丛枝菌根真菌对大葱幼苗生长和矿质元素吸收的影响.pdf

中国蔬菜 China Vegetables ISSN 1000 6346 CN 11 2326 S 中国蔬菜 网络首发论文 题目 丛枝菌根真菌对大葱幼苗生长和矿质元素吸收的影响 作者 陈奕璇 谢坤豪 王晓芹 闫妍 李衍素 于贤昌 王君 陈增杰 贺超兴 DOI 10 19928 ki 1000 6346 2024 3027 收稿日期 2023 09 27 网络首发日期 2024 04 17 引用格式 陈奕璇 谢坤豪 王晓芹 闫妍 李衍素 于贤昌 王君 陈增杰 贺超兴 丛 枝菌根真菌对大葱幼苗生长和矿质元素吸收的影响 J OL 中国蔬菜 https doi org 10 19928 ki 1000 6346 2024 3027 网络首发 在编辑部工作流程中 稿件从录用到出版要经历录用定稿 排版定稿 整期汇编定稿等阶 段 录用定稿指内容已经确定 且通过同行评议 主编终审同意刊用的稿件 排版定稿指录用定稿按照期 刊特定版式 包括网络呈现版式 排版后的稿件 可暂不确定出版年 卷 期和页码 整期汇编定稿指出 版年 卷 期 页码均已确定的印刷或数字出版的整期汇编稿件 录用定稿网络首发稿件内容必须符合 出 版管理条例 和 期刊出版管理规定 的有关规定 学术研究成果具有创新性 科学性和先进性 符合编 辑部对刊文的录用要求 不存在学术不端行为及其他侵权行为 稿件内容应基本符合国家有关书刊编辑 出版的技术标准 正确使用和统一规范语言文字 符号 数字 外文字母 法定计量单位及地图标注等 为确保录用定稿网络首发的严肃性 录用定稿一经发布 不得修改论文题目 作者 机构名称和学术内容 只可基于编辑规范进行少量文字的修改 出版确认 纸质期刊编辑部通过与 中国学术期刊 光盘版 电子杂志社有限公司签约 在 中国 学术期刊 网络版 出版传播平台上创办与纸质期刊内容一致的网络版 以单篇或整期出版形式 在印刷 出版之前刊发论文的录用定稿 排版定稿 整期汇编定稿 因为 中国学术期刊 网络版 是国家新闻出 版广电总局批准的网络连续型出版物 ISSN 2096 4188 CN 11 6037 Z 所以签约期刊的网络版上网络首 发论文视为正式出版 doi 10 19928 ki 1000 6346 2024 3027 https veg org 陈奕璇 女 硕士研究生 专业方向 蔬菜栽培 E mail 13668316179 通信作者 Corresponding author 贺超兴 男 研究员 专业方向 特色蔬菜栽培 E mail hechaoxing 收稿日期 2023 09 27 接受日期 2024 03 26 基金项目 国家重点研发项目 2022YFD1602403 国家特色蔬菜产业技术体系项目 CARS 24 B 04 农业农村部园艺作物生物学与种质创制重点实验室项目 丛枝菌根真菌对大葱幼苗生长和矿质元素吸收的影响 陈奕璇 1 谢坤豪 1 王晓芹 1 闫妍 1 李衍素 1 于 贤昌 1 王君 1 陈增杰 2 贺超兴 1 1中国农业科学院蔬菜花卉研究所 蔬菜生物育种全国重点实验室 北京 100081 2河南柘城辣椒研究 所 河南商丘 476200 摘 要 以大葱品种青叶 1号为试材 研究接种丛枝菌根真菌 arbuscular mycorrhiza fungi AMF 对葱 苗生长及矿质元素吸收的影响 结果表明 AMF 可以与大葱根系形成良好且稳定的共生关系 接种 45 d 后菌根侵染率为 83 3 与未接种处理 CK 相比 接种 AMF显著提高了葱苗的株高 假茎长 茎粗 地上部和地下部干鲜质量 根系活力 根系表面积 光合色素含量 以及营养元素 N P K和 Mn的含 量 有助于培育壮苗 关键词 大葱幼苗 丛枝菌根真菌 干鲜质量 矿质元素 根系活力 The Effects of Inoculated Arbuscular Mycorrhizal Fungi on the Growth and Mineral Element Uptake of Green Onion Seedlings CHEN Yixuan1 XIE Kunhao1 WANG Xiaoqin1 YAN Yan1 LI Yansu1 YU Xianchang1 WANG Jun1 CHEN Zengjie2 HE Chaoxing1 1Institute of