江哈尔滨 150030） 摘 要：20152017年在黑龙江省哈尔滨市、绥化市和齐齐哈尔市各马铃薯主产区共采集分离了126株马铃薯晚疫病菌菌  株，测定交配型、mtDNA单倍型、SSR基因型并进行multi-locus基因型分析。结果显示，126株菌株中发现了A1、A2、自 育型3种交配型，分别占分离菌株总数的88.1、6.3和5.6。126株菌株中共鉴定出a和a两种mtDNA单倍型，分别 占分离菌株总数的17.5和82.5。126株菌株中共鉴定出7种SSR基因型，分别为F-01、F-02、F-03、F-05、F-06、D-03 和G-02，其中F-01基因型（77.8）为优势基因型。根据马铃薯晚疫病菌的mtDNA单倍型和SSR基因型，共划分了9种 multi-locus基因型，其中multi-locus基因型A（65.1）是黑龙江省发现的优势基因型。20152017年黑龙江省马铃薯晚疫 病菌群体结构逐年复杂，绥化市马铃薯晚疫病菌群体结构最为复杂。 关键词：马铃薯晚疫病菌；交配型；mtDNA单倍型；SSR基因型；multi-locus基因型 型，其出现频率仅为2.2。王腾等（2016）对 20112013年在黑龙江采集的菌株进行交配型测 定，A1交配型占菌株总数的51.63，其余为A2 交配型。这些研究表明晚疫病菌由于不同交配型的 出现，可以在田间进行有性生殖和无性繁殖，导致 晚疫病菌群体结构发生变化。晚疫病菌群体结构变 化对晚疫病害的防治提出了新的挑战，因此研究马 铃薯晚疫病菌群体遗传结构变化具有重要意义。 线粒体基因组具有结构简单、无组织特异性等 优点，采用检测线粒体多态性方法研究晚疫病菌群 体遗传结构变化效果更佳（May & Ristino，2004）。 对马铃薯晚疫病菌线粒体DNA（mtDNA）多态性 进行研究，逐步成为国内外研究热点。Griffith和 Shaw（1998）采用改进PCR-RFLP方法将线粒体单 倍型分为a、a、b、b。Rojas和Kirk（2016） 研究表明，20082010年在密歇根州采集分离的 124株致病疫霉的mtDNA单倍型均为a型。Tian 等（2016）鉴定了中国西北地区采集分离的马铃 薯晚疫病菌mtDNA单倍型，结果检测到a、a 和b 3种单倍型，其中a为优势基因型。徐生军 （2010）利用PCR-RFLP方法，对黑龙江省采集分 离的马铃薯晚疫病菌进行mtDNA单倍型检测，共 张铉哲，男，博士，教授，硕士生导师，专业方向：植物病害综合防治， E-mail：zhe3850163.com   收稿日期：2017-11-13；接受日期：2018-03-06 基金项目：黑龙江省自然科学基金项目（C2016019） ，黑龙江省经济作 物现代农业产业技术协同创新体系项目（HNWJZTX201701） 中国是马铃薯生产大国，马铃薯已成为继小 麦、玉米之后的第三大作物，种植面积和产量居于 世界首位（王立 等，2013） 。黑龙江省因得天独厚 的冷凉气候和地理条件，成为我国马铃薯主产区之 一（关红颖，2011） 。然而，近几年由于黑龙江省 降雨量大等天气原因，马铃薯晚疫病发生十分严重。 马铃薯晚疫病是由致病疫霉Phytophthora  infestans引起的马铃薯毁灭性病害，可造成巨大的 经济损失（金光辉 等，2017） 。马铃薯晚疫病菌通 过不同交配型菌株之间异宗配合进行有性生殖，有 性生殖可产生卵孢子，卵孢子可在土壤中越冬，成 为翌年的初侵染源。不同交配型同时存在时说明马 铃薯晚疫病菌适应性和变异性增强（闵凡祥 等， 2010）。Gallegly和Galindo（1958）在墨西哥中部首 先发现了A1和A2交配型。张志铭等（1996）首 次在国内报道了A2交配型菌株。朱杰华（2004） 首次在黑龙江采集分离的菌株中鉴定出A2交配  58   新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控  58   研究论文 中 国 蔬 菜     CHINA VEGETABLES 2018（4）：58 - 64 检测到a和a两种单倍型。