猕猴桃青霉病病原菌鉴定及中草药提取物对其抑菌效果.pdf

2 0 1 8 , 4 4 （ 3 ） ： 1 8 6 1 8 9 PlantProtection 收 稿 日 期 ：2017 07 31 修 订 日 期 ：2017 09 27 基 金 项 目 ：湖南省农业科技创新资金 湘农科科 （ 2017 ） 18 号 * 通信作者 E-mail ： bufanwen 126. com 猕 猴 桃 青 霉 病 病 原 菌 鉴 定 及 中 草 药 提 取 物 对 其 抑 菌 效 果 程 小 梅 1 ， 2 ，彭 亚 军 3 ，杨玉 1 ， 2 ，徐海 1 ， 2 ，罗 赛 男 1 ， 2 ，卜 范 文 1 ， 2* （ 1. 湖南省农业科学院园艺研究所 ，长沙410125 ； 2. 农业部华中地区果树科学观测实验站 ，长沙410125 ； 3. 湖南省农业科学院植物保护研究所 ，长沙410125 ） 摘 要为 了 解 决 猕 猴 桃 真 菌 病 害 导 致 的 贮 运 难 题 ， 作 者 从 湖 南 、 陕 西 两 个 猕 猴 桃 主 产 区 采 集 的 病 果 中 分 离 获 得 青 霉 菌 株 Q-1 ， 应 用 rDNA-ITS 分 子 标 记 、 BLASTn 比 对 ， 结 合 传 统 真 菌 形 态 学 鉴 定 ， 确 定 该 致 病 菌 为 草 酸 青 霉 Pencilli- umoxalicum 。 利 用 带 药 培 养 基 法 筛 选 出 对 侵 染 猕 猴 桃 的 青 霉 菌 有 最 佳 抑 制 作 用 的 中 草 药 提 取 物 ， 猕 猴 桃 果 实 采 后 刺 伤 接 种 Q-1 ， 研 究 中 草 药 提 取 物 对 果 实 病 斑 直 径 的 影 响 。 结 果 表 明 ： 川 芎 、 肉 桂 、 高 良 姜 的 乙 醇 提 取 物 对 青 霉 均 有 较 好 的 抑 制 效 果 ， 菌 丝 生 长 相 对 抑 制 率 分 别 达 到 92. 79% 、 77. 67% 、 78. 49% ， 其 中 以 川 芎 的 抑 菌 效 果 最 佳 。 猕 猴 桃 果 实 在 贮 藏 期 接 种 Q-1 菌 株 后 ， 中 草 药 提 取 物 处 理 可 显 著 抑 制 果 实 病 斑 扩 大 。 关 键 词猕 猴 桃 ；青 霉 ；鉴 定 ；中 草 药 提 取 物 中 图 分 类 号 ：S436. 634 文 献 标 识 码 ：A DOI ：10. 16688 j. zwbh. 2017282 Identificationofthe p atho g encausin g fruit p enicilliosisonkiwifruitandthe inhibitioneffectofChineseherbextractsonthe p atho g en CHENGXiaomei 1 ， 2 ，PENGYajun 3 ，YANGYu 1 ， 2 ，XUHai 1 ， 2 ，LUOSainan 1 ， 2 ，BUFanwen 1 ， 2 （ 1.HunanHortisulturalResearshInstitute ， HunanAsademyofAgrisulturalSsienses ， Changsha 410125 ， China ； 2.SsientifisObservationandExperimentStationofFruitTreesinCentralChina ， Ministryof Agrisulture ， Changsha 410125 ， China ； 3.InstituteofPlantProtestion ， HunanAsademyof AgrisulturalSsienses ， Changsha 410125 ， China ） Abstract Theaimofthisstudyistosolvethedifficultiesoffungaldiseasesinpostharveststorageandtransitofki- wifruit.Thepathogenofkiwipenicilliosiswasisolatedfromthediseasedkiwifruitcollectedfrommainproduction