甜瓜尾孢叶斑病病原分离与鉴定.pdf

49 卷 南 方 农 业 学 报 476 0 引言 【 研 究 意 义 】 甜 瓜 是 葫 芦 科 黄 瓜 属 （Cucumis Linn. ） 一 年 生 蔓 生 草 本 植 物 ， 分 为 薄 皮 甜 瓜 和 厚 皮 甜 瓜 两 大 类 型 。 厚 皮 甜 瓜 （ 包 括 哈 密 瓜 、 白 兰 瓜 和 粗 皮 甜 瓜 等 ） 原 产 非 洲 和 亚 洲 热 带 地 区 ， 我 国 新 疆 为 厚 皮 甜 瓜 次 生 起 源 中 心 之 一 。 广 西 引 进 厚 皮 甜 瓜 种 植 始 于20 世 纪90 年 代 中 期 ， 并 于1998 年 开 始 通 过 改 用 大 棚 保 护 地 避 雨 栽 培 试 种 获 得 成 功 ， 2003 年 后 种 植 面 积 迅 速 扩 大 ， 常 年 种 植 总 面 积 约4000 ha ， 种 植 甜 瓜 已 成 为 广 西 部 分 瓜 农 脱 贫 致 富 的 重 要 途 径 。 由 于 广 西 的 气 候 高 温 多 雨 ， 大 棚 内 湿 度 大 ， 加 上 大 棚 栽 培 难 以 实 施 轮 作 ， 致 使 大 棚 甜 瓜 生 产 受 到 多 种 病 害 的 威 甜瓜尾孢叶斑病病原分离与鉴 定 叶云峰 1 ， 杜婵娟 2 ，覃斯华 1* ，柳唐镜 1 ，洪日新 1 ，付 岗 2* ， 李 桂芬 1 ， 黄金艳 1 （ 1 广西农业科学院 园艺研究所 ， 南宁 530007； 2 广西农业科学院 植物保护研究所 ， 南宁 530007 ） 摘要 ： 【 目的 】 明确近 年来引 起广西 大棚厚 皮甜瓜 叶斑病 的病原 ， 为该病 害的有 效防治 提供参 考依据 。 【 方法 】 采用 单 孢 分 离 法 直 接 从 罹 病 厚 皮 甜 瓜 叶 片 上 分 离 病 原 菌 ， 以 离 体 叶 片 接 种 法 验 证 病 原 菌 的 致 病 性 。 对 致 病 菌 的 菌 落 、 产 孢 结 构 、 分 生 孢 子 等 形 态 特 征 进 行 观 察 ， 同 时 对 致 病 菌 的rDNA-ITS 基 因 序 列 进 行 同 源 性 比 对 分 析 。 【 结 果 】 病 原 菌 形 态 特 征 与 瓜 类 尾 孢 （Cercospora citrullina ） 基 本 一 致 ， rDNA-ITS 基 因 序 列 与 瓜 类 尾 孢 的 同 源 性 达99% 。 结 合 病 原 菌 的 形 态 学 和 分 子 生 物 学 特 征 ， 将 该 病 害 的 病 原 菌 鉴 定 为 瓜 类 尾 孢 。 【 结 论 】 近 年 在 广 西 大 棚 厚 皮 甜 瓜 产 区 严 重 发 生 的 甜 瓜叶斑病由瓜类尾孢引起 ， 该病是广西厚皮甜瓜上的一种新病害 。 关键词： 甜瓜；叶斑病； 病原鉴定 ； 瓜类 尾孢 中图分类号：S436.5 文献标志码 ： A 文章编号： 2095-1191 （2018 ） 03-0476-05 收稿日期 ： 2017-09-19 基 金 项 目 ： 广 西 创 新 驱 动 发 展 专 项 资 金 项 目 （ 桂 科AA17204097 ） ； 广 西 科 学 研 究 与 技 术 开 发 计 划 项 目 （ 桂 科 能1598025-47 ） ； 广 西 农业科学院科技发展基金项目 （ 桂农科2017JM17 ） ； 广西农业科学院基本科研业务专项项目 （2015YT49 ） 作 者 简 介 ： * 为 通 讯 作 者 ： 覃 斯 华 （1977- ） ， 副 研 究 员 ， 主 要 从 事 西 甜 瓜 育 种 与 栽 培 研 究 工 作 ， E-mail ：nkyqsh163.com ； 付 岗 （1979- ） ， 博 士 ， 副 研 究 员 ， 主 要 从 事 植 物 病 害 防 治 研 究 工 作 ， E-mail ：fug110gxaas.net 。 