广西西北部核桃真菌性病害调查及核桃炭疽病防治试验.pdf

8 期 1531 广西西北部核桃真菌性病害调查及 核桃炭疽 病防治试验 汪筱雪 1 ，韦继光 1* ，杨振德 1 ，罗 辑 2 ， 吴耀军 2 ， 杨秀好 3 ， 罗基同 3 ， 谢代祖 4 （ 1 广西大学 农学院/ 农业环境与农产品安全广西重点实验室培育基地/ 植物科学国家级实验教学示范中心 ， 南宁 530004 ； 2 广西林业科学研究院 ，南宁 530002； 3 广西林业有害生物防治检疫站 ， 南宁 530028 ； 4 河池市林业科学研究院 ， 广西 河池 547000 ） 摘要 ： 【 目的 】 明确 广西 西北 部核 桃真 菌性 病害 种类 ， 并筛 选可 有效 防治 核桃 炭疽 病的 药剂 ， 为核 桃病 害防 治提 供 科 学 依 据 。 【 方 法 】 在 广 西 西 北 部 的 河 池 市 金 城 江 区 、 环 江 县 、 凤 山 县 和 百 色 市 乐 业 县 等 核 桃 种 植 区 ， 于 核 桃 病 害 发 生 期 开 展 真 菌 性 病 害 种 类 和 危 害 程 度 调 查 ， 计 算 其 发 病 率 及 病 情 指 数 。 测 定43% 戊 唑 醇 、 45% 咪 鲜 胺 、 25% 嘧 菌 酯 、 25% 吡 唑 醚 菌 酯 和40% 苯 醚 甲 环 唑 等5 种 杀 菌 剂 对 核 桃 炭 疽 病 菌 的 室 内 毒 力 ， 计 算 抑 制 中 浓 度 （EC50 ） ； 选 取 效 果 较 优 的3 种 杀 菌 剂 进 行 核 桃 炭 疽 病 田 间 防 治 试 验 ， 测 定 不 同 杀 菌 剂 的 防 治 效 果 。 【 结 果 】 调 查 区 核 桃 真 菌 性 病 害 主 要 有 核 桃 根 腐 病 、 核 桃 枝 枯 病 、 核 桃 茎 点 霉 黑 斑 病 和 核 桃 炭 疽 病4 种 ， 病 原 菌 分 别 为 腐 皮 镰 刀 菌 （Fusarium solani ） 、 胡 桃 楸 拟 茎 点 霉 （Phomopsis juglandina ） 、 茎 点 霉 属 （Phoma sp. ） 真 菌 和 胶 孢 炭 疽 菌 （Colletotrichum gloeosporioides ） ， 其 中 以 核 桃 炭 疽 病 发 病 最 严 重 。 杀 菌 剂 室 内 毒 力 测 定 结 果 显 示 ， 5 种 杀 菌 剂 对 核 桃 炭 疽 病 菌 的 抑 菌 效 果 为 ： 25% 吡 唑 醚 菌 酯>45% 咪 鲜 胺>40% 苯 醚 甲 环 唑>25% 嘧 菌 酯>43% 戊 唑 醇 ； 田 间 防 治 试 验 结 果 显 示 ， 25% 吡 唑 醚 菌 酯 、 45% 咪 鲜 胺 和40% 苯 醚 甲 环 唑 对 核 桃 炭 疽 病 的 田 间 防 治 效 果 分 别 为82.23% 、 80.26% 和75.98% 。 【 结 论 】 核 桃 炭 疽 病 是 目 前 广 西 西 北 部 核 桃 的 主 要 真 菌 性 病 害 。25% 吡 唑 醚 菌 酯 可 作 为 防 治 核 桃 炭 疽 病 的 药 剂 使 用 ， 同 时 建 议 在 地 势 较 高 、 排 水 良 好 且 通 风 状 况 好的地点种植核桃， 以防止病害发生 。 关键词： 核桃；真菌病害 ； 炭疽病； 杀菌剂；防治效果； 广西西 北部 中图分类号：S432.4 文献标志码： A 文章编号： 2095-1191 （2018 ） 08-1531-10 收稿日期 ： 2018-02-12 基 金 项 目 ： 广 西 创 新 驱 动 发 展 专 项 项 目 （ 桂 科AA17204058-9 ， AA17204058-6 ） ； 广 西 林 业 厅 科 技 项 目 （ 桂 林 科 字 2014 第25 号 ） ； 河池市科学研究与技术开发计划项目 （ 河科转1489-2-1 ） 作 者 简 介 ： * 为 通 讯 作 者 ， 韦 继 光 （1962- ） ， 博 士 ， 教 授 ， 主 要 从 事 植 物 病 理 学 研 究 工 作 ， E-mail ： jiguangweigxu.edu.cn 。 