矮牵牛花瓣衰老和逆境胁迫响应相关NAC基因的鉴定与分析.pdf

杨应杰 张付昆 穆静怡 等 矮牵牛花瓣衰老和逆境胁迫响应相关NAC基因的鉴定与分析 J 福建农业学报 2024 39 6 700 710 YANG Y J ZHANG F K MU J Y et al Identification and Analysis of NAC Related to Petal Senescence and Stress Responses of Petunia J Fujian Journal of Agricultural Sciences 2024 39 6 700 710 矮牵牛花瓣衰老和逆境胁迫响应相关NAC基因的 鉴定与分析 杨应杰 张付昆 穆静怡 付鲁峰 陈 倬 李 华 关夏玉 吕培涛 福建农林大学园艺学院 福建 福州 350002 摘 要 目的 NAC NAM ATAF and CUC 参与植物生长发育和多种逆境胁迫响应过程的调控 本文旨在鉴定 和研究对矮牵牛生长发育和逆境胁迫响应的关键NAC成员 为优质抗逆矮牵牛育种提供基因资源 方法 以腋 生矮牵牛 Petunia axillaris 基因组为参考基因组 利用矮牵牛花器官衰老过程 烟草脆裂病毒 Tobacco rattle virus TRV 侵染 低磷 低温 NaCl 铜离子和干旱胁迫处理后的转录组数据 分析矮牵牛NAC基因 PaNACs 差异 表达情况 并对差异表达PaNACs的启动子顺式作用元件及转录因子结合位点进行分析 利用实时荧光定量PCR验 证了部分差异表达PaNACs在矮牵牛花衰老过程中的表达情况 并预测了差异表达PaNACs编码蛋白的潜在靶基 因 结果 鉴定的131个PaNAC基因中 59个 45 04 被鉴定为花器官衰老和逆境胁迫响应过程中的差异表 达基因 PaNAC72 PaNAC22 PaNAC29 PaNAC40 PaNAC2 PaNAC90 PaNAC83 PaNAC56 PaNAC36和 PaNAC35在至少3个生物学过程响应中差异表达显著 其中拟南芥衰老关键基因AtNAP的直系同源基因 PaNAC29在花器官衰老过程和低温 低磷 铜离子胁迫逆境处理中显著上调表达 PaNAC72在除受铜离子胁迫外的 所有6种处理中表达差异显著 PaNAC22在花器官衰老过程和低温和低磷胁迫中上调表达 在铜离子和干旱逆境下 调表达 启动子分析结果显示这10个PaNAC启动子区域存在多种逆境胁迫响应相关元件 且大量响应衰老和逆境 胁迫的差异表达基因的启动子区域存在NAC的结合位点 结论 PaNACs广泛参与矮牵牛生长发育及逆境胁迫响 应 其中PaNAC29可能是花衰老关键的正调控因子 PaNAC72广泛响应多种逆境胁迫 关键词 矮牵牛 NAC 转录组 衰老 胁迫 生物信息学 中图分类号 S681 6文献标志码 A文章编号 1008 0384 2024 06 0700 11 Identification and Analysis of NAC Related to Petal Senescence and Stress Responses of Petunia YANG Yingjie ZHANG Fukun MU Jingyi FU Lufeng CHEN Zhuo LI Hua GUAN Xiayu L Peitao College of Horticulture Fujian Agriculture and Forestry University Fuzhou Fujian 350002 China Abstract Objective NACs in petunia responsible for the growth floral senescence and stress response were identified and analyzed Method Based on the Petunia axillaris genome transcriptomes on the flower in senescence as well as some other organs under the stress of inoculated tobacco rattle virus TRV low phosphorus low temperature NaCl copper ion or drought were obtained Expression under stress cis acting elements and transcription factor binding sites in promoters of differentially