红掌遗传多样性及亲缘关系的ISSR分析.pdf

户帅雅 李斌奇 陈孝丑 等 红掌遗传多样性及亲缘关系的ISSR分析 J 福建农业学报 2020 35 1 20 27 HU S Y LI B Q CHEN X C et al ISSR Analysis on Genetic Diversity and Relationships among Anthurium andraeanum J Fujian Journal of Agricultural Sciences 2020 35 1 20 27 红掌遗传多样性及亲缘关系的ISSR分析 户帅雅1 李斌奇1 陈孝丑2 巫伟峰1 张毅智2 陈 春2 陈发兴1 1 福建农林大学园艺学院亚热带果树研究所 福建 福州 350002 2 福建省林业科技试验中心 福建 漳州 363600 摘 要 目的 通过ISSR分子标记技术对56个红掌品种进行遗传多样性及亲缘关系分析 为红掌新品种选育 品种改良 种质资源管理等研究提供参考依据 方法 以采集到的56个红掌品种为试验材料 从100条哥伦比 亚大学 UBC 公布的ISSR inter simple sequence repeat简单重复序列 分子标记引物中筛选出10条多态性引物 利 用筛选得到的10个通用引物 构建红掌ISSR分子标记技术体系 对PCR扩增结果进行UPGMA Unweighted pair group method arithmetic average 非加权成组算术平均数 聚类分析 并计算其Nei s基因多样性指数和Shannon s信息 指数 结果 结果显示 从100条ISSR引物中筛选出10条多态性引物 共扩增得到99个基因位点 其中多态 性位点95个 多态性比率为95 96 用POPGENE分析结果得 Nei s基因多样性指数 H 为0 303 6 Shannon s 信息指数 I 为0 458 5 聚类分析结果表明56个红掌品种可以分为12类 结论 分类结果与火焰苞颜色存在 一定的相关性 ISSR分子标记技术可以很好地应用于红掌品种及其亲缘关系的鉴定 罗兰公主 香妃 索米 彩 霞 紫雷鸟 黑皇后 国王等7个品种性状独特 且相互之间遗传距离较远 可以作为新品种选育 品种改良的母 本 也可以作为优良的种质资源进行保存 关键词 红掌 ISSR 遗传多样性 亲缘关系 中图分类号 S 682 39文献标志码 A文章编号 1008 0384 2020 01 0020 08 ISSR Analysis on Genetic Diversity and Relationships among Anthurium andraeanum HU Shuai ya1 LI Bin qi1 CHEN Xiao chou2 WU Wei feng1 ZHANG Yi zhi2 CHEN Chun2 CHEN Fa xing1 1 Department of Horticulture Subtropical Fruit Research Institute Fujian Agriculture and Forestry University Fuzhou Fujian 350002 China 2 Forestry Science and Technology Test Center of Fujian Province Zhangzhou Fujian 363600 China Abstract Objective Genetic diversity and relationships of 56 species of Anthurium andraeanum were analyzed using the inter simple sequence repeat ISSR molecular marker technology for breeding and improvement of germplasms and resource management Method For the collected Anthurium varieties 100 UBC primers were screened for the polymorphic ones Using the universal primers an ISSR molecular marker system was constructed The UPGMA cluster analysis was performed and the Nei s gene diversity and Shannon s information indices calculated on the PCR amplified products Result Ten polymorphic primers were obtained by screening the 100 UBC primers and 99 bands amplified Of the amplified bands 95 were