汪 筱 雪 （1991- ） ， 研究方向为真菌学及植物真菌病害防治 ， E-mail ： 280593191qq.com Investigation on fungal disease of walnut in northwest Guangxi and control experiment of walnut anthracnose WANGXiao-xue 1 ，WEIJi-guang 1* ， YANGZhen-de 1 ，LUOJi 2 ，WUYao-jun 2 ， YANGXiu-hao 3 ，LUOJi-tong 3 ，XIEDai-zu 4 （ 1 CollegeofAgriculture ，GuangxiUniversity/CultivationBaseofGuangxiKeyLaboratoryforAgro-environmentand Agro-productSafety/NationalDemonstrationCenterofExperimentalPlantScienceEducation ，Nanning 530004 ， China ； 2 GuangxiAcademyofForestrySciences ，Nanning 530002，China ； 3 GuangxiForestPestManagementStation ， Nanning 530028，China ；HechiForestryResearchInstitute ，Hechi ，Guangxi 547000 ，China ） Abstract ： 【Objective 】 Walnut fungal diseases in northwest of Guangxi were investigated in order to screen the effec- tive fungicides and provide scientific basis for the prevention of walnut anthracnose. 【Method 】Survey on fungal diseases andhazardousdegreeofwalnutdiseaseswereconductedinJinchengjiangDistrict ，HuanjiangCountyandFengshanCoun- ty in Hechi City and Leye County in Baise City during the pathogenic period of walnut diseases. And the incidence and disease index of walnut diseases were calculated. The indoor toxicity of five fungicides namely 43% tebuconazole ，45% prochloraz ，25% azoxystrobin ，25% pyraclostrobin and 40% difenoconazole that against walnut anthracnose was deter- mined ，and the median inhibitory concentration （EC50 ）was calculated. Three kinds of fungicides whose effects were the optimalinindoortest againstwalnutanthracnoseinfieldwereselectedandthecontroleffectsofdifferentfungicideswere measured. 【Result 】The results showed that four different kinds of walnut fungal diseases ，included walnut root rot ，wal- nut twig blight ，walnut sp. leaf spot and walnut anthracnose ，and their pathogens were Fusarium solani ，Phomopsis jug- 南方农业学报 JournalofSouthernAgriculture 2018 ， 49 （ 8 ） ： 1531 - 1540 ISSN 2095 - 1191 ； CODEN NNXAAB http:/www.nfnyxb.com DOI ： 10 . 