解淀粉芽孢杆菌OMR1-7菌株对拟石莲花属多肉植物黑腐病的生防效果.pdf

引文格式 刘爽 唐锐 谭丹 等 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株对拟石莲花属多肉植物黑腐病的生防效果 J 云南农业大 学学报 自然科学 2024 39 1 54 63 DOI 10 12101 j issn 1004 390X n 202307024 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株对拟石莲花属 多肉植物黑腐病的生防效果 刘 爽 唐 锐 谭 丹 薛治峰 李梦杰 张廷萍 秦世雯 云南大学 农学院 资源植物研究院 云南 昆明 650500 摘要 目的 明确解淀粉芽孢杆菌 Bacillus amyloliquefaciens 对拟石莲花属 Echeveria 多肉植物黑腐病病原 菌 尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum 的生防效果 方法 从小粒野生稻 Oryza minuta 根部分离和鉴定 了1株内生解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株 测定其对拟石莲花属多肉植物品种血色罗密欧黑腐病菌F oxysporum KMEARM 2菌株和静夜黑腐病菌F oxysporum KMJY6菌株的拮抗效果 产铁载体和生物膜能力 定殖能力以及温室防效 结果 OMR1 7菌株对2种黑腐病菌菌丝抑制率分别为57 15 和74 29 菌体抑 制率分别为84 82 和86 15 该菌株可造成2种黑腐病菌的侵染结构畸形 产孢量减少 该菌株产铁载体 相对量为80 98 具有较强的铁元素竞争能力 且能够产生生物膜 在血色罗密欧和静夜植株的根 茎 叶 内稳定定殖 预防黑腐病菌的侵入和蔓延 OMR1 7菌株对血色罗密欧和静夜黑腐病具有良好的生防效果 温 室防效分别为80 08 和78 89 结论 研究结果将为拟石莲花属多肉植物黑腐病的生物防治提供微生物 菌种资源 为相关生防菌剂及制剂研发提供参考 关键词 拟石莲花属 多肉植物黑腐病 尖孢镰刀菌 解淀粉芽孢杆菌 生物防治 中图分类号 S436 412 1 文献标志码 A 文章编号 1004 390X 2024 01 0054 10 Biocontrol Efficiency of Bacillus amyloliquefaciens OMR1 7 against Echeveria Black Rot Disease LIU Shuang TANG Rui TAN Dan XUE Zhifeng LI Mengjie ZHANG Tingping QIN Shiwen College of Agriculture Institute of Resource Plants Yunnan University Kunming 650500 China Abstract Purpose To clarify the biocontrol effects of Bacillus amyloliquefaciens OMR1 7 aga inst Fusarium oxysporum causing black rot disease in Echeveria succulent plants Methods The endophytic bacterial strain OMR1 7 isolated from the root tissues of Oryza minuta was identified as B amyloliquefaciens in this study The antagonistic effects of B amyloliquefaciens OMR1 7 against F oxysporum KMEARM 2 on E agavoides cv Romeo and F oxysporum KMJY6 on E derenber gii cv Purpus the pathogens causing black rot disease in succulent plants of the genus Echeveria was evaluated Furthermore its ability to produce iron carriers and biofilms colonization capacity 收稿日期 2023 07 18 修回日期 2024 01 29 网络首发日期 2024 03 05 基金项目 国家自然科学基金项目 32060593 云南省基础研究计划面上项目 202101AT070021 云南大 学研究生科研创新项目 KC22223012 ZC 22222674 作者简介 刘爽 