polymorphic with a rate of 95 96 The analysis using POPGENE indicated the Nei s gene diversity index H to be 0 303 6 and the Shannon s information index I 0 458 5 Thus the genetic diversity among the Anthurium varieties was high The 56 varieties were classified into 12 groups Conclusion The ISSR results suggested a significant correlation between the clustered groups and sepal color of the flowering plants and the molecular marker technique applicable for the identification Among the cultivars Princess Alexia Violet Fiorino Sumi Caixia Thunderbird Luxury Black Queen and King exhibited unique traits among them with substantial genetic distances They were considered potential candidates as female parent for breeding new varieties and should be preserved in the germplasm collection Key words Anthurium andraeanum ISSR genetic diversity genetic relationship 收稿日期 2019 08 08 初稿 2019 10 27 修改稿 作者简介 户帅雅 1995 男 硕士研究生 研究方向 花卉与观赏园艺 E mail 1959720480 通信作者 陈发兴 1967 男 研究员 博士生导师 研究方向 园艺植物生理与分子生物学 Emai cfaxing 基金项目 福建省林业厅项目 闽林科 2015 2号 福建农业学报 2020 35 1 20 27 Fujian Journal of Agricultural Sciences doi 10 19303 j issn 1008 0384 2020 01 004 0 引言 研究意义 红掌Anthurium andraeanum又称花 烛 安祖花 系天南星科花烛属多年生草本植物 原产哥伦比亚 是现今最为名贵的切花品种之一 具有较高的观赏价值和经济价值 很具市场开发前 景 1 3 新品种的选育是红掌产业可持续发展的动 力 是提高产业竞争力的关键 国外从20世纪40年 代开始红掌的育种 到2000年已选育出600多个新 品种 而国内的红掌育种工作2001年才开始 迄今 共选育出新品种42个 新品种的选育进展缓慢 3 5 通过ISSR分子标记的手段 对红掌的遗传背景进行 研究 从而获得红掌更多的遗传资料 探索红掌种 质资源的亲缘关系 遗传多样性 为下一步红掌育 种 品种改良 种质资源管理等研究提供理论参 考 前人研究进展 红掌种质间的亲缘关系 种 质的遗传多样性等相关遗传背景是红掌育种工作顺 利开展的基础 长期以来中国对红掌的研究大多在 栽培技术 病虫害防治 组培快繁等方面 栽培技 术主要集中在栽培基质的选择及提高炼苗成活率几 个方面 病虫害防治主要是根腐病 青枯病 枯萎 病等病害的鉴定与防治 组培快繁则在激素配比及 外植体选择等方面进行优化 而目前红掌相关的遗 传学研究较少 王呈丹等 6 通过SRAP Sequence related amplified polymorphism 相关序列扩增多态性 技术对33个红掌品种进行扩增 将33个品种分为 5个类群 Nowbuth等 7 通过RAPD Random Amplified Polymorphism DNA 随机扩增多态性DNA 技术将 25个品种分为5个类群 并且指出其聚类分析结果 与佛焰苞不存在相关性 康黎芳等 8 利用ISSR技术 对情人红 阿里桑娜 阿拉巴马及其杂交后代进行 扩增 从而证明了ISSR分子标记在红掌亲缘关系分 析中的可行性 本研究切入点 红掌品种遗传背 景复杂 前人研究也仅对几个品种进行亲缘关系分 析 本研究利用从国内外引种的红掌品种共56个 通过ISSR分子标记技术 绘制聚类分析图 分析 56个红掌品种之间的亲缘关系 再通过与苞片颜色 性状的对比 将宏观的性状聚类与微观的分子聚类 对应起来 拟解决的关键问题 本研究通过开展 红掌DNA提取 PCR反应体系 通用引物筛选 红 掌DNA指纹图谱构建等试验 分析了红掌种质资源 亲缘关系和遗传多样性 从而对红掌新品种的选育 具有重要参考价值 