3969 /j.issn. 2095- 1191 . 2018. 08. 10 49 卷 南 方 农 业 学 报 1532 0 引言 【 研 究 意 义 】 核 桃 （Juglans regia ） 又 称 胡 桃 ， 是 胡 桃 科 核 桃 属 多 年 生 落 叶 乔 木 （ 孙 俊 等 ， 2012 ） ， 被 誉 为 世 界 四 大 干 果 之 一 ， 具 有 非 常 高 的 营 养 价 值 和 经 济 价 值 。 核 桃 在 我 国 栽 培 历 史 悠 久 ， 因 其 适 应 范 围 广 、 抗 逆 性 强 ， 且 核 桃 果 实 产 量 可 观 ， 因 此 成 为 我 国 第 一 大 干 果 树 种 ， 同 时 是 我 国 极 受 欢 迎 的 药 用 植 物 和 经 济 树 种 （ 王 红 霞 等 ， 2007 ； 高 智 辉 等 ， 2009 ； 杜 慧 平 等 ， 2017 ） 。 广 西 核 桃 主 要 在 凤 山 、 乐 业 和 凌 云 县 等 西 北 部 地 区 栽 培 ， 这 些 地 方 环 境 较 恶 劣 ， 多 石 山 ， 土 壤 贫 瘠 ， 是 广 西 典 型 的 石 漠 化 地 区 ， 许 多 作 物 无 法 栽 培 存 活 。20 世 纪90 年 代 核 桃 产 业 被 引 进 广 西 ， 主 要 用 于 增 加 农 民 收 入 及 治 理 石 漠 化 环 境 问 题 。 目 前 广 西 种 植 的 核 桃 品 种 有 凤 优1 号 、 凤 优2 号 、 云 新 核 桃 、 云 南 漾 濞 大 泡 核 桃 、 美 国 山 核 桃 和 山 东 辽 河1 号 等 ， 但 随 着 核 桃 种 植 面 积 的 扩 大 ， 核 桃 病 害 的 发 生 也 日 益 严 重 ， 病 害 严 重 的 甚 至 导 致 核 桃 树 整 株 死 亡 或 核 桃 苗 圃 整 片 死 亡 ， 已 严 重 影 响 了 核 桃 产 量 ， 因 此 ， 对 核 桃 病 害 进 行 深 入 调 查 及 防 治 方 法 研 究 迫 在 眉 睫 。 【 前 人 研 究 进 展 】 Pollegioni 等 （2012 ） 报 道 核 桃 褐 斑 病 的 病 原 菌 为 核 桃 日 规 壳 ， 其 无 性 世 代 为 核 桃 盘 二 孢 。 王 安 民 等 （2013 ） 报 道 核 桃 溃 疡 病 病 原 菌 为 腔 孢 纲 球 壳 孢 目 的 群 生 小 穴 壳 菌 。Zheng 等 （2015 ） 报 道 核 桃 根 腐 病 的 病 原 菌 为 腐 皮 镰 刀 菌 。 国 内 早 期 报 道 核 桃 枝 枯 病 的 病 原 菌 多 为 矩 圆 黑 盘 孢 菌 所 致 的 枝 枯 病 （ 胡 国 良 等 ， 1992 ； 李 会 钦 ， 2012 ； 张 力 元 ， 2017 ） ， 而 戚 佩 坤 等 （2007 ） 、 孙 俊 （2013 ） 、 李 星 月 等 （2017 ） 报 道 其 病 原 菌 为 拟 茎 点 霉 ， 尹 万 瑞 和 朱 天 辉 （2016 ） 报 道 其 病 原 菌 为 新 壳 梭 孢 。 刘 晓 云 等 （1995 ） 在 陕 西 留 坝 、 杨 凌 等 地 的 核 桃 上 曾 分 离 得 到 尖 孢 炭 疽 菌 ； 何 兴 文 等 （2003 ） 、 曲 文 文 等 （2011 ） 、 黄 雄 等 （2016 ） 、 王 清 海 等 （2016 ） 鉴 定 的 核 桃 炭 疽 病 病 原 菌 也 为 胶 孢 炭 疽 菌 ； Zhu 等 （2015 ） 分 离 鉴 定 得 到 广 西 核 桃 炭 疽 病 病 原 菌 为 松 针 炭 疽 菌 （Colletotrichum fioriniae ） 。 在 核 桃 炭 疽 病 防 治 方 面 ， 肖 育 贵 等 （2010 ） 的 研 究 结 果 表 明 ， 世 高 和 晴 菌 唑 对 核 桃 炭 疽 病 病 原 菌 生 长 的 抑 制 作 用 较 好 ， 林 间 防 治 效 果 可 达85% 以 上 。 刘 霞 等 （2013 ） 研 究 表 明 ， 28 时 咪 鲜 胺 、 戊 唑 醇 和 三 唑 酮 对 核 桃 炭 疽 病 病 原 菌 胶 孢 炭 疽 菌 菌 丝 毒 力 最 强 ， 而 异 菌 脲 、 代 森 锰 锌 和 咪 鲜 胺 对 其 孢 子 的 毒 力 最 强 。 