耐寒月季开放式组培快繁体系的建立_张悦.pdf

农业科学 Agricultural Science 农业与技术 Agriculture and Technology 2026 Vol 46 No 01 耐寒月季开放式组培快繁体系的建立 张悦 苏雪娇 张爽爽 王秀峰 王健鹂 聂楚楚 李阿红 吉林省蔬菜花卉科学研究院 长春 130033 摘 要 通过探讨抑菌剂浓度和激素的配组对耐寒月季离体快繁的影响 建立耐寒月季 2021 MH 开放式组 培快繁体系 为耐寒月季工厂化种苗生产提供技术支撑 以耐寒月季新品系 2021 MH 为材料 在组培快繁 的各个阶段 初代培养 继代培养 生根培养 添加不同浓度组合的抑菌剂 ZP 抗菌素 特美汀 PPM TM 及 植物生长激素 综合分析抑菌剂和激素组合对耐寒月季开放式培养的效果 结果表明 初代培养阶段最佳的培养 基抑菌剂和激素浓度配组 抑菌剂 60mg L 1 ZP 100mL L 1 特美汀 1 0mL L 1 PPM TM 培养基 MS 加 1 5mg L 1 6 BA 加 0 1mg L 1 2 4 D 加 0 3mg L 1 IBA 出芽率为 96 15 污染率为 13 33 褐化率为 3 85 继代培养阶段最佳的抑菌剂和激素浓度配组 抑菌剂 50mg L 1 ZP 150mL L 1 特美汀 0 75mL L 1 PPM TM 培养基 MS 加 2 5mg L 1 6 BA 加 1 0mg L 1 2 4 D 加 0 2mg L 1 NAA 污染率为 5 00 增殖系 数为 5 43 玻璃化率为 1 75 生根培养阶段最佳的培养基抑菌剂和激素浓度配组 抑菌剂 30mg L 1 ZP 50mL L 1 特美汀 0 75mL L 1 PPM TM 培养基 1 2MS 加 1 0mg L 1 IAA 加 0 5mg L 1 NAA 污染率为 10 00 生根率为 94 44 幼苗生根快 茎粗 叶色浓绿 成功建立了耐寒月季 2021 MH 开放式组培快繁 体系 该体系具有污染率低 不定芽增殖系数高 褐化率 玻璃化率低 幼苗生长状态佳等优点 关键词 耐寒月季 开放式组培 快繁体系 抑菌剂 工厂化生产 中图分类号 S 3 文献标志码 A DOI 10 19754 j nyyjs 20260130003 收稿日期 2025 11 18 基金项目 吉林省科技发展计划项目 项目编号 20230202106NC 作者简介 张悦 1983 女 硕士 副研究员 研究方向 蔬菜 花卉育种及栽培 Establishment of an Open Tissue Culture and apid Propagation System for Cold Tolerant oses ZHANG Yue SU Xuejiao ZHANG Shuangshuang WANG Xiufeng WANG Jianli NIE Chuchu LI Ahong Jilin Academy of Vegetable and Flower Sciences Changchun 130033 China Abstract By discussing the effects of bacteriostatic concentration and hormone combination on in vitro rapid propagation of cold resistant rose an open tissue culture rapid propagation system of cold resistant rose 2021 MH was established to provide technical support for industrialized seedling production of cold resistant rose A new cold tolerant rose strain 2021 MH was used as the material At each stage of tissue culture and rapid propagation primary culture subculture and rooting culture different concentration combinations ZP antibiotics Timentin