可见，4种单倍型在 不同国家和地区的分布具有一定差异。 SSR标记具有多态性高、重复性好、数量丰富、 发生频率高、批量操作等优点（李建武，2011） ， 近些年成为研究马铃薯晚疫病菌群体遗传多样性的 主要方法。对采自黑龙江的致病疫霉进行SSR基因 型分析，吴艳清等（2012）鉴定出8种基因型，F-01 型所占比例最高。而王晨（2013）的鉴定结果表明， 从黑龙江采集的菌株共鉴定出6种SSR基因型，F-01 为优势基因型。这些研究表明，黑龙江省马铃薯晚 疫病菌的SSR基因型呈现一种动态变化。 Runno-Paurson等（2016）对爱沙尼亚的马铃 薯晚疫病菌进行交配型和SSR基因型测定，结果表 明该地区出现不同交配型菌株，SSR基因型也趋于 多样化。Rekad等（2017）通过SSR标记分析、交 配型和瑞毒霉敏感性的测定，对阿尔及利亚西北部 地区的致病疫霉进行系统分析，结果表明不同交配 型的菌株其对应的优势SSR基因型有差异。Guo等 （2010）通过交配型、同工酶基因型、mtDNA单倍 型和RG57指纹的分析，发现中国地区的马铃薯晚 疫病菌基因型和表现型与其他国家有差异。 我国缺少对马铃薯晚疫病菌multi-locus基因型 的研究。本试验首先测定黑龙江省马铃薯晚疫病菌 的交配型；其次，利用PCR-RFLP方法和SSR标 记测定黑龙江省马铃薯晚疫病菌的mtDNA单倍型 和SSR基因型；第三，利用mtDNA单倍型和SSR 基因型确定黑龙江省马铃薯晚疫病菌的muti-locus 基因型；最终，分析交配型与muti-locus基因型的 相互关系。以期为马铃薯晚疫病菌的群体遗传研究 和马铃薯晚疫病的防治提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 供试菌株及培养基 20152017年，在黑龙江省齐齐哈尔市、绥 化市、哈尔滨市各马铃薯主产区采集具有马铃薯晚 疫病主要症状的单病斑叶片，将马铃薯切成约0.5  cm的薯片，用70%酒精将切后的薯片消毒，将病 叶放入灭菌后的选择性培养基中，把消毒处理后的 薯片放在病叶上，加入一定的蒸馏水，用封口膜封 盖，19 黑暗培养箱中培养46 d。 供试培养基为20%番茄汁琼脂培养基和选择 性培养基（张铉哲和徐生军，2010）。 1.2 马铃薯晚疫病菌的交配型测定 交配型的测定采用对峙培养法，使用20%番 茄汁琼脂培养基。将标准菌株A1（DN-3085日本）、 A2（TBC-3韩国）与待测菌株预培养，然后将标 准菌株和待测菌株菌饼分别与A1、A2标准菌株对 峙培养，菌饼之间距离为3 cm。封盖，每个菌株重 复测定3次，19 恒温培养14 d，在显微镜下观察 菌落交界处是否产生卵孢子。若待测菌株与A2标 准菌株之间产生卵孢子，且与A1标准菌株间不产 生卵孢子，说明所测菌株是A1交配型；相反，则 是A2交配型。若与2个标准菌株间都产生卵孢子， 且自身也可产生卵孢子，则待测菌株类型为自育型。 1.3 DNA提取 将待测菌株接种到20%番茄汁琼脂培养基 中，每株菌株接种3皿，19 黑暗培养箱中培养 14 d左右，用灭过菌的滤纸吸干菌丝上的水分，装 入1.5 mL EP管中，-20 下保存用于DNA的提取。 参考Goodwin等（1992）的方法提取基因组DNA。 1.4 马铃薯晚疫病菌mtDNA单倍型测定 1.4.1 引物序列与扩增体系 线粒体DNA单 倍型分析的PCR-RFLP方法参考Griffith和 Shaw（1998）的方法。引物序列：P2：F2： 5- TTCCCTTTGTCCTCTACCCAT-3，R2： 5-TTACGGCGGTTTAGCACATACA-3；P4：F4： 5-TGGTCATCCAGAGGTTTATGTT-3，R4：5-  CCGATACCGATACCAGCACCAA-3。所用引物由 生工生物工程（上海）股份有限公司合成。