1998 女 湖北黄冈人 在读硕士研究生 主要从事植物病害生物防治研究 E mail ls199805182021 通信作者 Corresponding author 秦世雯 1988 女 贵州贵阳人 博士 副教授 主要从事植物病原物 致病机制研究 E mail shiwenqin 网络首发地址 云南农业大学学报 自然科学 2024 39 1 54 63 Journal of Yunnan Agricultural University Natural Science E mail ynauzkxb and greenhouse efficacy were also determined Results The hyphal growth suppressive rates and colony inhibition rates of this antagonistic bacterium against these two pathogens were determined to be 57 15 74 29 and 84 82 86 15 respectively Due to the antagonistic effect of B amylolique faciens OMR1 7 these two pathogens produced abnormal hyphae and decreased sporulation B am yloliquefaciens OMR1 7 produced siderophores with a relative yield of 80 98 indicating the strong competition for iron This strain formed biofilms to colonize in the root stem and leaf tissues of plants which could prevent the invasion and spread of F oxysporum Furthermore the biocontrol ef ficiency of B amyloliquefaciens OMR1 7 against pathogens of E agavoides cv Romeo and E der enbergii cv Purpus black rot disease in the greenhouse was determined to be 80 08 and 78 89 respectively Conclusion The results will provide the biocontrol microbial resource which can develop the microbial fungicide for preventing black rot disease in Echeveria succulent plants Keywords Echeveria black rot disease of succulent plant Fusarium oxysporum Bacillus amyloli quefaciens biological control 多肉植物是一类营养器官肥厚的观赏植物 品种繁多 易栽培 深受全球消费者喜爱 1 多 肉植物是中国云南省 云花 产业的重要组成部分 截至2021年 云南多肉植物生产面积超67 hm2 产量超3 000万盆 2 景天科 Crassulaceae 拟石 莲属 Echeveria 是近年来热门的多肉植物种类 具有莲花状桩型 品种繁多 叶色和花色美丽 被广泛应用于室内盆栽 城市绿化及园林景观 中 黑腐病是多肉植物生产和家庭种植过程中的 主要病害之一 在全球多肉种植地均有发生 给 多肉植物产业造成了一定的损失 3 该病引起多 肉植物的水层组织和维管束组织腐烂和萎蔫 造 成叶片出现透明水渍状病斑并脱落 茎部呈黑腐 症状 最终导致植株枯萎死亡 4 研究发现 拟 石莲属黑腐病的病原菌为尖孢镰刀菌 Fusarium oxysporum 能够危害血色罗密欧 E agavoides cv Romeo 5 静夜 E derenbergii cv Purpus 6 彩 虹 Echeveria cv Rainbow 7 东云 E agavoides 8 和紫珍珠 Echeveria cv Perle von N rnberg 9 等 品种 尖孢镰刀菌作为全球防控难度最大的土传病 原真菌之一 能够在无寄主的情况下长期存活于 土壤中 而现有的化学药剂和农业防治手段无法 将其根除 3 多肉植物黑腐病的防治主要采取化 学防治手段 由于多肉植物多用于家庭种植 对 其化学药剂的毒性有较高要求 生物防治是使用 生物拮抗剂 细菌 真菌等 通过 以菌治菌 达 到防病和促进寄主生长的目标 