and PPM TM and plant growth hormones were added and the effects of bacteriostatic agents and hormone combinations on open culture of cold tolerant rose were comprehensively analyzed The results indicate The best combination of bacteriostatic agent and hormone concentration in the primary culture stage bacteriostatic agent 60mg L 1 ZP 100mL L 1 Timentin 1 0mL L 1 PPM TM Medium MS 1 5mg L 1 6 BA 0 1mg L 1 2 4 D 0 3mg L 1 IBA the germination rate was 96 15 the contamination rate was 13 33 the browning rate was 3 85 The best combination of bacteriostatic agent and hormone concentration in subculture stage bacteriostatic agent 50mg 11 2026 Vol 46 No 01 农业与技术 Agriculture and Technology 农业科学 Agricultural Science L 1 ZP 150mL L 1 Timentin 0 75mL L 1 PPM TM Medium MS 2 5mg L 1 6 BA 1 0mg L 1 2 4 D 0 2mg L 1 NAA with pollution rate of 5 00 proliferation coefficient of 5 43 vitrification rate of 1 75 The best combination of culture medium bacteriostatic agent and hormone concentration in rooting culture stage bacteriostatic agent 30mg L 1 ZP 50mL L 1 Timentin 0 75mL L 1 PPM TM Medium 1 2MS 1 0mg L 1 IAA 0 5mg L 1 NAA the contamination rate was 10 00 the rooting rate was 94 44 the seedlings took root quickly the stems were thick and the leaves were dark green An open tissue culture and rapid propagation system for the cold tolerant rose 2021 MH was successfully established which has the advantages of low contamination rate high adventitious bud proliferation coefficient low browning rate and vitrification rate and favorable seedling growth performance Key words Cold resistant rose open tissue culture rapid propagation system bacteriostatic agent industrialized seedling production 月季 osa chinensis Jacq 为蔷薇科蔷薇属木本 观赏植物 因其品种繁多 花色绚丽 花型优美且花 期较长 素有 花中皇后 的美誉 尤其是少数耐寒 月季品种 深受北方消费者追捧 已广泛应用在北方 城市绿化 家庭园艺等多领域 特别是一些新选育的 耐寒月季新品系 因花色艳丽 花期长 可在 30 无保护越冬的特性 更是受到消费者的大力追求 但 寒地月季品种稀少 