PCR扩 增体系和程序参考Zhang等（2006）的方法。 1.4.2 酶切体系 目的片段回收采用核酸回收试剂 盒生工生物工程（上海）股份有限公司 。P2引 物扩增片段使用 Msp 酶切，P4引物扩增片段使用 EcoR 酶切，酶切体系为50 L：胶回收产物10  L，Buffer 5 L，Enzyme 1 L，ddH 2 O补足至50  L。反应条件为37 水浴3 h。将酶切产物与溴 酚蓝混合，采用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测，用凝 胶成像仪拍照。 1.5 马铃薯晚疫病菌SSR基因型测定 1.5.1 SSR引物序列与扩增体系 马铃薯 晚疫病SSR基因型划分标准参考Knapova 和Gisi（2002） 的 方 法。 引 物 序 列Pi4B：  59   新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控  59   研究论文 中 国 蔬 菜     CHINA VEGETABLES F：5 -AAAATAAAGCCTTTGGTTA-3 ，R： 5-GCAAGCGAGGTTTGTAGATT-3；Pi4G： F：5-CGCTGTGTGGATGACAAGTA-3，R： 5-TCGACCTGACATACGAGCTA-3。SSR扩增体 系和扩增程序参考王晨（2013）的方法。 1.5.2 聚丙烯凝胶电泳检测 将扩增后的样品与同 体积的Loading Buffer混合，95 变性10 min，扩 增产物用12%的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染 染色，用凝胶成像系统拍照（Gene Company Limited  GBOX-CHEMI-XRQ）。 2 结果与分析 2.1 马铃薯晚疫病菌分离 20152017年在黑龙江省哈尔滨市、绥化市 和齐齐哈尔市各马铃薯主产区共采集分离了126株 马铃薯晚疫病菌菌株（表1）。 表1 黑龙江省马铃薯晚疫病菌菌株信息 采集年份 采集地区 菌株数 2015 齐齐哈尔 16 绥化 2 哈尔滨 4 2016 绥化 26 哈尔滨 6 2017 绥化 35 齐齐哈尔 37 2.2 马铃薯晚疫病菌交配型分析 在黑龙江省采集分离的126株马铃薯晚疫病 菌菌株中共发现了3种交配型。A1、A2和自育 型菌株分别占所分离菌株总数的88.1、6.3和 5.6。从采集年份分析结果显示，2015年采集的 22株菌株中，共鉴定出A1和A2 2种交配型，其 中，21株菌株为A1交配型（95.5），仅1株菌 株为A2交配型（4.5）。2016年采集的32株菌 株中共鉴定出3种交配型，其中26株A1交配型 菌株（81.3），4株A2交配型（12.5），2株自 育型（6.2）。2017年共分离鉴定了72株菌株， 3株菌株为A2交配型（4.2） ，5株菌株为自育型  （6.9），其余64株菌株为A1交配型（88.9）， 由此可见，自育型菌株比例逐年增长，各年份之间 A1交配型所占比例具有差异。 从采集地区分析结果显示，哈尔滨市采集分 离的菌株均为A1型（100） ，绥化市采集分离的 菌株共鉴定出3种交配型，56株为A1交配型菌株 （88.9），5株为A2交配型菌株（7.9），2株 为自育型菌株（3.2） 。齐齐哈尔市采集分离的菌 株共测定出A1、A2和自育型3种，分别为46株 （86.8）、2株（3.8）和5株（9.4） 。以上结 果显示，哈尔滨市马铃薯主产区与其他2个马铃薯 主产区相比晚疫病菌交配型相对单一，各地区之间 不同交配型所占百分比具有明显差异。 2.3 马铃薯晚疫病菌mtDNA单倍型分析 黑龙江省采集分离的126株马铃薯晚疫病菌菌 株共鉴定出a和a 2种mtDNA单倍型，其中104 株菌株为a单倍型（82.5） ，22株菌株为a单倍 型（17.5） 。