expressed PaNACs were analyzed The expression in flower senescence was determined using qRT PCR and putative target genes of proteins encoded by them predicted Result Of the 131 PaNACs 59 i e 45 04 of all were identified as differentially expressed genes DEGs during flower senescence and in response to stresses PaNAC72 PaNAC22 PaNAC29 PaNAC40 PaNAC2 PaNAC90 PaNAC83 PaNAC56 PaNAC36 and PaNAC35 exhibited significant differential expressions in response to at least 3 stress treatments Among them PaNAC29 an orthologue of the Arabidopsis key senescence related gene AtNAP was highly upregulated during flower senescence and in response to low temperature low 收稿日期 2024 03 25 修回日期 2024 06 15 作者简介 杨应杰 1996 男 硕士研究生 主要从事花卉与景观园艺研究 E mail hnyingjieyang 通信作者 关夏玉 1984 女 博士 高级实验师 主要从事观赏园艺品质生物学研究 E mail gxy302 吕培涛 1983 男 博士 教授 主要从事园艺作物品质生物学研究 E mail ptlv 基金项目 福建农林大学园艺学院青年学术骨干培养基金项目 722022011 福建省高原学科建设项目 102 71201801101 福建农业学报 2024 39 6 700 710 Fujian Journal of Agricultural Sciences doi 10 19303 j issn 1008 0384 2024 06 009 phosphorus or copper ion treatment PaNAC72 was significantly affected by all except copper ion treatment PaNAC22 was upregulated during flower senescence and in responses to low temperature and low phosphorus treatments but downregulated in the presence of copper ion or under drought condition Multiple stress responsive elements presented in the promoters of the 10 PaNACs and many senescence and stress responsive DEGs containing NAC binding sites in their promoters Conclusion NAC NAM ATAF and CUC involved widely in the growth development and stress responses of plants PaNACs in petunia such as PaNAC29 appeared to be a key positive regulator of floral senescence and PaNAC72 responsive to a wide variety of stresses Key words Petunia hybrida NAC transcriptome senescence stress bioinformatics 0 引言 研究意义 矮牵牛 Petunia hybrida 是茄科 Solanaceae 矮牵牛属 Petunia 多年生草本观赏 植物 也是研究植物花色 器官衰老以及响应逆境 胁迫分子机制的重要模式植物 矮牵牛花冠容易衰 老 易受外部环境如病毒侵染 干旱 极端温度 重金属等非生物的胁迫 严重限制其展示期和观赏 价值 NAC NAM ATAF and CUC 转录因子作为 