种苗繁育困难 因此如何快速繁 育耐寒月季种苗 已成为限制北方寒地地区月季产业 发展的瓶颈 月季种苗生产一般采用扦插 嫁接等方式 1 2 但扦插和嫁接的方式存在繁殖系数低及易感染病毒使 种苗质量下降等问题 3 而利用组织培养技术繁育月 季种苗 具有不受地区 季节的限制的优点 生产的 种苗不仅能保持母本优良性状 且种苗获得周期短 繁殖率高 4 因此 利用植物组织培养技术繁殖月季 种苗更有利于工厂化生产 5 近年来 关于不同月季 品种的组培快繁体系建立的报道层出不穷 6 10 主要 集中在不同月季品种 外植体类型的选择 灭菌 激 素种类与浓度的组合 培养条件等方面 结果表明 月季品种差异 11 外植体类型 12 和不同浓度的植物 生长调节剂种类 13 对月季的组培快繁体系存在较大 差异 6 BA 和 2 4 D 的组合更有利于腋芽的萌发 如 蜜桃雪山 雪山 粉佳人 红双喜 和 金玛丽 TDZ 3 的添加对不同外植体类型月季的植 株再生均有较好效果 可大大提高月季植株的再生率 等 这些研究更倾向于切花类的月季品种 关于耐寒 月季品种的组培快繁研究未见报道 近年来 植物开放式组织培养技术 14 19 因操作 流程简化 育苗成本较低 具有可以在开放 自然环 境中进行植物的组织培养 20 的优点 已成为组织培 养研究的新焦点 但开放式组培技术仍不够成熟 多 数开放式组织培养的实际操作环境尚未达到完全自然 开放的理想状态 大多数组织培养工作依旧在无菌条 件下进行 目前该技术仅在马铃薯 21 铁皮石斛 22 蓝莓 23 等植物组培中应用 关于月季的开放式组织 培养研究未见报道 关于开放式组培的研究主要以抑 菌剂的选择及用量为焦点 主要是因为在再生体系建 立的过程中 抑菌剂的添加虽然可以降低污染率 但 对植物体的再生会产生不良的影响 从而影响外源激 素对外植体材料的诱导 本研究以耐寒月季 2021 MH 新品系为研究对 象 在组培苗繁育的各个阶段 初代培养 继代培 养 生根培养 通过分析出芽 增殖 生根 褐化 玻璃化和污染情况 筛选出最佳开放式组培抑菌剂和 外源激素配组 确定各个阶段的最佳培养基 从而建 立耐寒月季新品系 2021 MH 的开放式组培快繁体 系 为耐寒月季种苗生产提供理论和技术支撑 推动 耐寒月季种苗生产和产业发展 1 材料与方法 1 1 实验材料 本实验以耐寒月季新品系 2021 MH 为材料 见图 1 该品系抗寒能力强 花色艳丽 花朵硕大 样品采集于吉林省蔬菜花卉科学研究院耐寒月季资源圃 图 1 耐寒月季新品系 2021 MH 田间表现 Fig 1 Field performance of the new cold tolerant rose line 2021 MH 实验所用的抑菌剂为 ZP 抗菌素 山东省威海市 绿韵商行分装 特美汀 Timentin 康倍斯生物 PPM TM Plant Preservative Mixture 翌圣生物科技 上 海 股份有限公司分装 所用 MS Mursahinge and 21 农业科学 Agricultural Science 农业与技术 Agriculture and Technology 2026 Vol 46 No 01 skoog MS 培养 培养基 购自上海生工生物技术服务 有限公司 所用植物激素 6 BA 6 Benzylaminopurin 6 苄氨基腺嘌呤 2 4 D 2 4 Dichlorophenoxyacetic acid 2 4 二氯苯氧乙酸 NAA napHthalene acetic acid 萘乙酸 和 IBA Indole butyric acid 吲哚丁酸 均购自北京鼎国生物技术有限公司 1 2 实验方法 1 2 1 外植体的制备 在当年生健康植株上剪取枝条顶端生长健壮 无 病虫害的半木质化部位作为外植体 去除枝条上的叶 片和皮刺 剪成 2 3cm 长的茎段 每个茎段包含至 少 1 个腋芽 在自来水下冲洗 0 5h 放入干净烧杯 备用 在实验室内 对照需在超净工作台内进行 用 75 酒精浸泡 30s 立即用 2 次氯酸钠溶液浸泡 15min 取出后用无菌水冲洗 3 5 次 用滤纸吸干茎 段表面水分后备用接种 每个处理接种 60 个芽 20 瓶 每瓶 3 个芽 1 2 2 开放式初代培养抑菌剂和激素浓度的筛选 将处理后的茎段去除上下两端 保留中间含有腋 芽的部分 按正常生长方向 接种于含有不同抑菌剂 