从采集年份分析结果显示，2015年 测定的22株菌株中，共测定出19株a单倍型菌 株（86.4%），3株为a单倍型菌株（13.6%）。2016 年分离鉴定的32株菌株中，24株为a单倍型菌株 （75.0%），其余8株为a单倍型菌株（25.0）。 2017年分离的72株菌株中，11株为a单倍型菌株 （15.3），61株为a单倍型菌株（84.7）。2015 年所鉴定菌株中a单倍型比例最高。 从采集地区分析结果显示，哈尔滨市采集分离 的菌株均为a单倍型（100） ，绥化市分离的63 株菌株中，共鉴定出a和a 2种单倍型，分别为 15株（23.8）和48株（76.2）。齐齐哈尔市鉴 定的53株菌株中，46株为a单倍型（86.8），7 株为a单倍型（13.2） 。可见哈尔滨市马铃薯主 产区mtDNA单倍型单一，各地区马铃薯晚疫病菌 不同mtDNA单倍型所占比例具有明显差异。 2.4 马铃薯晚疫病菌SSR基因型分析 对黑龙江省采集分离的126株马铃薯晚疫病菌 菌株进行SSR基因型分析，共鉴定出7种基因型， 分 别 为F-01、F-02、F-03、F-05、F-06、D-02 和G-02。其中F-01基因型菌株共鉴定出98株 （77.8），F-05基因型为12株（9.5%） ，F-03基 因型菌株为7株（5.5），D-02基因型菌株为4株 （3.2） ，F-06基因型菌株为3株（2.4），F-02 基因型和G-02基因型分别鉴定出1株（0.8）。 从采集年份来看（图1） ，2015年分离鉴定的 22株菌株中，共鉴定出3种基因型，分别为F-01、 F-05和F-03。2016年共鉴定出5种基因型，分别 为F01、F02、F03、F05、D02，其中F-01基因型  60   新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控  60   研究论文 中 国 蔬 菜     CHINA VEGETABLES 菌株24株（75.0%），占比最高。2017年共鉴定出 6种基因型。可见黑龙江省马铃薯晚疫病菌SSR基 因型多样性逐年增加，F-01基因型为优势基因型， 各年份间F-01基因型所占比例存在差异（图1）。 从采集地点来看（图2） ，哈尔滨市采集分离 的菌株只有F-01和D-02 2种基因型，分别占鉴定 总菌株数的90.0和10.0。绥化市采集分离的菌 株SSR基因型最多，有7种，其中F-01基因型47 株（74.6），占比最高。齐齐哈尔市共鉴定出5种 SSR基因型（图2）。 2.5 马铃薯晚疫病菌multi-locus基因型分析 根据mtDNA单倍型和SSR基因型，20152017 年黑龙江省采集分离的菌株共划分成9种multi- locus基因型（表2），优势基因型均为multi-locus A 基因型。其中2015年采集分离的马铃薯晚疫病菌 共鉴定出4种multi-locus基因型，2016年共鉴定 出7种multi-locus 基因型，其中multi-locus F基因 型只在2016年分离的菌株中出现。2017年共鉴定 出8种基因型。Multi-locus H基因型和multi-locus I  表2 黑龙江省分离的马铃薯晚疫病菌采集年份与multi-locus基因型分析 multi-locus基因型 采集年份/个数（占比） 交配型/个数 2015 2016 2017 A1 A2 自育型 总菌株数 A 15（68.2%） 18（56.3%） 49（68.1%） 69 6 7 82 B 3（13.6%） 6（18.8%） 7（9.6%） 15 1 0 16 C 2（9.1%） 4（12.5%） 6（8.3%） 12 0 0 12 D 2（9.1%） 1（3.1%） 2（2.8%） 4 1 0 5 E 0（0） 1（3.1%） 1（1.4%） 2 0 0 2 F 0（0） 1（3.1%） 0（0） 1 0 0 1 G 0（0） 1（3.1%） 3（4.2%） 4 0 0 4 H 0（0） 0（0） 3（4.2%） 3 0 0 3 I 0（0） 0（0） 1（1.4%） 1 0 0 1 注：Aa，F-01；Ba，F-01；Ca，F-05；Da，F-03；Ea，F-03；Fa，F-02；Ga，D-02；Ha，F-06；Ia，G-02； 下表同。 