10 生防菌剂具有 绿色 环保 对人体安全等特点 是理想的多肉 植物黑腐病防治手段 然而 多肉黑腐病的生物 防治研究目前还处于空白 本研究从小粒野生稻 Oryza minuta 根部分离鉴定了1株解淀粉芽孢杆 菌 Bacillus amyloliquefaciens OMR1 7菌株 通 过测定其拮抗效果 产铁载体和生物膜能力 定 殖能力和温室防效 以期明确其对拟石莲属多肉 品种血色罗密欧和静夜的生防效果 为多肉植物 黑腐病的生物防治提供菌种资源 1 材料与方法 1 1 供试材料 供试植物品种 小粒野生稻 由农业农村部 多年生稻生物学与种质创新重点实验室提供 拟 石莲属多肉植物血色罗密欧和静夜购于云南昆明 一多肉植物商业大棚 供试病原菌 血色罗密欧黑腐病菌F oxys porum KMEARM 2 5 和静夜黑腐病菌F oxyspor um KMJY6 6 均由云南大学农学院植物病理学研究 室鉴定和提供 供试载体 GFP标记解淀粉芽孢杆菌OMR 1 7菌株所用遗传转化载体pGFP4 412由中国农 业大学王埼教授惠赠 1 2 生防细菌的分离 采用组织分离法 11 从健康的小粒野生稻上剪 取根部组织 无菌水冲洗干净表面污渍后用滤纸 吸干表面水分 根部组织经75 酒精浸泡5 min 无菌水漂洗1次 2 5 次氯酸钠浸泡3 min 无 菌水漂洗3次后 用无菌滤纸吸干表面水分 将 根部组织放入无菌研钵中 加入适量无菌水 研 第 1 期刘 爽 等 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株对拟石莲花属多肉植物黑腐病的生防效果55 磨后对研磨液进行梯度稀释 吸取组织液100 L 涂布于LB固体培养基 12 上 同时吸取第3次漂 洗液100 L涂布于LB固体培养基 若无细菌生 长表明根部表面已彻底消毒 将以上平板置于37 黑暗培养1 3 d直至有菌落长出 挑取形态不同 的细菌菌落进行纯化和保藏 1 3 生防菌株的鉴定 1 3 1 形态学鉴定 将OMR1 7菌株划线培养于LB培养基 37 培养24 h后观察其单菌落形态 随后进行革兰氏 染色并观察其菌体形态特征 1 3 2 分子序列特征鉴定 利用TIANGEN细菌基因组DNA提取试剂盒 提取OMR1 7菌株的DNA 利用16S rDNA引物 27F 5 AGAGTTTGATCCTGGCTCAG 3 和1492 R 5 GGTTACCTTGTTACGACTT 3 以及gyrA基 因引物gyrAF 5 CAGTCAGGAAATGCGTACGTC CTT 3 和gyrAR 5 CAAGGTAATGCTCCAGGC ATTGCT 3 进行PCR扩增 扩增片段经电泳和 测序检测后 在NCBI数据库进行Blastn比对分 析 并提交至国家生物信息中心Genbase数据库 软件以邻接法构建16S rDNA和gyrA系统发育 树 Bootstrap值设为1 000 1 4 拮抗效果的测定 1 4 1 菌丝抑制率的测定 采用平板对峙法 将5 mm2黑腐病菌KMJ Y6和KMEARM 2菌块分别接种于PDA平板 13 中央 将OMR1 7菌株划线培养于LB固体培养 基 37 培养24 h后 挑取单菌落接种至LB 液体培养基 28 180 r min振荡培养12 h 制成1 108 CFU mL的菌悬液 将OMR1 7菌悬 液划线接种于病原菌菌块两侧2 5 cm处 设3次 重复试验 以仅接种病原菌菌块的PDA平板为 对照 将PDA平板置于28 恒温培养箱中培 养6 d 待对照组菌丝长满平板后 按公式计算 OMR1 7菌株对黑腐病菌的菌丝抑制率 抑制 率 对照菌落直径 处理菌落直径 对照菌落直 径 100 1 4 2 菌体抑制率的测定 将OMR1 7菌悬液与融化 冷却至约40 的 PDA培养基按体积比1 10混合 制成OMR1 7 毒板 将5 mm2黑腐病菌KMJY6和KMEARM 2菌块接入毒板中心 设3次重复试验 以PDA 平板为对照 将毒板和PDA平板置于28 恒温 培养5 7 d 然后计算OMR1 7菌株对黑腐病菌 的菌体生长抑制率 计算公式同1 4 1节 1 5 生防菌株产铁载体能力测定 1 5 1 产铁载体定性分析 采用滤纸片法 将生防菌株接种于CAS培 养基 14 上 28 倒置培养2 3 d后观察是否有透 明圈 以LB培养基为对照 透明圈和菌落圈直 径的比值即为菌株产铁载体能力 1 5 2 产铁载体定量分析 取OMR1 7菌悬液100 L接种于1 mL CAS 培养液 28 C 180 r min振荡培养48 h 离心后 取上清液300 L置于96孔板中 每个处理3个重 复 用酶标仪 Molecular Devices SpectraMax i3 中国 检测630 nm处的吸光度值 As 另取LB 培养基与CAS培养液等体积混匀 以其630 nm 处的吸光度值 Ar 作为参比值 根据公式SU 1 As Ar计算菌株产铁载体的相对含量 