Vegetables and Flowers Chinese Academy of Agricultural Sciences National Key Laboratory of Vegetable Biological Breeding Beijing 100081 China 2Henan Zhecheng pepper Research Institute Shangqiu 476200 Henan China Abstract The effects of inoculation with arbuscular mycorrhizal fungi AMF on the growth and mineral element absorption of green onion seedlings were studied The results showed that AMF could form a good and stable symbiotic relationship with the onion root system and the root mycorrhizal infection rate was 83 3 in 45 days seedlings Compared with control CK inoculation with AMF significantly increased the plant height stem thickness fresh and dry weight in both onion seedlings and roots the root activity root surface area leaf photosynthetic pigment and nutrient mineral elements contents of N P K and Mn in onion 网络首发时间 2024 04 17 14 53 58 网络首发地址 seedlings So AMF inoculation treatment had a promoting effect on growth and mineral elements absorption of green onion which was conductive to the strong seedlings cultivation for onion production Keywords green onion seedlings arbuscular mycorrhizal fungi plant dry and fresh weight mineral element content root activity 大葱 Allium fistulosum L var gigantum Makino 在中国特色蔬菜生产中占有重要的地位 是重要的出 口创汇蔬菜 目前 我国大葱栽培面积近 60万 hm2 霍晴 等 2022 随着大葱种植面积的扩大 特别 是小青葱生产的发展 葱苗生长期短 一年多茬栽培 葱苗人工移栽成本不断上涨 工厂化育苗和机械 化移栽是节本增效的重要技术措施 而培育优质健壮葱苗是保证大葱机械化移栽质量的前提 张德学 等 2020 崔丹丹 等 2024 王婧 等 2024 丛枝菌根真菌 arbuscular mycorrhiza fungi AMF 是一种能与大多数陆地植物建立互惠共生关系 促进植物生长的真菌 Wang et al 2019 AMF菌丝生长侵染植物根系 菌丝根系融为一体扩大了吸 收面积 菌丝协助根系吸收营养物质 促进了矿质营养从根系向地上部转移 Lehmann Rillig 2015 进 而促进幼苗生长 提高幼苗成活率 Salvioli di Fossalunga Bonfante 2023 大量研究表明 接种 AMF能够提高植株根系活力和地上部生物量 例如促进黄瓜 李聪 等 2014 Chen et al 2017 辣 椒 董桑婕 等 2022 Franczuk et al 2023 洋葱 Shafiq et al 2023 等蔬菜幼苗的生长 本试验 研究了接种 AMF对葱苗生长和矿质元素吸收的影响 以期为培育大葱优质壮苗提供试验依据 1 材料与方法 1 1 试验材料 供试大葱品种为青叶 1号 