低温对铁皮石斛活性成分合成影响机制的转录组学研究.pdf

低温对铁皮石斛活性成分合成影响 机制的转录组学研究 王小仲 1 马 艳 1 任得强 2 1 关岭自治县农业农村局 贵州 关岭 561300 2 贵州中医药大学 贵州 贵阳 550025 摘要 目的 挖掘低温条件下铁皮石斛多糖 生物碱 黄酮合成路径上的差异表达基因 为低温胁迫 对铁皮石斛活性成分合成的影响机制提供理论依据 方法 用Illumina Novaseq 6000测序技术对低温胁 迫下铁皮石斛叶片进行转录组测序 使用Cutadapt对获得的序列进行过滤组装 获得有效序列 Clean data 选择log2Fold Change 处理组 对照组 1 且FDR 0 001作为参数筛选差异表达基因 通过参考基因组 Swissprot数据库 Uniprot数据库对差异表达基因进行注释 运用GO KEGG数据库对差异表达基因进行富集 分析 结果 测序得到46 85 Gb数据 有1 815个差异表达基因参与铁皮石斛低温胁迫响应 其中 1 281 个基因上调表达 534个基因下调表达 有12个多糖 6个生物碱 53个黄酮类化合物合成路径上的差异表达 基因被检测到 qRT PCR验证与转录组分析结果一致 结论 铁皮石斛的多糖 生物碱 黄酮合成路径上 的71个差异表达基因参与了低温胁迫的响应 从而对铁皮石斛药材品质产生影响 其中 黄酮类物质可能在 铁皮石斛低温耐受过程中发挥重要作用 关键词 铁皮石斛 低温胁迫 药材品质 差异表达基因 黄酮 转录组学 中图分类号 S567 239文献标识码 A文章编号 1001 3601 2025 01 0013 0097 09 Transcriptomics Study on Influencing Mechanism of Low Temperature on Active Components Synthesis in Dendrobium officinale WANG Xiaozhong1 MA Yan1 REN Deqiang2 1 Guanling Bureau of Agricultural and Rural Affairs Guanling Guizhou 561300 2 Guizhou University of Traditional Chinese Medicine Guiyang Guizhou 550025 China Abstract Objective The differential expression genes in the synthesis pathway of polysaccharides alkaloids and flavonoids of Dendrobium officinale under low temperature condition were explored which provided the theoretical basis for studying the influencing mechanism of low temperature stress to the active components synthesis of D officinale Method Illumina NovaseqTM 6000 sequencing technology was used to perform transcriptome sequencing of D officinale leaves under low temperature stress The sequences obtained by Cutadapt were filtered and assembled to obtain the clean data The differential expression genes were screened with log2Fold Change Treatment Control 1 and FDR 0 001 as parameters The differential expression genes were annotated by referring to the genome Swissprot database and Uniprot database and the differential expression genes were enriched and analyzed by GO and KEGG databases Result A total of 46 85 Gb data were obtained by sequencing 1 815 differential expression genes involved in the response of low temperature stress process of which 1 281 genes were up regulated and 534 genes