1 材料与方法 1 1 试验材料 2017年10月开始 试验材料采自福建省林业科 技试验中心红掌种质资源圃 共收集56个品种 表1 花色有红色 白色 粉色 紫色以及混合 色等 其中红花系列品种32个 所占比例为57 1 白花系列品种6个 占10 7 粉花系列品种8个 占14 3 紫花系列品种3个 占5 35 混合花色 系列品种4个 其他颜色3个 所占比例分别为 7 14 和5 35 其中包括2个福建省林业科技试验 中心新选育品种 新星 白鸽 1 2 试验方法 1 2 1 试剂和仪器 选择加拿大英属哥伦比亚大学 University of British Columbia 公布的 100 个 Set No 9 No 801 900 引物作为本试验的筛选引物 9 13 由华 大基因合成 2 EasyTaq PCR SuperMix 由EasyTaq DNA Polymerase dNTPs和优化的反应缓冲液组成 购自北京TansGen Biotech有限公司 主要仪器设备 离心机 Eppendorf AG 电泳仪 BIO RAD PowerPac Universal 电泳凝胶成像仪 z 超微量核酸测 定仪 Thermo NANODROP ONE PCR仪 BIO RAD T100TM 等 14 1 2 2 DNA提取和检测 在参考李金璐等 15 方法的 基础上进行适度的改良 具体方法如下 a 称取100 mg的植物材料 迅速置于液氮中 加入少量石英砂 碾磨成细粉末 将粉末转移到2 0 mL的离心管中 加入1 mL预冷的提取缓存液 混 匀后冰预15 min 冰预过程中颠倒混匀2 3次 12 000 r min 1离心10 min 弃上清 b 重复步骤2 3 直至上清液不黏稠 c 加入0 7 mL CTAB提取液 混匀后60 水浴 60 min 水浴过程中颠倒混匀数次 颠倒混匀的时候 操作需轻缓 12 000 r min 1离心10 min 吸上清置 于2 0 mL的离心管中 d 加入0 7 mL的酚 氯仿 异丙醇 25 24 1 混合液 轻柔地来回翻转颠倒50次左右 12 000 r min 1 离心10 min 吸取上清液置于新的的1 5 mL的离心 管中 加入0 7 mL的氯仿 异戊醇 24 1的混合液 中 轻柔地来回翻转颠倒50次左右 e 取上清转入新的离心管中 加入250 L的 NaAc 3 mol L 1 加入1 mL预冷的乙醇 80 放 置30 min 12 000 r min 1离心10 min 弃上清液 在短 暂的离心收集剩余液体 用移液枪吸取剩余液体 第 1 期户帅雅等 红掌遗传多样性及亲缘关系的ISSR分析21 表 1 红掌品种名目 Table 1 List of Anthurium varieties 序号 Serial number 品种名 代号 Variety name Code 花色 Color 来源 Source 序号 Serial number 品种名 代号 Variety name Code 花色 Color 来源 Source 1 大哥大Dakota 红 Red 安祖园艺有限公司 Anthura 22 潘多拉Pandola 粉 Pink 安祖园艺有限公司 Anthura 2 阿拉巴马Alabama 红 Red 安祖园艺有限公司 Anthura 23 夏之恋Summer Love 粉 绿Pink Green 瑞恩花卉有限公司 Ryan 3 粉冠军Pink Champion 粉 Pink 安祖园艺有限公司 Anthura 24 红国王Red King 红 Red 瑞恩花卉有限公司 Ryan 4 维他Vita 红 Red 广州市花卉科学研究所 Guangzhou Institute of Flower Science 25 第一红First Red 红 Red 瑞恩花卉有限公司 Ryan 5 广州红Guangzhou Red 红 Red 广州市花卉科学研究所 Guangzhou Institute of Flower Science 26 迷你红Nano Red 红 Red 瑞恩花卉有限公司 Ryan 6 旭日Rising sun 粉 Pink 广州市花卉科学研究 Institute of Flower Science 27 红宝贝Red Baby 红 Red 瑞恩花卉有限公司 Ryan 7 朝霞Asaka 红 Red 广州市花卉科学研究所 Guangzhou Institute of Flower Science 28 甜冠军Sweet Champion 粉 Pink 安祖园艺有限公司 Anthura 8 彩霞pink clouds 粉 Pink 广州市花卉科学研究所 Guangzhou Institute of Flower Science 29 红唇 Princess Amalia Elegance 红 白 Red White 瑞恩花卉有限公司 Ryan 9 热情Tropical 红 Red 安祖园艺有限公司 Anthura 30 梦幻Fantasy Love 白 绿White Green 