areasofHunanandShaanxiprovincesandwasnamedQ-1.BasedonrDNA-ITSsequenceanalysis ， BLASTnalign- mentandtraditionalmorphologicalidentification ， thepathogenwasidentifiedasPensilliumoxalisum.TheChi- neseherbextractswiththebestinhibitingeffectstoPensilliumoxalisum werescreenedbydrug-containingPDA plates ， andtheireffectsoncontrollingdiseaseofkiwifruitinoculatedwithP.oxalisum werealsoinvestigated. Theresultsshowedthatethanolextractsofrhizomaligusticumwallichii ， cinnamonandgalangalallhadgoodin- hibitingeffectsonP. oxalisum ， withtheinhibitionratioof92. 79 ， 77. 67 ， and78. 49onmycelialgrowth ， respectively ， amongwhichextractofrhizomaligusticiwallichiihadthebestantifungalactivity.Duringkiwifruit storage ， Chineseherbextractstreatmentsignificantlydecreasedthelesiondiameterofkiwifruitinoculatedwith P. oxalisum. Keywords kiwifruit ；Penisillium ；identification ；Chineseherbextract猕猴桃是一种深受消费者喜爱的水果 ，营养极 为丰富 。维生素 C 含量高 ，同时还含大量的糖 、蛋白 质 、 氨基酸等多种有机物和人体必需的多种矿物质 。 猕猴桃果实青霉病是我国猕猴桃贮藏期的主要病 害 ，在湖南 、陕西等猕猴桃主产区发生比较普遍 ，症 状为在果面受损伤处呈现青绿色霉层 ，易于识别 。 44 卷第 3 期 程小梅等 ：猕猴桃青霉病病原菌鉴定及中草药提取物对其抑菌效果 病原为多种青霉 ，主要由伤口侵入 ，引起腐烂 。青霉 不仅引起猕猴桃腐烂 ，还危害柑橘 、苹果 、梨 、哈密瓜 等的叶片和果实 ，引起各种贮藏病害 1 2 。常用于水 果贮藏保鲜的抗真菌作用较强的中草药成分主要有 丁香 、木香 、大黄 、荆芥 、肉桂 、茵陈蒿 、川芎 、肉豆蔻 、 黄连 、黄芩 、紫草和黄柏等 3 7 。本研究从湖南 、陕西 两大猕猴桃主产区采集了青霉危害的样本 ，对该病 菌的致病力 、形态学 、分子生物学特性进行比较分 析 ，同时筛选出对分离菌株有较强抑菌作用的中草 药提取物 ，以期为猕猴桃贮藏期真菌病害的防治提 供理论依据 。 1 材 料 与 方 法 1. 1 试 验 材 料 猕猴桃青霉病病果采自湖南永顺 、凤凰 ，陕西眉 县 、 周至 4 个猕猴桃主产区的 5 个果园 ，每个果园分 别采集样品 6 份 ，共计 30 份 。 马铃薯葡萄糖琼脂培养基 （ PDA ） ：马铃薯 200g 、 葡萄糖 20g 、琼脂 20g 、蒸馏水 1L 。 试剂及仪器 ： PCR 扩增仪为 TaKaRaBioInc. 