由河北省石家庄市农林科学研究院选育并提供 供试 AMF菌株为摩西球 囊霉 Glomus mosseae 由中国农业科学院蔬菜花卉研究所设施栽培课题组以玉米 高粱和万寿菊为宿 主扩繁所得 Corona Ram rez et al 2023 育苗基质为草炭 蛭石 2V 1V 基本理化性质 有机质 OM 109 g kg 1 全氮 TN 1 30 g kg 1 全磷 TP 0 115 g kg 1 全钾 TK 0 678 g kg 1 速效钾 AK 1 174 mg kg 1 pH 土水 质量比为 1 10 稀释后测定 5 54 1 2 试验设计 试验于 2023 年 2 6 月在中国农业科学院蔬菜花卉研究所南区人工气候室进行 昼夜温度分别设置 为 25 1 和 18 1 每天光照和黑暗时间各 12 h 补充光照强度为 400 800 mol m 2 s 1 试验采用 50 孔穴盘育苗方式进行 设置接种丛枝菌根真菌 AMF 和不接种丛枝菌根真菌 CK 2 个处理 穴盘用 75 酒精擦洗消毒 将高温 121 灭菌后的基质拌匀后装入穴盘 AMF处理每个穴盘施 200 g菌剂 CK处理穴盘不施菌剂 装入基质后按每穴 4粒播种 每处理 5盘 每穴保苗 2株 即每处理 500株葱苗 取样测定相关指标时每次取样 10株为 1个重复 重复 3次 播种后每隔 15 d按 30 mL 穴 1 浇灌营养液 营养液配方如下 Ca NO3 2 189 mg L 1 KNO3 101 2 mg L 1 NH4NO3 16 mg L 1 KH2PO4 6 8 mg L 1 MgSO4 7H2O 98 6 mg L 1 KCl 11 175 mg L 1 Zhu et al 2022 1 3 指标测定 1 3 1 AMF菌剂孢子含量测定 采用湿筛倾注蔗糖离心法测定菌剂包子含量 An et al 1990 具体方 法 称取 10 g菌剂置入大烧杯中 加入 500 mL蒸馏水搅拌 先后过 80目 400目分样筛 将 400目分样 筛上的残余物转入离心管中 3 000 r min 1离心 10 min后去掉上清液 在离心管中加入蔗糖溶液再次离心 10 min 用 400目筛过滤上清液后将剩余残留物划入培养皿进行镜检 采用目测视野法 根据培养皿的面 积 奥林巴斯显微镜 BX53M 视野面积大小和镜头视野中的平均孢子数计算出菌剂中的孢子含量 1 3 2 菌根侵染指标测定 采用曲利苯蓝染色 方格交叉根段法测定菌根侵染相关指标 大葱幼苗播 种后 45 d 第 2片真叶和顶芽长出 每处理随机选取长势一致的葱苗 30株 洗净幼苗根部后剪取根尖 1 cm 处根段 使用曲利苯蓝完成根段染色 乳酸酚脱色后制片 Phillips et al 1970 使用奥林巴斯显微镜 BX53M 进行镜检 统计菌根侵染根段数 根据以下公式计算菌根侵染率 根系菌根侵染强度 侵染 丛枝率 根系丛枝丰度和菌根效应 Trouvelot et al 1986 于二敏 等 2014 娄璇 等 2019 菌根侵染率 菌根侵染根段数 检测根段总数 100 根系菌根侵染强度 0 95 N5 0 70 N4 0 30 N3 0 05 N2 0 01 N1 镜检根段总数 100 侵染根段菌根侵染强度 根系菌根侵染强度 镜检总根段数 被侵染根段数 侵染丛枝率 100 mA3 50 mA2 10 mA1 100 根系丛枝丰度 侵染根段菌根侵染强度 根系菌根侵染强度 100 菌根效应 接种 AMF处理生物量 对照生物量 对照生物量 100 根系菌根侵染强度计算公式中的 N5 N4 N3 N2 N1 是将菌根侵染强度分为 5个等级 即 N1 0 无菌根化 N2 1 的片段为菌根化 N2 10 的片段为菌根化 N3 50 的片段为菌根化 N4 50 的片段为菌根化侵染丛枝 N5 大于 90 的片段为菌根化 N5 第 5级根段数之和 N4 N3 N2 N1含义相同 0 95 0 70 0 30 0 05 0 01代表各级所占权重 侵染丛枝率计算公式中的 mA3 mA2 mA1分别为 A3 A2 A1所对应的菌根侵染强度 侵染丛枝率根据侵染根段丛枝状菌丝分布的多少 分为无 A0 少量 A1 多量 A2 大量 A3 其中 mA3 0 95 A35 0 70 A34 0 30 A33 0 05 A32 A31 被侵染根段数 根系菌根侵染强度 A35表示第 5级根段中丛枝为 