瑞恩花卉有限公司 Ryan 10 皇冠royal crown 红 Red 安祖园艺有限公司 Anthura 31 白马王子Prince Charming 白 white 三明市农科院花卉所 Sanming Agricultural Science Research Institute 11 阿瑞博 Arebo 红 Red 安祖园艺有限公司 Anthura 32 Adios pink 粉 Pink 三明市农科院花卉所 Sanming Agricultural Science Research Institute 12 维多Vito 红 Red 安祖园艺有限公司 Anthura 33 粉爱Pink Love 粉 Pink 安祖园艺有限公司 Anthura 13 香妃Fiorino 紫 purple 安祖园艺有限公司 Anthura 34 布加迪威龙Bugatti Veyron 红 Red 广州市花卉科学研究所 Guangzhou Institute of Flower Science 14 索米Sumi 白 white 安祖园艺有限公司 Anthura 35 罗兰公主Princess Alexia Violet 白 white 安祖园艺有限公司 Anthura 15 国王Arrow 墨绿Dark green 安祖园艺有限公司 Anthura 36 紫雷鸟Thunderbird Luxury 紫 purple 安祖园艺有限公司 Anthura 16 白冠军White Champion 白 white 安祖园艺有限公司 Anthura 37 洋葱 VR990 紫 purple 安祖园艺有限公司 Anthura 17 阿瓦托Avento 红 Red 安祖园艺有限公司 Anthura 38 唇彩Lipstick Red 红 Red 瑞恩花卉有限公司 Ryan 18 特伦萨Turenza 红 Red 安祖园艺有限公司 Anthura 39 红布加迪Bugatti Red 红 Red 瑞恩花卉有限公司 Ryan 19 特仙Special fairy 红 Red 广州市花卉科学研究所 Guangzhou Institute of Flower Science 40 黑皇后Black Queen 黑 black 瑞恩花卉有限公司 Ryan 20 马都拉Madural 红 Red 安祖园艺有限公司 Anthura 41 红成功Red Success 红 Red 瑞恩花卉有限公司 Ryan 21 红赢家Red Winner 红 Red 安祖园艺有限公司 Anthura 42 橙布加迪Bugatti Royal 橙 Orange 瑞恩花卉有限公司 Ryan 22福建农业学报第 35 卷 f 加入0 1 mL100 mg L 1的RNase 37 放置30 min g 加入0 1 mL去离子水 0 1 mL 5 mol L 1NaCl 0 8 mL预冷乙醇 轻轻混匀 12 000 r min 1离心10 min 弃上清 加入0 5 mL 75 的乙醇 轻轻弹起沉 淀 10 000 r min 1离心2 min 弃上清 h 重复以上步骤 加入0 5 mL 75 的乙醇 轻 轻弹起沉淀 10 000 r min 1离心2 min 弃上清 风 干乙醇 加入0 1 mLTE溶解DNA i 测定DNA的浓度和纯度 DNA如需立即使用 贮存于4 短期贮存于 20 长期贮存于 80 然后 超微量核酸测定仪测定DNA浓度与质 量 凝胶电泳检测DNA完整性 最后将样品浓度稀 释至50 ng 置于 20 备用 1 2 3 引物筛选 4个样品DNA 大哥大 热情 皇 冠 国王 取等量混合成基因池 以基因池为 DNA模板对100个UBC通用引物进行筛选 选取带 清晰 多态性丰富的引物用于下一步DNA指纹图谱 的构建 1 2 4 ISSR PCR扩增体系 反应体系为 1 L DNA 模板 1 L引物 12 5 Lmix 10 5 L无菌水 PCR 程序设置为 预变性94 5 min 变性94 45 s 退 火温度根据引物说明设置 延伸72 2 min 45个循 环 终延伸72 6 min 1 3 数据分析 根据照片显示 仅清晰 可重复的并且长度为 200 2 000 bp的扩增带才被记录 对于同一引物的 扩增产物 迁移率相同的条带记为1个位点 扩增 阳性 有条带出现 记为 1 扩增阴性 无条带出 现 记为 0 所得数据输入 Excel2003建立原始表 征数据矩阵 根据表征矩阵 对扩增产物的条带总数和多态 性条带数量进行统计 计算多态条带所占比例和单 个引物多态条带数 扩增的DNA片段出现频率小于 或等于0 99的位点即为多态性位点 使用NTSYS软件对原始矩阵用SimQual程序计 算种质间的Nei Li相似系数 获得遗传相似系数 Genetic similarity S 再用SHAN程序中的UPGMA Unweighted pair group method arithmetic average 非加 权成组算术平均数 法进行聚类分析 最后treeplot 过程生成聚类图 