生 产的 TaKaRaThermalCyclerDiceTP600 ； 核酸电泳仪 为 ADVANCE-BIOCo. ， Ltd 生产的 Mupid ； 蛋白质电 泳仪为上海天能生产的 EPS300 ；电泳成像装置采用 PharmaciaBiotechImageMaster VDS ； DNA 测序仪 为 Applied Biosystem 生产的 ABI PRISM TM 3730XLDNASequencer ；循环测序试剂盒采用 Big- Dye TerminatorV3.1CycleSequencingKit ；川 芎 、肉桂 、高良姜原料均购于安徽蜀中医药有限 公司 。 1. 2 方 法 1. 2. 1 病 原 菌 的 分 离 纯 化 、 致 病 性 测 定 及 柯 赫 氏 法 则 验 证将发病的果实表皮用清水清洗干净 ，切取 5mm 5mm 的病组织数块 ，用 75% 的乙醇消毒 10s ，随 后放入 0. 1% 升汞消毒 5min ，取出后用无菌水冲洗 3 次 ，将病组织放入马铃薯葡萄糖琼脂 （ PDA ）平板 中 ，在 28 黑暗培养 ，分离纯化得到供试菌株 。将 分离纯化的菌株在 PDA 平板上 28 培养 3 5d 后 用打孔器打取直径 4mm 的菌丝块 。每个处理选取 健康的猕猴桃果实 10 个 ，用接种针在果实腰部将果 实刺伤后将菌饼有菌丝的一面紧贴于果实伤口处 ， 菌丝块表面覆盖湿棉球 ，放入瓷盘中密封保湿 ，逐日 观察各处理的发病情况 。以接种不含菌 PDA 为对 照 。从接种后发病的果实上再次分离 、纯化和培养 病原菌 ，并与原菌株进行比较 。 1. 2. 2 病 原 菌 的 形 态 学 观 察 将菌株接种到 PDA 平板上于培养箱中 28 避光 培养 2d ， 在显微镜下观察病原菌的分生孢子形态 。 1. 2. 3 病 原 菌 的 分 子 生 物 学 鉴 定 从 PDA 平板上用牙签挑取少量菌体于 50 L 裂解缓冲液 （ TaKaRaLysisBufferforMicroorgan- ismtoDirectPCR ， CodeNo.9164 ）中 ，在 80 下 ， 变性 15min ，变性后离心取上清作为模板 。使用 TaKaRaFungi IdentificationPCRKit （ CodeNo. RR178 ）扩增目的片段 。 PCR 反应体系为 50 L ，其 中 ， DNA 模板 （ 变性反应液 ） 1 L ， PCRPremix25 L ， ITSForwardprimer （ 20 pmol L ） 0.5 L ， ITS Reverseprimer （ 20pmol L ） 0. 5 L ， ddH2O23 L 。 扩增程序为 ： 945min ； 9430s ， 5530s ， 72 1min ， 30 个循环 ； 725min ；扩增完毕 ，取 10 L 扩增产物用 1.2% 琼脂糖凝胶进行电泳检测 8 。 PCR 产物送宝生物工程 （大连 ）有限公司测序 。将 所得的序列提交到 GenBank 核酸序列数据库中 ，获 得登录号 。同时将序列作同源相似性差异分析 ，确 定该菌株的分类地位 ，用 NJ 法 （ neighbor-joining method ）构建系统进化树 。 1. 2. 4 中 草 药 提 取 物 对 青 霉 的 抑 菌 作 用 精选川芎 、高良姜 、肉桂原料切碎后 ，取肉桂粗 粉各 10g 。分别以乙醇为溶剂 ，索氏法提取 3.2h ， 提取液过滤 ，减压回收乙醇至无醇味 ，热水分散后 放冷 ，石油醚 （ 60 90 ）脱脂 3 次 ，水液浓缩 ， 80 干燥成干浸膏 ，粉碎成细粉供试 9 。分别配制 肉桂 、高良姜 、川芎提取液母液 330mg mL 备用 。 取配制好的中草药提取液母液与 PDA 培养基混合 均匀制成浓度为 8.25mg mL 的带药培养基 ，将其 倒入 9cm 培养皿中 ，以相同量的无菌水代替中草药 母液作为对照 10 。提取物对青霉的抑菌效果采用 改良的菌丝生长速率法 11 13 ，即在含药培养基中央 用直径为 4mm 的打孔器打孔 ，注入 50 L1.0 10 6 个 mL 的青霉孢子悬浮液 ，培养箱 28 培养 72h 后观察试验结果 。采用十字交叉法测量各菌落直 7 8 1 2018 径 ，计算各处理菌落直径的平均值和菌丝生长相对 抑菌率 。 