叶 云 峰 （1978- ） ， 博 士 ， 副 研 究 员， 主要从事西甜瓜病虫害防治研究工作， E-mail ：yeyunfeng111126.com Isolationandidentificationofpathogencausing Cercospora leafspotofmuskmelon YEYun-feng 1 ，DUChan-juan 2 ，QINSi-hua 1* ，LIUTang-jing 1 ，HONGRi-xin 1 ， FUGang 2* ，LIGui-fen 1 ，HUANGJin-yan 1 （ 1 HorticulturalResearchInstitute ，GuangxiAcademyofAgriculturalSciences ，Nanning 530007 ，China ； 2 Plant ProtectionResearchInstitute ，GuangxiAcademyofAgriculturalSciences ，Nanning 530007 ，China ） Abstract ： 【Objective 】 ThepathogencausingleafspotdiseaseonmuskmeloningreenhouseinGuangxiinrecentyears was clarified to provide reference for the effective control of the disease. 【Method 】 The pathogenic fungi were isolated by single spore isolation method from leaves of diseased muskmelon. The pathogenicity of pathogenic fungi was verified by inoculation of detached leaves. Furthermore ，the colony ，conidiophores and conidia characteristics of the pathogen were observed.HomologyanalysisonrDNA-ITSgenesequencesofthepathogenicfungiwasconducted. 【Result 】 Themorpho- logical characteristics of the pathogen were consistent with Cercospora citrullina. And its rDNA-ITS gene sequences showed 99% similarity with C. citrullina. Based on the morphological and molecular characteristics ，the pathogen was identified as C. citrullina. 【Conclusion 】The serious leaf spot appeared on muskmelon in greenhouse in Guangxi these yearsiscausedbyC.citrullina.ItisanewdiseaseonmuskmeloninGuangxi. Keywords ：muskmelon ；leafspot ；identificationofpathogen ；Cercosporacitrullina 南方农业学报 JournalofSouthernAgriculture 2018 ， 49 （ 3 ） ： 476 - 480 ISSN 2095 - 1191 ； CODEN NNXAAB http:/www.nfnyxb.com DOI ： 10 . 