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中国农学通报 ChineseAgriculturalScienceBulletin 中国农学通报 2023 39 34 41 46 ChineseAgriculturalScienceBulletin 0 引言 草 莓 病 毒 病 在 世 界 各 地 分 布 广 泛 目 前 已 报 道 的 可 侵 染 草 莓 的 病 毒 有20 多 种 草 莓 受 侵 染 后 主 要 表 现 为 叶 片 失 绿 畸 形 生 长 量 减 少 植 株 矮 化 产 量 下 基金项目 陕西省农业科技创新计划 蓝莓草莓绿色高效生产技术集成与示范推广 NYKJ 2022 YL XN 30 第 一 作 者 简 介 王 培 女 1985 年 出 生 山 西 大 同 人 农 艺 师 硕 士 研 究 生 研 究 方 向 为 草 莓 育 种 及 栽 培 技 术 通 信 地 址 710061 陕 西 省 西 安 市 雁 塔 区 长安南路140 号 Tel 029 85253935 E mail 124658545 收稿日期 2022 12 08 修回日期 2023 05 16 草莓茎尖组培繁育体系优化及 SRAP 遗传稳定性检验 王 培 李军见 王高奇 耿腾飞 西安市农业科学研究所 西安710061 摘 要 以组培苗遗传稳定和植株健 壮为标准 优化草莓茎尖组培繁育体系 以期为草莓工厂化育苗提供 科研和技术依据 以 凤冠 和 天仙醉 草莓为材料 设置植物生长调节剂浓度梯 度 调整培养基基础配 方 调 查 茎 尖 分 化 情 况 增 殖 苗 形 态 增 殖 系 数 生 根 苗 叶 片 及 根 系 等 性 状 并 比 对 组 培 前 后 植 株SRAP 标 记 扩 增 条 带 的 差 异 筛 选 出 初 代 培 养 基 配 方MS 6 BA0 5mg L NAA0 01mg L 增 殖 培 养 基 配 方 MS 6 BA0 3mg L NAA0 01mg L 生 根 培 养 基 配 方1 2MS 硝 酸 钙0 45g L 组 培 前 后 植 株DNA 使 用19 对SRAP 引 物 特 异 性 扩 增 得 到 的72 个 基 因 位 点 条 带 未 发 生 变 化 以 上 条 带 形 成 的DNA 指 纹 没 有 差异 研究得到的草莓茎尖组培繁 育体系具备植物生长调节剂 种类少且浓度低 继代次数少 增殖系数 低 组培时间短 组培苗健壮且基因稳定等特征 关键词 草莓 茎尖 组织培养 相关序列扩增多态性标记 基因稳定性 中图分类号 S668 4 文献标志码 A 论文编号 casb2022 1016 Optimization of Tissue Culture of Tip shoot of Strawberry and SRAP Detection of Genetic Stability of Tissue Culture Seedling WANG Pei LI Junjian WANG Gaoqi GENG Tengfei Xi an Institute of Agricultural Science Xi an 710061 Abstract The aim of this study was to optimize strawberry tip shoot tissue culture breeding system based on the genetic stability and robustness of tissue culture seedlings and to provide scientific and technical basis for strawberry factory cultivation Taking two main strawberry varieties of Fengguan and Tianxianzui as samples the concentration gradient of plant growth regulator was set the basic ula of medium was adjusted and the tip shoot differentiation