植物生长发育及应对逆境胁迫的关键分子 已被证 实具有重要作用 矮牵牛PaNAC转录因子的功能研 究不仅有助于揭示其在生长发育中的作用 而且对 于理解其如何帮助植物适应和响应上述逆境胁迫具 有重要意义 进而为优质抗逆矮牵牛新品种的育种 工作提供潜在的分子靶标和理论基础 前人研究 进展 NAC是植物特有的转录因子家族 得名于矮 牵牛无顶端分生组织 no apical meristem NAM 拟南芥1 2转录激活因子 Arabidopsis thaliana transcri ption activation factor 1 2 ATAF1 2 和杯状子叶 cup shaped cotyledon CUC2 最早由Souer等 1 和Aida 等 2 发现 NAC转录因子N端有1个保守结构域 该结构域包含约150个氨基酸残基 由A B C D和E等5个基序组成 侧翼含有 螺旋和 折叠 结构 A基序可能与NAC二聚体形成有关 C和 D基序存在核定位信号并参与DNA的结合 B与 E基序可能与基因的功能多样性密切相关 3 5 大量 研究表明 NAC在植物生长发育及响应不同逆境胁 迫过程中发挥重要作用 OsNAC6在水稻 Oryza sativa L 对稻瘟病菌的防御反应中发挥作用 6 过 表达SlNAP1的番茄 Solanum lycopersicum L 植株 对2种广泛传播的细菌性疾病的防御能力显著增 强 7 在郁金香 Tulipa gesneriana L 中过表达TgNAP 会加速花瓣衰老 而沉默TgNAP则会延缓花衰老 8 BrNAC029参与了细胞分裂素途径延缓采后大白菜 Brassica rapa var glabra Regel 叶片衰老的途径 9 过表达SNAC1 stress responsive NAC 1 的转基因水 稻在生长期的抗旱性和耐盐性显著提高 10 百合 Lilium lancifolium LlNAC2过表达能够增强百合对 寒冷 干旱和盐分的耐受性 11 本研究切入点 目前已有一些关于矮牵牛花冠衰老和多种逆境处理 下的转录组数据报道 12 18 但关于NAC在这些生物 过程中的响应仍然缺乏集中研究 而来自不同研究 的多个转录组数据没有标准化 限制了对参与多种 生物学过程的关键矮牵牛目的基因的深入挖掘 拟 解决的关键问题 本研究对已公开发表的矮牵牛在 花衰老和不同逆境胁迫的转录组数据进行标准化处 理 分析NAC基因家族在矮牵牛花衰老及响应胁迫 过程中的表达模式 为揭示NAC在矮牵牛生长发育 和抗逆防御反应过程中的作用提供理论参考 1 材料与方法 1 1 矮牵牛RNA seq数据下载及处理 从NCBI https www ncbi nlm nih gov 中下载公 开发表的矮牵牛花瓣衰老 PRJNA417209 12 烟草 脆裂病毒 TRV 侵染 PRJNA693880 13 冷胁迫 PRJNA640832 14 低磷胁迫 PRJNA997338 15 NaCl胁迫 PRJNA381775 16 铜离子胁迫 PRJNA 774370 17 和干旱胁迫 PRJNA680631 18 相关转 录组数据 表1 从SolGenomics Network SGN 数据库下载矮牵牛基因组序列及基因组结构注释文 件 19 使用SRA toolkit2 11 3软件的fastp dump将 SRA格式的文件转化为fastq gz格式后使用Fastp软 件对转换格式后的数据进行质量控制 从原始数据 中删除低质量和接头 adapter 序列 使用Hisat2建 立矮牵牛参考基因组的索引并将处理后的测序数 据比对到参考基因组 最后通过samtools进行排序 处理 把SAM格式文件转换为BAM格式文件 利 用subread软件包中的FeatureCounts 20 计算读序数 量 read counts 并均一化为TPM值 transcripts per million 1 2 矮牵牛PaNAC成员序列下载及系统进化分析 从PlantTFDB http planttfdb gao lab org 下载 第 6 期杨应杰等 矮牵牛花瓣衰老和逆境胁迫响应相关NAC基因的鉴定与分析701 矮牵牛和拟南芥的NAC家族基因 使用MEGA 10 1 8将矮牵牛和拟南芥NAC的全长蛋白序列进行 序列比对 之后采用Maximum likelihood ML 法 的GTR CAT替代模型构建系统进化树 SPR 4 Shimodaira Hasegawa方法检验分支支持度 根据 前人通过与AtNAC蛋白的同源性命名方式对矮牵牛 PaNACs分别命名 21 1 3 基因表达分析及差异表达PaNAC成员鉴定 用Featurecount统计PaNACs的读序数量 