长寿花叶片组织培养与离体快繁研究_欧阳先进.pdf

北京农学院学报 nullnullnullnullnull nullnull null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull 收稿日期 nullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnull 基金项目 北京市教委nullnullnullnull年科研计划一般项目 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 北京农学院青年科学基金项目 nullnullnullnull nullnullnullnull nullnull 第一作者 欧阳null进 硕士生 主要从事植物组织培养及多肽设计合成研究 null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnull 通信作者 常明明 讲师 博士 主要从事植物组织培养及多肽设计合成研究 null nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 长寿花叶片组织培养与离体快繁研究 欧阳先进 郭婷婷 康 null 旭 刘悦萍 常明明 null 北京农学院生物与资源环境学院 农业农村部华北都市农业重点实验室 北京 nullnullnullnullnullnull 摘 null 要 目的 快速扩繁长寿花优良品种 建立长寿花叶片离体组织繁殖体系 方法 以长寿花幼嫩叶片为 外植体 考察null菌方法对叶片再生能力的影响 比较培养基中激素nullnullnull和null nullnullnull 的质量浓度对长寿花叶片愈伤 组织的诱导及不定芽生根的影响 结果 长寿花幼嫩叶片的最佳消毒方法为nullnull次氯酸钠溶液消毒nullnullnullnullnull 无 菌水冲洗null次 nullnullnull乙醇消毒nullnullnull 再次用无菌水冲洗null次后null菌完成 最适愈伤组织诱导培养基是nullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnull null 愈伤组织诱导率达 nullnullnullnullnull 最适分化培养基是 nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null 丛芽分化率达 nullnullnullnullnull 最适生根培养基是 null nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull null 生根率达 nullnullnullnullnull 经炼苗成活率高达 nullnullnull以上 结论 该研究建立长寿花组织培养的再生体系 诱导率 出芽率 生根率及移栽成活率均达到 nullnullnull 以上 显著缩短移栽时间 有效降低繁殖成本 关键词 长寿花 null菌时间 激素 组织培养 离体快繁 中图分类号 nullnullnull null 文章编号 nullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull文献标志码 nullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnull null nullnull null null null nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull 长寿花 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 又称圣诞伽 蓝菜 红景天 寿星花 景天科伽蓝菜属多年生肉质 草本植物 null 其茎直立 植株矮小 叶片肉质交互对 生 叶片中心常为深绿色 边缘略薄呈红色 花色多 nullnullnullnull 年第 null 期 欧阳null进 等 长寿花叶片组织培养与离体快繁研究 nullnullnull 样 开花时花朵拥null成团 花期较长null nullnullnullnullnullnull null 具有极高的观赏性 null 是中国花卉市场的主流盆栽 花卉 null 长寿花在温暖 阳光充足 排水良好 通风 设施完善 土壤疏松肥沃的环境中生长为佳 具有 较好的市场前景 null 由于长寿花只开花不结果实 目前主要采用无性培育法进行扦插繁殖 但长期的 无性繁殖易导致病毒在植株体内蓄积 影响产品品 质 null 植物组培技术具有外植体遗传背景一致 生 长周期短 生长过程条件可控 同时可以大幅提高 繁殖速度 长寿花作为观赏类花卉 市场需求量 高 研究长寿花组织培养和离体快繁技术 可以保 证长寿花优良性状稳定遗传 可快速 高效的繁育 种苗 null 目前 对长寿花的组织培养研究较多 一般 采用长寿花幼嫩叶片和茎段作为外植体 探讨外植 体消毒方法 激素质量浓度及不同移栽培养对长寿 花组织培养的影响 null nullnullnull 在植物组织培养过程中有 三种情况可导致污染 外植体消毒不彻null 空白培 养基污染和无菌操作导致的污染 该研究从外植 体null菌角度探讨降低植物组培污染率的方法 众 所周知缩短消毒时间污染率会大幅提升 然而并不 是消毒时间越长越好 