抑菌率 = ck-c ck 100% ； 公式中 ck 为对照组菌落的净生长量 ， c 为中草 药处理组菌落的净生长量 。 1. 2. 5 中 草 药 提 取 物 对 猕 猴 桃 果 实 损 伤 接 种 青 霉 的 抑 菌 效 果选取外观整齐 、 无病虫害和机械损伤的猕猴桃用 75% 乙醇消毒 ， 晾干备用 。用接种针在果实表面穿刺 接种 ， 对照组只接种 Q-1 病原菌 ，处理组先接种孢子 浓度为 10 6 10 7 个 mL 的青霉孢子悬浮液 50 L ，稍 晾干后接种中草药提取物处理液 ，同时设有空白对 照 。伤口晾干后将果实放在包装盒中 ，外套塑料袋保 湿 ， 于 26 贮藏 。每隔 2d 观察发病率和病斑直径 。持 续观察 7d 。每个处理设 3 次重复 ， 每重复 8 个果实 ， 果 实损伤接种后病斑直径测量采用十字交叉法 14 。 2 结 果 与 分 析 2. 1 猕 猴 桃 青 霉 病 病 原 菌 的 筛 选 分 离 及 致 病 性 测 定 从 30 份样品中共分离到 6 株具有较强致病性 的青霉 ，健康猕猴桃接种这 6 株青霉后 ，其发病症状 与自然发病症状一致 ，所有对照均无发病症状 。对 接种后发病的组织进行再次分离均能得到与原来接 种的菌落特征相同的分离物 15 。后续试验取菌株 Q-1 进行 。 图 1 Q-1 菌 株 对 猕 猴 桃 的 致 病 性 Fig. 1 PathogenicityaSSayofQ-1tokiwifruit 2. 2 猕 猴 桃 果 实 上 分 离 青 霉 的 形 态 学 特 征 如图 2a 所示 ，菌株 Q-1 在 PDA 培养基上的 菌落为暗青色 ，粉粒状 ，生长速度较快 ，边缘呈白 色 。从背面观察培养基 ，发现培养基由浅黄色慢 慢变为黄褐色 ，并随着培养时间的延长而逐渐加 深 。分生孢子呈念珠状串生 ，单孢无色 ，近球形 （图 2b ） 。 图 2 猕 猴 桃 果 实 上 分 离 的 青 霉 Q-1 的 形 态 特 征 Fig. 2 MorphologyofPenicilliumSp.StrainQ-1fromkiwifruit 2. 3 猕 猴 桃 果 实 上 分 离 青 霉 的 分 子 生 物 学 鉴 定 将菌株 Q-1 的 ITS 基因序列提交至 GenBank ， 获得登录号 MF669724 。病原菌的琼脂糖凝胶电 泳结果见图 3 。菌株 Q-1 和菌株 L-1 为作者从猕 猴桃感病果实中分离出的具有代表性的菌株 。将 所得序列作同源相似性分析 ，确定了该菌株的分类 地位 ，构建了系统进化树 ，结果 （图 4 ）表明 ，菌株 Q-1 与登录号 KP735935.1 和登录号 KX674635.1 的同 源性最高 ，综合比较病原菌的形态学特征结合序列 比对结果可以得出 ，菌株 Q-1 为草酸青霉 Penicilli- umoxalicum 16 。 图 3 病 原 菌 的 PCR 产 物 电 泳 结 果 Fig. 3 ElectrophoreticreSultSofPCRproductSof ITSgeneinthepathogen 8 8 1 44 卷第 3 期 程小梅等 ：猕猴桃青霉病病原菌鉴定及中草药提取物对其抑菌效果 图 4 Q-1 菌 株 的 系 统 发 育 树 Fig. 4 PhylogenictreeofQ-1Strain 2. 4 几 种 中 草 药 提 取 物 对 青 霉 的 抑 菌 情 况 表 1 结果可以看出肉桂 、高良姜和川芎提取物 均对 Q-1 的抑菌效果良好 ，尤其是川芎提取物对 Q- 1 的抑菌率最高 ，达到了 92. 79% 。 表 1 几 种 中 草 药 提 取 物 对 Q-1 的 抑 菌 作 用 1 ） Table1 InhibitioneffectofSeveralChineSeherb extractSonmycelialgrowthofQ-1 中草药提取物 Chineseherbalmedicine 菌落直径 cm Colonydiameter 抑菌率 % Inhibitoryrate 肉桂提取物 Cinnamonextract （ 1. 920. 