A3级的数量 A34 A33 A32 A31含义相同 mA2 mA1计算方法同 mA3 1 3 3 葱苗生长指标测定 分别在播种后 30 45 60 75 d和 90 d时 每处理各选取长势均匀的葱苗 30 株 统计单株生长指标 使用卷尺测量株高 茎基部至植株顶端叶尖的高度 叶长 叶鞘顶端至植株 最长功能叶片顶端叶尖的长度 假茎长 茎基部至叶鞘顶端的距离 使用游标卡尺测量茎粗 茎基 部向上 2 cm 处的假茎直径 使用千分之一电子天平测定葱苗地上部和地下部鲜质量 置于烘箱 75 烘干至恒重后测定干质量 播种后 90 d时 每处理选取长势均匀的葱苗 30株 使用万深根系扫描仪 V700P 扫描葱苗根系 扫描结果使用 LA S根系分析软件 杭州万深检测科技有限公司 进行分析 得到葱苗根长 根系表面积 根系体积 分叉数 平均直径等形态指标结果 Meng et al 2021 1 3 4 植株生理指标测定 播种后 90 d时每处理选取长势均匀的葱苗 30株 分别剪取功能叶 生长点以 下第 2片真叶 采用 95 乙醇浸提 比色分析法测定叶片光合色素含量 Li et al 2019 同时洗净葱 苗根系 自然晾干后采用 TTC染色法测定根系活力 朱秀云 等 2020 叶绿素含量 mg g 1 色素浓度 提取液体积 稀释倍数 样品鲜质量 根系活力 g g 1 h 1 OD 0 003 5 4 h W 0 002 2 h 4 W 0 4 0 5 1 3 5 葱苗矿质元素含量测定 播种后 90 d时每处理随机选取长势均匀的葱苗 30株 置于 105 烘箱杀 青 15 min 75 烘干至恒重后使用研磨机将其磨成粉末 采用 凯氏定氮法 测定氮含量 采用磷钼酸比色 法测定磷含量 采用二乙烯三胺五乙酸 DTPA 萃取法测定钾 钙 镁 锌 锰和铜含量 采用原子吸 收光谱法测定铁含量 鲍士旦 2000 1 4 数据处理 使用 Excel 2016软件整理数 据 使用 DPS 9 01软件分析数据 采用 Duncan s新复极差法 P 0 05 进行差异显著性检验 使用 Prism 8 4 2软件作图 2 结果与分析 2 1 AMF菌剂孢子含量及 AMF处理对葱苗根系菌根侵染的影响 经测定 所用菌剂 孢子密度为 80 86个 g 1 可以满足菌根菌高效侵染的需要 葱苗播种后 45 d 接 菌葱苗根段中具有较多泡囊结构以及 AMF菌丝丛枝结构 对照根段无侵染 图 1 AMF处理葱苗根段 中的菌根侵染率达 83 3 根系菌根侵染强度为 34 3 侵染根段菌根侵染强度为 4 45 丛枝丰度为 8 68 表明 AMF与葱苗根系形成了良好且稳定的共生结构关系 图 1 播种后 45 d葱苗根段 AMF侵染情况 A AMF处理根段内的泡囊结构 10 40 B AMF处理根段内菌丝与泡囊形成丛枝结构 10 20 C和 D为对照根 段 内无泡囊结构 10 40 2 2 AMF处理对葱苗根系生长和根系活力的影响 由表 1与图 2可知 与 CK相比 AMF处理显著提高了葱苗的根长 根系表面积 根系体积 根尖 数以及根系活力 分别提高 235 5 210 0 187 5 683 4 和 69 6 表明接种 AMF 可以促进葱苗 根系的生长 表 1 AMF处理对葱苗根系生长和根系活力的影响 注 同列数据后不同小写字母表示在 P 0 05水平上差异显著 下表同 处理 根尖数 个 根长 cm 根系表面积 cm2 根系活力 g g 1 h 1 根系体积 cm3 分叉数 个 平均直径 mm CK 229 33 91 95 b 283 31 66 48 b 29 18 5 01 b 31 67 11 54 b 0 32 0 40 b 0 86 0 03 a 0 36 0 038 a AMF 1796 67 175 10 a 950 39 6 53 a 90 47 16 10 a 53 71 3 72 a 0 92 0 30 a 0 96 0 03 a 0 37 0 040 a 菌根效应 683 4 235 5 210 0 69 6 187 5 11 6 2 8 图 2 不同处理的葱苗根系形态 2 3 AMF处理对葱苗生长的影响 葱苗生长 90 d时 与 CK相比 AMF处理显著提高了葱苗的株高 假茎长和茎粗 分别提高 19 1 21 6 14 3 图 3 葱苗生长 90 d时 与 CK相比 AMF处理显著提高了葱苗地上部 