再使用POPGENE软件分析得出 Nei s基因多样性指数和Shannon s信息指数 2 结果与分析 2 1 DNA提取 利用改良的CTAB法提取DNA DNA提取物呈白 色或无色絮状沉淀 凝胶电泳成像结果显示该方法 提取的DNA完整 无明显拖带及降解 图1 通 过超微量核酸测定仪检测DNA A260 A280为1 7 2 0 浓度为100 200 ng L 1 结果显示该方法提取 的红掌DNA可以满足ISSR分子标记试验要求 2 2 红掌ISSR分子标记通用引物筛选 通过对100条UBC通用引物的筛选 筛选出 10条带清晰 多态性丰富的引物 分别为UBC807 续上表 序号 Serial number 品种名 代号 Variety name Code 花色 Color 来源 Source 序号 Serial number 品种名 代号 Variety name Code 花色 Color 来源 Source 43 绿国王Greed King 绿 green 安祖园艺有限公司 Anthura 50 马蒂兹 Matiz 红 Red 瑞恩花卉有限公司 Ryan 44 满天星Gypsophila 红 Red 三明市农科院花卉所 Sanming Agricultural Science Research Institute 51 彩虹冠军Rainbow champion 红 Red 瑞恩花卉有限公司 Ryan 45 莱尼 Lenny 红 Red 瑞恩花卉有限公司 Ryan 52 白骄阳White Sierra 白 White 三明市农科院花卉所 Sanming Agricultural Science Research Institute 46 阿美拉Amera 红 Red 瑞恩花卉有限公司 Ryan 53 甜梦Sweet Dreams 红 Red 三明市农科院花卉所 Sanming Agricultural Science Research Institute 47 红班比诺Red bandino 红 Red 安祖园艺有限公司 Anthura 54 白鸽White pigeon 白 White 福建省林业科技试验中心 Forestry Science and Technology Test Center of Fujian Province 48 轰动Sensation 红 Red 安祖园艺有限公司 Anthura 55 红衣少女 Red girl 红 Red 瑞恩花卉有限公司 Ryan 49 朱莉Julie 粉 Pink 瑞恩花卉有限公司 Ryan 56 新星New star 红 Red 福建省林业科技试验中心 Forestry Science and Technology Test Center of Fujian Province 第 1 期户帅雅等 红掌遗传多样性及亲缘关系的ISSR分析23 UBC810 UBC811 UBC817 UBC825 UBC836 UBC840 UBC843 UBC850 UBC854 其PCR扩 增产物电泳成像如图2 2 3 多态性分析 利用筛选出的10个引物对56份红掌种质的 DNA进行PCR扩增 图3 共扩增得到99个位点 其中多态性位点95个 多态性比率为95 96 扩增 条带数最多的是引物UBC850 位点数为12 其中多 态性位点为12 多态性比率100 扩增条带数最少 的是UBC807 扩增位点是7 其中多态性位点为 6 多态性比率为85 71 用POPGENE分析软件进 行分析结果得 Nei s基因多样性指数H为0 303 6 Shannon s信息指数I为0 458 5 利用引物UBC850 对56种红掌品种的ISSR扩增图谱见图3 2 4 红掌种质资源的ISSR分子标记聚类分析 基于ISSR扩增结果 用UPGME聚类分析方法 绘制出聚类分析图 图4 结果显示遗传相似系数 为0 54 0 91 其中广州红和阿瑞博遗传相似系数最 大 为0 91 而国王与其他所有品种遗传相似系数 最小 为0 54 即国王与其他品种遗传信息存在较 大差异 亲缘关系较远 以马蒂兹为界其上的亲缘关系相对较近 其下 方品种整体来说相互之间亲缘关系相对较远 根据 聚类结果 图4 在遗传相似系数0 72处画一条线 从而可将56个红掌品种分为12类 如图4所示 国 王 黑皇后 紫雷鸟 彩霞 索米 香妃等6个品 种单独自成一类 皇冠和轰动 红成功和满天星 白冠军和白骄阳 绿国王和阿美拉两两聚为一类 另外特伦萨 特仙 罗兰公主3个品种聚为一类 大哥大 热情等剩下的39个品种聚为一类 以马蒂兹为界 包括马蒂兹在内其上的39个品 种聚为一类 与之对应 这39个品种苞片颜色以红 色粉色为主 马蒂兹下方 亲缘关系较远的罗兰公 主 香妃 索米 彩霞 紫雷鸟 黑皇后 国王等 7个品种各自单独聚为一类 相应的它们各自苞片颜 注 M 标准分子量marker 2 000 Note M DL2 000 DNA marker 图 1 DNA提取电泳结果 Fig 1 DNA extraction electropherogram