王 凡 等 （2015 ） 测 定 了9 种 杀 菌 剂 对 核 桃 炭 疽 病 菌 的 抑 制 作 用 ， 结 果 表 明 以40% 咪 鲜 胺 水 乳 剂 对 胶 孢 炭 疽 菌 的 抑 菌 作 用 最 强 。 黄 雄 等 （2016 ） 的 室 内 防 治 试 验 结 果 表 明 ， 25% 咪 鲜 胺500 倍 液 、 50% 福 美 双500 倍 液 、 70% 甲 基 硫 菌 灵500 倍 液 和100% 链 霉 素3000 倍 液 对 核 桃 炭 疽 菌 的 防 治 效 果 最 佳 。 【 本 研 究 切 入 点 】 广 西 核 桃 产 业 发 展 迅 速 ， 已 成 为 桂 西 北 部 分 农 民 的 重 要 经 济 收 入 来 源 ， 为 广 西 农 民 收 入 增 长 及 环 境 治 理 提 供 了 强 有 效 的 支 持 。 但 目 前 已 报 道 的 文 献 多 为 核 桃 种 植 或 栽 培 等 方 面 的 研 究 （ 蒋 桂 雄 等 ， 2010 ； 张 武 贵 等 ， 2012 ； 曾 纪 维 ， 2014 ） ， 对 核 桃 病 害 方 面 的 研 究 报 道 较 少 ， 缺 乏 针 对 广 西 西 北 部 核 桃 病 虫 害 调 查 及 防 治 等 方 面 的 研 究 。 【 拟 解 决 的 关 键 问 题 】 为 明 确 广 西 西 北 部 核 桃 真 菌 性 病 害 的 发 生 情 况 ， 在 广 西 河 池 市 的 凤 山 县 、 环 江 县 、 金 城 江 区 和 百 色 市 乐 业 县 等 核 桃 种 植 区 开 展 核 桃 真 菌 性 病 害 种 类 调 查 ， 对 其 病 原 菌 进 行 形 态 学 及 分 子 生 物 学 鉴 定 ， 并 进 行 核 桃 炭 疽 病 防 治 药 剂 室 内 筛 选 及 田 间 防 治 试 验 ， 筛 选 出 可 有 效 防 治 核 桃 炭 疽 病 的 药 剂 ， 为 核 桃 病 害 防 治 提 供 科 学 依据 。 1 材料与方法 1. 1 调 查地点 于20152017 年 进 行 核 桃 真 菌 性 病 害 种 类 调 查 ， 调 查 地 点 主 要 集 中 在 广 西 西 北 部 的 河 池 市 金 城 江 区 、 环 江 县 、 凤 山 县 和 百 色 市 乐 业 县 ， 调 研 多 个 核 桃 示 范 基 地 ， 分 别 是 河 池 市 凤 山 县 金 牙 乡 示 范 基 地 、 环 江 县 水 源 镇 核 桃 示 范 基 地 、 金 城 江 区 侧 岭 乡 良 种 繁 育 基 地 、 金 城 江 区 水 任 收 费 站 核 桃 示 范 基 地 、 金 城 江 区 大 山 塘 示 范 基 地 、 金 城 江 区 齐 美 村 才 贵 屯 核 桃 示 范 基 地 、 金 城 江 区 三 才 村 内 文 屯 核 桃 种 植 地 及 乐 业县央林大槽等苗圃 。 landina ，Phoma sp. andColletotrichumgloeosporioides. Walnut anthracnose was the most serious disease.The indoor to- xicity test of the five fungicides showed that the efficacy of the five fungicide against walnut anthracnose was as follows: 25% pyraclostrobin>45% prochloraz>40% difenoconazole>25% azoxystrobin>43% tebuconazole. The control efficien- cies of 25% pyraclostrobin ，45% prochloraz and 43% difenoconazole against walnut anthracnose in field were 82.23% ， 80.26% and 75.98% respectively. 【Conclusion 】Walnut anthracnose is the main fungal disease in northwest of Guangxi. 