the morphology of proliferating seedlings the proliferation coefficient the leaf and root of rooting seedlings were investigated The differences of the amplified bands of SRAP markers in plants before and after tissue culture were compared The medium ula suitable for primary culture was MS 6 BA 0 5 mg L NAA 0 01 mg L The medium ula for proliferation culture was MS 6 BA 0 3 mg L NAA 0 01 mg L And the medium ula for rooting culture was 1 2 MS calcium nitrate 0 45 g L 19 pairs of SRAP primers were used for specific amplification of plant DNA before and after tissue culture the obtained 72 gene locus bands did not change and there was no difference in DNA fingerprints ed by the above bands The tip shoot tissue culture breeding system of strawberry obtained in this study had the characteristics of few plant growth regulators and low concentration low proliferation coefficient short tissue culture time robust seedling and stable gene Keywords strawberry tip shoot tissue culture sequence related amplified polymorphism genetic stability中国农学通报 降 品 质 变 劣 等 现 象 严 重 时 可 引 起 毁 灭 性 灾 害 1 在 中 国 危 害 严 重 的 主 要 有 草 莓 轻 型 黄 边 病 毒 SMYEV 草 莓 皱 缩 病 毒 SCV 草 莓 镶 脉 病 毒 SVBV 和 草 莓 斑 驳 病 毒 SMoV 4 种 草 莓 病 毒 目 前 尚 无 有 效 化 学 药 剂 进 行 防 治 最 好 的 解 决 办 法 是 采 用 脱 毒 种 苗 进 行 无 病 毒 栽 培 2 因 此 众 多 学 者 在 草 莓 种 苗 脱 毒 方 面 进 行 了大量的研究 建立了以草莓茎尖组织培养为主体 结 合 热 处 理 脱 毒 超 低 温 脱 毒 或 化 学 试 剂 脱 毒 等 方 法 为 补 充 的 多 种 脱 毒 体 系 1 3 5 随 着 草 莓 组 培 技 术 的 发 展 生产中组培苗开始大量使用 但有时会出现种性变异 花 而 不 实 等 现 象 针 对 该 现 象 学 者 们 也 开 展 了 草 莓 离 体 培 养 条 件 下 遗 传 变 异 方 面 的 研 究 苗 徐 静 等 6 通 过 对 草 莓 试 管 苗DNA 甲 基 化 的MSAP 检 测 发 现 随 继 代 次 数 的 增 加 组 培 苗DNA 甲 基 化 敏 感 多 态 性 整 体 呈 下 降 趋 势 代 雄 伟 7 研 究 发 现 整 个 组 培 过 程 黄 毛 草 莓 甲 基 化 水 平 呈 现 降 低 和 升 高 交 替 出 现 的 动 态 变 化 趋 势 这与组培过程中细胞功能分化 激素的使用以及外 界 环 境 的 影 响 密 切 相 关 刘 振 8 研 究 发 现 培 养 基 中 添 加NAA 对 草 莓 叶 片 分 化 的 再 生 植 株 的 遗 传 稳 定 性 影 响 