及激素配比的 MS 培养基上 培养基中蔗糖浓度为 3 琼脂浓度为 0 65 pH 为 5 8 初代培养抑菌 剂设 4 个处理 A1 A4 对照 A5 不添加抑菌剂 于 121 0 1MPa 条件下灭菌 17min 接种操作在无 菌条件下进行 见表 1 培养基激素浓度设 3 个处理 B1 B3 见表 2 抑菌剂和培养基激素浓度组合为 12 组 对照和培养基激素浓度组合为 3 组 每个处理 接种 20 瓶 每瓶接种 3 个茎段 接种完成后置于 25 2000lx 光照时间 16h d 1 条件下培养 记录 生长情况 20d 后根据接种总数统计其污染率 根据 未被污染芽数统计其出芽率和褐化率 污染率 污 染芽数 接种总数 100 出芽率 未污染出芽 总数 未污染总数 100 褐化率 褐化总数 未 污染总数 100 表 1 初代培养基抑菌剂组合 Table 1 Combinations of bacteriostatic agents in primary culture medium 编号 ZP 抗菌素 mg L 1 特美汀 mg L 1 PPM TM mL L 1 A1 40 150 0 5 A2 60 150 1 0 A3 80 200 1 5 A4 100 200 2 0 A5 表 2 初代培养基激素组合 Table 2 Hormone combinations of primary culture medium 编号 6 BA mg L 1 2 4 D mg L 1 IBA mL L 1 B1 1 0 1 0 2 B2 1 5 0 1 0 3 B3 2 0 1 0 4 1 2 3 开放式继代培养抑菌剂和激素浓度的筛选 取初代培养发育的无菌腋芽 按正常生长方向接 种于含有不同抑菌剂及激素配比的 MS 培养基上 继 代培养抑菌剂设 4 个处理 C1 C4 对照 C5 不添加 抑菌剂 于 121 0 1MPa 条件下灭菌 17min 接种 操作在无菌条件下进行 见表 3 培养基激素浓度设 3 个处理 D1 D3 见表 4 抑菌剂和培养基激素浓 度组合为 12 组 对照和培养基激素浓度组合为 3 组 每个处理接种 20 瓶 每瓶接种 3 个无菌腋芽 接种 完成后置于 25 2000lx 光照时间 16h d 1 条件下 培养 记录生长情况 35d 后根据接种总数统计其污 染率 根据未被污染芽数统计其出增殖系数和玻璃化 率 增殖系数 分化芽总数 接种未污染芽总数 玻 璃化率 玻璃化总数 未污染总数 100 表 3 继代培养基抑菌剂组合 Table 3 Combinations of bacteriostatic agents in subculture medium 编号 ZP 抗菌素 mg L 1 特美汀 mg L 1 PPM TM mL L 1 C1 10 150 0 75 C2 30 150 1 0 C3 50 100 0 75 C4 70 100 1 0 C5 表 4 继代培养基激素组合 Table 4 Hormone combinations of subculture medium 编号 6 BA mg L 1 2 4 D mg L 1 NAA mL L 1 D1 1 1 5 0 3 D2 1 5 1 0 0 2 D3 2 0 5 0 1 1 2 4 生根培养抑菌剂和培养基激素浓度的筛选 将获得的不定芽分割成独立个体后 按生长方向 分别接种在含有不同抑菌剂浓度的开放式生根培养基 中 生根培养抑菌剂设 4 个处理 E1 E4 对照 E5 不 添加抑菌剂 于 121 0 1MPa 条件下灭菌 17min 接 31 2026 Vol 46 No 01 农业与技术 Agriculture and Technology 农业科学 Agricultural Science 种操作在无菌条件下进行 见表 5 培养基激素浓度 设 4 个处理 F1 F4 见表 6 抑菌剂和培养基激素 浓度组合为 16 组 对照和培养基激素浓度组合为 4 组 每个处理接种 20 瓶 每瓶接种 3 个不定芽 接种完成后 置于 25 2000lx 光照时间 16h d 1 条件下培养 记录 不定芽生长及生根情况 20d 后根据接种总数统计其污染 率 统计生根苗数 生根率 生根率 未污染生根芽 总数 未污染不定芽总数 100 表 5 生根培养基抑菌剂组合 Table 5 Combinations of bacteriostatic