延长消毒时间null可有效降低 污染率 但会导致外植体受到损伤 褐化率显著升 高 不利于愈伤组织的形成和诱导不定芽 该研究 从不同消毒剂时间对消毒效果进行比较 同时 同 株植物不同器官繁殖能力有所不同 丁雪珍 nullnull 研究 结果表明长寿花离体快繁适宜的外植体为幼嫩叶 片和茎段 在 nullnullnullnullnullnullnullnullnull null 与 nullnullnullnullnullnullnullnull null 组 合下 长寿花叶片分化率最高 为 nullnullnullnullnull 愈伤组织 发生率为 nullnullnull 用 nullnullnullnullnullnullnullnullnull null 与 nullnullnullnullnullnullnullnull null 的激素组合培养长寿花茎段时 不仅分化率高 而 且分化芽数量多 分化率为 nullnullnull 魏null菲 nullnull 利用长 寿花叶片 茎段进行组织培养 当以长寿花叶片作 为外植体时 第 nullnull 天就可以形成愈伤组织 而茎段 在第 nullnull 天nullnullnull能形成愈伤组织 基于此 该研究 采用长寿花叶片作为外植体 主要null绕外植体的处 理 培养基配方的选取 培养过程及条件 组培苗的 驯化和移栽等环节 希望通过调整激素质量浓度 提高长寿花各生产环节的繁殖成功率 从而缩短长 寿花快速扩繁时间 为长寿花组培育苗提供参考 方法 nullnull 材料和方法 nullnullnull 材料和培养条件 供试材料为花卉市场 北京三旗百汇农贸花卉 市场 购买的优质长寿花 放置于北京农学院组培 中心的组培室内 培养条件 温度 nullnullnull 光照强度 nullnullnullnullnullnullnull 每日光照 nullnullnull 选取生长健null 无病虫害 的幼嫩叶片 null 盆 每盆选取null nullnull 片叶片 为外植体 进行组织培养相关研究 nullnullnull 方 null 法 nullnullnullnull 培养基的配制 nullnullnull 培养基或 null nullnullnull 培养 基中加入不同质量浓度的 nullnullnullnull 和 nullnullnull 培养基中 蔗糖 nullnullnull null 琼脂 nullnull null nullnullnullnull null 的 nullnullnullnull 溶液调 节培养基 nullnull 值 使培养基 nullnull 值为 nullnullnull 培养基进 行分装 放入null菌锅中null菌 配制的培养基种类及 相应的激素质量浓度如表 null 所示 表null null 培养基种类和激素质量浓度对照表 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 培养基种类 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnull nullnullnullnull nullnull null nullnullnull nullnull null 愈伤组织诱导培养基 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull 分化培养基 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull 生根培养基 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull null nullnull nullnullnull nullnull null nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull nullnullnull nullnull nullnull 培养基在配制过程中应边测 nullnull 值边搅拌 注 意控制 nullnull 值 使null菌后的 nullnull 值为 nullnullnull nullnull 值过 小易导致培养基null菌冷null后不凝固 nullnull 值过大则 容易导致培养基易开裂 nullnullnullnull 长寿花叶片的处理 null 摘取长寿花幼嫩叶片 作为外植体 自来水冲洗 nullnullnullnullnull 洗去叶片表面灰 尘 洗洁精溶液浸泡 nullnullnullnull 自来水冲洗 nullnullnullnull 分 组null菌 将叶片平均分成 null 组 用 nullnull 次氯酸钠溶 液进行消毒 消毒时间分别为 null nullnull 和 nullnullnullnullnull 用无 菌水冲洗 null 次 每组内将叶片分成 null 份 分别用 nullnullnull 乙醇消毒 nullnull nullnull 和 nullnullnull 再次用无菌水冲洗 null 次 滤纸吸干水分 null菌完成 将叶片切成null nullnullnull null 接种于培养瓶中 接种后放置培养室内进行培养 培养室温度 nullnullnull 光照强度 nullnullnullnullnullnullnull 每日光照 nullnull null 