were down regulated 12 6 and 53 differential expression genes in the synthesis pathway of polysaccharides alkaloids and flavonoids were detected respectively qRT PCR verification was consistent with transcriptome analysis results Conclusion A total of 71 differential expression genes in the synthesis pathway of polysaccharides alkaloids and flavonoids of D officinale involved in the response to low temperature stress thus affecting the quality of D officinale Flavonoids may play an important role in the process of low temperature tolerance of D officinale Key words Dendrobium officinale low temperature stress quality of medicinal material differential expression genes flavonoids transcriptome 收稿日期 2024 06 06 基金项目 贵州省科技厅基础研究计划项目 重点大品种铁皮石斛低温胁迫响应机制及耐寒品种分子标记辅助选择研究 黔科合基础 ZK 2022 一般481 贵州中医药大学博士启动资金项目 铁皮石斛全基因组SSR标记的开发及种质资源遗传多样性分析 贵中医博士启动 2019 067 作者简介 王小仲 1981 男 高级农艺师 硕士 从事中药材资源与产业发展研究及农业技术推广工作 E mail 463500237 通信作者 马 艳 1978 女 高级农艺师 从事中药材资源与产业发展研究及农业技术推广工作 E mail 506601392 贵州农业科学 Guizhou Agricultural Sciences 2025 53 1 97 105 DOI 10 3969 j issn 1001 3601 2025 01 013 0 引言 研究意义 铁皮石斛 Dendrobium officinale Kimura et Migo 为兰科石斛属多年 生草本植物 是传统名贵中药材 1 具有较高 的经济和药用价值 但不耐低温 低温是影 响植物区域分布和生长发育主要环境因子 随着铁皮石斛种植在我国不断北移及向高 海拔地区推广扩大 低温对铁皮石斛活性成 分合成及药材品质的影响机制逐渐成为研 究热点 前人研究进展 现代研究表明 植物的低温胁迫响应是多基因控制的复杂 性状 转录组学是挖掘重要性状基因 揭示 关键机制的有效技术手段 植物遭受冷胁迫 时 通过诱导相关基因的大量表达 糖醇 特殊氨基酸 甘氨酸 甜菜碱及脯氨酸等小 分子质量的渗透调节物质积累增加 使渗透 压平衡维持 降低植物水势 从而避免或者 减少低温造成的伤害 因而 转录组测序技 术逐渐成为研究药用植物天然活性成分生 物合成相关功能基因挖掘及其表达规律的 重要手段 如在铁皮石斛 2 八爪金龙 3 五 倍子 4 萱草 5 山银花 6 等的药用次生代谢 产物合成调控机制研究中得到广泛应用 铁皮石斛中多糖 生物碱 黄酮类等活性成 分决定其药材品质 而且多糖 生物碱及黄 酮类化合物在铁皮石斛低温耐受过程中发 挥着十分重要的作用 黄酮类作为植物次 生代谢产物的重要成分 在低温胁迫下变化 显著 桃树叶低温胁迫下类黄酮代谢相关 的黄酮醇及衍生物含量和抗氧化能力显著 提高 7 植物受低温胁迫时 通过增加膜脂 中亚麻酸 油酸和磷脂等不饱和脂肪酸含 量增加保持细胞膜的流动性 维持细胞正常 生理功能 百香果低温胁迫后其茉莉酸代 谢途径相关基因AOC AOS JAR1 MYC2 PYL和JAZ均上调表达 COI1的表达水平呈 下调趋势 8 同时植物通过积累碳水化合物 抵御严寒 如巨桉在4 低温条件下叶片中 可溶性糖含量逐渐增加 参与细胞壁成分构 成的阿拉伯糖 半乳糖等也有所增加 9 研 究切入点 铁皮石斛不同种源的耐低温特 性差异明显 其中 浙江种源抗寒性最好 低 温条件下植株具有更高的多糖含量 铁皮石 斛在低温条件下抗坏血酸过氧化物酶 丙 二醛和脯氨酸含量也表现出一定的规律性 2 然而 低温条件对铁皮石斛活性成分合成的 影响机制尚未阐明 亟待开展相关研究 拟 解决的关键问题 利用转录组测序手段 挖 掘低温条件下铁皮石斛多糖 生物碱 黄酮 合成路径上的差异表达基因 为揭示低温对 铁皮石斛活性成分合成的影响机制提供理 论参考 1 材料与方法 1 1 材料 供试铁皮石斛为森山1号 选取生长一 