3969 /j.issn. 2095- 1191 . 2018. 03. 10 3 期 477 胁 。 本 课 题 组 于20152016 年 在 广 西 南 宁 、 北 海 和 钦 州 等 厚 皮 甜 瓜 主 产 区 开 展 甜 瓜 病 害 种 类 调 查 时 发 现 一 种 叶 部 新 病 害 ， 该 病 害 侵 染 北 甜 一 号 、 好 运11 号 和 新 金 凤 凰 等 厚 皮 甜 瓜 品 种 ， 其 症 状 与 以 往 发 生 的 甜 瓜 叶 部 病 害 症 状 存 在 明 显 差 异 ， 主 要 表 现 为 在 叶 片 上 形 成 近 圆 形 或 倒 “V ” 字 形 褐 色 大 型 病 斑 。 该 病 在 春 茬 甜 瓜 上 的 发 病 率 为30%50%， 在 秋 茬 甜 瓜 上 发 生 更 严 重 ， 多 数 大 棚 发 病 率 在80% 以 上 ， 严 重 的 发 病 率 达100%， 成 为20152016 年 广 西 大 棚 甜 瓜 最 严 重 的 叶 部 病 害 之 一 。 该 病 主 要 造 成 甜 瓜 叶 片 大 面 积 枯 死 ， 植 株 早 衰 ， 严 重 影 响 果 实 后 期 的 营 养 吸 收 ， 降 低 果 实 品 质 和 产 量 ， 造 成20%40% 的 经 济 损 失 。 目 前 该 病 病 原 菌 的 分 类 地 位 尚 不 明 确 ， 因 此 ， 开 展 该 病 原 的 鉴 定 研 究 ， 对 有 效 防 治 该 病 害 具 有 重 要 的 指 导 意 义 。 【 前 人 研 究 进 展 】 在 我 国 南 方 地 区 大 棚 甜 瓜 上 常 发 生 的 病 害 主 要 有 霜 霉 病 、 白 粉 病 、 蔓 枯 病 、 病 毒 病 、 枯 萎 病 、 炭 疽 病 、 猝 倒 病 和 根 结 线 虫 病 等 （ 何 毅 等 ， 2005 ； 周 灵 芝 等 ， 2006 ） 。 经 比 对 ， 本 课 题 组 调 查 发 现 的 甜 瓜 叶 部 新 病 害 症 状 与 上 述 常 见 病 害 的 叶 部 症 状 存 在 明 显 差 异 ， 关 于 这 种 新 病 害 目 前 未 见 相 关 研 究 报 道 。 此 外 ， 前 人 对 植 物 病 害 的 鉴 定 通 常 采 用 病 原 菌 形 态 学 和 分 子 生 物 学 相 结 合 的 方 法 ， 该 方 法 能 将 病 原 菌 鉴 定 到 种 的 水 平 （ 王 爽 等 ， 2013 ； 冉 双 飞 等 ， 2016 ； 赵 杨 等 ， 2016 ； 欧 阳 秋 飞 等 ， 2017 ） 。 【 本 研 究 切 入 点 】 对 于 一 种 新 发 生 的 病 害 ， 准 确 鉴 定 其 病 原 菌 是 进 行 有 效 防 治 的 基 本 前 提 。 目 前 对 近 年 来 广 西 大 棚 甜 瓜 叶 片 上 发 生 的 新 病 害 尚 无 文 献 报 道 。 【 拟 解 决 的 关 键 问 题 】 采 用 单 孢 分 离 法 对 厚 皮 甜 瓜 上 新 发 生 的 叶 部 病 害 进 行 病 原 菌 分 离 ， 用 离 体 叶 片 接 种 法 进 行 致 病 性 测 定 ， 同 时 对 病 原 菌 的 形 态 特 征 进 行 显 微 观 察 ， 并 对 其rDNA-ITS 基 因 序 列 进 行 同 源 性 比 对 分 析 ， 结 合 病 原 菌 的 形 态 学 特 征 和 分 子 生 物 学 分 析 结 果 进 行 鉴 定 ， 以 明 确 该 病 原 菌 的 分 类 地 位 ， 为 该 病 害 的有效防治提供 参考 依据 。 1 材料与方法 1.1 试验材料 病原 菌分 离和 接种 均采 用厚 皮甜 瓜品 种好 运11 号 ， 种 植 于 广 西 南 宁 市 武 鸣 区 锣 圩 镇 武 帽 农 场 。 