然后 使用DESeq2以 log2 fold change 1和q value 0 05为标准筛选差异表达基因 Differentially expressed genes DEGs 提取差异表达的PaNAC成员的TPM 值 利用R包EnhancedVolcano和ComplexHeatmap 分别生成火山图和热图 韦恩图使用https www version 3 14 3 进行Gene ontology term分析 1 4 花瓣衰老差异基因的实时荧光定量PCR 矮牵牛植株在正常温室条件下生长 22 光 周期14L 10D 取开花期D0 花冠完全展开 和 衰老时期D4 花完全开放后4 d 的花各10朵 于 液氮中速冻后研磨成粉末 保存在 80 冰箱用于 RNA提取 所有试验均独立收集并提取至少3次 使用多糖多酚植物总RNA提取试剂盒 TIANGEN 提取矮牵牛花总RNA 用Prime Script RT reagentKit 试剂盒反转录获得cDNA 以Actin7为内参基因 每 种样品均设3个生物学重复 使用Bio Rad CFX96 Touch实时荧光定量PCR仪对目的基因扩增 表2 通过2 Ct计算基因的相对表达量 1 5 启动子顺式作用元件及转录因子结合位点分析 选取PaNAC转录起始位点上游2 000 bp的序列作 表 1 矮牵牛花衰老及各种胁迫处理 Table 1 Petunia flower senescence and various stress treatments 胁迫 Stress 处理方法 Treatment 品种 组织 Cultivar tissue 数据来源 Data source 花衰老 Flower senescence 采样时间点 第 0天 D0 花朵开放但在花药裂开之前 第 4天 D4 花冠在尖端边缘显示枯萎迹象 米切尔二倍体 腋生矮牵牛 花瓣 PRJNA417209 12 病毒胁迫 Virus stress 用 100 mmol L 1酸盐缓冲液均质化的 TRV PPK20 感染性汁液侵染 在侵染后第 0天 S0 3天 S3 和 6天 S6 取样 蓝色好时 腋生矮牵牛 叶 PRJNA693880 13 冷胁迫 Cold stress 分别于 4 C低温处理后 1 3 6 12 h收集叶片 超越 腋生矮牵牛 叶 PRJNA640832 14 低磷胁迫 Low phosphorus 切除来自节点 2 侧芽 和 7 顶芽 的腋芽 两种处理 正常磷 250 mol L 1 和低磷 5 mol L 1 V26自交系 腋生矮牵牛 腋芽 PRJNA997338 15 NaCl胁迫 NaCl stress 正常植株用 Hoagland溶液进行培养 NaCl处理组用含 150 mmol L 1 NaCl的改良 Hoagland溶液进行处理 在处理后 0 6 24 h取叶片 米切尔二倍体 腋生矮牵牛 叶 PRJNA381775 16 铜离子胁迫 Cu stress 正常营养液培养 28 d后 将植物转移至含有 40 mol L 1 CuSO4 Cu 的营养液中直至开花 正常植株始终用正常营养液培 养 收集第 7阶段 花药裂开 花瓣 米切尔二倍体 腋生矮牵牛 花瓣 PRJNA774370 17 干旱胁迫 Drought stress 对照组每天用 100 mg L 1氮灌溉直至试验结束 胁迫组 5 d不浇水 并在第 5天收集叶 米切尔二倍体 腋生矮牵牛 叶 PRJNA680631 18 表 2 实时荧光定量PCR引物信息 Table 2 Oligonucleotide primers used for qRT PCR analysis 基因名称 Gene 上游引物 Forward primer 下游引物 Reverse primer 退火温度 Annealing temperature PaNAC2 CTAATGTCGACCGCTCTGCT CATCGATTGTGGCCTTGGTG 57 34 57 03 PaNAC22 ATAGCCAACGTGACCGGAAG AGAGTAGTGAGGGTCGGTCC 57 65 58 56 PaNAC29 TCGGACCTTCCTCCAGGATT TATCGGTGCCTGTAGCCTTC 57 58 PaNAC35 GGATGACAGAAGCAGCAACG GTTCCCAAGGGTCATAGCGA 56 89 57 23 PaNAC36 TGGCAACAATTGGCGAGAGA ACCCAATCAGTCTTGGAGCC 57 23 57 56 PaNAC40 GTCTCCAGTGGGCCTGAATC TCAACCAGCTTGCTGAACCA 58 49 57 19 PaNAC72 