致的组培材料作处理组和对照组 各2瓶 处理组进行4 低温胁迫处理 每隔24 h 处理组和对照组 常温25 取鲜嫩叶1次 液氮快速冷冻后保存于 70 超低温冰箱 备用 1 2 方法 1 2 1 RNA的提取及测序 将样品放在冰 上融化后粉碎 充分混匀并离心 去上清液 用Trizol试剂分离提取总RNA 用 Oligotex mRNA 试剂盒对RNA进行纯化 利用Aglient 2 100检测RNA样品的浓度和完整性 6个 铁皮石斛RNA样品均满足转录组测序的建 库要求 RNA样品送至联川生物科技有限 公司 使用Illumina Novaseq 60 000进行转 录组测序 对转录组测序得到的原始测序数据 Raw Reads 进行数据过滤 经去接头 对 Ns 无法确定碱基信息 比例大于10 的读 长片段 低质量读长片段 质量值Qphred 20的碱基数占整个读长片段50 以上的读 长片段 的过滤 利用Cutadapt对有效序列 进行重头组装 用Cd hit去除完全一样的序 列 然后使用Tgicl进行聚类 合并相似度大 98 贵 州 农 业 科 学 于90 重叠序列长度大于35的序列 最后 得到基因序列 1 2 2 Gene的注释和分类 根据处理组和 对照组的转录组测序结果中每个基因的 表达量 选择log2Fold Change Treatment Cont rol 1 且FDR 0 001的作为参数筛选得到 差异表达基因 通过参考基因组 Swissprot 数据库 Uniprot数据库对差异表达基因进 行注释 1 2 3 差异基因的qRT PCR荧光定量分析 以Actin蛋白为内参 参照赵俊等 10 的方 法进行差异基因的qRT PCR荧光定量分析 PCR反应程序 95 预变性30 s 94 变性 5 s 56 60 退火10 s 72 延伸13 s 共 42个循环 每个处理分别执行3次生物学 重复 每个反应分别做3个重复 反应结束 后分析溶解曲线和荧光曲线 1 3 数据处理 以Actin蛋白为对照 Ct值取平均值 采 用2 Ct算法分析试验结果 2 结果与分析 2 1 铁皮石斛差异基因表达 铁皮石斛RNA样品测序共计产生46 85 Gb 的数据 在处理组 4 低温 和对照组 常 温25 分别得到23 62 Gb和23 23 Gb测序 数据 Raw data 经过滤 处理组和对照组 分别得到20 67 Gb和20 65 Gb的可读片段 表1 表 1 转录组测序所有样品的数据量统计 Table 1 Statistics of all samples of transcriptome sequencing 组别 Group 样本 Sample 原始数据 Gb Raw data 有效序列 Gb Clean data 有效率 Valid ratio GC含量 GC content 对照 CK DE C 1 7 97 7 04 88 28 46 00 DE C 2 7 60 6 93 91 19 46 50 DE C 3 7 66 6 68 87 26 46 00 处理 Treatment DE T 1 7 82 6 79 86 84 46 00 DE T 2 8 05 7 30 90 70 46 00 DE T 3 7 75 6 58 84 89 46 00 经分析 共得到1 815个差异表达基因 其中 1 281个基因表达上调 534个基因表 达下调 图1 通过参考基因组 Swissprot 数据库 Uniprot数据库对差异表达基因进 行注释 差异表达基因均能被注释 图2 2 2 GO富集分析 对铁皮石斛差异表达基因进行GO富集 分析 E 值 10 5 其中 1 630个基因被富集 到不同生物过程中 差异表达基因被富集 到的生物过程分为1 525类 图3 其中 主 要富集到细胞核 Nucleus 32 3 细胞膜 Plasma membrane 16 9 其次为细胞膜组 成分 Integral component of membrane 14 9 分子功能 Molecular function 14 1 生物 过程 Biological process 25 9 在分子功能 过程中 差异表达基因还被富集到分子功能 Molecular function 46 6 转录因子活性 Transcription factor activity 34 4 ATP结 合 ATP binding 27 9 DNA结合 DNA binding 27 9 GO功能分类提供了基因 主要参与的生物学过程和相关功能 为后续 进一步筛选目的基因提供了信息 1 500 1 000 500 0 转录组数量 个 Number of transcripts DE TVSDE C Up Down1 281 534 图 1 铁皮石斛低温胁迫处理差异表达基因 Fig 1 The differential expression genes in D officinale under low temperature stress 1 期王小仲 等 低温对铁皮石斛活性成分合成影响机制的转录组学研究 