06 ） bB （ 77. 670. 73 ） bB 高良姜提取物 Galangalextract （ 1. 850. 04 ） bB （ 78. 490. 47 ） bB 川芎提取物 Rhizomaligusticiwallichiiextract （ 0. 620.10 ） cC （ 92. 791. 20 ） aA CK （ 8. 600 ） aA -1 ）同一列数据后标示的大写和小写字母分别表示 0. 01 和 0. 05 差 异显著水平 。下同 。 Differentcapitalandlowercaselettersinthesamecolumnindi- catedthesignificantdifferenceat1%and5%levels ， respec- tively. Thesamebelow. 2. 5 中 草 药 提 取 物 对 猕 猴 桃 果 实 采 后 刺 伤 接 种 Q-1 的 病 斑 直 径 的 影 响猕猴桃果实接种 Q-1 菌株 4d 后 ，病斑直径不 断增加 ，但中草药提取物处理显著抑制了果实病斑 的扩大 （图 5 ） 。综合比较川芎 、高良姜 、肉桂三种提 取物的处理结果 ，川芎提取物的抑制效果最突出 ，高 良姜提取物其次 ，最后为肉桂提取物 。 图 5 中 草 药 提 取 物 对 果 实 采 后 接 种 Q-1 的 病 斑 直 径 的 影 响 Fig. 5 EffectSofChineSeherbalmedicineextractSonleSion diameteronkiwifruitSinoculatedbyQ-1 3 结 论 与 讨 论 中草药提取物具有良好的杀菌作用 ，对人体和 环境无危害 ，增加了水果食用的安全性 ，用于水果保 鲜有很好的效果 。将中草药提取物应用到食品防腐 的最大优点就是腐烂率低 ，很少甚至不影响食品的 原有风味 。同化学合成的防腐剂相比 ，中草药提取 物不仅无毒 ，对人体健康也有裨益 。再者 ，中草药简 单易得 、取材容易 、经济实惠 ，中草药提取物替代化 学合成保鲜剂用于水果贮藏保鲜有着广阔的发展前 景 。本研究对猕猴桃青霉病病原菌进行了筛选 、鉴 定 ，应用 rDNA-ITS 分子标记分析 、 BLASTn 比对 ， 结合传统真菌形态学鉴定 ，确定致病菌 Q-1 为草酸 青霉 Pencilliumoxalicum 。作者从众多中草药提 取物中筛选出川芎 、高良姜 、肉桂三种中草药提取物 对猕猴桃青霉病病原菌抑菌效果较好 ，将三种抑菌 效果较好的中草药提取物用于猕猴桃果实采后刺伤 接种青霉的防腐 ，发现对病斑直径的扩大仍有较好 的抑制作用 。在后续的试验中作者会进一步验证在 本试验中发挥抑菌作用的几种中草药提取物的主要 抑菌成分 ，力争将本试验结果可以直接应用于生产 实践 、解决猕猴桃贮运难题 。 参 考 文 献 1 闵晓芳 ，邓伯勋 ，陈丽锋 ，等 . 柑橘采后致病青霉的鉴定 J . 果 树学报 ， 2007 ， 24 （ 5 ） ： 653 656. 2 YUTing ， LIHongye ， ZHENGXiaodong.Synergisticeffectof chitosanandCryptococcuslaurentii oninhibitionofPenicilli- umexpansuminfections J .InternationalJournalofFoodMi- crobiology2007 ， 114 （ 3 ） ： 261 266. 3 曾荣 ， 陈金印 ， 张阿珊 ，等 . 植物提取液对柑桔采后青霉 、绿霉抑 菌活性的研究 J . 江西农业大学学报 ， 2010 ， 32 （ 6 ） ： 1142 1145. 4 曾荣 ，张阿珊 ，陈金印 ，等 . 植物源防腐剂在果蔬保鲜中应用研 究进展 J . 中国食品学报 ， 2011 ， 7 （ 4 ） ： 161 165. 5 陈玉环 ， 彭旋 ， 陈楚英 ， 等 . 三颗针提取液复合涂膜对 “ 纽荷尔 ” 脐橙 贮藏保鲜的影响 J . 江西农业大学学报 ， 2016 ， 38 （ 3 ） ： 469 475. 