25% pyraclostrobin is recommended as preferable fungicide to control walnut anthracnose. Furthermore ，the occurrence degreeofthesediseasescanbepreventedbyavoidingplantingonlow-lying ，poordrainageandpoorventilationplace. Key words ：walnut ；fungaldisease ；anthracnose ；fungicides ；controlefficacy ；northwestofGuangxi 8 期 1533 汪筱雪等 ： 广西西北部核桃真菌性病害调查及核桃炭疽病防治试验 1 . 2 试验材料 此 次 调 查 的 核 桃 品 种 主 要 有 凤 优1 号 、 凤 优2 号 、 云 新 核 桃 、 云 南 漾 濞 大 泡 核 桃 、 美 国 山 核 桃 、 山 东 辽 河1 号 和 香 玲 核 桃 等 。 采 集 感 病 植 株 的 叶 片 、 枝 条 和果实 ， 带回实验室作进一步试验 。 主 要 仪 器 设 备 ： 电 热 恒 温 鼓 风 干 燥 箱 （DHZT- 9240A 型 ， 太 仓 精 宏 仪 器 设 备 有 限 公 司 ） ， 全 自 动 立 式 电 热 压 力 蒸 汽 灭 菌 锅 （YXQ-LS-S 型 ， 上 海 博 讯 实 业 有 限 公 司 ） ， 光 照 培 养 箱 （LRH-400-G 型 ， 韶 关 市 泰 宏 医 疗 器 械 有 限 公 司 ） ， 生 物 光 学 显 微 镜 （OLYM- PUS CX21， 日 本 东 京 奥 林 巴 斯 公 司 ） ， PCR 仪 天 根 生 化 科 技 （ 北 京 ） 有 限 公 司 ， 电 泳 槽 （DYCZ-24A 型 ， 北 京 六 一 仪 器 厂 ） ， 凝 胶 成 像 系 统 （ 购 自Bio-Rad 公 司 ） ， DNA 提 取 试 剂 盒 新 型 植 物 基 因 组DNA 提 取 试 剂 盒 （NuClean PlantGen DNA Kit ） ， 康 为 世 纪 生 物 科技有限公司 。 1 . 3 病害田间调查方法 选 择 天 气 回 暖 、 高 温 、 高 湿 时 节 ， 即 核 桃 病 害 发 病 高 峰 期 开 展 核 桃 苗 圃 真 菌 性 病 害 调 查 及 采 样 工 作 。 采 用 线 路 踏 查 法 进 行 核 桃 病 害 种 类 调 查 ， 具 体 方 法 ： 调 查 人 员 在 同 一 树 种 苗 圃 间 行 走 观 察 植 株 ， 记 载 病 害 发 生 的 种 类 、 严 重 程 度 ， 采 集 带 有 典 型 症 状 的 样 本 ， 归 类 存 放 ， 带 回 实 验 室 后 进 行 分 离 鉴 定 。 病 害 发 生 严 重 程 度 调 查 根 据 同 一 树 种 苗 圃 田 块 形 状 选 择 调 查 方 法 及 采 样 ， 当 田 块 较 大 、 较 规 则 时 ， 可 采 用 五 点 取 样 法 ， 每 个 点 为 边 长 约2 m 的 正 方 形 ； 当 田 块 为 长 条 形 时 ， 可 采 用 三 点 法 ， 即 两 头 选 两个点 、 中间选 择 一 个 点 ； 对 于 不 规 则 的 林 场 ， 可 采 取 随 机 抽 样 调 查 采 样 。 病 害 严 重 度 分 级 标 准 （ 表1 ） 参 照 方 中 达 （1998 ） 的方法 。 发病率及病情指数按以下公式计算 ： 发病率 （% ） = 发病数/ 调查总数100 病情指数= （ 各级发病数 各级代表值 ） / （ 调 查总数 最高级数 ） 100 1 . 4 病原菌分离及鉴定 1. 4. 1 病 原 菌 分 离 纯 化 选 取 新 鲜 的 带 有 典 型 病 斑 的 核 桃 叶 片 或 根 茎 ， 用 解 剖 刀 取 病 健 交 界 处 5 mm5 mm 大 小 的 组 织 块 ， 先 用75% 酒 精 浸 润10 s ， 再 用0.1% 升 汞 溶 液 消 毒30 s ， 最 后 用 灭 菌 水 冲 洗3 次 ， 待 组 织 块 晾 干 后 ， 将 其 转 入PDA 培 养 基 中 ， 置 于 25 的 培 养 箱 中 培 养 ， 待 组 织 上 长 出 的 菌 落 产 孢 后 进行单孢稀释纯化 。 1. 4. 2 病 原 菌 致 病 性 测 定 病 原 菌 致 病 性 测 定 的 寄 主 植 物 为 云 南 漾 濞 大 泡 核 桃 。 