99 2 3 KEGG代谢通路富集 铁皮石斛1 815个差异表达基因进行 KEGG显著性富集分析 可注释到的差异表 达基因被富集到121个代谢通路中 不同的 代谢通路富集到的基因为1 151个 图4 差异基因显著富集途径主要有2个 其中 植物 病原菌互作 Plant pathogen interaction 差异基因151个 占16 5 植物荷尔蒙信号 转导途径 Plant hormone signal transduction 120个 占13 1 淀粉和糖类代谢 Starch 2 0 1 5 1 0 0 5 0 0 5 1 0 DE T 1 DE T 2 DE T 3 DE C 1 DE C 2 DE C 3 图 2 铁皮石斛低温胁迫处理差异表达基因热图 Fig 2 Heat map of differential expression genes in D officinale under low temperature stress 100 贵 州 农 业 科 学 and sucrose metabolism 差异表达基因有73个 占8 0 氨基糖和核苷酸糖代谢 Amino sugar and nucleotide sugar metabolism 有42个 占4 6 苯丙烷生物合成 Phenylpropanoid biosynthesis 有35个 占3 8 除以上代谢途径以外 内吞作用 Endo cytosis 内质网的蛋白质加工 Protein proc essing in endoplasmic reticulum 类黄酮生物 合成 Flavonoid biosynthesis 昼夜节律 植物 Circadian rhythm plant 磷脂酰肌醇信号系 生物过程转录调控 转录 蛋白质磷酸化 防御反应 氧化还原过程蛋白质泛素化对伤害的反应 对几丁质的反应对脱落酸的反应 对寒冷的反应 对盐胁迫的反应 细胞壁组织 对镉离子的发应多细胞生物发育 对缺水的反应 脱落酸激活的信号通路 对真菌的防御反应 对生长素的反应 信号转导 次生代谢产物生物合成过程 蛋白水解 乙烯激活的信号通路类黄酮生物合成过程 磷酸化 对光刺激的反应对水杨酸的反应 对细菌的防御反应 核 质膜 膜的组成部分 细胞质叶绿体 细胞外区胞质溶胶 线粒体 膜 胞间连丝高尔基体 细胞壁 质膜的组成部分 内质网质外体 分子功能 转录因子活性 序列特异性 DNA 结合 ATP 结合 DNA 结合 蛋白质结合 蛋白质丝氨酸 苏氨酸激酶活性 金属离子结合 激酶活性 锌离子结合 序列特异性 DNA 结合 500 400 300 200 100 0 数量 类 Quantity Biological process Cellular component Molecular function Ontology GO富集分析 Go enrichment analysis 图 3 铁皮石斛低温胁迫差异基因的GO富集 Fig 3 Go enrichment of differential genes in D officinale under low temperature stress 植物 病原相互作用 植物激素信号转导 黄酮生物合成 光合作用 天线蛋白 黄酮和黄酮醇的生物合成 二苯乙烯类 二芳基庚类和姜辣素的生物合成 昼夜节律植物 亚油酸代谢 咖啡因代谢 色氨酸代谢 柠檬烯和蒎烯降解 苯丙素生物合成 淀粉和蔗糖代谢 其他聚糖降解 糖胺聚糖降解 异黄酮生物合成 鞘糖脂生物合成 乳糖和新乳糖系列 自噬的调节 脂肪酸伸长 鞘脂代谢 0 1 0 2 0 3 0 4 基因数 50 100 150 p value 0 125 0 100 0 075 0 050 0 025 图 4 差异基因的KEGG代谢通路富集 Fig 4 Enrichment of KEGG metabolic pathway of differential genes 1 期王小仲 等 低温对铁皮石斛活性成分合成影响机制的转录组学研究 101 统 Phosphatidylinositol signaling system 戊糖 和葡萄糖醛酸的相互转化 Pentose and glucur onate interconversions 碳代谢 Carbon meta bolism 色氨酸代谢 Tryptophan metabolism 甘油酯代谢 Glycerolipid metabolism 半乳 糖代谢 Galactose metabolism 氨基酸生物 合成 Biosynthesis of amino acids 等也参与了 低温胁迫的响应 2 4 低温胁迫处理铁皮石斛多糖 生物碱 黄酮代谢通路 低温胁迫铁皮石斛 经转录组分析 共 检测到12个多糖 6个生物碱 53个黄酮合 成路径上的差异表达基因 图5 60 40 20 0 生物碱多糖黄酮 上调 下调 差异表达基因数 个 Dif ferential expression gene 药效成分 Active component 图 