较 大 王 国 平 等 9 认 为 在 草 莓 离 体 培 养 过 程 中 生 长 调 节 剂 的 种 类 和 含 量 继 代 次 数 以 及 组 织 培 养 的 时 间 都 有 可 能 会 导 致 染 色 体 数 目 或 性 状 畸 变 的 出 现 赵 密 珍 10 认 为 离 体 培 养 过 程 中 加 入 的 某 些 植 物 生 长 调 节 剂 可 能 是 引 起 草 莓 的 组 培 苗 茎 数 花 序 数 增 多 等 现 象 的 原 因 Haque 等 11 认 为 大 量 变 异 会 对 生 产 产 生 不 利 影 响 如 造 成 果 实 产 量 下 降 和 畸 形 果 的 产 生 等 因此 草莓组培过程中 关注组培苗的遗传变异情 况 非 常 必 要 但 很 少 有 对 现 有 报 道 的 草 莓 组 培 繁 育 体 系进行遗传稳定性的检验 本研究采用草莓茎尖组织 培养 设置植物生长调节剂浓度梯度 调整培养基基础 配方 调查茎尖分化情况 增殖苗形态 增殖系数 生根 苗 叶 片 和 根 系 等 性 状 比 对 组 培 前 后 植 株DNA 的 相 关 序 列 扩 增 多 态 性 sequence related amplified polymorphism SRAP 标 记 条 带 的 差 异 旨 在 以 组 培 苗 遗传稳定和健壮为标准 优化草莓茎尖组培繁育体系 为草莓工厂化育苗提供技术依据 1 材料与方法 1 1 材料 供 试 材 料 见 表1 MS 和1 2MS 培 养 基 购 自 阜 阳 曼林生物技术有限公司 琼脂 琼脂糖购自北京奥博星 生 物 技 术 有 限 责 任 公 司 蔗 糖 购 自 天 津 市 科 密 欧 化 学 试 剂 公 司 硝 酸 钙 分 析 纯 购 自 天 津 市 天 力 化 学 试 剂 有 限 公 司 6 BA NAA 购 自Sigma 公 司 快 捷 型 植 物 基 因 组DNA 提 取 系 统 DP321 2 Taq PCR Mix KT201 购 自 天 根 生 化 科 技 有 限 公 司 引 物 由 生 工 生 物 工 程 上 海 股 份 有 限 公 司 合 成 组 培 和SRAP 遗 传 稳 定 性 检 验 试 验 于2021 年11 月 2022 年11 月 在 西 安 市 现 代 农业展示中心组培及分子实验室进行 1 2 试验方法 1 2 1 组培方法 1 取 样 在 设 施 内 剪 取 草 莓 植 株 上 生 长 充 实 小 叶 尚 未 展 开 且 带 有 未 粘 泥 土 顶 芽 的 匍 匐 茎 茎 粗2 4mm 长 约10 15cm 将 匍 匐 茎 装 入 塑 料 袋 并 密 封 放入冰箱4 冷藏备用 2 培 养 条 件 培 养 基 以MS 或1 2MS 为 基 础 培 养 基 琼 脂5 2 g L 蔗 糖30 g L 根 据 不 同 培 养 阶 段 加 入不同种类和浓度的植物生长调节剂以及硝酸钙 培 养 基pH5 8 121 高 压 蒸 汽 灭 菌20min 培 养 室 温 度 25 2 相 对 湿 度45 60 光 照 强 度2000 3000lx 光照时长12h d 3 外植体处理 剪取草莓匍匐茎顶端顶芽 先用 加 入 洗 衣 粉 或 洗 洁 精 的 水 溶 液 震 荡 浸 泡5min 再 用 自 来 水 流 水 冲 洗30min 之 后 在 超 净 工 作 台 上 用75 酒 精 表 面 消 毒0 5 1 0 min 无 菌 水 冲 洗3 遍 0 20 HgCl2 浸 泡8 11 min 无 菌 水 冲 洗3 遍 放 入 无 菌 水 中 待用 4 初 代 培 养 设 计 正 交 试 验 在MS 基 础 培 养 基 中 添 加 不 同 浓 度 的 植 物 生 长 调 节 剂 设 置15 个 处 理 表2 每 个 处 理 每 个 品 种 接 种10 瓶 每 瓶1 个 茎 尖 在 体 式 显 微 镜 下 切 取0 1 0 3mm 已 消 毒 的 茎 尖 生长点 接种在初代培养基上 培养30d 表 1 试验材料 品种名称 天仙醉 凤冠 采样点 陕西省西安市长安区草莓种植户 陕西省西安市高陵区东张寺村 采样时间 2021 年11 月25 日 2021 年11 月26 日 表 2 草莓初代培养正交试验处理 