李明远断病手迹（八十五） 菊花上发生的原来是番茄斑萎病毒（TSWV）.pdf

温室园艺2018-01612016年10月6日，我和实验室的几位同事去北京顺义的花卉基地。办完事儿之后就到毗邻的一个花木公司的切花菊温室参观，想欣赏一下他们的切花菊。他们的切花菊温室是连栋玻璃温室，看上去又高又大，面积大约有0.5 hm2。自从建成一直在种植切花菊。而且是一茬接着一茬，即在同一个时间里可以见到扦插在穴盘里的菊花苗、刚刚栽在土里的菊花植株、尚未现蕾的菊花、已经开放的花朵、收获完的残株以及尚未定植的白地，周年不断。这样种植已经有五六年了。公司管销售的孙师傅，陪我在里面转了转。看上去，切花菊长的似乎很好，已经收获的几个品种摆放在过道里，搭配在一起，十分美丽。我问孙师傅这里的切花菊是不是也有病虫害？他说：“哪能没有？而且十分严重，常见的害虫有蓟马、叶螨，病害的症状有烂头和死苗。今年夏天死苗就很严重，有的品种加在一起死苗能有1/3。”。听说还有病虫害，我很感兴趣，就问他是什么病、怎么防治的、效果如何？他说：“用药喷过，也用药灌过，但是最后拔掉的也不少。因为用的药有好几种，得问我们这里的技师。”我又问他现在是否还可以见到死苗？他说还能找到一棵半棵。说着便走进地里帮我寻找。还不错，没有花太长时间就找到2棵叶片萎蔫的植株。我拔下了这2棵病株，看到病株的根及根颈部变黑，和此前见到的菊花立枯病十分相似，我就说有可能是立枯病。李明远断病手迹（八十五）菊花上发生的原来是番茄斑萎病毒（TSWV）李明远1,2，陈东亮1,2，李雪梅1,2，王玲玲3，黄丛林1,2（1. 北京市农林科学院农业生物技术研究中心，北京 100097；2. 北京市功能花卉工程技术中心，北京 100097；3. 西藏农牧学院资源与环境学院，西藏林芝 860000）  图 1  藏在切花菊中间的的番茄斑尾病毒（简称 TSWV，以下同）病株（红 色 箭头指的 植株 ） 图 2 上部折倒的 TSWV 病株看完死苗，孙师傅说：“还有一种烂头病，不知道是什么病？您给看看”。说着他便领我到一块品种名为斯翠萨（Stressa）的小区。这个小区的植株长得不大整齐，仔细看可以发现有些矮化植株（图1）顶部下垂、叶片萎蔫；还有的病株叶片正常，而在茎的上部出现一段褐色水浸状的病斑，严重的还可使茎腐烂、凹陷，引起上端嫩茎折倒（图2）。这时孙师傅对我说：“这就是我说的烂头病”。我发现在这个品种中病株很多。一般每株仅有一处腐烂，个别的在其上端还有一处腐烂。也有些植株并不折倒，仅在茎部出现一些褐色的条斑。还发现病原也可以侵染叶片，形成边缘不明显的暗褐色的叶斑，叶斑多自边缘向内发展，严重时会使整个叶片枯死（图3），特别是发生在植株的顶端时，会引起顶部一些叶片萎缩、枯死（图4）。因为腐烂是细菌常见的症状。我猜测可能是一种细菌性病害，因为我也是第一次见到，没有看到病原，不敢乱说，只说可能是一种传染DOI: 10.16815/j.cnki.11-5436/s.2018.01.011温室园艺2018-0162温室园艺叶缘枯焦的症状，和我所见完全一样。所以我认为所谓的“烂头病”就是菊花细菌性枯萎病（Erwinia crysanthemi）。后来又在方中达主编的中国农业植物病害2上查到了对菊花细菌性枯萎病的症状描述，也和我们这里所见比较吻合。但是要肯定它是病原菌，必须通过侵染性试验验证。为此我便采用离体叶片法在无菌条件下将含有菌液的脱脂棉贴在叶片的伤口上。放在有光的定温箱中让它发病。1周过去，没有反应。又过了1周，接种和对照叶都腐烂了，说明回接失败。即我们得到的分离物不是菊花细菌性枯萎病。2017年1月，我又和陈东亮博士去了一趟这个花木公司的温室，想知道前几次见到的菊花“烂头病”在冬季是否还在发展。一进门遇到主管这片菊花的陈经理，据介绍，他们目前正在防治菊花“烂头病”，采取的措施就是换土。把温室里已收完花的那部分土地的土壤移走，换上无病的大田土。再就是对未换茬的白地，进行药剂处理，使用的农药是包括多菌灵、百菌清、链霉素、锌硫磷在内的“四合一”。据说仅换了半个温室的土就花了5万元。但是由于处理时温室里仍有不少刚定植和现蕾的植株，遗留在温室里的病株仍然不少。交谈中我们知道陈经理并不认为他们温室里发生的菊花“烂头病”是由细菌引起，他们的种苗是从荷兰购入，据图 3  菊花 TSWV 叶部 症状图 4  顶芽坏死 TSWV 病株性病害，具体是什么病也不清楚。我请他帮我采集了一些病枝，又从不同的角度拍了些照片就离开了玻璃温室。