将 已 纯 化 的 病 原 菌 用5 mm 打 孔 器 打 取 大 小 一 致 的 菌 丝 块 ， 分 别 同 时 进 行 野 外 植 株 接 种 和 室 内 离 体 接 种 。 设 针 刺 法 和 无 伤 口 接 种 两 种 处 理 ， 以 空 白 琼 脂 块 处 理 为 空 白 对 照 。 每 处 理 均 设3 次 重 复 。 室 内 离 体 接 种 各 处 理 使 用 有 机 玻 璃 罩 罩 住 后 置 于 温 室 内 保 湿 ， 野 外 植 株 接 种 后 使 用 无 菌 保 鲜 袋 套 袋 进 行 保 湿 ， 此 后 每 天 观 察 并 记 录 发 病 情 况 ， 待 出 现 症 状 后 ， 根 据 柯 赫 氏 法 则 对 发 病 部 位 进 行 病 原 再 分 离 ， 若 仍 能 得 到 相 同 的 菌 ， 即 确 定 其为病原菌 。 1. 4. 3 病 原 菌 形 态 学 鉴 定 及rDNA-ITS 序 列 测 定 病 原 菌 形 态 学 鉴 定 ： 将 纯 化 后 的 病 原 菌 菌 种 在 适 宜 的 温 度 条 件 下 进 行 活 化 培 养 并 逐 日 观 察 记 录 病 原 菌 的 培 养 性 状 ， 如 菌 落 大 小 、 颜 色 、 形 状 等 。 采 用 插 片 法 在 光 学 显 微 镜 下 观 测 病 原 菌 的 菌 丝 、 产 孢 梗 和 孢 子 等 的 大 小 及 形 态 特 征 。 观 察 病 原 菌 孢 子 等 的 形 态 结 构 时 ， 使 用 奥 林 巴 斯CX21 型 生 物 光 学 显 微 镜 ， 先 于10 倍 物 镜 视 野 下 观 察 ， 后 使 用40 倍 物 镜 观 察 其 孢 子 等 的 具 体 形 态 特 征 ； 形 态 学 鉴 定 方 法 参 照 相 关 文 献 （ 魏景超 ， 1982 ； 周茂繁 ， 1989 ； 许志刚 ， 2002 ） 。 病 原 菌rDNA-ITS 序 列 测 定 ： 将 纯 化 后 的 病 原 菌 接 种 至PDA 培 养 基 上 ， 待 其 生 长68 d 后 刮 取 菌 丝 提 取DNA 。 将 所 提DNA 进 行PCR 扩 增 ， 扩 增 引 物 为 ITS4 ： 5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3' ； ITS1： 5'- TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3' （ 周 颖 ， 2016 ） 。PCR 反 应 体 系25.0L ， 其 中 包 括2Taq MasterMix 12.5 L ， 上 、 下 游 引 物 各1.0L ， DNA 模 板3.0L ， RNase- Free Water 补 足 至25.0L 。 扩 增 程 序 ： 94 预 变 性5 min ； 94 30 s ， 55 30 s ， 72 30 s ， 进 行30 个 循 环 ； 72 延 伸7 min 。 扩 增 产 物 用 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 ， 将 成 像 条 带 清 晰 明 亮 的PCR 产 物 委 托 生 工 生 物 工 程 （ 上 海 ） 股 份 有 限 公 司 和 康 为 世 纪 生 物 科 技 有 限 公 司 纯 化 回 收 后 测 序 。 对 测 定 的 结 果 ， 采 用www.ncbi. nlm.nih.gov 网 站 中 的BLAST 比 对 程 序 进 行 比 对 分 析 ， 查 找 同 源 性 最 高 的 病 原 菌 序 列 。 根 据 病 原 菌 分 子 序 列 对 比 结 果 ， 使 用MEGA 7.0 、 DNAMAN 及 BioEdit v7.0.5进行分析 ， 明确其分类地位 。 1. 5 防治药剂筛选试验 1. 5. 1 供试药剂 供试剂信息见表2 。 1. 5. 