agents for rooting medium 编号 ZP 抗菌素 mg L 1 特美汀 mg L 1 PPM TM mL L 1 E1 10 100 0 5 E2 20 100 0 75 E3 30 50 0 5 E4 40 50 0 75 E5 表 6 生根培养基激素组合 Table 6 Hormone combinations of rooting medium 编号 MS 基础培养基 IBA mL L 1 NAA mL L 1 F1 1 2 0 5 1 F2 1 2 1 0 5 F3 1 4 0 5 1 F4 1 4 1 0 5 2 结果与分析 2 1 抑菌剂浓度和激素配组对耐寒月季开放式初代 培养的影响 在培养基中激素配比相同时 对外植体材料的污 染率 出芽率和褐化率进行调查 结果见表 7 外植 体污染率和出芽率随抑菌剂组合中各成分浓度的增大 而降低 对照除外 各配组中 A4 的污染率最低 A2 出芽率最高 与 B3 的组合中 A1 A2 相差不大 与对照接近 外植体褐化率与抑菌剂组合中各成分浓 度变化未出现明显相关 这说明高浓度的抑菌剂组合 虽然对培养基中各种杂菌有良好的抑制效果 但也影 响其腋芽的萌发 对初代培养有一定的抑制作用 在 抑菌剂浓度相同时 对外植体的出芽率和褐化率进行 调查 结果见表 7 在同一抑菌剂浓度下 B2 组合的 出芽率最高 且褐化率最低 这说明 B2 的激素配比 更有利于初代培养中外植体腋芽的诱导 也说明培养 基内激素的配比与初代培养的褐化率直接相关 因 此 通过综合分析污染率 出芽率及褐化率 认为最 佳的耐寒月季开放式组培的初代培养抑菌剂和激素组 合为 A2B2 表 7 抑菌剂和激素浓度配组对初代培养效果的影响 Table 7 Effect of combinations of bacteriostatic agents and hormone concentrations on primary culture efficiency 组合 污染芽数 个 污染率 出芽数 个 出芽率 褐化数 个 褐化率 A1B1 13 21 67 34 72 34 13 27 66 A2B1 8 13 33 41 78 85 11 21 15 A3B1 6 10 00 38 70 37 16 29 63 A4B1 5 8 33 40 72 73 15 27 27 A5B1 3 5 00 45 78 95 12 21 05 A1B2 15 25 00 42 93 33 3 6 67 A2B2 8 13 33 50 96 15 2 3 85 A3B2 7 11 67 48 90 57 5 9 43 A4B2 5 8 33 46 83 64 9 16 36 A5B2 4 6 67 55 98 21 1 1 79 A1B3 14 23 33 34 73 91 12 26 09 A2B3 7 11 67 38 71 70 15 28 30 A3B3 5 8 33 35 63 64 20 36 36 A4B3 5 8 33 29 52 73 26 47 27 A5B3 3 5 00 42 73 68 15 26 32 图 2 初代培养 A2B2 组合中腋芽诱导情况 Fig 2 Induction of axillary buds in primary culture combination A2B2 41 农业科学 Agricultural Science 农业与技术 Agriculture and Technology 2026 Vol 46 No 01 2 2 抑菌剂浓度和激素配组对耐寒月季开放式继代 培养的影响 继代培养是以初代培养中获得的未染菌腋芽为实 验对象 在培养基中激素配比相同时 对污染率 增 殖系数及玻璃化率进行调查 由表 8 可知 在培养基 中激素配比相同时 C3 组合及 C4 组合的污染率明显 低于 C1 组合 C2 组合 其中 C4 组合的污染率更接 近对照 C2 组合的玻璃化率略高于 C1 组合 C4 组 合的玻璃化率略高于 C3 组合 其中 C3 组合的玻璃化 率更接近对照 结果表明 污染率随组合中 ZP 抗菌 素及特美汀浓度的增加而明显提升 玻璃化率随组合 中 PPM TM 浓度的增加而增大 这说明在低浓度 PPM TM 的情况下 适当提高 ZP 抗菌素及特美汀的浓度 既 可有效抑制继代过程中杂菌的生长 又能降低抑菌剂 对玻璃化的影响 在抑菌剂浓度相同时 