TGTGTCACAGGGTACTCAAGC ACCGAATACCAAACGGGTCA 57 56 4 Actin7 TGCTGATCGTATGAGCAAGGAA GGTGGAGCAACAACCTTAATCTTC 56 56 702福建农业学报第 39 卷 为启动子序列 使用PlantCARE https bioinformatics psb ugent be webtools plantcare html 预测顺式作用元 件 使用PlantTFDB http planttfdb gao lab org 预 测启动子区域转录因子结合位点 1 6 潜在NAC靶基因的鉴定 选用拟南芥的NAC motif在MEME中 https meme suite org meme 预测差异表达基因的转录起 始位点上游2 000 bp序列中是否含有NAC结合位点 2 结果与分析 2 1 矮牵牛PaNAC和拟南芥AtNAC系统进化分析 使用MEGA软件对131个PaNAC和138个 AtNAC进行系统进化分析 发现NAC可以被分成 13个组 Group 1 13 图1 AtNAC基因响应 多种生物学过程并在逆境胁迫中发挥关键作用 PaNAC72 PaNAC2和PaNAC29所在的Group 5中的 拟南芥AtNAC被报道参与了干旱 AtNAC72 22 叶 片衰老 AtNAC55 23 和冷胁迫 AtNAC41 24 过 程 该组中的AtNAC29是拟南芥叶片衰老的关键转 录因子 25 PaNAC36和PaNAC90所在的Group 8中 的拟南芥AtNAC90被报道参与了盐胁迫 26 与 PaNAC138和PaNAC40同属于Group 9的拟南芥 AtNAC89和AtNAC40分别被报道参与了抗病毒 27 和 盐胁迫 28 过程 一般认为 结构决定功能 29 因此 推断这些PaNAC很可能与AtNAC具有相似的功能 2 2 矮牵牛PaNAC在花衰老中的表达情况 从公开发表的数据中 共获得69个转录组文 库 这些文库的Q30均值为94 91 平均比对率超 AT 5G 07 68 0 AN AC 07 9 AT 5G 61 43 0 AN AC 10 0 Pe ax i16 2Sc f00 12 90 00 11 PaNAC100 Pe ax i16 2Sc f00 45 1g 00 62 5 PaNAC79 Pe ax i16 2Sc f00 27 4g 00 44 3 PaNAC8 0 Pe ax i16 2Sc f00 01 3g 00 43 7 PaNAC59 Pe ax i16 2Sc f00 10 6g 00 32 3 PaNAC92 AT 3G 29 03 5 AN AC 05 9 AT 5G 39 61 0 AN AC 09 2 Pe ax i16 2Sc f00 07 6g 00 07 1 PaNA87 AT 3G 04 06 0 AN AC 04 6 AT 5G 18 27 0 AN AC 08 7 AT 1G 76 42 0 AN AC 03 1 Pe axi 16 2Sc f00 680 g00 630 PaNAC3 1 AT 3G 15 170 AN AC 05 4 AT 5G 53 950 AN AC 09 8 Pea xi1 62Sc f00 027 g00 145 PaNAC9 8 Pea xi1 62Sc f00 069 g01 832 PaNAC5 4 Pea xi1 62Sc f00 045 g00 146 PaNAC3 9 Pea xi1 62Sc f00 213 g00 119 PaNAC3 8 AT 2G 244 30 AN AC 038 AT 3G 184 00 AN AC 058 Pea xi1 62Sc f00 015 g00 941 PaNAC1 13 Pea xi1 62Sc f00 013 g00 103 PaNAC5 8 Pea xi1 62Sc f00 634 g00 032 PaNAC142 AT 1G 560 10 AN AC 021 AT 3G 129 77 Pea xi1 62Sc f00 232 g01 126 PaNAC22 AT 4G 285 30 AN AC 074 Pea xi1 62Sc f00 624 g00 014 PaNAC2 1 Pea xi1 62Sc f00 987 g00 110 PaNAC7 4 Pea xi1 62Sc f00 083 g00 319 PaNAC1 5 Pea xi16 2Sc f00 268 g01 214 PaNAC3 0 AT 1G7 193 0 AN AC 030 Pea xi16 2Sc f000 74g 001 35 PaNAC1 