病 原菌分离采用马铃薯琼脂培养基 （PDA ） 。 1.2 病害症状观察 2015 年8 月2016 年12 月 ， 在 南 宁 市 武 鸣 区 、 青 秀 区 和 北 海 市 银 海 区 等 厚 皮 甜 瓜 主 产 区 ， 于 不 同 发 病 时期对厚皮甜瓜叶斑病进行症状观察 、 记录和拍照 。 1.3 病 原菌鉴定 1. 3. 1 病 原 菌 分 离 从 南 宁 市 武 鸣 区 锣 圩 镇 武 帽 农 场5 个 大 棚 采 集 新 鲜 病 叶 各1 张 ， 分 别 用 灭 菌 水 冲 洗 表 面 ， 置 于28 下 保 湿2 d， 在 超 净 工 作 台 上 进 行 病 原 菌 单 孢 分 离 。 用 沾 了 无 菌 水 的 灭 菌 接 种 环 粘 取 病 斑 处 的 分 生 孢 子 ， 在 水 琼 脂 块 表 面 划 线 ， 置 显 微 镜 下 观 察 ， 挑 取 单 孢 子 移 入 另 一 块 水 琼 脂 块 表 面 ， 再 次 用 显 微 镜 观 察 ， 确 认 第2 块 水 琼 脂 块 上 只 含 有1 个 分 生 孢 子 ， 将 第2 块 水 琼 脂 块 移 到PDA 培 养 基 上 ， 28 下 黑 暗 培 养10 d ， 挑 取 菌 落 边 缘 的 菌 丝 块 转 接 至PDA 斜面培养基上 ， 培养10 d 后4 保存备用 。 1. 3. 2 病 原 菌 致 病 性 测 定 从 生 长 健 壮 的 甜 瓜 植 株 中 上 部 剪 取 健 康 叶 片 ， 用 无 菌 水 冲 洗 干 净 。 用 灭 菌 接 种 针 在 健 康 叶 片 上 的 每 个 接 种 点 针 刺5 下 ， 在 伤 口 处 滴 半 滴 无 菌 水 。 从28 黑 暗 培 养15 d 的 菌 落 上 切 取 菌 丝 块 （5 mm5 mm ） ， 将 长 菌 丝 的 一 面 贴 于 针 刺 伤 口 处 。 每 处 理3 张 叶 片 ， 每 张 叶 片 接 种3 个 菌 丝 块 ； 以 针 刺 伤 口 处 贴 放PDA 空 白 培 养 基 块 为 对 照 。 将 处 理 和 对 照 叶 片 置 于28 下 保 湿 培 养 ， 定 期 观 察 各 处 理 叶 片 的 发 病 情 况 。 发 病 后 对 病 斑 上 的 病 原 菌 进 行 再 分 离 ， 比 较 分 离 菌 株 与 接 种 菌 株 的 菌 落 和 分 生 孢 子 形 态 是 否 相 同 ， 如 分 离 菌 株 与 接 种 菌 株 的 菌 落 和 分 生 孢 子 形 态 相 同 ， 则 说 明 是 同 一 种 真 菌 ， 可 确 认为病原菌 。 1. 3. 3 病 原 菌 形 态 学 鉴 定 将 致 病 菌 接 种 到PDA 培 养 基 上 ， 置 于28 下 黑 暗 培 养 ， 定 期 观 察 记 录 菌 落 的 形 态 特 征 和 生 长 情 况 。 另 外 ， 用 灭 菌 解 剖 刀 片 从 叶 片 病 斑 上 刮 下 菌 体 ， 置 于 载 玻 片 上 的 半 滴 无 菌 水 中 ， 盖 上 盖 玻 片 ， 置 显 微 镜 下 观 察 病 菌 的 产 孢 结 构 和分生孢子形态特征 ， 并测量大小 。 1. 3. 4 病 原 菌 分 子 生 物 学 鉴 定 采 用 天 根 生 化 科 技 （ 北 京 ） 有 限 公 司 生 产 的DNA 提 取 试 剂 盒 提 取 病 原 菌 基 因 组DNA 。 以 真 菌 通 用 引 物ITS1 （5'-TCCG- TAGGTGAACCTGCGG-3' ） 和ITS4 （5'-TCCTCCGC TTATTGATATGC-3' ） （ 朱 迎 迎 等 ， 2016 ） 对 病 原 菌 的 rDNA-ITS 序 列 进 行PCR 扩 增 。