对增殖系数 及玻璃化率进行调查 结果表明 在同一抑菌剂浓度 下 D2 组合的增殖系数最高 D3 组合玻璃化率最 高 由表 8 可知 培养基内 6 BA 的浓度与继代培养 的增殖系数及玻璃化率直接相关 适当提高培养基中 6 BA 的含量可有效提高继代过程中的增殖系数 但 6 BA 浓度越大玻璃化率越大 因此 通过对污染率 增殖系数及玻璃化率的综合分析 认为最佳耐寒月季 开放式组培的继代培养抑菌剂和激素组合为 C3D2 表 8 抑菌剂和激素浓度配组对继代培养效果的影响 Table 8 Effect of combinations of bacteriostatic agents and hormone concentrations on subculture efficiency 组合 污染芽 个 污染率 增殖系数 玻璃化数 个 玻璃化率 C1D1 9 15 00 2 67 0 06fg 4 7 84 C2D1 11 18 33 3 43 0 15h 6 12 24 C3D1 3 5 00 3 47 0 21g 2 3 51 C4D1 3 5 00 3 23 0 10i 3 5 26 C5D1 1 1 67 3 670 0 15de 0 0 00 C1D2 8 13 33 5 23 0 15cde 4 7 69 C2D2 10 16 67 4 97 0 06f 5 10 00 C3D2 3 5 00 5 43 0 15ef 1 1 75 C4D2 2 3 33 4 73 0 12g 2 3 45 C5D2 0 0 00 5 43 0 06bc 0 0 00 C1D3 10 16 67 3 53 0 12b 8 16 00 C2D3 12 20 00 4 23 0 15cde 9 18 75 C3D3 4 6 67 4 37 0 06bcd 8 14 29 C4D3 2 3 33 3 97 0 15f 10 17 24 C5D3 0 0 00 5 93 0 12a 0 0 00 图 3 继代培养 C3D2 组合中不定芽增殖情况 Fig 3 Proliferation of adventitious buds in subculture combination C3D2 2 3 抑菌剂浓度和激素配组对耐寒月季开放式生根 培养的影响 生根培养是使获得的不定芽长出新根 形成完整 个体的过程 分别调查生根培养过程中的污染率 生 根率及根系生长状况 由表 9 可知 在培养基中激素 配比相同时 E3 组合及 E4 组合的污染率明显低于 E1 组合 E2 组合 其中 E4 组合的污染率更接近对照 在抑菌剂浓度相同时 F2 组合 F4 组合的生根率高 于其他组合且幼苗根生长速度较快 结果表明 生根 培养基质特美汀浓度的降低并未直接影响到污染率 而 ZP 抗菌素浓度的增加则会明显降低污染率 说明 生根培养过程中 ZP 抗菌素对污染率的降低起到关键 的作用 通过对幼苗长势的分析 可以确定 1 2MS 培 养基更有利于幼苗的生长 幼苗的茎粗且叶色绿或浓绿 而 IAA 则更有利于根的生长 在 IAA 浓度为 1mg L 1 的 培养基中 幼苗生根速度较快 因此 通过对污染 率 生根率及幼苗长势的综合判断 认为最佳耐寒月 季开放式组培的生根培养抑菌剂和激素组合为 E3F2 3 讨论 3 1 3 种抑菌剂对抑菌效果的影响 开放式组培因其具有低成本和对环境要求的普适 性等优点 成为当前组培研究的热点 而建立高效的 开放式组培体系的关键点则在于如何选择适宜的抑菌 51 2026 Vol 46 No 01 农业与技术 Agriculture and Technology 农业科学 Agricultural Science 表 9 抑菌剂和激素浓度配组对生根培养效果的影响 Table 9 Effect of combinations of bacteriostatic agents and hormone concentrations on rooting culture efficiency 组合 污染 芽 个 污染 率 生根 苗数 个 生根 率 幼苗 长势 E1F1 10 16 67 39 78 00 生根慢 茎粗 叶色浓绿 E2F1 9 15 00 40 78 43 生根慢 茎粗 叶色绿 E3F1 6 10 00 45 83 33 生根快 茎粗 叶色浓绿 E4F1 5 8 33 43 78 18 生根慢 茎粗 