18 Pea xi16 2Sc f008 88g 004 10 PaNAC1 2 AT1 G32 770 AN AC0 12 AT2 G46 770 AN AC0 43 AT3 G61 910 AN AC0 66 AT1 G79 580 AN AC0 33 Peax i162 Scf0 0006 g002 29 PaNAC33 Peax i162 Scf0 0078 g001 21 PaNAC7 0 AT1 G332 80 AN AC0 15 AT4 G103 50 AN AC0 70 AT2G 1806 0 AN AC03 7 AT4G 36160 ANAC 076 Peaxi 162Sc f0008 3g009 15 PaNAC7 6 Peaxi1 62Scf 00799 g0021 6 PaNAC105 AT5G 66300 ANAC 105 AT5G 62380 ANAC 101 AT1G1 2260 AN AC007 AT1G6 2700 AN AC026 Peaxi16 2Scf000 02g0072 0 PaNAC7 Peaxi162 Scf00054 g02213 PaNAC1 05 Peaxi162Sc f00241g0 0423 PaNAC2 6 Peaxi162Sc f00128g01 627 PaNAC83 Peaxi162Sc f00962g000 19 PaNAC125 AT5G13180 AN AC083 Peaxi162Scf005 16g00027 PaNAC4 1 AT2G33480 ANAC 041 Peaxi162Scf00525g000 06 PaNAC139 AT5G64530 ANAC104 Peaxi162Scf00152g01118 PaNAC104 Peaxi162Scf00001g00042 PaNAC110 Peaxi162Scf00001g00044 PaNAC111 Peaxi162Scf00086g00028 PaNAC120 Pe axi162Scf00432g00076 PaNAC102 Peaxi 162Scf00004g02727 PaNAC81 Peaxi162Scf00493g00013 PaNAC6 4 Peaxi162Scf00079g00716 PaNAC1 19 Peaxi162Scf006 10g00367 PaNAC141 AT1G52880 AN AC018 AT3G15510 AN AC056 Peaxi162Scf0018 1g00124 PaNAC18 Peaxi162Scf0099 8g00127 PaNAC56 AT1G61 110 ANAC 025 Peaxi16 2Scf011 53g0003 6 PaNAC2 5 Peaxi16 2Scf000 00g004 81 PaNAC1 9 Peaxi1 62Scf0 0998g0 0126 PaNAC72 AT4G 27410 ANAC 072 AT1G 52890 ANAC 019 AT3G 15500 ANAC 055 Peaxi 162Sc f0018 2g007 11 PaNAC55 Peaxi 162S cf003 51g00 112 PaNAC47 AT3G 0407 0 AN AC04 7 Peax i162Sc f0005 5g02 415 PaNAC163 Peax i162Sc f014 55g0 0015 PaNAC1 4 Peax i162 Scf0 0184 g000 18 PaNAC1 26 Peax i162 Scf0 0222 g006 24 PaNAC2 9 AT1 G69 490 N AP AT1 G01 720 AN AC0 02 Peax i162 Scf0 005 1g0 141 0 PaNAC2 AT1 G77 450 AN AC0 32 Pea xi16 2Sc f008 42g 002 11 PaNAC81 AT5 G08 790 AN AC0 81 AT 5G6 379 0 AN AC 102 AT 3G0 320 0 AN AC 045 AT 5G1 726 0 AN AC 086 AT 1G6 591 0 AN AC 028 AT 3G 177 30 AN AC 057 Pea xi1 62Sc f00 171 g00 619 PaNAC57 Pea xi1 62Sc f00 643 g00 628 PaNAC86 AT 1G 543 30 AN AC 020 Pea xi1 62Sc f00 294 g00 625 PaNAC20 Pea xi1 62Sc f00 521 g00 049 PaNAC161 Pea xi1 62Sc