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 5 0 5 0 5 0 5 0 5 1 0 1 0 1 0 1 0 0 01 0 05 0 10 0 20 0 30 0 01 0 05 0 10 0 20 处理编号 6 BA 浓度 mg L NAA 浓度 mg L 42 5 增 殖 培 养 设 计 单 一 变 量 试 验 在MS 基 础 培 养 基 中 添 加 不 同 浓 度 的6 BA 设 置3 个 处 理 表3 每 个 处 理 每 个 品 种 接 种10 瓶 每 瓶 接 种 个 体 形 态 大 小 近 乎 一 致 的 无 菌 单 芽5 个 接 种 单 芽 后 30 d 转 接1 次 培养60d 6 生根培养 设计单一变量试验 将增殖苗接种 到MS 处 理1 和1 2MS 硝 酸 钙0 45g L 处 理2 2 种 培 养 基 中 进 行 生 根 培 养 每 个 处 理 每 个 品 种 各10 瓶 每 瓶 接 种5 株 个 体 形 态 完 好 株 高 和 大 小 近 乎 一 致 的 无根或剪根幼苗 培养25 30d 7 试验调查和数据统计 初代培养中 不以品种 分类 观察所有茎尖的分化情况 增殖和生根培养中 每 个 品 种 随 机 取10 个 样 本 调 查 增 殖 形 态 和 系 数 生 根 植 株 的 株 高 叶 片 数 根 长 根 系 条 数 株 高 是 指 草 莓植株中最高叶片距离植株基部的高度 统计增殖系 数 时 若 出 现 芽 块 与 单 芽 等 量 大 小 的 芽 块 视 为1 个 单 芽 采 用Excel 2003 和SASV8 统 计 软 件 进 行 数 据 处 理和分析 1 2 2 遗传稳定性检验方法 1 引物合成 设计SRAP 标记引物 表4 12 13 2 DNA 提 取 及 检 测 使 用 快 捷 型 植 物 基 因 组 DNA 提 取 系 统 DP321 提 取 供 试 材 料 组 培 前 后 植 株 的 第 3 片 展 开 叶 DNA 使 用 核 酸 分 析 仪 Nano Drop2000 检测DNA 浓度和纯度 3 SRAP PCR 检 测 采 用25 L 的 扩 增 体 系 2 Taq PCR Mix 12 5 L 正 反 引 物 各1 L DNA 模 板 1000ng 加ddH2O 至25 L 扩 增 条 件 为 94 预 变 性 5 min 94 变 性1 min 35 退 火1 min 72 延 伸 1 min 5 个 循 环 94 变 性1 min 50 退 火1 min 72 延 伸1min 35 个 循 环 72 延 伸10min 2 琼 脂 糖凝胶电泳 凝胶成像仪照相观察 4 数 据 统 计 根 据 琼 脂 糖 凝 胶 电 泳 结 果 人 工 读 带 以相同迁移位置上有带记为 1 无带或缺失 模糊 不清条带记为 0 建立0 1 数据矩阵 2 结果与分析 2 1 茎尖组培 2 1 1 初代培养 经过5d 初代培养后 茎尖生长点逐渐 变 绿 萌 动 15d 出 现 新 芽 和 愈 伤 组 织 的 分 化 在 不 同 处 理 下 草 莓 茎 尖 分 化 存 在 明 显 差 异 表5 比 较 不 同 处 理 下 茎 尖 分 化 情 况 当NAA 浓 度 0 05mg L 时 会 出 现 表 4 SRAP 标记引物 引物方向 正向 引物名称 me1 me2 me3 me4 me5 me6 me7 me8 引物序列 5 3 TGAGTCCAAACCGGATA TGAGTCCAAACCGGAGC TGAGTCCAAACCGGAAT TGAGTCCAAACCGGACC TGAGTCCAAACCGGAAG TGAGTCCAAACCGGTAA TGAGTCCAAACCGGTCC TGAGTCCAAACCGGTGC 引物方向 反向 引物名称 em1 em2 em3 em4 em5 em6 em7 em8 引物序列 5 3 GACTGCGTACGAATTAAT GACTGCGTACGAATTGAC GACTGCGTACGAATTTGA GACTGCGTACGAATTAAC GACTGCGTACGAATTGCA GACTGCGTACGAATTCAA GACTGCGTACGAATTCTG GACTGCGTACGAATTCGA 