SU 1 6 生防菌株产微生物膜能力的测定 1 6 1 产微生物膜定性分析 将OMR1 7菌株接种于LB培养基培养24 h 离心后弃上清 用MSgg培养基 15 重悬菌体 在24 孔细胞培养板的培养孔中加入 MSgg培养基2 mL 然后加入 OMR1 7菌液5 L 设置3个重复 于 37 静置培养72 h 以MSgg培养基中加入LB 培养基5 L为对照 观察OMR1 7菌株的成膜 情况 1 6 2 产微生物膜定量分析 将OMR1 7菌株接种于LB培养基 28 180 r min培养48 h取出 每组设3个重复 吸取 取出后的菌液4 mL室温静止培养24 h 弃培养 液后用去离子水清洗 用1 结晶紫染色2 min 弃结晶紫溶液 水洗 风干后用1 结晶紫染 色 吸出多余结晶紫 用蒸馏水漂洗 待风干后 加入洗膜缓冲液 16 振荡10 15 min后稀释10 倍 用紫外分光光度计 岛津 UV2600 日本 测 定570 nm处的吸光度值 1 7 GFP标记OMR1 7菌株的构建 将OMR1 7菌株接种于30 mL GM液体培养 基 17 中 28 180 r min培养16 h制成种子液 取种子液1 mL接种于100 mL GM液体培养基 中 28 180 r min培养至600 nm处的吸光度 56云南农业大学学报第 39 卷 值为0 7 取GM培养液1 mL 加至灭菌的1 5 mL 离心管中 冰浴10 min 4 8 000 r min离心 10 min 弃上清液 沉淀用200 L预冷的ETM 18 漂洗2次 制成OMR1 7菌株感受态细胞 取 pGFP4 412质粒1 g加至100 L感受态细胞中 温和混合后置于电击杯 将电击杯放入Gene Pulser Xcell电击仪 Bio Rad 美国 进行电击 电 压1 8 kV 电阻200 随后加入RM培养基 19 1 mL 并转移至灭菌的1 5 mL离心管 28 200 r min培养4 h 取100 L涂布于LB固体培 养基 含100 g L新霉素 28 倒置培养24 h 待长出转化子后 挑取转化子单菌落进行PCR检 测 检测引物为gfp F 5 GCCTCTAGAATGAG TAAAGGAGAAGAACTTTTC 3 和gfp R 5 GC CAAGCTTTTATTTGTATAGTTCATCCATGCC 3 1 8 OMR1 7菌株在多肉植物体内定殖的观察 采用灌根接种法 将GFP标记的OMR1 7菌 株单菌落接种至LB液体培养基28 180 r min 振荡培养 制成1 108 CFU mL的OMR1 7 GFP 菌悬液 取25 mL分别接种于血色罗密欧和静夜 植株 5 d后接种黑腐病菌孢子悬浮液40 mL 每 个处理设置10株植株 重复3次 28 d后取多 肉植物的根 茎和叶进行冷冻切片 置于激光共 聚焦显微镜 Olympus FV3000 日本 下观察 激 发光波长设置为488 nm 发射光波长为510 nm 1 9 多肉黑腐病温室防效测定 将黑腐病菌接种于Bilai s培养基 20 中 28 180 r min振荡培养5 d 用4层无菌纱布过滤菌 丝 制备成密度为1 106 mL 1的孢子悬浮液 将 OMR1 7菌液接种于LB液体培养基中 28 180 r min振荡培养12 h 制备成1 108 CFU mL的 OMR1 7菌悬液 分别选取大小一致的健康多肉品种血色罗密 欧和静夜 采用灌根接种法 设置以下3个处 理 清水对照 接种黑腐病菌孢子悬浮液 40 mL 先接种OMR1 7菌液25 mL 5 d后接 种黑腐病菌孢子悬浮液40 mL 每个处理接种植 株10盆 每个处理重复3次 接种后的植株放 置于温度为25 湿度为50 的温室中 每天 观察黑腐病发病症状 28 d后统计发病率和生防 效果 发病率 发病植株数 调查总株数 100 生防效果 处理 发病植株数 处理 发病植株 数 处理 发病植株数 100 2 结果与分析 2 1 OMR1 7菌株的鉴定 OMR1 7菌株在LB固体培养基培养1 d后单 菌落呈圆形 淡黄色 半透明 边缘整齐 突起 形状平展 表面湿润且有黏稠感 图1a 革兰氏 染色发现该菌为短杆状革兰氏阳性菌 图1b 分 子序列鉴定发现 OMR1 7菌株16S rDNA基因 GenBase No C AA009084 1 与从栽培稻品种 金刚30中分离的Bacillus amyloliquefaciens Lx 11 菌株 GenBank No HQ179100 1 相似性最高 为 99 93 OMR1 7菌株gyrA基因 GenBase No C AA016452 1 与从番茄根际土壤中分离的B am yloliquefaciens RNB 92菌株 GenBank No LC09 6069 1 相似性最高 为100 00 通过构建16S rDNA和gyrA基因系统发育树 图1c和1d 发现 OMR1 7菌株与B