5 铁皮石斛药效成分合成路径差异表达调控基因 Fig 5 The differential expression regulatory genes in the synthetic pathway of medicinal components of D officinale 多糖类化合物是铁皮石斛植物内主要 活性成分之一 其生物合成受温度影响较大 通过低温胁迫下对铁皮石斛进行转录组测 序 发现12个基因参与多糖类化合物的低 温响应 其中 9个上调 3个下调 CSLD3 GATL9基因上调尤为显著 GO富集分析发 现 CSLD3 GATL9基因均参与多糖生物合 成过程 GO 0000271 转移酶活性 转移糖 基 GO 0016757 其中 CSLD3基因还参与 冷响应 GO 00009409 甘露聚糖合酶活性 GO 0051753 纤维素合酶活性 GO 0016 759 纤维素合酶 UDP形成 活性 GO 0016 760 纤维素生物合成过程 GO 0030244 细胞壁组织 GO 0071555 等 KEGG富集分 析发现 CSLD3 GATL9基因均参与淀粉和 蔗糖代谢 K00500 氨基糖和核苷酸糖代 谢 K00520 生物碱也是铁皮石斛植物内生物碱类 活性成分 其生物合成亦受温度影响 6个 基因参与生物碱类化合物的低温响应 其中 5个上调 1个下调 TYDC2基因上调尤为显 著 GO富集分析发现 5个上调基因中 TYDC2基因参与生物碱合成有酪氨酸脱羧 酶活性 GO 0004837 细胞氨基酸代谢过程 GO 0006520 L 苯丙氨酸分解代谢过程 GO 0006559 磷酸吡哆醛结合 GO 000301 苯乙醛合酶活性 GO 990055 等多个生物合 成 下调基因MA16 Dca002252参与调控分 子功能 GO 0003674 细胞成分 GO 000 5575 生物过程 GO 0008150 等 KEGG富 集分析发现 下调基因MA16 Dca002252参 与酪氨酸代谢 K00350 异喹啉生物碱生 物合成 K00950 等 黄酮类化合物作为植物内常见化合物 其生物合成受温度的影响较大 铁皮石斛中 黄酮类化合物也是其活性成分之一 其参与 低温响应的基因有53个差异基因得到表达 其中 上调基因40个 下调基因13个 上调 基因中UGT73C4 ACT 2 MA16 Dca009088 尤为显著 下调基因中TKPR1尤为显著 GO富集分析发现 上调基因UGT73C4 MA16 Dca009088均参与类黄酮生物合成过 程 GO 0009813 细胞内膜结合的细胞器 GO 0043231 类黄酮葡萄糖醛酸化 GO 0052696 槲皮素3 O 葡萄糖基转移酶活性 GO 0080043 葡萄糖基转移酶活性 GO 008004 ACT 2基因参与胍丁胺N4 香豆酰 转移酶活性 GO 0047634 下调基因TKPR1 参与蛋白质结合 GO 0005515 细胞核 GO 0005634 内质网 GO 0005783 花粉发育 GO 0009555 花粉外壁形成 GO 0010584 氧化还原酶活性 GO 0016491 种子发育 GO 0048316 辅酶结合 GO 0050662 氧 102 贵 州 农 业 科 学 化还原过程 GO 0055114 孢粉生物合成过 程 GO 0080110 KEGG富集分析发现 UGT 73C4基因参与黄酮和黄酮化生物合成 K00944 ACT 2基因参与K00940 苯丙烷 生物合成 K00945 芪类 二芳基庚烷和姜 酚生物合成 K00941 类黄酮生物合成 MA16 Dca009088基因参与类胡萝卜素生物 合成 K00906 2 5 差异表达基因qRT PCR荧光定量 选取特异参与到低温条件下铁皮石斛 多糖 生物碱 黄酮合成路径中的6个重要 差异表达基因 5个上调基因 1个下调基 因 进行qRT PCR分析验证 如图6所示 MA16 Dca021921 RLK1 12倍 MA16 Dca 021379 TYDC2 11倍 MA16 Dca002818 GLC1 83倍 MA16 Dca008721 CYP93A1 8倍 MA16 Dca015800 BHLH4 21倍 5个 基因表达水平均显著上调 MA16 Dca 027206 CSLG3 201倍 下调表达 与转录组 分析结果一致 但在差异倍数上有差异 5 000 4 000 3 000 2 000 1 000 0 C T MA16 Dca021379 2 000 1 500 1 000 500 0 C T MA16 Dca008721 30 000 20 000 10 000 0 C T MA16 Dca002818 8 000 6 000 4 000 2 000 0 C T MA16 Dca015800 4 000 3 000 2 000 1 000 0 C T MA16 Dca021921 25 000 20 000 15 000 10 000 5 000 0 C T MA16 Dca027206 C T