10 11 12 13 14 15 1 0 2 0 2 0 2 0 2 0 2 0 0 30 0 01 0 05 0 10 0 20 0 30 处理编号 6 BA 浓度 mg L NAA 浓度 mg L 续表 2 表 3 草莓增殖培养单一变量试验处理 处理编号 1 2 3 6 BA 浓度 mg L 0 1 0 3 0 5 NAA 浓度 mg L 0 01 0 01 0 01 表 5 不同处理对草莓初代培养茎尖分化比例的影响 接种后 30 d 注 分化良好表示分化出1 个以上的健壮 黄绿色单芽 未出现愈伤组织和玻璃化现象 分化差表示分化出大量愈伤组织或 及 玻璃化现象 茎尖状况 分化良好的茎尖 分化差的茎尖 处理1 100 0 处理2 50 50 处理3 33 67 处理4 50 50 处理5 50 50 处理6 75 25 处理7 66 7 33 3 处理8 60 40 处理9 50 50 处理10 50 50 处理11 50 50 处理12 0 100 处理13 0 100 处理14 0 100 处理15 0 100 王 培 等 草 莓 茎 尖 组 培 繁 育 体 系 优 化 及SRAP 遗 传 稳 定 性 检 验 43中国农学通报 愈 伤 组 织 和 玻 璃 化 现 象 也 由 此 可 推 知 相 比 于6 BA NAA 浓 度 的 增 加 更 易 产 生 愈 伤 组 织 和 玻 璃 化 现 象 处 理1 添 加 的 植 物 生 长 调 节 剂 浓 度 最 低 茎 尖 分 化 最 好 30 d 内 每 个 茎 尖 平 均 分 化 出2 个 健 壮 芽 且 基 部 没 有愈伤组织附着 适合草莓茎尖初代培养的培养基为 MS 6 BA0 5mg L NAA0 01mg L 2 1 2 增 殖 培 养 在 不 同 处 理 下 草 莓 初 代 单 芽 增 殖 情 况 存 在 明 显 差 异 表6 处 理1 的2 个 品 种 虽 然 以 幼 苗 为 增 殖 形 态 的 植 株 达 到93 以 上 没 有 出 现 愈 伤 组 织 和 玻 璃 化 现 象 但 植 株 生 长 势 弱 增 殖 系 数 较 低 处 理3 的2 个 品 种 虽 然 增 殖 系 数 适 合 但 出 现 大 量 的 愈 伤 组 织 和 玻 璃 化 现 象 处 理2 的2 个 品 种 增 殖 形 态 以 幼 苗 为 主 苗 健 壮 基 部 会 产 生 极 少 量 的 愈 伤 组 织 且增殖系数最大 综合考虑植株形态 增殖系数 植株 健壮程度 愈伤组织和玻璃化出现情况等方面 适合草 莓 增 殖 培 养 的 培 养 基 为MS 6 BA 0 3 mg L NAA 0 01mg L 2 1 3 生 根 培 养 在 不 同 处 理 下 2 个 品 种 的 株 高 叶 片 数 根 数 根 系 长 度 存 在 显 著 差 异 表7 其 中 2 个 品 种 的 株 高 根 数 根 系 长 度 均 是 处 理2 显 著 大 于 处 理1 但 凤 冠 处 理1 的 叶 片 数 显 著 大 于 处 理2 天 仙 醉 处 理2 的 叶 片 数 显 著 大 于 处 理1 综 合 考 虑 植 株 株 高 和 根 系 发 育 情 况 1 2MS 硝 酸 钙0 45g L 的 培 养 基 更 加 适 合 生 根 培 养 同 时 凤 冠 在2 种 处 理 下 变 化 相 对 较 小 且 叶 片 数 在MS 培 养 基 中 更 大 可 能 与 品 种 自 身 较抗盐碱的特性有关 表 6 不同处理对草莓增殖分化的影响 处理编号 1 2 3 品种 凤冠 天仙醉 凤冠 天仙醉 凤冠 天仙醉 植物形态 幼芽或幼苗 幼芽或幼苗 丛芽 芽块 或幼苗 丛芽 芽块 或幼苗 芽块 愈伤组织 或幼苗 芽块 愈伤组织 或幼苗 芽 愈伤组织 的比例 4 6 2 14 6 15 83 6 90 4 幼苗的比例 96 93 8 85 4 85 16 4 9 6 增殖系数 3 05 2 92 5 07 4 61 4 04 4 27 2 2 组培苗基因稳定性检测 前 期 研 究 已 对64 对SRAP 引 物 组 合 进 行 筛 选 其 中19 对 引 物 产 生 了 清 晰 稳 定 多 态 性 好 的 条 带 共 扩 增 出72 条 条 带 将 这19 对 引 物 对 凤 冠 和 天 