amyloliquefaciens聚在同一分 支 结合形态学和分子序列鉴定结果可知 OM R1 7菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌 B amylolique faciens 2 2 OMR1 7对多肉黑腐病原菌的抑制效果 OMR1 7菌株与血色罗密欧黑腐病原菌KM EARM 2菌株 静夜黑腐病原菌KMJY6菌株之 间均形成了明显的抑菌带 图2a 并且造成了黑 腐病菌菌丝末端膨大 图2b OMR1 7菌株对 KMEARM 2和KMJY6菌株的菌丝生长抑制率分 别为57 15 和74 29 图2c KMEARM 2和K MJY6菌株在OMR1 7菌株制成的毒板上生长受 到抑制 OMR1 7菌株对2个病原菌菌体抑制率 分别为84 82 和86 15 图2d 同时造成2个 病原菌孢子产量减少 图2e 以上结果说明解淀 粉芽孢杆菌OMR1 7菌株对血色罗密欧和静夜黑 腐病菌的菌丝和孢子生长具有显著抑制效果 且 造成病原菌侵染结构畸形 2 3 OMR1 7菌株产铁载体能力 OMR1 7在CAS培养基上其菌落周围形成了 橙黄色透明圈 图3 且OMR1 7菌株产铁载体 的透明圈和菌落圈直径的比值为4 43 0 17 通过 定量测定 OMR1 7菌株产生铁载体的相对含量 为80 98 以上结果说明该菌株具有较强的铁载 体分泌能力 能够与植物病原真菌竞争铁元素进 而抑制病原菌 第 1 期刘 爽 等 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株对拟石莲花属多肉植物黑腐病的生防效果57 2 4 OMR1 7菌株产微生物膜能力 OMR1 7菌株在MSgg培养基中形成了密集 褶皱的生物膜 图4 OMR1 7菌株产生的生物 膜在570 nm处的吸光度值为1 60 0 38 说明其 具有较强的能力 有利于菌株适应环境以及提高 在寄主中定殖和抗菌的活性 2 5 OMR1 7菌株在拟石莲花属多肉植物中的 定殖 OMR1 7 GFP菌株能成功定殖于血色罗密欧 和静夜的根 茎和叶部 图5 相较于叶部 OM R1 7 GFP菌株在寄主根部和茎部数量较多 说 明OMR1 7菌株具有内生特性 占据了拟石莲属 多肉植物体根 茎和叶内生态位 有效阻止了黑 腐病菌的侵入和扩增 2 6 OMR1 7菌株对拟石莲花属黑腐病的生防 效果 接种黑腐病菌28 d后 血色罗密欧和静夜植 株叶部和茎部出现了黑腐症状 图6a b 发病率 分别为83 33 和100 00 而先接种OMR1 7 菌株5 d后再接种病原菌的植株发病率分别为 16 67 和33 33 图6c OMR1 7菌株对血色 罗密欧和静夜黑腐病的盆栽防效分别达到80 08 和78 89 图6d 说明解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株对拟石莲属多肉植物黑腐病具有显著的生 防效果 3 讨论 解淀粉芽孢杆菌是目前应用最为广泛的生防 细菌之一 具有广谱抗菌活性和较强的抗逆能 力 能够促进多种植物生长 21 解淀粉芽孢杆菌 对尖孢镰刀菌 F oxysporum 灰葡萄孢 Botryt is cinerea 稻瘟病菌 Magnaporthe oryzae 灰 绿青霉 Penicillium glaucum 叶霉病菌 Clado sporium fulvum 等植物病原真菌具有显著的抑菌 效果 22 23 研究表明 解淀粉芽孢杆菌可产生抑 菌次生代谢物 表面活性素 大环内酯H 芽孢 素 丰原素 地非西丁 杆菌溶素等 以及水解酶 类 几丁质酶和蛋白酶 抑制植物病原真菌的生 长 24 25 本研究发现 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7 菌株与拟石莲属多肉植物黑腐病菌F oxys porum拮抗互作时 两者之间形成了明显的抑菌 带 病原菌菌丝出现畸形且产孢量降低 说明 OMR1 7菌株能够产生抑菌物质影响拟石莲属多 肉植物黑腐病菌侵染结构和无性繁殖体的形成 进而影响病原菌的侵入和扩繁 深入挖掘和鉴定 注 a LB培养基上的菌落形态 b 革兰氏染色结果 c 16S rDNA基因系统发育树 d gyrA基因系统发育树 Note a colony of B amyloliquefaciens OMR1 7 on LB medium b cells of B amyloliquefaciens OMR1 7 based on Gram staining c phylogenetic tree from 16S rDNA sequences d phylogenetic tree from gyrA genes 图 1 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株的形态特征和分子序列系统发育树 Fig 1 