2 室 内 药 剂 筛 选 试 验 以43% 戊 唑 醇 、 45% 咪 级别 Grade 0 1 2 3 4 代表值 Value 0 1 2 3 4 各级发病特征 Characterofdiseaseatdifferentlevels 植株无病 病斑面积占采样组织的1/4以下 病斑面积占采样组织的1/41/2 病斑面积占采样组织的1/23/4 病斑面积占采样组织的3/4 以上 ， 至全部坏死 表 1 病害严重度分级标准 Table1 Gradingstandardsofdifferentdiseaseseverity 49 卷 南 方 农 业 学 报 1534 药品名 Fungicide 43% 戊唑醇43%tebuconazole 45% 咪鲜胺45%prochloraz 25% 嘧菌酯25%azoxystrobin 25% 吡唑醚菌酯25%pyraclostrobin 40% 苯醚甲环唑40%difenoconazole 试剂种类 Reagenttype 悬浮剂 水乳剂 悬浮剂 悬浮剂 悬浮剂 有效成分含量 （g/L ） Activeconstitutecontent 430 450 250 250 400 生产厂家 Manufacturer 江西威力特生物科技有限公司 山东奥德利化工有限公司 江西威力特生物科技有限公司 济南仕邦农化有限公司 河北卓诚化工有限责任公司 表 2 供试药剂种类 Table2 Thetestedfungicidetypes 鲜 胺 、 25% 嘧 菌 酯 、 25% 吡 唑 醚 菌 酯 和40% 苯 醚 甲 环 唑 为 供 试 药 剂 ， 以 在PDA 培 养 基 上 经 分 离 纯 化 的 病 原 菌 为 供 试 材 料 。 将 供 试 药 剂 按 计 算 好 的 量 加 入 PDA 培 养 基 ， 配 置 不 同 浓 度 药 剂 培 养 基 ， 向 每 个 培 养 皿 内 倒 入10 mL 培 养 基 ， 以 不 加 药 剂 的PDA 培 养 基 为 对 照 ， 各 处 理 重 复3 次 。 将 斜 面 保 存 的 菌 种 于 无 菌 的PDA 培 养 基 中 进 行 活 化 培 养 ， 培 养6 d 后 于 菌 落 边 缘 处 用5 mm 打 孔 器 打 取 大 小 一 致 的 菌 丝 块 ， 将 菌 丝 块 接 种 至 已 凝 固 的 药 剂 培 养 基 及 空 白 对 照 培 养 基 正 中 央 ， 封 口 膜 封 口 ， 于25 恒 温 条 件 下 培 养 ， 每3 d 测 量 一 次 菌 落 直 径 ， 直 至 空 白 对 照 组 菌 落 占 培 养 皿 的 80% 。 用 垂 直 十 字 交 叉 法 测 量 所 得 各 处 理 的 菌 落 直 径 ， 计 算 菌 落 生 长 抑 制 率 ， 并 求 出 毒 力 回 归 方 程 、 相 关系数和抑制中浓度 （EC50 ） 。 1. 5. 3 田 间 防 治 试 验 在 金 城 江 区 齐 美 村 才 贵 屯 核 桃 示 范 基 地 进 行 田 间 防 治 试 验 。 选 择23 年 生 核 桃 苗 为 施 药 对 象 ， 药 剂 选 择45% 咪 鲜 胺1000 倍 、 25% 吡 唑 醚 菌 酯1000 倍 和40% 苯 醚 甲 环 唑1000 倍 液 ， 以 清 水 处 理 为 对 照 （CK ） 。 因 试 验 地 为 坡 地 ， 核 桃 种 植 不 规 则 ， 因 此 采 取 小 区 随 机 设 计 ， 每 一 片 集 中 地 区 随 机 设4 个 小 区 ， 每 小 区 对 应 一 种 药 剂 及 清 水 对 照 ， 确 保 同 一 片 集 中 地 区 内 每 种 处 理 核 桃 株 数 一 致 ， 每 处 理4 次 重 复 。 每 隔15 d 喷 药1 次 ， 共 喷3 次 ， 最 后 一 次 施 药 后15 d 调查其发病率及病情指数 。 病情指数增长率 （% ） = （ 用药后病情指数 - 用药 前 病 情 指 数 ） / （100- 用 药 前病情指数 ） 100 防治效果 （% ） = （ 对 照 组 病 情 指 数 增 长 率 - 处 理 组 病 情 指 数 增 长 率 ） / 对 照 组 病 情指数增长率100 1 . 6 统计分析 采 用Excel 2010 对 试 验 数 据 进 行 整 理 ， 使 用 SPSS 21.0 进 行 数据统计分析 。 2 结果与分析 2 . 1 核桃真菌性病害种类调查结果 2. 1. 1 核 桃 根 腐 病 危 害 核 桃 植 株 根 部 ， 根 部 腐 烂 导 致 病 株 叶 片 出 现 退 绿 、 黄 化 和 萎 蔫 等 症 状 ， 严 重 时 导 致 整 株 死 亡 ， 淹 水 后 容 易 发 病 （ 图1 ） 。 