仙 醉 组 培 前 后 植 株 进 行DNA SRAP 扩 增 具 体 扩 增 结 果 见 表8 凤 冠 和 天 仙 醉 组 培 前 后72 个 基 因 位 点 未 发 生变化 以上条带数据形成的DNA 指纹没有差异 3 结论 1 在 保 证 组 培 植 株 健 壮 的 前 提 下 尽 量 减 少 植 物 生 长 调 节 剂 添 加 的 种 类 和 浓 度 降 低 了 高 变 异 率 愈 伤 组 织的产生 与前人研究相比 14 23 本研究培养基中使用 的 植 物 生 长 调 节 剂 种 类 和 浓 度 有 所 减 少 初 代 培 养 基 中 6 BA 浓 度 为0 5mg L NAA 浓 度 为0 01mg L 增 殖 培 表 7 不同处理对草莓生根培养的影响 品种 凤冠 天仙醉 处理编号 1 2 1 2 株高 cm 2 074B 3 149A 1 337B 3 133A 叶片数 片 7 5A 5 9B 5 2B 7 4A 根数 条 3 6B 5 2A 4 8B 8 4A 根系长度 cm 2 265B 3 149A 1 757B 4 850A 注 不同大写表示在 P 0 05 水平上呈显著差异 表 8 组培前后植株 DNA SRAP 的扩增条带数据 引物组合 me3 em1 me5 em1 me2 em2 me2 em3 me2 em4 me5 em6 me1 em7 me3 em7 me6 em7 me1 em8 me5 em8 me3 em8 me6 em8 me8 em8 me6 em1 me6 em2 me6 em3 me7 em1 me7 em4 凤冠 组培前 0011000010 110 1111 111 1111 111 1101 1011 10101 10 1101 111 111 10101 111 111 11 111 1101 组培后 0011000010 110 1111 111 1111 111 1101 1011 10101 10 1101 111 111 10101 111 111 11 111 1101 天仙醉 组培前 0000000011 110 1111 111 1011 111 0001 1011 10101 01 1010 101 111 10101 111 111 11 111 0101 组培后 0000000011 110 1111 111 1011 111 0001 1011 10101 01 1010 101 111 10101 111 111 11 111 0101 44养 基 中6 BA 浓 度 为0 3mg L NAA 浓 度 为0 01mg L 生根培养基中未添加植株生长调节剂 初代培养基中 NAA 浓 度 达 到 及 超 过0 05 mg L 将 影 响 植 株 分 化 会 出 现 大 量 的 愈 伤 组 织 和 玻 璃 化 现 象 增 殖 培 养 基6 BA 浓 度 低 有 助 于 分 化 出 较 多 幼 苗 这 些 结 论 与 李 晓 亮 等 21 的 研 究 较 一 致 生 根 培 养 基 中 不 添 加 植 株 生 长 调 节 剂 可 以 有 效 提 高 植 株 健 壮 程 度 在 生 根 的 同 时 完 成 复 壮 使 用1 2MS 培 养 基 降 低 培 养 基 的 盐 分 能 够 有 效 促 进 植 株 生 根 结 合 生 产 中 的 表 现 品 种 越 不 耐 盐 碱 在1 2MS 培 养 基 中 长 势 越 好 但 需 要 注 意 的 是 1 2MS 培 养 基 需 额 外 添 加 硝 酸 钙 否 则 会 在 生 根 培 养 后期出现新叶褐变坏死的现象 2 控 制 继 代 次 数 和 增 殖 系 数 减 少 组 培 时 长 避 免 植 物 生 长 调 节 剂 在 植 株 体 内 过 度 累 积 降 低 变 异 风 险 本 研 究 将 继 代 次 数 控 制 在2 代 增 殖 系 数 控 制 在5 以 下 有 植 物 生 长 调 节 剂 使 用 的 时 间 为3 个 月 这 些 结 论 与 胡 盼 盼 等 24 的 总 结 较 一 致 虽 然 使 用 该 方 法 得 到 组培苗数量少 但组培苗质量好 加之优质组培苗本身 生 长 势 旺 盛 可 以 通 过 在 防 虫 网 室 中 进 行 匍 匐 茎 快 速 