6 张阿珊 ，曾荣 ，陈金印 ，等 . 丁香提取液对脐橙采后生理相关酶 活性的影响 J . 江西农业大学学报 ， 2011 ， 33 （ 6 ） ： 1067 1071. 7 陈楚英 ， 陈明 ， 陈金印 ， 等 . 壳聚糖涂膜对新余蜜橘常温贮藏保鲜 效果的影响 J . 江西农业大学学报 ， 2012 ， 34 （ 6 ） ： 1112 1117. 8 段爱莉 ，雷玉山 ，孙翔宇 ，等 . 猕猴桃果实贮藏期主要真菌病害 的 rDNA-ITS 鉴定及序列分析 J . 中国农业科学 ， 2013 ， 46 （ 4 ） ： 810 818. （下转 202 页 ） 9 8 1 2018 综合以上试验研究结果 ，从防治效果 、增产效果 及投入成本等多因素考虑 ，建议从发病初期开始施 药 ，使用 300g L 苯甲 丙环唑 EC3000 倍液配施 0. 136% 赤 吲乙 芸苔 8000 倍液 1 次 ，随后连续 喷施 300g L 苯甲 丙环唑 EC3000 倍 2 次 ，间隔 约 10d ，可在减少农药使用量的同时 ，有效防治花生 网斑病并能提高花生荚果产量 。此外 ，在不同时期 进行杀菌剂交替使用 ，以延缓抗药性的产生 ，降低防 治成本 ，达到有效控制病害的目的 。 参 考 文 献 1 徐秀娟 ，崔凤高 . 中国花生网斑病研究 J . 植物保护学报 ， 1995 ， 22 （ 1 ） ： 70 74. 2 KOKALIS-BURELLEN ， PORTERDM ， RODRIGUEZ-KA- BANAR ， etal.Compendiumofpeanutdisease M .USA AmericanPhytopathologicalSociety ， 1997 ： 39 40. 3 SUBRAHMANYAMP ， SMITHDH.Effectofhostgenotype onincubationperiod ， receptivity ， lesiondiameter ， andleafare- adamageofDidymellaarachidicola onpeanut J .Peanut Science ， 1987 ， 14 （ 2 ） ： 90 94. 4 全鑫 ，宋玉立 ，何文兰 ，等 . 花生网斑病国内外研究进展 J . 河 南农业科学 ， 2008 （ 7 ） ： 13 16. 5 傅俊范 ，王大洲 ，周如军 ，等 . 辽宁花生网斑病发生危害及流行 动态研究 J . 中国油料作物学报 ， 2013 ， 35 （ 1 ） ： 80 83. 6 傅俊范 ，崔建潮 ，周如军 ，等 . 辽宁花生主栽品种 （系 ）对褐斑病 和网斑病抗性鉴定 J . 植物保护 ， 2015 ， 41 （ 1 ） ： 171 173. 7 陈华 ，李志敏 ，杨海棠 ，等 . 花生叶斑病 、网斑病的综合防治技术 J . 河南农业科学 ， 2004 （ 9 ） ： 91. 8 刘美昌 ，丰燕 ，冯志花 ，等 . 新型杀菌剂防治花生网斑病的效果 J . 山东农业科学 ， 2004 （ 3 ） ： 58 59. 9 王建伟 . 推广节约农药生产技术减少面源污染促进循环农业 发展 J . 河北农业科学 ， 2012 ， 16 （ 11 ） ： 50 52. 10 吴定邦 ，王东明 ，马勇 . 浅谈农药减量使用的技术措施 J . 安徽 农学通报 ， 2010 ， 16 （ 6 ） ： 106 107. 11 周长勇 ，刘伟中 ，郭小山 . 爱苗在花生上应用试验初报 J . 安徽 农学通报 ， 2011 ， 17 （ 24 ） ： 61 62. 12 陈发宏 ，荣维国 . 爱苗的防病效果及增产效果分析 J . 安徽农 学通报 ， 2007 ， 13 （ 22 ） ： 89. 13 王伟 . “爱苗 ”防治草莓白粉病的试验 J . 安徽农业科学 ， 2007 ， 35 （ 22 ） ： 6844. 