PCR 反 应 体 系25.0 L ： 2.5 mmol/L dNTP 2.0 L ， 10Buffer 2.5 L ， 5 U/L Ex Taq 0.5 L ， 10 mol/L ITS1 和ITS4 各1.0 L ， 模 板 DNA 100 ng， 超 纯 水 补 足 至25.0 L 。 扩 增 程 序 ： 95 预 变 性5 min ； 95 30 s ， 58 30 s ， 72 80 s ， 进 行35 个 循 环 ； 72 延 伸10 min 。PCR 扩 增 产 物 经 1% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 后 ， 回 收 目 标DNA 条 带 ， 送 交 金 唯 智 生 物 科 技 （ 北 京 ） 有 限 公 司 进 行 序 列 测 定 。 运 用 BLAST 将 测 序 结 果 与GenBank 数 据 库 中 的 基 因 序 列 进行同源性比对分析 。 叶云峰等 ： 甜瓜尾孢叶斑病病原分离与鉴定 49 卷 南 方 农 业 学 报 478 2 结果与分析 2.1 病 害症状 该 病 害 在 厚 皮 甜 瓜 定 植 后 的 整 个 生 育 期 均 可 发 生 ， 苗 期 发 生 较 轻 微 ， 以 生 长 中 后 期 （ 结 果 期 至 采 收 期 ） 发 病 最 重 。 病 害 症 状 首 先 在 植 株 下 部 的 叶 片 上 出 现 ， 随 后 向 中 上 部 叶 片 扩 展 。 初 期 在 叶 片 上 形 成 灰 白 色 圆 形 小 斑 点 ， 后 逐 渐 扩 大 成 近 圆 形 褐 色 病 斑 ， 病 斑 中 央 常 为 灰 白 色 ， 外 围 有 明 显 黄 色 晕 圈 （ 图 1-A ） 。 还 可 形 成 不 规 则 形 或 沿 着 叶 缘 叶 脉 向 叶 片 内 部 扩 展 呈 倒 “V ” 字 形 的 大 型 病 斑 ， 病 斑 均 为 褐 色 ， 外 围 有 黄 色 晕 圈 （ 图1-B ） ， 病 斑 大 小 差 异 较 明 显 。 病 害 严 重 时 ， 多 个 病 斑 融 合 在 一 起 ， 致 叶 片 大 面 积 干 枯 死 亡， 造成植株早 衰 。 图 1 厚皮甜瓜叶斑病自然发病症状 Fig.1 Naturalsymptomsofmuskmelonleafspot A ： 近圆形病斑 ； B ： 不规则形或倒 “V ” 字形病斑 A ： Semiroundspot ； B ： Irregularshapedorinverted “V ”shapedspots 2.2 病原菌分离和鉴定结果 2. 2. 1 病 原 菌 分 离 和 致 病 性 测 定 结 果 对5 张 来 自 不 同 大 棚 的 甜 瓜 病 叶 进 行 病 原 菌 单 孢 分 离 ， 分 离 纯 化 得 到 形 态 特 征 一 致 的 真 菌5 株 。 通 过 针 刺 接 种 法 将5 株 菌 株 的 菌 丝 块 接 种 到 健 康 的 甜 瓜 叶 片 上 ， 接 种4 d 后 ， 接 种 部 位 均 出 现 明 显 的 近 圆 形 褐 色 小 病 斑 ， 直 径810 mm ， 外 围 有 明 显 黄 色 晕 圈 （ 图2-B ） 。 随 着 时 间 推 移 ， 病 斑 不 断 扩 大 ， 接 种6 d 后 ， 病 斑 直 径 达2530 mm ， 病 斑 症 状 与 自 然 发 病 的 近 圆 形 病 斑 症 状 相 似 （ 图2-C ） 。 对 照 叶 片 未 发 病 （ 图2-A ） 。 从 发 病 组 织 上 采 用 单 孢 分 离 法 再 分 离 得 到 的 菌 株 ， 其 菌 落 和 分 生 孢 子 形 态 与 接 种 菌 株 相 同 ， 表 明 再 分 离 获 得 的 真 菌 菌 株 即 为 病 原 菌 。 