繁殖增加种苗数量 3 组 培 苗SRAP 基 因 稳 定 性 检 测 证 明 草 莓 茎 尖 组 培 扩 繁 体 系 的 可 靠 性 前 人 研 究 表 明 SRAP 分 子 标记由于具有简单 高效 高共显性 重复性 易测序等 优 点 已 应 用 在 多 种 作 物 的 种 质 资 源 鉴 定 评 价 中 25 刘 振 8 采 用SRAP 分 子 标 记 技 术 检 测 不 同 途 径 获 得 的 草莓植株的遗传稳定性 检测子代与母本的相似程度 为离体快繁和种质资源保存提供了技术依据 本研究 将考察组培苗基因稳定性作为茎尖组培体系是否合理 的 一 项 指 标 采 用SRAP 分 子 标 记 扩 增 得 到 的72 个 基 因位点不存在变异 证明组培苗种性稳定 4 讨论 研 究 以 凤 冠 和 天 仙 醉 草 莓 为 材 料 这2 个 品 种 在 西 安 地 区 设 施 栽 培 中 表 现 出 早 熟 性 好 冬 季 连 续 结 果 能 力 强 果 个 大 等 优 点 但 随 着 种 植 年 限 的 增 加 也 出 现 了 不 同 程 度 的 品 种 退 化 和 产 量 下 降 现 象 经 分 子 检 测 证 实 这2 个 品 种 已 有 病 毒 侵 染 虽 然 前 人 已 建 立 红颜 14 19 白雪公主 20 甜查理 14 京藏香 14 鬼 怒 甘 21 石 莓7 号 22 阿 苏 的 小 雪 18 童 子 一 号 23 等 品 种 的 茎 尖 组 培 体 系 但 未 见 有 这2 个 品 种 组 培 方 面 的 报 道 值 得 注 意 的 是 不 同 品 种 组 培 使 用 的 植 物 生 长 调 节 剂 种 类 及 数 量 继 代 次 数 和 培 养 时 间 均 不 相 同 即 使 是 同 一 品 种 如 红 颜 茎 尖 组 培 体 系 也 不 尽相同 因此在进行大规模组培生产前 需要针对不同 品种对组培体系进行调整和优化 在建立草莓组培繁育体系时 要将保持品种种性 植株健壮 脱病脱毒作为标准 而不是一味追求增殖数 量 在 保 持 品 种 种 性 方 面 可 以 使 用ISSR MSAP 6 RAPD SCAR 26 SSR 27 SRAP 等 技 术 进 行 基 因 稳 定 性 检 测 还 可 以 进 行 田 间 栽 培 种 性 鉴 定 试 验 只 有 证 明 组 培 苗 未 发 生 变 异 后 才 可 使 用 在 生 产 中 组 培 苗 进 入栽培种植环节后 虽然已脱去了病毒和病菌 但并不 意 味 着 在 种 植 过 程 中 不 会 再 染 病 由 于 组 培 苗 相 对 于 常 规 苗 生 长 势 更 旺 盛 所 以 应 当 注 意 灰 霉 病 白 粉 病 蚜虫 螨虫等病虫害的防治 然 而 本 研 究 在 增 殖 培 养 过 程 中 会 出 现 占 比 约 15 的 丛 芽 其 基 部 产 生 极 少 量 的 愈 伤 组 织 因 此 仍 存 在 变 异 的 可 能 下 一 步 研 究 中 将 进 一 步 细 分 该 培 养 阶 段 植 物 生 长 调 节 剂 的 浓 度 梯 度 以 期 找 到 更 加 利 于 植 株幼苗分化且兼顾植株健壮度和增殖系数的浓度 同 时 在组培体系的遗传稳定性检验中 下一步研究中将 扩大基因标记的数量 并结合组培苗田间种性鉴定 从 基因和表型2 个方面检验遗传稳定性 参考文献 1 周 厚 成 何 水 涛 草 莓 病 毒 病 研 究 进 展 J 果 树 学 报 2003 5 421 426 2 李 军 见 王 富 荣 王 培 北 方 草 莓 栽 培 原 理 与 技 术 M 西 安 陕 西 科 学技术出版社 2019 75 3 霍 辰 思 樊 新 萍 刘 伟 草 莓 病 毒 病 脱 毒 技 术 及 病 毒 检 测 研 究 进 展 J 果树资源学报 2020 1 4 66 71 4 彭 芳 芳 魏 召 新 洪 林 等 草 莓 脱 毒 技 术 研 究 进 展 J 南 方 农 业 2019 13 25 32 35 5 苏 代 发 童 江 云 杨 俊 誉 等 草 莓 病 毒 病 及 其 研 究 进 展 J 云 南 大 学学报 自然科学版 2019 41 6 1221 1237 6 苗 徐 静 文 壮 文 晓 鹏 草 莓 组 培 苗 遗 传 稳 定 性 