Morphological characteristic and molecular sequence phylogenetic tree of Bacillus amyloliquefaciens OMR1 7 strain 58云南农业大学学报第 39 卷 注 a OMR1 7菌株对黑腐病菌KMEARM 2和KMJY6菌株的菌丝生长抑制效果以及菌体生长抑制效果 b OMR1 7菌株造成黑腐病菌 KMEARM 2和KMJY6菌株菌丝膨大畸形 c e 表示差异显著 P 0 05 表示差异极显著 P 0 01 下同 Note a hyphal and colony growth of Fusarium oxysporum KMEARM 2 and KMJY6 were inhibited by B amyloliquefaciens OMR1 7 b F oxysporum KMEARM 2 and KMJY6 produced abnormal hyphae due to the antagonistic effect of B amyloliquefaciens OMR1 7 c e indicates a significant differ ences P 0 05 indicates an extremely significant differences P 0 01 the same as below 图 2 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株对拟石莲属多肉植物黑腐病菌的抑制效果 Fig 2 Antagonistic effects of B amyloliquefaciens OMR1 7 against Fusarium oxysporum causing black rot on Echeveria succulent plants 注 CK LB培养基 1 4 OMR1 7菌液 Note CK LB medium 1 4 OMR1 7 strains 图 3 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株在 CAS平板上的产铁载体情况 Fig 3 Siderophore produced by B amyloliquefaciens OMR1 7 on CAS plates 注 a LB培养基接种在MSgg液态培养基72 h后的情况 b OMR1 7菌株接种在MSgg液态培养基72 h后形成生物膜的情况 Note a LB medium was inoculated in Msgg liquid medium after 72 h b B amyloliquefaciens OMR1 7 produced biofilms in Msgg liquid medium after 72 h 图 4 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株在 Msgg液态培养基中形成生物膜 Fig 4 Biofilms produced by B amyloliquefaciens OMR1 7 in Msgg liquid medium 第 1 期刘 爽 等 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株对拟石莲花属多肉植物黑腐病的生防效果59 OMR1 7菌株的抗菌物质 有助于开发拟石莲属 多肉植物黑腐病的生物农药 高产铁载体的生防细菌通过竞争土壤中的铁 元素从而抑制植物病原菌的生长 促进寄主植物 健康 26 已有研究报道不同种的芽孢杆菌均具有 高产铁载体特性 27 29 黄瓜根际土壤中分离的B amyloliquefaciens B2菌株能够产铁载体 抑制黄 瓜枯萎病菌 F oxysporum f sp cucumerinum 促 进轮作环境下的黄瓜生长 30 本研究发现 OM R1 7菌株铁载体产量高达80 98 说明其与土 传性拟石莲花属多肉植物黑腐病菌F oxyspor um拮抗互作时 具有强铁素竞争能力 能够有 效抑制病原菌入侵 解淀粉芽孢杆菌寄主范围广泛 可稳定定殖 于寄主植物根际 叶际和体内 31 B amylolique faciens X5和BQA2菌株在番茄根际有较强的定 殖能力 32 B amyloliquefaciens Jt84菌株能够在 水稻叶表长期有效定殖 33 B amyloliquefaciens CC09菌株在小麦根内 根表和根际均能定殖 且不影响根组织细胞结构 34 本研究从小粒野生 稻中分离到的B amyloliquefaciens OMR1 7菌株 可在非寄主植物拟石莲属多肉植物的根 茎和叶 部有效定殖 OMR1 7菌株在拟石莲属多肉植物 的根和茎部大量定殖 可有效阻止土传性黑腐病 菌F oxysporum从根部侵入 