此 病 只 在 金 城 江 区 三 才 村 内 文 屯 种 植 地 、 金 城 江 区 大 山 塘 示 范 基 地 （ 山 地 种 植 ） 、 凤 山 县 金 牙 乡 示 范 基 地 和 乐 业 县 央 林 大 槽 发 生 ， 多 数 只 有12 株 发 病 。 除 金 城 江 区 三 才 村 内 文 屯 种 植 地 外 ， 其 他 调 查 点 核 桃 根 腐 病 发 病 率 均 低 于5.00% 以 下 ； 金 城 江 区 三 才 村 内 文 屯 种 植 地 核 桃 根 腐 病 发 病 率 高 达53.85%， 因 该 地 地 处 山 内 盆 地 ， 地 势 较 低 ， 接 连 阴 雨 造 成 大 面 积 淹 水 ， 导 致 根 腐病发生严 重 。 分 离 得 到 一 株 优 势 菌 株HTGF-1 ， 分 离 率 为64% 。 将 该 菌 进 行 纯 培 养 后 ， 取5 mm 菌 丝 块 接 种 于 健 康 的 核 桃 根 系 ， 利 用 柯 赫 氏 法 则 确 定HTGF-1 菌 株 为 核 桃 根腐病病原菌 。 病 原 菌 在PDA 培 养 基 上 培 养 ， 初 期 为 白 色 絮 状 菌 丝 ， 后 期 菌 落 背 面 产 生 黑 色 色 素 。 其 病 原 菌 有 两 种 形 态 的 分 生 孢 子 ， 小 型 分 生 孢 子 呈 卵 形 ， 无 隔 或 只 有1 个 分 隔 ， 大 小 为10.052.50m7.60.50m ； 大 型 分 生 孢 子 呈 镰 刀 形 ， 有13 个 隔 ， 两 端 钝 圆 ， 大 小 为 43.356.30m5.40.20m （ 图2 ） 。 根 据 其 分 生 孢 子 的 镰 刀 状 初 步 判 定 为 镰 刀 菌 属 真 菌 ， 经rDNA- ITS 序 列 测 定 后 ， 与GenBank 中 的Fusarium solani （KJ528277.1 ） 同 源 性 达99% ， 进 而 确 定 核 桃 根 腐 病 病原菌为腐皮镰刀菌 （F. solani ） 。 2. 1. 2 核 桃 枝 枯 病 主 要 危 害 小 枝 ， 尤 以12 年 生 枝 条 为 主 ， 开 始 时 病 原 菌 多 从 顶 梢 幼 嫩 的 断 枝 进 行 侵 染 ， 随 后 逐 渐 向 下 侵 染 直 至 主 干 。 侵 染 初 期 时 枝 条 呈 暗 灰 褐 色 ， 稍 凹 陷 ， 病 健 交 界 处 的 健 康 组 织 常 稍 隆 起 ， 后 逐 渐 变 为 浅 红 褐 色 ， 最 后 变 为 深 灰 色 。 病 部 皮 层 坏 死 、 干 缩 ， 很 快 扩 展 绕 枝 条 一 周 ， 造 成 枝 枯 ， 其 上 叶 片 逐 渐 变 黄 脱 落 。 病 死 枯 枝 上 散 生 很 多 黑 色 小 图 1 核桃根腐病田间危害症状 Fig.1 Symptomsofwalnutrootrotinfield 8 期 1535 汪筱雪等 ： 广西西北部核桃真菌性病害调查及核桃炭疽病防治试验 图 2 核桃根腐病病原菌的分生孢子 Fig.2 Conidiaofpathogenofwalnutrootrot a ： 小型分生孢子 ； b ： 大型分生孢子 a ：Microconidia ；b ：Macroconidia 颗 粒 ， 直 径0.20.3 mm ， 为 其 病 原 菌 的 分 生 孢 子 器 ， 湿 度 大 时 ， 分 生 孢 子 器 上 会 重 新 分 泌 出 分 生 孢 子 堆 （ 图3 ） 。 调 查 结 果 显 示 ， 核 桃 枝 枯 病 病 害 级 数14 级 不 等 ， 发 病 严 重 的 全 株80.00% 感 染 致 使 植 株 死 亡 。 在 金 城 江 区 三 才 村 内 文 屯 、 金 城 江 区 大 山 塘 示 范 基 地 、 环 江 县 水 源 镇 核 桃 示 范 基 地 、 乐 业 县 央 林 大 槽 等 地 发 病 率 为25.00%40.00%， 其 中 乐 业 县 央 林 大 槽 发病率最高 ， 为37.50% 。 将 感 病 组 织 带 回 实 验 室 后 对 发 病 部 位 进 行 切 片 观 察 ， 发 现 病 原 菌 分 生 孢 子 器 扁 球 形 ， 单 腔 ， 保 湿 培 养 一 段 时 间 后 会 从 其 上 溢 出 分 生 孢 子 。 取 感 病 部 位 进 行 分 离 ， 得 到 一 株 优 势 菌 株ZK6-4。