每瓶接种 null 个外植体 每组 nullnull 瓶 共分 null 组 表 null nullnull 后统计污染率 nullnullnull 后注意观察培养瓶中外 nullnullnull 北 null 京 null 农 null 学 null 院 null 学 null 报 第 nullnull 卷 植体的生长状况 筛选最佳消毒方法 nullnullnullnull 愈伤组织的诱导 null 外植体经null菌处理后 将 已null菌的叶片剪成null nullnullnull null 的小块 接种到愈伤组 织诱导培养基上 接种后将材料放置培养室内进 行培养 培养室温度 nullnullnull 光照强度 nullnullnullnullnullnullnull 每日 光照 nullnullnull 每瓶接种 null 个外植体 每组 nullnull 瓶 表 null nullnullnull 后观察不同激素质量浓度培养基中愈伤诱导 率 记录 筛选最适愈伤组织诱导培养基配方 nullnullnullnull 愈伤组织分化生芽 null 挑选疏松 健null的愈伤 组织接种到分化培养基上 接种后将材料放置培养 室内进行培养 培养室温度 nullnullnull 光照强度 nullnullnullnullnull nullnull 每日光照 nullnullnull 每瓶接种 null 个外植体 每组 nullnull 瓶 表 null nullnull 后观察出芽情况 nullnullnull 后观察不同激素 质量浓度培养基中愈伤组织的分化率 记录 筛选 最适分化培养基配方 nullnullnullnull 不定芽生根 null 当 nullnullnull 中的不定芽生长到 null nullnull nullnull时 选择生长状态好的长寿花无根苗转入 生根培养基中 以 nullnull 为基本培养基或 null nullnullnull 为 生根培养基 考察不同质量浓度 nullnullnull nullnullnullnull null 和 nullnullnullnull null 对长寿花无根苗生根的影响 接种后将 材料放置培养室内进行培养 培养室温度 nullnullnull 光 照强度 nullnullnullnullnullnullnull 每日光照 nullnullnull 每瓶接种 null 个长寿 花无根苗 每组 nullnull 瓶 表 null nullnull 后观察不同激素 质量浓度培养基中无根苗的生根率 记录 筛选最 适生根培养基配方 nullnullnullnull 组培苗的驯化与移栽 null 移栽前将含有生根 苗的培养瓶移到自然光照锻炼 nullnull 让组培苗接受强 光的照射 再开口炼苗 nullnull 以适应自然条件和温度 从培养瓶中选取根较nullnull的幼苗 自来水冲净根部 残留的培养基 转移至null菌后的培养土中 培养土 组成为蛭石和腐殖土质量比为 nullnullnull nullnullnullnull 数据计算与分析 null 污染率 null null 污染的外 植体数 接种外植体总数 愈伤组织诱导率 null null 愈伤组织个数 接种外植体数 分化率 null null 分化 苗长出个数 接种外植体总数 生根率 null 生根数 接 种外植体数 所有数据均采用 nullnullnullnullnull 软件对 null 次重 复试验的平均值进行数据分析 nullnull 结果与分析 nullnullnull 消毒时间对外植体污染率的影响 以 nullnull 为培养基 长寿花幼嫩叶片为外植体 采 用 nullnull 次氯酸钠和 nullnullnull 乙醇对外植体进行消毒处 理 nullnull 后统计污染率 nullnull 次氯酸钠和 nullnullnull 乙醇均 可有效降低污染率 且随着消毒时间延长污染率呈 明显下降趋势 nullnullnull 后当 nullnull 次氯酸钠null菌时间大 于 nullnullnullnullnull nullnullnull 乙醇null菌时间大于 nullnullnull 时 由于消 毒时间过长导致外植体褐化 生长缓慢 nullnull 次氯 酸钠消毒 nullnullnullnullnull nullnullnull 乙醇消毒 nullnullnull 为最佳消毒方 法 该消毒方法可有效控制污染率在 nullnullnull 以内 同 时有效控制褐化率 保证外植体良好的生长状态 表 null 表null null 消毒时间对外植体生长的影响 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 序号 nullnullnullnullnullnull nullnull次氯酸钠 nullnullnull nullnullnullnullnullnullnull nullnullnull乙醇 null nullnullnullnullnullnullnullnullnull 污染样品数 nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull nullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnullnull 污染率 null nullnullnullnulln