继而向维管束蔓 延 说明OMR1 7菌株具有与黑腐病菌进行空间 竞争的能力 此外 B amyloliquefaciens占据寄 主植物根际生态位后 还能招募有益微生物群促 进植物生长 35 细菌生物膜是细菌群体聚集形成的膜状物 帮助其黏附寄主 提高环境适应性 36 生物膜被 认为是B amyloliquefaciens在寄主环境定殖并与 植物病原菌进行空间竞争的重要物质之一 37 39 它还能在逆境条件下维持B amyloliquefaciens的 营养供给 减少逆境伤害 40 本研究也发现 OM R1 7菌株能够产生生物膜 可以帮助其高效定殖 于寄主 提高在土壤和寄主中长期存活的能力 解淀粉芽孢杆菌对多种植物真菌病害具有良 好的生防潜力 目前研究报道该菌对F oxyspor um引起病害的生防效果可达60 以上 21 如 分离自土壤的B amyloliquefaciens B6菌株对F ox ysporum f sp lycopersicis引起的番茄枯萎病防效 为64 35 41 B amyloliquefaciens Y 4菌株对F oxysporum f sp cubense引起的香蕉枯萎病防效 为67 9 42 B amyloliquefaciens HD 5菌株对F oxysporum引起的草莓根腐病防效达77 78 43 图 5 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株在拟石莲属多肉植物血色罗密欧 上 和静夜 下 中的定殖 Fig 5 Colonization of B amyloliquefaciens OMR1 7 in E agavoides cv Romeo above and E derenbergii cv Purpus below 60云南农业大学学报第 39 卷 喷施解淀粉芽孢杆菌微生物叶面肥悬浮剂对葡萄 白粉病的防治效果达65 以上 44 本研究分离 的B amyloliquefaciens OMR1 7菌株对拟石莲属 多肉植物黑腐病的生防效果为78 89 80 08 且该菌株对供试2种多肉植物黑腐病的生防效果 无显著差异 但OMR1 7菌株在PDA培养基上 对血色罗密欧黑腐病菌的抑菌效果却显著低于对 静夜黑腐病菌的抑菌效果 这是由于生防细菌在 植物体内的生防效果受自身定殖能力 寄主和环 境等多重因素影响 因此体外抑菌防效和田间防 效存在一定差异 45 46 4 结论 本研究首次对拟石莲花属多肉植物的生物防 治进行了生防细菌挖掘 明确了解淀粉芽孢杆菌 OMR1 7菌株对拟石莲属多肉植物黑腐病的生防 效果 研究结果将为多肉植物黑腐病的防控和生 防药剂开发提供参考 图 6 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株对拟石莲属多肉植物血色罗密欧和静夜黑腐病的生防效果 Fig 6 Biocontrol efficiency of B amyloliquefaciens OMR1 7 against black rot diseases of E agavoides cv Romeo EA and E derenbergii cv Purpus ED 第 1 期刘 爽 等 解淀粉芽孢杆菌OMR1 7菌株对拟石莲花属多肉植物黑腐病的生防效果61 参考文献 胡莹冰 沈守云 多肉植物的景观应用及发展趋势 J 广东农业科学 2013 40 12 46 DOI 10 16768 j issn 1004 874x 2013 12 057 1 刘磊 多肉还能再火十年吗 N OL 中国花卉报 2023 04 20 2 2023 07 18 DOI 10 38297 ki nzghh 2023 000168 2 GULLINO M L DAUGHTREY M L GARIBALDI A et al Fusarium wilts of ornamental crops and their man agement J Crop Protection 2015 73 50 DOI 10 1016 j cropro 2015 01 003 3 KAMALI SARVESTANI S MOSTOWFIZADEH GH ALAMFARSA R SALMANINEZHAD F et al Fusari um and Neocosmospora species associated with rot of Cactaceae and other succulent plants J Journal of Fu ngi 2022 8 4 364 DOI 10 3390 jof8040364 4 XUE Z F JI M L TIAN Q L et al First report of 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