地下部 全 株鲜质量和干质量 分别提高了 104 6 223 3 114 1 和 17 8 96 8 223 3 图 4 从整个 生长时期看 AMF促进了葱苗生长和生物量的累积 图 3 AMF处理对葱苗生长的影响 图柱上相同处理天数的不同小写字母表示差异显著 P 0 05 下图同 图 4 AMF处理对葱苗生物量的影响 2 4 AMF处理对葱苗光合色素含量的影响 与 CK相比 接种 AMF显著提高了葱苗叶片的叶绿素 a 叶绿素 b 总叶绿素和类胡萝卜素含量 分别提高 10 8 11 8 10 9 和 9 1 图 5 图 5 AMF对葱苗叶片光合色素含量的影响 2 5 AMF处理对葱苗矿质元素吸收的影响 由表 2可知 AMF处理显著提高了葱苗地上部茎叶中 N P K Mn的含量 分别较 CK提高 32 0 42 1 237 5 64 5 表 2 AMF处理对大葱幼苗地上部茎叶矿质元素的影响 处理 Ca mg g 1 N mg g 1 K mg g 1 P mg g 1 Mg mg g 1 Fe mg kg 1 Mn mg kg 1 Cu mg kg 1 Zn mg kg 1 CK 4 16 0 65 a 2 03 0 14 b 0 8 0 09 b 1 9 0 02 b 0 86 0 03 a 80 20 11 91 a 54 40 12 41 b 8 23 1 18 a 0 01 0 10 a AMF 5 72 0 89 a 2 68 0 04 a 2 7 0 40 a 2 70 0 40 a 0 96 0 03 a 121 17 27 22 a 89 47 11 76 a 13 17 4 07 a 0 02 0 01 a 菌根效应 37 5 32 0 237 5 42 1 11 6 51 1 64 5 60 0 100 0 3 讨论 随着我国经济社会的快速发展和居民生活水平的稳步提高 蔬菜栽培技术水平不断提高 为降低劳 动成本 蔬菜工厂化育苗和机械化移栽技术逐渐得到推广应用 加快补齐工厂化育苗短板 培育高质量 健康蔬菜种苗 实现机械化育苗 对加快农业现代化发展具有重大意义 大葱的根系属于须根 分布浅 吸收深层土壤水分和养分的能力较弱 育苗周期长 AMF 作为一种能与植物根系进行共生的有益菌 具 有明显促进蔬菜幼苗生长和干物质积累 培育壮苗的作用 吴亚胜 等 2018 已有大量研究表明 接 种 AMF 能够提高蔬菜根系活力和地上部生物量 促进番茄 贺 忠群 等 2006 黄瓜 李聪 等 2014 Chen et al 2017 辣椒 董桑婕 等 2022 Franczuk et al 2023 等设施蔬菜幼苗的生长 在多年生 蔬菜芦笋中 也发现了接种 AMF具有改善芦笋矿质元素吸收和促进增产和改善品质的效果 于二敏 等 2014 有关接种 AMF 对大葱影响的研究尚不多见 本试验表明 在大葱苗期接种 AMF 对根系有很好的侵 染效果 表现为接种 45 d后葱苗根段中的 AMF菌根侵染率高达 83 3 侵染强度高表明 AMF与葱苗根 系间已建立起稳定的共生体系 由于 菌丝系统扩大了植物根系的吸收范围 使宿主植物在土壤中吸收了 更多的养分 从而促进植物地上部的生长 试验还发现 接种 AMF显著提高了葱苗的根系活力和光合色 素含量 显著提高了葱苗株高 茎粗 假茎长 地上部和地下部干鲜质量 且随着接种天数的增加呈增 长趋势 这与 Guo 等 2007 在大葱 Shafiq 等 2023 在洋葱苗期接菌后促进植株生长的研究结果相 一致 AMF 通过与植物根系建立共生联系并且定殖于根的皮层细胞中 使植物根系伸长 根系表面积增加 强壮的根系从基质或土壤中吸收更多的大量元素和微量元素 进而促进地上部 植株的生长 Alghamdi 2019 Fasusi et al 2021 Kalamulla et al 2022 本试验结果也有同样发现 与对照相比 接种 AMF 提高了葱苗的根系活力和根系吸收面积 促进了根系对矿质元素的吸收 丰富了葱苗地上部 N P K 和 Mn 等营养元素水平 进而促进其生长和干物质积累 这可能是由于 AMF 定殖于根系后向土壤中释放能 够活化矿质元素吸收的物质 例如高铁载体 酚类化合物 这些物质大大促进了宿主植物对矿质营养元 素的吸收 Sarathambal et al 2023 4 结论 接种 AMF 显著提高了葱苗的根系活力 