14 REUVENIM ， SHEGLOVD.Effectsofazoxystrobin ， difeno- conazole ， polyoxinB （ polar ） andtrifloxystrobinongermina- tionandgrowthofAlternariaalternataanddecayinreddelicious applefruit J .CropProtection ， 2002 ， 21 （ 10 ） ： 951 955. 15 刘燕菁 ，范玉 ，张旭光 ，等 . 丙环唑在香蕉和土壤中的消解动态 及残留安全性评价 J . 植物保护 ， 2010 ， 36 （ 2 ） ： 109 111. 16 何晶晶 ，周如军 ，崔健潮 ，等 . 不同杀菌剂对花生网斑病菌室内 毒力测定及田间防效研究 J . 中国油料作物学报 ， 2015 ， 37 （ 4 ） ： 525 531. 17 袁虹霞 ，孙炳剑 ，李洪连 ，等 . 花生品种 （系 ）对叶斑病的抗性鉴 定 J . 河南农业科学 ， 2004 ， 33 （ 12 ） ： 35 38. 18 WOODWARDJE ， BRENNEMANTB ， KEMERAITRC ， et al.Managementofpeanutdiseaseswithreducedinputfungi- cideprogramsinfieldswithvaryinglevelsofdiseaserisk J . CropProtection ， 2010 ， 29 （ 3 ） ： 222 229. 19 牛海龙 ，王义生 ，李伟堂 ，等 . 防治花生叶斑病药剂筛选 J . 辽 宁农业科学 ， 2016 （ 5 ） ： 20 23. 20 晏立英 ， 宋亚辉 ， 倪皖莉 ， 等 . 三种杀菌剂在不同生态区对花生叶 斑病的防治效果 J . 中国油料作物学报 ， 2016 ， 38 （ 5 ） ： 644 648. 21 傅华龙 ，何天久 ，吴巧玉 . 植物生长调节剂的研究与应用 J . 生 物加工过程 ， 2008 ， 6 （ 4 ） ： 7 12. 22 刁春玲 ，刘芳 ，宋宝安 . 农用杀菌剂作用机理的研究进展 J . 农 药 ， 2006 ， 45 （ 6 ） ： 374 377. 23 刘美昌 ，马世洪 ，张佃文 ，等 . 花生网斑病防治技术研究 J . 花 生科技 ， 1999 （ S1 ） ： 436 438. 24 梁英 ，赵志伟 ，孙国臣 ，等 .4 种农药及植物生长调节剂在花生 上的应用效果 J . 农业科技与装备 ， 2014 （ 2 ） ： 25 26. （ 责 任 编 辑 ： 杨 明 丽 櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍櫍 ） （上接 189 页 ） 9 吴新安 . 中草药提取物对几种植物病原菌的抗菌活性研究 D . 合肥 ：安徽农业大学 ， 2002. 10 孙伟 ，蒋红云 ，张燕宁 ，等 .55 种中草药提取物对 2 种植物病原 菌的生物活性 J . 植物保护 ， 2011 ， 37 （ 3 ） ： 124 127. 11 陈年春 . 农药生物测定 M . 北京 ：北京农业大学出版社 ， 1991 ： 176 781. 12 陈仕江 ，丁伟 ，杨帮 ，等 .10 种中药植物对 4 种植物病原真菌的 生物活性研究 J . 西南农业学报 ， 2005 ， 3 （ 18 ） ： 311 314. 13 慕立义 . 植物化学保护研究方法 M . 北京 ：中国农业出版 社 ， 1994. 14 朱玉燕 ，邬波龙 ，姜天甲 ，等 . 外源草酸对猕猴桃采后果实扩展 青霉生长及展青霉素积累的影响 J . 果树学报 ， 2015 ， 32 （ 2 ） ： 298 303. 15 赵金梅 ，高贵田 ，谷留杰 ，等 . 中华猕猴桃褐斑病病原鉴定及抑 菌药剂筛选 J . 中国农业科学 ， 2013 ， 46 （ 23 ） ： 4916 4925. 16 李黎 ，陈美艳 ，张鹏 ，等 . 猕猴桃软腐病的病原菌鉴定 J . 植物保 护学报 ， 2016 ， 43 （ 3 ） ： 527 528. （ 责 任 编 辑 ： 杨 明 丽 ） 2 0 2