叶色绿 E5F1 0 0 00 39 65 00 生根慢 茎粗 叶色浓绿 E1F2 11 18 33 47 95 92 生根快 茎粗 叶色浓绿 E2F2 10 16 67 46 92 00 生根快 茎粗 叶色绿 E3F2 6 10 00 51 94 44 生根快 茎粗 叶色浓绿 E4F2 5 8 33 49 89 09 生根快 茎粗 叶色绿 E5F2 0 0 00 58 96 67 生根快 茎粗 叶色浓绿 E1F3 11 18 33 35 71 43 生根慢 茎细弱 叶色淡绿 E2F3 9 15 00 38 74 51 生根慢 茎细弱 叶色淡绿 E3F3 8 13 33 35 67 31 生根快 茎细弱 节间长 叶色绿 E4F3 8 13 33 31 59 62 生根快 茎细弱 节间长 叶色黄绿 E5F3 0 0 00 41 68 33 生根快 茎细弱 叶色淡绿 E1F4 11 18 33 41 83 67 生根快 茎细弱 叶色淡绿 E2F4 9 15 00 43 84 31 生根快 茎细弱 叶色淡绿 E3F4 8 13 33 46 88 46 生根快 茎细弱 节间长 叶色黄绿 E4F4 6 10 00 47 87 04 生根快 茎细弱 节间长 叶色黄绿 E5F4 0 0 00 51 85 00 生根快 茎细弱 叶色淡绿 图 4 生根培养 E3F2 组合中生根及幼苗生长情况 Fig 4 ooting and seedling growth in rooting culture combination E3F2 剂 ZP 抗菌素是一种组培专用的新型防污染抑菌剂 可通过切断植物细胞内细菌关键蛋白的连接或与核酸 碱基结合 干扰其复制 达到灭菌的目的 本实验结 果表明 在耐寒月季种苗繁育的各个阶段 污染率均 随 ZP 抗菌素浓度的增加而降低 初代培养过程中 当 ZP 抗菌素浓度 60mg L 1 时 污染率得到有效的 控制 降至 13 33 当 ZP 抗菌素浓度 80mg L 1 时 污染率即可控制在 10 以下 这与王平红等 24 关于蓝莓组培苗开放组培的研究结果一致 当在培养 基中加入 80mg L 1 的 ZP 抑菌剂 蓝莓组培苗污染率 可控制在 10 以下 继代培养的研究结果同样表明 污染率随 ZP 抗菌素浓度的增加而降低 当 ZP 抗菌素 浓度 50mg L 1 时 污染率降至 6 67 ZP 抗菌素 浓度 50mg L 1 时 污染率最低可达 3 33 在生 根培养的过程中 ZP 抗菌素 30mg L 1 时 污染率控 制在 13 33 以下 ZP 抗菌素 40mg L 1 时 污染 率控制在 10 以下 该浓度略高于许克正等 25 在白 掌 维美 组培苗生根培养时 ZP 抗菌素的使用浓度 10mL L 1 综合比较耐寒月季组培苗诱导不同阶 段的抑菌效果可知 当污染率控制在 10 以下时 ZP 抗菌素浓度表现为初代培养 继代培养 生根培养 ZP 抗菌素浓度的使用浓度随诱导阶段的延续而逐渐 降低 究其原因可能是 ZP 抗菌素自身的抑菌特点具 有持续的抗菌性 因而抑菌浓度随诱导阶段的延续而 逐渐降低 也可能因为初代培养时外植体材料取自长 期暴露在有菌环境中枝条 本身杂菌含量较高 因此 要使用高浓度的 ZP 抗菌素 随着诱导阶段的延续 材料表面的杂菌含量也在逐渐减低 因而低浓度的 ZP 抗菌素也会有明显的抗菌效果 PPM TM 是一种热稳定的抗菌剂 用于植物组织培 养中植物的微生物污染防治与清除 26 29 已在多种植 物的开放式组培中应用 30 34 P Pincelli Souza enata 等 35 在研究平欧杂种榛组培快繁技术时 以温室培 养的平欧杂种榛含腋芽的茎段为外植体 在生根培养 前用含 1 35mL L 1 的植物组培抑菌剂 PPM TM 冲洗外 植体材料 可有效抑制榛子组织内隐藏的生长缓慢的 内生菌 本实验初代培养过程中 植物组培抑菌剂 PPM TM 添加的最佳浓度为 1mL L 1 略低于 P Pincelli Souza enata 等实验中使用浓度 考虑是本实验 3 种 抑菌剂共同作用的结果 特美汀是替卡西林钠 Ticarcillin Disodium 和克 拉维酸钾 Potassium Clavulanate 按照 15 1 的比例 混合而成的抗生素 具有广谱抑菌特性 对革兰氏阳 性菌和阴性菌均有强效 李冰清等 36 在建立月季遗 传转化体系时 发现在 MS 培养基中 