f00 713 g00 018 PaNAC11 AT 1G 325 10 AN AC 011 AT 4G 179 80 AN AC 071 AT 5G 465 90 A NAC 096 Pea xi1 62S cf0 01 02 g00 626 PaNAC9 6 Pea xi1 62Sc f00 695 g00 512 PaNAC71 AT 5G 09 330 AN AC 08 2 AT 5G 64 060 AN AC 10 3 Pe axi 16 2Sc f00 583 g00 020 PaNAC1 03 Pe axi 16 2Sc f00 589 g00 322 PaNAC82 AT 1G 34 180 AN AC 01 6 AT 1G 34 19 0 AN AC 01 7 Pe ax i16 2Sc f00 16 0g 01 63 6 PaNAC1 7 Pe ax i16 2S cf0 02 26 g0 03 19 PaNAC16 AT 1G 32 87 0 AN AC 01 3 AT 3G 10 50 0 AN AC 05 3 AT 5G 04 41 0 AN AC 07 8 Pe ax i16 2Sc f00 25 3g 00 32 1 PaNAC7 8 Pe ax i16 2Sc f01 10 5g 00 21 8 PaNAC53 AT 3G 10 48 0 AN AC 05 0 AT 3G 10 49 0 AN AC 05 1 Pe ax i16 2Sc f00 17 6g 01 63 8 PaNAC50 Pe ax i16 2Sc f01 10 5g 00 01 5 PaNAC5 1 Pe ax i16 2Sc f00 05 7g 00 08 4 CA Na P 95 Peax i16 2Sc f00 54 1g 00 01 0 CA Na P 14 0 Pe ax i16 2Sc f00 91 1g 00 04 9 PaNAC9 4 Pe ax i16 2Sc f00 12 9g 00 23 0 PaNAC9 AT 1G 26 87 0 AN AC 00 9 AT 5G 39 82 0 AN AC 09 4 Pe ax i16 2Sc f00 35 9g 00 81 5 PaNAC1 33 Pe ax i16 2Sc f01 42 5g 00 11 3 PaNAC1 56 AT 3G 12 91 0 AT 2G 43 00 0 AN AC 04 2 Pe ax i16 2Sc f00 45 2g 00 72 0 PaNAC4 2 AT 2G 17 04 0 AN AC 03 6 Pe ax i16 2Sc f00 87 5g 00 11 1 PaNAC3 6 Pe axi 16 2Sc f00 580 g00 710 PaNAC6 3 Pe axi 16 2Sc f00 150 g00 001 PaNAC35 Pe axi 16 2Sc f00 194 g01 039 PaNAC3 4 AT 2G 02 450 AN AC 03 4 Pea xi1 62Sc f00 069 g00 510 PaNAC6 1 Pea xi1 62Sc f00 040 g00 025 PaNAC9 0 AT 3G 44 350 AN AC 06 1 AT 5G 223 80 AN AC 090 AT 1G 022 10 AT 3G 044 10 AT 1G 022 30 AN AC 004 AT 1G 022 50 AN AC 005 AT 1G 022 20 AN AC 003 AT 3G 044 20 AN AC 048 AT 1G 010 10 AN AC 001 AT 4G 015 50 AN AC 069 AT 3G 044 30 AN AC 049 AT 4G 015 20 AN AC 067 AT 4G0 154 0 AN AC 068 Pea xi16 2Sc f00 504 g00 008 PaNAC1 38 AT 5G0 440 0 AN AC 077 AT5 G50 820 AN AC0 97 AT3 G44 290 AN AC0 60 AT5 G22 290 AN AC0 89 AT2 G27 300 AN AC0 40 Peax i162 Scf0 0091 g000 74 PaNAC40 Peax i162 Scf0 0224 g005 14 PaNAC6 0 AT5 G18 037 AT5 G18 300 AN AC0 88 AT1 G641 05 AN AC0 27 AT1 G330 60 AN AC0 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