图2 采集地区与马铃薯晚疫病菌SSR基因型关系 100 80 60 40 20 0 SSR基因型占比/% 年份 2015 2016 2017 F-03 F-01 F-02 F-05 G-02 D-02 F-06 100 80 60 40 20 0 SSR基因型占比/% 地点 哈尔滨市 绥化市 齐齐哈尔市 F-03 F-01 F-02 F-05 G-02 D-02 F-06 10.0 1.6 3.2 1.9 11.3 7.5 77.4 1.9 3.2 9.5 1.6 6.3 74.6 90.0 图1 采集年份与马铃薯晚疫病菌SSR基因型关系 100 80 60 40 20 0 SSR基因型占比/% 年份 2015 2016 2017 F-03 F-01 F-02 F-05 G-02 D-02 F-06 100 80 60 40 20 0 SSR基因型占比/% 地点 哈尔滨市 绥化市 齐齐哈尔市 F-03 F-01 F-02 F-05 G-02 D-02 F-06 9.1 9.1 81.8 3.1 12.6 6.2 3.1 75.0 1.4 4.2 4.2 8.2 4.2 77.8 基因型只在2017年分离的菌株中出现。Multi-locus 基因型多样性呈逐年增加的趋势。 从表3可以看出，哈尔滨市采集分离的菌株鉴 定出3种基因型，绥化市采集分离的菌株共鉴定出 9种基因型，其中multi-locus F和multi-locus I基 因型仅在绥化市出现。齐齐哈尔市采集分离的菌株 中共鉴定出7种基因型。表明绥化市各马铃薯主产 区的马铃薯晚疫病菌基因型更为丰富（表3）。 综合上述multi-locus基因型和交配型结果， multi-locus基因型为A基因型的马铃薯晚疫病菌其 交配型类型为A1、A2和自育型，基因型B和基因 型D的马铃薯晚疫病菌其交配型类型为A1和A2。 其余几种multi-locus基因型的马铃薯晚疫病菌交配 型都为A1。  61   新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控  61   研究论文 中 国 蔬 菜     CHINA VEGETABLES 3 结论与讨论 3.1 马铃薯晚疫病菌交配型 马铃薯晚疫病菌是危害马铃薯、番茄等作物的 一种卵菌纲致病真菌，20122013年马铃薯晚疫病 在全国范围内偏重发生，发生范围广且流行快，对 马铃薯造成严重危害（黄冲和刘万才，2016）。 王鹤等（2012）对2009年在黑龙江省采集的 菌株进行交配型检测，结果表明鉴定菌株均为A1 交配型。郭梅等（2015）研究发现，20112012 年在黑龙江省哈尔滨、绥化望奎县、齐齐哈尔克 山等地发现大量A2交配型马铃薯晚疫病菌菌株， 2011年A2交配型占被测菌株的23.08%；2012年 占被测菌株的30%。由此可见，黑龙江省马铃薯 晚疫病菌交配型逐年复杂，但2014年后有关黑龙 江省马铃薯晚疫病菌交配型方面的报道较少。本试 验对20152017年在黑龙江马铃薯主产区采集分 离出的晚疫病菌进行交配型测定，研究发现自育型 菌株出现频率逐年增加。从采集地点上发现哈尔 滨市只有A1交配型菌株，绥化市和齐齐哈尔市出 现3种交配型，说明与其他2个地区相比，哈尔滨 市马铃薯晚疫病菌交配型较为单一。这一结论与郭 梅等（2015）的研究结果基本一致。同时也说明绥 化市和齐齐哈尔市马铃薯主产区有可能发生有性生 殖，并导致马铃薯晚疫病菌的遗传多样性更加复  杂化。 3.2 马铃薯晚疫病菌mtDNA单倍型和SSR基因型 通过测定马铃薯晚疫病菌基因型，可对晚疫病 菌遗传变异进行探究，为防治马铃薯晚疫病提供理 论依据。