回到实验室我对病茎进行了保湿，因为病株对高湿毫无反应，就开始进行组织分离。按习惯，分离时还在使用的PDA培养基中加了乳酸。做完后在25下放了2天，什么也没长。我后悔加了乳酸，因为乳酸会抑制细菌的生长，如果是细菌病害，有可能分离不出来病原。但是第3天，发现有几个组织块长出了细菌，菌落边缘不整齐，但是很纯，做的5皿菌落的形态都基本相同。很像是以前我见到的欧氏杆菌（Erwinia sp.）。根据所见又去查资料，首先查阅的是韩金声编著的花卉病害防治1，根据此书的介绍，此病最明显的症状是茎上部腐烂，导致末梢枯萎和死亡，剖开病部，可发现病梢基部变为褐色或黑色，病害偶尔出现荷兰专家说这里发生的有可能是由蓟马传播的番茄斑萎病（TSWV），换土是为了给菊花创造一个无病虫的环境。但是，当时我们并没有将荷兰专家的看法当回事儿，因为在番茄上的番茄斑萎病毒我见到过，没有出现烂头的这种症状，仍认为目前这里发生的更像是一种细菌病害。为了证明我们的看法，就又采集了一些病株回来，做了1次分离和回接。这次分离病菌使用的方法和上次不同的是不加乳酸。经过在PDA平板上划线，得到了8个单菌落。从菌落的形态上看，与上次不同，多为乳白色，有光泽，边缘比较整齐。然后将其再次接种到菊花上。接种的方法有3种，其一是将病菌用喷接法接种在郦邑贡菊的一种茶菊上（每株剪掉2个叶片造成伤口，接种40 h放回温室养护）。与此同时，我们还在郦邑贡菊上使用针刺法（在叶基针刺后，用消毒脱脂棉蘸菌液敷在伤口上面，保湿40 h）接种了一些苗子，还用郦邑贡菊离体茎、叶（在消毒培养皿中叠放3片消毒滤纸，将洁净的茎、叶放入，针刺后用消毒脱脂棉蘸菌液敷在上面保湿）在消毒培养皿里进行接种。到第7天，我发现接种4号细菌的植株有2片叶子发病，而且叶片附近的茎变黑（图5）。我当时十分高兴，以为通过一番努力终于有了结果。但是，我们将发病的植株放在人工气候箱里，将温度设定为18、28各12 h，每天光照12 h，湿度80继续温室园艺2018-0163处理3周后，发现病害没有发展，此时变黄的那个叶片已枯死，而变黑的茎却返绿。更令人惊讶的是在病叶处却长出了一个新枝，说明植株又变好了。此外，在这段时间，陈东亮博士等还对病菌进行了PCR检测，得知我们分离到的病菌有2种，除第9号为芽孢杆菌外，多数为假单胞杆菌。同时，从文献上还看到有一篇报道3，说菊花可发生一种由Pseudomonas cichorii引起的菊花细菌病害，和我们田间见到的病害有些相似。但是，由于回接没有成功，这个病害仍不能得到确认。为了明确这种病害的病原，我们课题组除了做了许多工作外，又请了2位专门研究细菌的朋友帮我分离鉴定，但是2个月过去了，仍无进展。2017年3月，我们第4次来到发病现场，发现随着天气的转暖，温室里蓟马的数量有所增多。同时进入花期的切花菊的“烂头病”也有些加重。多数品种的症状和以前看到的相同，仍是烂头。但是有一种开粉色花的品种病害的表现是花叶型症状，而且在茎上也有黑色的条斑，这倒像是一种病毒病（图6）。还发现一些病株虽然病变集中在植株的上部，形成所谓的烂头，但是在茎的一侧自下而上会断续的出现黑褐色线状的条斑，这种条斑并不伤及皮下的髓部，和番茄的条斑病毒（ToMV）有些相像（图7）。而且还发现了有些矮化病株花色异常，正常的花应当是紫红色，但是这种病花部分的花瓣颜色变浅、变黄（图8）；还有的菊花瓣扭曲，瓣数变少（图9），越来越多的症状表现都说明这里发生的很像是由病毒引起的病害，我们对这个病害的认识发生了改变。为了搞清楚这个问题，我们将“烂头病”和田间见到的花叶型的病株一起使用PCR的方法进行了检测4。还根据文献，使用摩擦接种病毒的方法，对采到的病样做了侵染试验5。即将田间采到的病样，使用0.01M的磷酸缓冲液+0.1%亚硫酸钠（pH=7.2）研碎后，加上500目的金刚砂，接种在健康的菊花上。使用PCR方法测得的结果说明这里发生的是番茄斑萎病毒Tomato spotted wilt virus（TSWV）。而且使用摩擦接种处理的植株在3周后，除接种叶枯死，茎部还出现了坏死斑。表现出和“烂头病”类似的症状（图10）证明了它具有侵染性。就在此时，我们从文献上图 6  花叶型 TSWV 病株 图 7  茎部出现褐色条斑的 TSWV 病株图 8  TWSV 病株花瓣变浅、变黄的表现图 9  TWSV 病株菊花花瓣扭曲，瓣数变少的表现图 5  接种 4 号细菌的 菊花 植株症状 表现温室园艺2018-0164温室园艺看到一篇关于番茄斑萎病毒的报道4。