选 取 其 中 一 株 菌 株TBD-2 进 行培养菌落的形态特征观察和分子生物学鉴定 。 图 2 菌株TBD-2接种甜瓜叶片后的发病症状 Fig.2 SymptomsaftermuskmelonleafinoculatedwithstrainTBD-2 A ： CK ； B ： 接种4d 后的发病症状 ； C ： 接种6d后的发病症状 A ： CK ； B ： Symptom4dafterinoculation ； B ： Symptom6dafterinoculation 3 期 479 2. 2. 2 病 原 菌 形 态 学 鉴 定 结 果 人 工 培 养 的 菌 落 在 PDA 培 养 基 上 生 长 缓 慢 ， 28 下 黑 暗 培 养10 d， 菌 落 直 径 仅 为3.03.5cm ， 且 不 产 生 分 生 孢 子 。 菌 落 近 圆 形 ， 边 缘 平 滑 ， 气 生 菌 丝 致 密 ， 菌 落 正 面 为 白 色 ， 中 央 隆 起 （ 图3-D ） ， 菌 落 背 面 黑 褐 色 ， 产 生 红 色 色 素 。 菌 落 生 长 特 征基本与尾孢属真菌相符 （ 雷玉明和张建文 ， 2006 ） 。 从 叶 片 病 斑 上 观 察 到 病 菌 子 实 体 叶 两 面 生 。 刮 下 菌 体 制 成 临 时 玻 片 在 显 微 镜 下 观 察 ， 可 见 子 座 小 或 不 明 显 。 分 生 孢 子 梗 单 生 或212 根 簇 生 ， 顶 部 浅 褐 色 ， 基 部 深 褐 色 ， 不 分 枝 ， 直 立 或 弯 曲 ， 有17 个 曲 膝 状 折 点 ， 18 个 隔 膜 ， 顶 部 圆 锥 形 平 截 ， 孢 痕 疤 明 显 加 厚 （ 图3-C ） ， 大 小 为 （52.5245.0 ） m （4.06.0 ） m 。 分 生 孢 子 针 形 ， 直 或 稍 弯 曲 ， 无 色 ， 单 生 ， 基 部 平 截 ， 顶 端 渐 细 至 钝 ， 多 个 隔 膜 （ 图3-A 和 图3-B ） ， 大 小 为 （48.5238.0 ） m （2.75.4 ） m 。 从 叶 片 病 斑 上 观 察 到 的 病 原 菌 形 态 特 征 与 中 国 真 菌 志 第 二 十 四 卷 尾 孢 菌 属 （ 郭 英 兰 等 ， 2005 ） 描 述 的 寄 生 在 葫 芦 科 作 物 上 的 瓜 类 尾 孢 （Cercospora citrullina ） 基 本 一致 。 2. 2. 3 病 原 菌 分 子 生 物 学 鉴 定 结 果 用 真 菌 通 用 引 物ITS1 和ITS4 对 菌 株TBD-2 的rDNA-ITS 基 因 进 行PCR 扩 增 ， 产 物 经1% 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 ， 获 得 长 度 约530 bp 的DNA 片 段 （ 图4 ） 。 回 收 该DNA 片 段 进 行 测 序 ， 得 到538 bp 的 基 因 序 列 （GenBank 登 录 号 KY824771 ） ， 将 该 序 列 与GenBank 数 据 库 中 已 公 布 的 基 因 序 列 进 行BLAST 同 源 比 对 分 析 ， 结 果 表 明 ， 该序列与瓜类尾孢的同源性达99% 。 结 合 病 原 菌 的 形 态 学 和 分 子 生 物 学 鉴 定 结 果 ， 将菌株TBD-2 鉴定为瓜类尾孢 （C. citrullina ） 。 