本试验对20152017年在黑龙江各马铃 薯主产区采集的马铃薯晚疫病菌进行mtDNA单倍 表3 黑龙江省分离的马铃薯晚疫病菌采集地区与multi-locus基因型分析 multi-locus基因型 采集地点/个数（占比） 交配型/个数 哈尔滨市 绥化市 齐齐哈尔市 A1 A2 自育型 总菌株数 A 8（80.0%） 38（60.3%） 36（67.9%） 67 8 5 82 B 1（10.0%） 10（15.8%） 4（7.5%） 14 1 0 15 C 0（0） 6（9.5%） 6（11.3%） 12 0 0 12 D 0（0） 2（3.2%） 4（7.5%） 4 2 0 6 E 0（0） 1（1.6%） 1（1.9%） 2 0 0 2 F 0（0） 1（1.6%） 0（0） 1 0 0 1 G 1（10.0%） 2（3.2%） 1（1.9%） 4 0 0 4 H 0（0） 2（3.2%） 1（1.9%） 3 0 0 3 I 0（0） 1（1.6%） 0（0） 1 0 0 1 型鉴定，鉴定出a和a两种单倍型。其中，a单 倍型为优势基因型，与张铉哲等（2015）的研究结 果一致，但未发现b单倍型菌株。同时，本试验 对晚疫病菌进行SSR基因型测定，与李微（2015） 对20122014年黑龙江省马铃薯晚疫病菌SSR基 因型测定结果相比，鉴定出新的基因型F-06基因 型。从分离年份上看，2017年黑龙江省晚疫病菌 SSR基因型更为丰富，从采集地区方面分析，绥化 市各马铃薯产区的马铃薯晚疫病菌SSR基因型更多 样化。 3.3 马铃薯晚疫病菌multi-locus基因型 利用马铃薯晚疫病菌的交配型和multi-locus基 因型，对马铃薯晚疫病菌的表现型和基因型进行系 统综合分析。本试验中，2017年在黑龙江省采集分 离的晚疫病菌multi-locus基因型最多，说明黑龙江 省马铃薯晚疫病群体结构逐年复杂。从分离地点分 析，绥化市采集分离的马铃薯晚疫病菌multi-locus 基因型最为丰富。交配型与multi-locus基因型综合 分析结果表明，multi-locus A基因型、multi-locus  B基因型和multi-locus D基因型与交配型没有相关 性，其余multi-locus 基因型与交配型相关。 哈尔滨市各马铃薯主产区马铃薯晚疫病菌 multi-locus基因型多样性较低，说明该地区马铃薯 晚疫病菌遗传结构较为简单；而绥化市采集的马铃 薯晚疫病菌multi-locus基因型最多，表明该地区 马铃薯晚疫病菌群体遗传结构更具多样性。总体来 说，20152017年黑龙江省各马铃薯主产区的晚疫 病菌群体结构逐年复杂，给黑龙江省马铃薯晚疫病 的防治带来了新的挑战。绥化市可能是黑龙江省马 铃薯晚疫病的起源中心，未来该地区应加强对马铃 薯晚疫病的监控。  62   新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控  62   研究论文 中 国 蔬 菜     CHINA VEGETABLES 参考文献 关红颖.2011.黑龙江省马铃薯晚疫病的发生与防治.中国马铃薯， 25（3）：173-174. 郭梅，Vincent C，闵凡祥，吕军，高云飞，杨帅，王晓丹，Jean- louis R.2015.黑龙江省发现马铃薯晚疫病菌（Phytophthora  infestans）A2交配型.中国马铃薯，（3）：171-174. 黄冲，刘万才.2016.近几年我国马铃薯晚疫病流行特点分析与监 测建议.植物保护，42（5）：142-147. 金光辉，李学湛，王玉成，王腾.2017.年际间干旱对晚疫病菌生 理小种复杂性的影响.植物保护，（4）：167-173. 李建武.2011.SSR标记技术在马铃薯遗传育种研究中的应用.中 国蔬菜，（20） ：1-8. 李微.2015.黑龙江省马铃薯晚疫病菌群体结构的研究硕士论  文.哈尔滨：东北农业大学. 闵凡祥，王晓丹，胡林双，魏琪，董学志，刘伟婷，郭梅.2010. 