文章说：“菊花感染了斑萎病毒的症状表现确实有2个类型，即黄化斑驳和叶脉的损伤。这些症状在晚期引起芽和上部叶片的凋萎。此外在一些品种上（如SIMMA）可以出现褪绿和坏死斑，在部分植株上还会出现枯萎及茎部坏死”。和我们这里见到的一样。也证明了所谓的菊花“烂头病”有可能是由番茄斑萎病毒（TSWV）引起。此后，陈东亮博士等对该病作了深入的研究，补充了相关的试验，将其发表在Plant disease杂志上6。通过这次对菊花番茄斑萎病毒的鉴定，我更加坚定的认为，鉴定一个未知的植物病害，一定要用病原说话，仅用症状来识别病害并不可靠。关于菊花的番茄斑萎病毒的防治，最为重要的是做好植物检疫工作。目前有一些菊花的生产企业不经检疫，直接从国外进口菊花插穗扦插繁殖，十分危险。这些进口种苗往往是转口培育的。例如供应商是荷兰，实际上插穗来自生产条件较差的非洲某个国家，带毒机率较高。经过本地蓟马的传播，很快就会蔓延开来，造成很大损失。因此，必须有一套严格的检疫办法，防患于未然。一旦发生了该病，目前看比较现实的方法就是杀灭传毒介体蓟马。北京地区菊花上发生的蓟马主要是西花蓟马Frankliniella occidentalis（Pergande），而西花蓟马很易产生抗药性。在防治时应当几种不同类型的杀虫剂轮换使用。例如目前不少人使用6%乙基多杀菌素（艾绿士）悬浮剂20 mL/667 m2防治蓟马，这是个不错的选择。但是连用3次以后，防治效果会明显下降。必须多准备几种对蓟马有效的杀虫剂与它轮换。例如25%噻虫嗪水分散粒剂1500倍、10%虫螨腈悬浮剂2000倍液、10吡虫啉可湿性粉剂1000倍液、5啶虫脒可湿性粉剂1500倍液等轮换使用，才可取得持久的效果。使用蓝色黏虫板也是防治蓟马的一种选择。但是最好能将蓝色黏虫板和药剂防治结合起来使用，在化学农药杀死大部分蓟马后用蓝板来杀灭残余的蓟马。夏季换茬的时候利用高温消灭田间残存的蓟马，也是防治蓟马不可少的一项措施。即在菊花定植前将棚里的土壤旋耕1次，彻底的清除田间杂草，使用高温闷棚的方法处理完毕，1周后再定植。特别是在连栋玻璃温室里，往往一茬接着一茬种植，应选择适当的时机，对整棚土壤同时处理。实际上不同品种的菊花对番茄斑萎病毒的抗病性差异十分明显，利用抗病品种防治病害应当是不错的选择。但是考虑到目前的品种多不抗病，而花朵的多样性是菊花观赏性的基本要求。因此，仅种植少数抗病品种来应对病害，会影响卖相，目前在实践中并不可行。参考文献1 韩金声.花卉病害防治M.云南:云南科技出版社 ,1986.2 方中达.中国农业植物病害M.北京 : 中国农业出版社 ,1996.3 Jones J B, Engelhard A W, Raju B C. Outberak of a Stem Necrosis on Chrysanthemum Incited by Pseudomonas cichorii in FloridaJ. Plant Disease, 1983(67):431-433.4 Chung B N, Pak H S, Jung J A, et al. Occurrence of Tomato spotted wilt virus in Chrysanthemum (Dendranthema grandiflorun) in KoreaJ. The Plant Pathology Journal, 2006,22(3):230-234.5 郑宽瑜, 吴阔, 董家红, 等.番茄斑萎病毒对云南莴苣类蔬菜的侵染危害 J.植物保护 ,2015,41(05):174-178.6 Chen D L, Zhang L, Hua L, et al. FirstReport of Chrysanthemum Stem Blight and Dieback Caused by Tomatospotted wilt virus in ChinaJ.Plant Disease, https:/doi.org/10.1094/PDIS-07-17-1088-PDN. 引用信息 李明远 , 陈东亮 , 李雪梅 , 等 . 李明远断病手迹（八十五）菊花上发生的原来是番茄斑萎病毒（TSWV）J. 农业工程技术 ,2018,38(01):61-64.图 10  人工接种 TSWV 发病 的 菊花 ，除了接种叶枯死外在茎部还出现了 2 个褐色条斑