加入 100mL L 1 的特美汀可有效抑制农杆菌生长 本实验继代培 养过程中 在培养基中添加 100mL L 1 的特美汀抑菌 效果最佳 生根培养过程中在培养基中添加 50mL L 1 的特美汀抑菌效果最佳 这说明通过初代培养有 效降低了培养材料中的杂菌含量 因而特美汀的使用 浓度同样可随诱导阶段的延续逐步降低 61 农业科学 Agricultural Science 农业与技术 Agriculture and Technology 2026 Vol 46 No 01 3 2 不同激素组合对耐寒月季组培苗繁育的影响 植物激素的使用 在植物组培快繁中同样有着至 关重要的作用 在对月季组培苗的繁育研究中 6 BA 2 4 D IAA IBA NAA 是使用最多的植物激 素 3 4 11 12 7 10 倪静 12 在扦插成活率低月季品种组培 快繁体系研究中 通过比较萌芽率和生根率 筛选出 最适宜的启动培养基和生根培养基 结果表明 红双喜 最适启动培养基是 MS 加 3mg L 1 6 BA 加 0 2mg L 1 NAA 萌发率为 85 7 金玛丽最适启动培养基是 MS 加 2mg L 1 6 BA 加 0 2mg L 1 NAA 萌发率为 83 33 刘亚娟等 3 在芳纯月季组培快繁技术研究 中 最佳继代增殖培养基是 MS 加 3mg L 1 6 BA 加 0 1mg L 1 TDZ 加 0 1mg L 1 IBA 本实验筛选的最 佳初代培养基为 MS 加 1 5mg L 1 6 BA 加 0 1mg L 1 2 4 D 加 0 3mg L 1 IBA 最佳继代培养基为 MS 加 1 5mg L 1 6 BA 加 1 0mg L 1 2 4 D 加 0 2mg L 1 NAA 与前人研究相比较 都选择了 6 BA 诱导腋芽 的萌发及不定芽的增殖 但本实验的 6 BA 使用浓度 低于前人 王云云等 37 通过对 3 种抗寒月季组培快繁 的研究 确定 DQ2006 1 适宜生根培养基为 1 2MS 加 IBA 0 5mg L 1 加 NAA 0 05mg L 1 Q4 最佳生根培 养基为 1 2MS 加 IBA 0 5mg L 1 加 NAA 0 1mg L 1 Q6 最佳生根培养基为 1 2MS 加 IBA 0 1mg L 1 加 NAA 0 05mg L 1 倪静 12 研究认为 红双喜的最适生 根培养基是 1 2MS 加 0 5mg L 1 IBA 加 0 2mg L 1 NAA 金玛丽的最适生根培养基是 1 2MS 加 0 5mg L 1 IBA 加 0 1mg L 1 NAA 本实验研究表明 耐寒月季 2021 MH 的最佳生根培养基为 1 2MS 加 1mg L 1 IBA 加 0 5mg L 1 NAA 生根率达 94 44 与前人 研究中使用的激素种类一致 仅在使用剂量上存在差 异 综上考虑到这是因品种的特性所决定的 通过对抑菌剂的浓度和植物激素的组合的综合分 析 发现在耐寒月季种苗繁育的过程中 出芽率最 高 增殖系数最大 生根率最大植株生长状态最好 褐化率和玻璃化率最低时 污染率并未达到最小值 而污染率最小时 其他指标也未达到最优 这说明抑 菌剂的浓度和植物激素的组合是影响开放式组培的 2 个关键性因素 二者既相互依赖又彼此影响 抗菌剂 的添加可以保护培养物免受污染 有利于植物激素对 外植体材料的诱导 高浓度的抑菌剂又会产生细胞毒 性对外植体造成损伤 从而影响外源激素对外植体生 长和分化的诱导效果 4 结论 本试验通过探讨抑菌剂和激素浓度配组对初代培 养 继代培养基生根培养 3 个阶段的影响 建立了完 整的开放式耐寒月季组培快繁体系 通过分析初代培 养阶段各组合污染 褐化和出芽情况 优选出最佳的 耐寒月季开放式组培的初代培养基抑菌剂和激素浓度 配组 抑菌剂 60mg L 1 ZP 100mL L 1 特美汀 1 0mL L 1 PPM TM 培养基 MS 加 1 5mg L 1 6 BA 加 0 1mg L 1 2 4 D 加 0 3mg L 1 IBA 出芽率为 96 15 污染率为 13 33 褐化率为 3 85 通过 分析继代培养阶段各组合污染 玻璃化和增殖情况 优选出最佳的耐寒月季开放式组培的初代培养基抑菌剂 和激素浓度配组 抑菌剂 50mg L 1 ZP 150mL L 1 特 美汀 0 75mL L 1 PPM TM 培养基 MS 加 2 5mg L 1 6