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The results indicated that 3 mating types of A1，A2 and    63   新优品种 栽培管理 本期视点 产业市场 病虫防控  63   研究论文 中 国 蔬 菜     CHINA VEGETABLES QuEChERS 法动态监测及评价山西省韭菜 中12 种农药残留 郭丽丽 1花 锦 2* （ 1 山西中医药大学制药与食品工程学院，山西晋中 030619； 2 山西出入境检验检疫局检验检疫技术中心， 山西太原 030024） 摘 要：采用乙腈超声提取，经PSA、C 18 基质分散净化，通过液质联用及气质联用建立了韭菜中吡虫啉、敌敌畏、毒死蜱、 多菌灵、腐霉利、甲胺磷、甲氰菊酯、克百威、六六六、氯丹、 （高效）氯氟氰菊酯、阿维菌素等12种农药的QuEChERS（quick， easy，cheap，effective，rugged，safe）快速检测方法，并对山西省市售韭菜的农药残留状况进行了动态监测和评价。结果表明： 山西省韭菜中农药残留的总检出率为80%，超标率为20%，使用比较多的农药为吡虫啉、敌敌畏、多菌灵、腐霉利、甲氰 菊酯和（高效）氯氟氰菊酯，腐霉利超标是韭菜产品不合格的主要因素。8月后太原及周边地区韭菜中的农药残留水平较高， 且该地区农贸市场与超市韭菜中农药残留的检出率相近，但前者超标率（27.3%）明显高于后者（9.1%）。 关键词：QuEChERS；韭菜；农药残留；监测；评价  2012） 。然而韭菜生产中韭蛆、灰霉病等病虫害多 发，种植过程中需要适量使用农药以减少病虫害损 失（Farha et al.，2017）。但是一些菜农为了追求产 量，经常采用灌根的方法将一些高毒农药用于韭蛆 的防治（宋丹 等，2016） ，造成韭菜中农药残留超 标，中毒事件频频发生（王文娇 等，2011）。2017 年11月1日起，山东省全面启动实施韭菜产品“双 证制”管理，严禁无合格证和市场销售凭证 的韭菜产品进入食用农产品市场、生产加工、餐饮 服务环节。这一举措反映出韭菜农药残留问题的日 益严重性，相关部门应加强韭菜中农药残留的监测 郭丽丽，女，讲师，专业方向：食品安全与检测，E-mail： cauguolili163.com   *通讯作者（Corresponding author）：花锦，女，工程师，专业方向：食 品安全，E-mail：hua-jin1986163.com 收稿日期：2017-12-12；接受日期：2018-02-01 基金项目：国家认监委检验检疫行业标准项目（2012B131） ，山西中医 药大学博士科研启动项目（2015BK11） 韭菜是我国的特色蔬菜，味道鲜美、香味独特， 具有丰富的营养价值。韭菜含有VC、VB 1 等多种 维生素及矿物质，还含有丰富的纤维素，可以促进 肠道蠕动。韭菜中硫化物的独特辛香味具有一定的 杀菌消炎作用，有助于提高人体免疫力（商飞飞， self-fertility were found in 126 strains isolated，accounting for 88.1%，6.3% and 5.6% of the total isolates， respectively. Two mtDNA haplotypes，a and a，were identified，accounting for 17.5% and 82.5% of the total  number of isolates，respectively. Seven SSR genotypes，F-01，F-02，F-03，F-05，F-06，D-03 and G-02， were identified from 126 isolates tested. Among them，the F-01 genotype（77.8%）was dominant ge