3 讨论 国 内 外 已 报 道 能 引 起 甜 瓜 叶 斑 病 的 病 原 菌 有 多 种 ， 包 括 瓜 链 格 孢 （Alternaria cucumerina ） （Egel and Harmon ， 2007 ） 、 交 链 格 孢 （A. alternata ） （Zhou and Everts ， 2008 ； Huang et al. ， 2011 ） 、 多 主 棒 孢 霉 （Corynespora cassiicola ） （ 王 爽 等 ， 2013 ） 和 丁 香 假 单 胞 杆 菌 （Pseudomonas syringae ） （ 李 亚 利 等 ， 2007 ） 等 真 菌 和 细 菌 ， 由 瓜 类 尾 孢 （C. citrullina ） 引 起 的 甜 瓜 叶 斑 病 未 见 相 关 文 献 报 道 。 瓜 类 尾 孢 主 要 侵 染 葫 芦 科 的 冬 瓜 、 西 瓜 、 南 瓜 、 西 葫 芦 、 黄 瓜 、 丝 瓜 和 苦 瓜 等 作 物 （ 郭 英 兰 等 ， 2005 ） ， 引 起 叶 斑 类 病 害 。 鉴 于 能 引 起 甜 瓜 叶 斑 病 的 病 原 种 类 较 多 ， 为 避 免 混 淆 ， 建 议 将 瓜 类尾孢引起的甜瓜叶斑病定名为甜瓜尾孢叶斑病 。 本 研 究 发 现 采 用 常 规 的 组 织 分 离 法 很 难 分 离 到 尾 孢 菌 ， 其 原 因 可 能 是 尾 孢 菌 在 人 工 培 养 基 上 生 长 缓 慢 ， 容 易 被 其 他 生 长 较 快 的 腐 生 真 菌 或 内 生 真 菌 覆 盖 ， 因 此 采 用 组 织 分 离 法 通 常 分 离 到 其 他 真 菌 而 不 是 尾 孢 菌 。 而 采 用 挑 取 单 孢 的 分 离 法 ， 可 有 效 分 离 到 纯 的 尾 孢 菌 ， 且 能 减 少 病 菌 分 离 纯 化 的 工 作 量 。 刘 庆 奎 等 （2013 ） 、 张 小 飞 等 （2014 ） 也 是 采 用 单 孢分离法对尾孢属真菌进行分离 。 瓜 类 尾 孢 在 人 工 培 养 基 上 生 长 缓 慢 ， 这 一 特 性 与 其 他 尾 孢 属 真 菌 相 同 （ 雷 玉 明 和 张 建 文 ， 2006 ） 。 其 生 长 缓 慢 的 特 性 将 影 响 后 续 的 生 物 学 特 性 测 定 、 药 剂 敏 感 性 测 定 等 室 内 试 验 的 开 展 ， 因 此 ， 促 进 该 病 原 菌 快速生长的培养条件和培养方法尚需进一步 探 究 。 图 3 菌株TBD-2的形态特征 Fig.3 MorphologyofstrainTBD-2 A 和B ： 分生孢子 ； C ： 分生孢子梗和子座 ； D ： 菌落 AandB ： Conidia ； C ： Conidiophoreandstroma ； D ： Colony 图 4 菌株TBD-2的rDNA-ITS 基因PCR 扩增电泳结果 Fig.4 PCR amplification electrophorogram results for rDNA- ITSgeneofstrainTBD-2 M ： DL2000DNAMaker ； 1 ： TBD-2 菌株StrainTBD-2 M 1 2000bp 1000bp 700bp 500bp 250bp 100bp 叶云峰等 ： 甜瓜尾孢叶斑病病原分离与鉴定 49 卷 南 方 农 业 学 报 480 4 结论 结 合 形 态 学 和 分 子 生 物 学 方 法 ， 对 近 年 来 在 广 西 大 棚 厚 皮 甜 瓜 上 严 重 发 生 的 一 种 叶 部 新 病 害 进 行 鉴 定 ， 将 病 原 菌 鉴 定 为 瓜 类 尾 孢 （C. citrullina ） ， 该 病 是广西厚皮甜瓜上的一种新病害 。 参考文献 ： 郭 英 兰 ， 刘 锡 琎 ， 谢 文 瑞. 2005. 中 国 真 菌 志 （ 第 二 十 四 卷 尾 孢 菌 属 ） M . 北 京 ： 科 学 出 版 社 ： 103-105. 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