增加了根系表面积和根系干 鲜质量 促进了葱苗对 N P K和 Mn等矿质元素的吸收 提高叶片光合色素含量 进而促进了葱苗生长 为大葱培育壮苗提供了技术 支撑 参考文献 鲍士旦 2000 土壤农化分析 北京 中国农业出版社 32 40 崔丹丹 韩金磊 徐有权 王婧 李胜利 2024 不同浓度矮壮素 萘乙酸和烯效唑对大葱苗期生长的 影响 中国蔬菜 1 1 9 董桑婕 葛诗蓓 李岚 贺丽群 范飞军 齐振宇 喻景权 周艳虹 2022 不同光质补光对辣椒幼苗 生长 丛枝菌根共生和磷吸收的影响 园艺学报 49 8 1699 1712 贺忠群 贺超兴 张志斌 邹志荣 王怀松 2006 不同丛枝菌根真菌对番茄生长及相关生理因素的影 响 沈阳农业大学学报 3 308 312 霍晴 吴曼 赵邦宏 2022 我国大葱产业竞争力分析与对策 中国蔬菜 3 1 8 李聪 贺超兴 闫妍 李衍素 于贤昌 Vosatka M J M 2014 不同时期接种 AM 真菌对大棚黄瓜产量 及品质的影响 中国蔬菜 8 21 24 娄璇 陶刚 王廿 卯婷婷 赵玳琳 2019 丛枝菌根真菌与大田辣椒定殖共生研究 北方园艺 5 56 60 王婧 马付生 胡鹏昊 徐有权 崔丹丹 宋向达 耿永琪 何雪颖 李胜利 不同浓度调环酸钙对大 葱幼苗生长的影响 中国蔬菜 1 9 吴亚胜 王其传 祁红英 赵政 张帅 2018 育苗基质中添加丛枝菌根真菌菌剂对辣椒幼苗生长和光 合参数的影响 蔬菜 7 12 16 于二敏 李聪 贺超兴 2014 AM 真菌对大棚芦笋矿质元素吸收和营养品质的影响 中国蔬菜 7 40 43 张德学 张军强 闵令强 李青江 刘学峰 任冬梅 2020 我国大葱生产全程机械化进程及配套设备 概述 中国农机化学报 41 1 197 204 周丽颜 陆建增 黄馨怡 孙兆智 吴凤芝 高丹美 2024 丛枝菌根真菌对番茄生长和根结线虫病的 影响 中国蔬菜 2 100 105 朱秀云 梁梦 马玉 2020 根系活力的测定 TTC 法 实验综述报告 广东化工 47 6 211 212 An Z Q Hendrix J W Hershman D E Henson G T 1990 Evaluation of the Most Probable Number Mpn and wet sieving methods for determining soil borne populations of endogonaceous mycorrhizal fungi Mycologia 82 5 576 581 Alghamdi S A 2019 Influence of mycorrhizal fungi on seed germination and growth in terrestrial and epiphytic orchids Saudi Journal of Biological Sciences 26 3 495 502 Chen S Zhao H Zou C Li Y Chen Y Wang Z Jiang Y Liu A Zhao P Wang M Ahammed G J 2017 Combined Inoculation with multiple arbuscular mycorrhizal fungi improves growth nutrient uptake and photosynthesis in cucumber seedlings Frontiers in Microbiology 8 277334 Corona Ram rez A Symanczik S Gallusser T Bodenhausen N 2023 Quantification of arbuscular mycorrhizal fungi root colonization in wheat tomato and leek using absolute qPCR Mycorrhiza 33 5 387 397 Fasusi O A Amoo A E Babalola O O 2021 Propagation and characterization of viable arbuscular mycorrhizal fungal spores within maize plant Zea mays L Journal