C T C T C T C T C T 图 6 铁皮石斛冷胁迫差异表达基因的qRT PCR验证 Fig 6 Verification of differential expression genes in D officinale under cold stress by qRT PCR 3 讨论 铁皮石斛在冷驯化过程通过激活高能 量需求的糖水解 氨基酸分解代谢和柠檬 酸循环等途径提高铁皮石斛的抗寒性 复杂 调控过程需要信号的转导 逆境响应相关 基因表达的启动以及抗逆相关代谢反应的 诱发等基因大量表达 研究表明 低温胁迫 下 铁皮石斛的多糖 黄酮 生物碱等次生 代谢产物合成增加 铁皮石斛多糖的组成 和调控十分复杂 本研究在铁皮石斛低温胁 迫下挖掘出参与多糖合成的基因家族有 UAM UGP RHM SPS CSLA和PGM GAPDH 分别参与了细胞壁多糖和糖蛋白 甘露糖 蔗糖 淀粉 纤维素 半纤维素以及其他寡 糖和葡萄糖基的生物合成 参与到多糖类的 合成代谢中 与佟岩等 11 的研究结果一致 另外 本研究还发现了CSLD GATL GLC GT CSLG GATL CSLE等基因家族参与铁 1 期王小仲 等 低温对铁皮石斛活性成分合成影响机制的转录组学研究 103 皮石斛低温胁迫下多糖合成的响应 相关基 因的作用机制有待进一步研究 黄酮类化合物在抵抗生物和非生物胁 迫的保护剂功能 吸引授粉者的视觉信号 以及植物激素活性的调节过程中发挥重要 作用 本研究挖掘出黄酮类化合物合成路径 上参与响应的基因共53个 有UGT CYP CXE GT ACT BHLH等基因家族 显示黄酮类可 能在铁皮石斛低温胁迫响应过程中发挥十 分重要的作用 植物家族1 UDP 糖基转移 酶 UGTs 是植物中最大的GT家族 负责将 糖部分转移到多种小分子上 并控制许多代 谢过程 但其在植物中的生理学意义是未知 的 LI等 12 13 研究揭示了UGT79B2和UGT 79B3拟南芥糖基转移酶基因可被各种非生 物胁迫强烈诱导 包括冷 盐和干旱胁迫 UGT79B2 B3的过量表达显著增强植物对低 温以及干旱和盐胁迫的耐受性 而由RNAi RNA干扰 和CRISPR Cas9策略产生的UGT 79b2 b3双突变体更易受不利条件的影响 UGT79B2和UGT79B3被鉴定为花青素鼠李 糖基转移酶 受CBF1 CRT DRE结合因子1 也称为DREB1B 调节 并通过调节花青素 积累赋予非生物胁迫耐受性 生物碱类化合物在抵御非生物胁迫下 发挥着重要作用 研究表明 铁皮石斛低温 胁迫下生物碱类代谢产物主要由TYDC SD RLK等基因家族共同调控 酪氨酸脱羧酶 TYDC 在植物中参与合成许多具有临床药 用价值的苄基异喹啉类生物碱 BIAs 位于 BIAs生物合成的初始位置 其在合成BIAs 过程中发挥重要作用 通过博落回转录组 数据筛选到1个博落回TYDC McTYDC2 候 选基因 其表达规律与博落回中BIAs代谢 规律相符 14 本研究共挖掘12个多糖 6个生物碱类 53个黄酮类合成路径上的差异表达基因参 与了铁皮石斛低温胁迫的响应 相关基因功 能和机制仍待进一步研究 表明 转录组测 序是挖掘和揭示植物抗逆机制的有效手段 相关研究结果可为铁皮石斛低温胁迫相关 研究提供参考 4 结论 研究对2组生长一致的铁皮石斛鲜嫩叶 在低温处理及常温对照条件下进行转录组 测序和分析 共得到71个差异表达基因参 与到铁皮石斛低温胁迫的响应中 从而对铁 皮石斛的品质产生影响 其中黄酮类成分可 能发挥十分重要的作用 相关基因的功能和 机制有待进一步研究 参考文献 References 殷维 黄晓聪 铁皮石斛 中华九大仙草之首 J 中南药学 用药与健康 2017 3 8 13 YIN W HUANG X C Dendrobium officinale the leader of the nine immortal herbs in China J Central South Pharma cy Medication and Health 2017 3 8 13 1 乔宇琛 周思静 宋梅芳 等 铁皮石斛分子遗传学和多组 学研究进展 J 生物技术通报 2019 35 3 151 163 QIAO Y C ZHOU S J SONG M F et al Research progress on molecular genetics and multi omics of Dendrobium offici nale J Biotechnology Bulletin 2019 35 3 151 163 2 刘畅 俸婷婷 刘雄伟 等 苗药八爪金龙转录组测序与次 生代谢产物合成相关基因的挖掘 J 中草药 2021 52 5 1434 1447 LIU C FENG T T LIU X W et al Transcriptome analysis and identification of related genes involved in secondary metabolism