M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 注 M 标准分子 量 marker 2 000 1 UBC807 2 UBC810 3 UBC811 4 UBC817 5 UBC825 6 UBC836 7 UBC840 8 UBC843 9 UBC850 10 UBC854 Note M DL2 000 DNA marker 1 UBC807 2 UBC810 3 UBC811 4 UBC817 5 UBC825 6 UBC836 7 UBC840 8 UBC843 9 UBC850 10 UBC854 图 2 UBC872 UBC894引物筛选电泳结果 Fig 2 UBC872 UBC894 primer screening electropherogram M M M 1 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 515253545556 2 3 M 181920 21222324252627282930313233 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 注 M 标准分子量marker 2 000 1 56 56个红掌品种见表1 Note M DL2 000 DNA marker 1 56 56 anthurium varieties are shown in Table 1 图 3 UBC850对56种红掌品种的ISSR扩增结果 Fig 3 ISSR amplification map of 56 species of Anthurium varieties by UBC850 24福建农业学报第 35 卷 色也比较独特 分别为白色 紫色 白色 粉色 紫色 黑色 墨绿色 剩下的特伦萨和特仙聚为一 类 苞片均为红色 绿国王和阿美拉聚为一类 苞 片颜色分别为绿色和红色 白冠军和白骄阳聚为一 类 苞片颜色分别为白色和白色加绿色 红成功和 满天星聚为一类 苞片颜色均为红色 皇冠和轰动 聚为一类 苞片颜色均为红色 综上可知 红掌的 ISSR聚类分析结果可能与红掌苞片颜色有关 3 讨论与结论 本研究利用筛选出的10条ISSR引物从红掌 56个品种的基因组中分析得到99条带 其中多态性 条数95条 多态性比率为95 96 另Nei s基因多样 性指数H为0 303 6 Shannon s信息指数I为0 458 5 表明红掌的遗传多样性较高 通过聚类分析图与红 掌苞片颜色相对应 发现聚类结果与红掌的苞片颜 色这一性状存在较大相关性 这与王呈丹等 6 Khan Y J 16 易双双等 徐世松等 尚伟等的研究结果一 致 6 16 17 从而将微观的分子鉴定与宏观的性状鉴定 对应起来 说明ISSR分子标记方法可以在分子水平 较好地将红掌的不同品种区分开来 红掌品种新星 和白鸽为福建省林业科技试验中心自主研发的新品 图 4 56个红掌品种扩增结果聚类分析 Fig 4 Clustering analysis on 56 Anthurium varieties based on amplification results 第 1 期户帅雅等 红掌遗传多样性及亲缘关系的ISSR分析25 种 其母本分别为粉冠军和红衣少女 在聚类分析 图中 新星和粉冠军 白鸽和红衣少女 也分别聚在 了一起 证明了研究结果的可靠性 也说明ISSR分 子标记也能够很好地用于红掌品种亲缘关系的鉴 定 但是同时 有多位学者的研究结果证明红掌品 种的聚类与形态学标记的聚类没有相关性 7 18 造 成这种差异的原因可能有以下几点 一 形态学标 记受环境影响较大 因此不同表型的遗传基础可能 是相同的 二 采用的分子标记类型与表型无关 三 选择的形态学标记少 19 广州红和阿瑞博遗传相似系数最大为0 91 说明 二者亲缘关系最近 有可能来自同一品种的变种 国王与其他品种遗传相似系数最小为0 54 说明国 王亲缘关系最远 遗传分化较大 且国王性状奇 特 可作为新品种培育的母本 Adiospink和洋葱及 绿国王和阿美拉遗传相似系数0 86左右 仅次于广 州红和阿瑞博 但他们的苞片颜色却差异较大 Adiospink为粉红色 而洋葱为紫色 同样的 绿国 王苞片为浅绿色 而阿美拉为红色 猜测原因可能 是遗传过程中产生的变异 使控制花青素的基因过 表达或未表达 具体原因有待进一步研究 香妃 紫雷鸟 国王 绿国王等性状奇特 且遗传多样性 丰富 可作为优良种质资源保存 总的来说 本研究证实了ISSR分子标记技术在 红掌品种鉴定及遗传多样性分析中的有效性及可靠 性 为红掌后续的遗传学研究及育种实践提供了重 要参考 参考文献 文方德 金剑平 红掌 M 广州 广东科技出版社 2004 1 杜平 邵小斌 我国红掌的研究进展 J 江苏农业科学 2011 39 6 325 327 DU P SHAO X B Research Progress of Anthurium in China J Jiangsu Agricultural