of the Science of Food and Agriculture 101 14 5834 5841 Franczuk J Tartanus M Rosa R Zaniewicz Bajkowska A D bski H Andrejiov A Dydiv A 2023 The effect of mycorrhiza fungi and various mineral fertilizer levels on the growth yield and nutritional value of sweet pepper Capsicum annuum L Agriculture 13 1 857 Kalamulla R Karunarathna S C Tibpromma S Galappaththi M C A Suwannarach N Stephenson S L Asad S Salem Z S Yapa N 2022 Arbuscular mycorrhizal fungi in sustainable agriculture Sustainability 14 19 12250 Lehmann A Rillig M C 2015 Arbuscular mycorrhizal contribution to copper manganese and iron nutrient concentrations in crops a meta analysis Soil Biology and Biochemistry 81 147 158 Phillips J M Hayman D S 1970 Improved procedures for clearing roots and staining parasitic and vesicular arbuscular mycorrhizal fungi for rapid assessment of infection Transactions of the British Mycological Society 55 1 217 221 Salvioli di Fossalunga A Bonfante P 2023 Arbuscular mycorrhizal fungi as biofertilisers Current Biology 33 11 462 463 Sarathambal C Sivaranjani R Srinivasan V Alagupalamuthirsolai M Subila K P Anamika B 2023 Effect of arbuscular mycorrhizal inoculation on growth mineral nutrient uptake photosynthesis and antioxidant activities of black pepper cuttings Journal of Plant Nutrition 46 10 2508 2524 Shafiq M Casas Sol s J Neri Luna C Kiran M Yasin S Gonz lez Eguiarte D R Mu oz Urias A 2023 Arbuscular mycorrhizal fungi as a plant growth stimulant in a tomato and onion intercropping system Agronomy 13 8 2003 Trouvelot A Kough J L Gianinazzi Pearson V 1986 Mesure du taux de mycorhization VA d un systeme radiculaire Recherche de methods d estimation ayant une signification fonctionnelle Gianinazzi Pearson V Gianinazzi S Physiological and genetical aspects of mycorrhizae Paris INRA 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