biosynthesis in Ardisia crispa J Chinese Tra ditional and Herbal Drugs 2021 52 5 1434 1447 3 陈彦超 汪启明 饶力群 等 基于比较转录组学的盐肤木 响应五倍子蚜胁迫的机理探究 J 分子植物育种 2024 22 6 1861 1869 CHEN Y C WANG Q M RAO L Q et al The stress re sponse mechanism of Rhus chinensis to Schlechtendalia chi nensis based on comparative transcriptome J Molecular Plant Breeding 2024 22 6 1861 1869 4 黄长兵 程培蕾 杨绍宗 等 萱草根茎低温胁迫转录组分 析 J 浙江农业学报 2021 33 8 1445 1460 HUANG C B CHENG P L YANG S Z et al Transcrip tome analysis of Hemerocallis fulva under low temperature stress J Acta Agriculturae Zhejiangensis 2021 33 8 1445 1460 5 潘媛 赵晓 陈大霞 灰毡毛忍冬花不同发育阶段的转录 组学与代谢组学研究 J 中国中药杂志 2021 46 11 2798 2805 6 104 贵 州 农 业 科 学 PAN Y ZHAO X CHEN D X Different development phase of transcription proteomics and metabolomics of flower of Lonicera macranthoides J China Journal of Chinese Mate ria Medica 2021 46 11 2798 2805 周平 林志楷 郭瑞 等 低温处理对桃树叶片基因表达及 类黄酮合成代谢的影响 J 农业生物技术学报 2021 29 7 1283 1294 ZHOU P LIN Z K GUO R et al Effects of low tempera ture treatment on gene expression and flavonoids biosynthe sis metabolism in peach Prunus persica leaves J Jour nal of Agricultural Biotechnology 2021 29 7 1283 1294 7 韦晓霞 王小安 陈瑾 等 百香果低温胁迫转录组及茉莉 酸代谢基因分析 J 核农学报 2021 35 4 815 825 WEI X X WANG X A CHEN J et al Transcriptome and jasmin metabolism gene analysis of Passiflora edulia Sims under low temperature stress J Journal of Nuclear Agricul tural Sciences 2021 35 4 815 825 8 孙丽娟 低温对巨桉叶片糖含量变化的影响及巨桉糖基转 移酶基因家族EgrGATL的表达特性分析 D 杭州 浙江 农林大学 2016 SUN L J The effect of low temperature on the changes in sugar content in Eucalyptus grandis leaves and the expres sion characteristics of the EgrGATL gene family of Eucalyp tus grandis glycosyltransferase D Hangzhou Zhejiang A F University 2016 9 赵俊 孟灿灿 赵亦帆 等 铁皮石斛转录因子基因 Do WRKY2 的克隆与表达分析 J 农业生物技术学报 2015 23 8 1049 1057 10 ZHAO J MENG C C ZHAO Y F et al Cloning and expres sion analysis of transcription factor gene DoWRKY2 in Dendrobium officinale J Journal of Agricultural Biotech nology 2015 23 8 1049 1057 佟岩 黄荟 王辉 等 铁皮石斛多糖合成相关基因在不同 组织及低温胁迫下的表达分析 J 西部林业科学 2021 50 3 20 27 TONG Y HUANG H WANG H et al Expression analysis of polysaccharide synthesis related genes in different