Sciences 2011 39 6 325 327 in Chinese 2 褚云霞 邓姗 顾可飞 等 红掌已知品种库的建立与应用 J 中国 农学通报 2014 30 19 129 136 CHU Y X DENG S GU K F et al Development and application of cultivars bank for Anthurium andraeanum J Chinese Agricultural Science Bulletin 2014 30 19 129 136 in Chinese 3 牛俊海 黄少华 冷青云 等 分子标记技术在红掌研究中的应用与 展望 J 分子植物育种 2015 13 6 1424 1432 NIU J H HUANG S H LENG Q Y et al Application and prospect of molecular markers in Anthurium research J Molecular Plant Breeding 2015 13 6 1424 1432 in Chinese 4 易懋升 谢利 郭和蓉 等 红掌育种方法研究进展 J 中国农学通 报 2015 31 4 157 161 5 YI M S XIE L GUO H R et al Advancement on breeding method of Anthurium andraeanum J Chinese Agricultural Science Bulletin 2015 31 4 157 161 in Chinese 王呈丹 牛俊海 张志群 等 红掌品种亲缘关系 SRAP分析 J 植 物遗传资源学报 2013 14 4 759 763 WANG C D NIU J H ZHANG Z Q et al Analysis of gnetic relationships of Anthurium andreanum varieties using SRAP markers J Journal of Plant Genetic Resources 2013 14 4 759 763 in Chinese 6 NOWBUTH P KHITTOO G BAHORUN T et al Assessing genetic diversity of some Anthurium andraeanum Hort cut flower cultivars using RAPD Markers J african journal of biotechnology 2005 4 10 1189 1194 7 康黎芳 王云山 张超 等 3个红掌品种杂交后代的部分植物学性状 及分子鉴定 J 西北农业学报 2013 22 11 152 157 KANG L F WANG Y S ZHANG C et al Botanical characters and molecular identification of hybrids from three Anthurium varieties J Acta Agriculturae Boreali Occidentalis Sinica 2013 22 11 152 157 in Chinese 8 何予卿 张宇 孙梅 等 利用 ISSR分子标记研究栽培稻和野生稻亲 缘关系 J 农业生物技术学报 2001 9 2 123 127 HE Y Q ZHANG Y SUN M et al Studies on the relationship between cultivated and wild rice using ISSR markers J Journal of Agricultural Biotechnology 2001 9 2 123 127 in Chinese 9 王建波 ISSR分子标记及其在植物遗传学研究中的应用 J 遗传 2002 24 5 613 616 WANG J B ISSR molecular markers and their application in plant genetics research J Genetic 2002 24 5 613 616 in Chinese 10 余爱丽 张木清 陈如凯 ISSR分子标记在甘蔗及其近缘属分类上 的应用 J 福建农林大学学报 自然科学版 2002 31 4 484 489 YU A L ZHANG M Q CHEN R K Application of ISSR molecular markers in the classification of sugarcane and its related genera J Journal of Fujian Agriculture and Forestry University 2002 31 4 484 489 in Chinese 11 周延清 景建洲 李振勇 等 利用 RAPD和 ISSR分子标记分析地黄 种质遗传多样性 J 遗传 2