的ISSR 检 测 及 DNA 甲基化变异 J 分子植物育种 2019 17 2 531 538 7 代 雄 伟 黄 毛 草 莓 Fragaria nilgerrensisSchltdl 组 培 再 生 过 程 中 基 因组DNA 甲基化动态变化 D 昆明 云南大学 2020 41 44 8 刘 振 草 莓 离 体 再 生 体 系 的 建 立 及 遗 传 转 化 D 保 定 河 北 大 学 2017 29 30 9 王 国 平 刘 福 昌 草 莓 病 毒 种 类 鉴 定 及 培 育 无 病 毒 种 苗 的 技 术 研 究 J 中国农业科学 1990 23 4 43 49 10 赵 密 珍 日 本 四 季 草 莓 育 种 与 夏 秋 草 莓 生 产 概 况 J 中 国 果 树 2006 2 61 62 11 HAQUE M S NATH U K IQBAL M S et al Assessment of field perance and genetic diversity analysis of tissue culture variants of strawberry J Journal of agricultural technology 2015 11 1 107 125 12 LI G QUIROS C F Sequence related amplified polymorphism SRAP a new marker system based on a simple PCR reaction Its application to mapping and gene tagging in Brassica J Theoretical andappliedgenetics 2001 103 2 455 461 王 培 等 草 莓 茎 尖 组 培 繁 育 体 系 优 化 及SRAP 遗 传 稳 定 性 检 验 45中国农学通报 13 魏 丽 丽 朱 世 东 贾 庆 美 等 草 莓SRAP 反 应 体 系 优 化 及 引 物 筛 选 J 中国农学通报 2014 30 25 159 165 14 杨波 新疆 草莓 病毒 病检 测及 脱毒 繁育 体系 建立 D 石河 子 石河 子大学 2018 22 35 15 张 黎 凤 钱 雯 婕 魏 红 英 等 红 颜 草 莓 茎 尖 组 培 快 繁 技 术 研 究 J 现代农业科技 2017 7 71 74 16 王 晓 玲 唐 丽 萍 范 雨 等 红 颜 草 莓 茎 尖 组 织 培 养 的 器 官 发 生 途 径 研究 J 四川林业科技 2017 38 6 40 44 17 姚 思 扬 红 颜 草 莓 组 培 快 繁 技 术 的 优 化 D 长 春 吉 林 农 业 大 学 2019 52 18 邓渊 两个 草莓 品种 茎尖 脱毒 快繁 体系 的建 立 D 呼和 浩特 内蒙 古农业大学 2018 11 15 19 杨 肖 芳 苗 立 祥 张 豫 超 等 浙 江 省 红 颜 草 莓 镶 脉 病 毒 SVBV 的 调查与茎尖脱毒技术研究 J 核农学报 2015 29 9 1694 1700 20 窦 炎 丹 白 雪 公 主 草 莓 快 繁 和 超 低 温 处 理 体 系 的 建 立 以 及 抗 生 素抗性研究 D 石家庄 河北经贸大学 2019 12 15 21 李晓亮 张军云 张钟 等 草莓茎尖 组织培养 和快繁体 系的建立 J 作物杂志 2016 4 68 74 173 22 赵 艳 华 程 和 禾 陈 龙 等 草 莓 品 种 石 莓7 号 的 组 织 培 养 与 离 体 快 繁 J 河北果树 2019 1 9 10 23 王禹 耿月伟 谭巍 等 童子一号 草莓组织 培养快繁 体系的建 立 J 黑龙江农业科学 2019 10 10 14 24 胡 盼 盼 赵 霞 李 刚 等 草 莓 组 培 苗 体 细 胞 无 性 系 变 异 研 究 J 中 国农业通报 2016 32 16 77 82 25 柳 李 旺 龚 义 勤 黄 浩 等 新 型 分 子 标 记 SRAP 与TRAP 及 其 应用 J 遗传 2004 26 5 777 781 26 王 志 刚 张 志 宏 李 贺 等 利 用RAPD 和SCAR 标 记 鉴 定 草 莓 品 种 J 园艺学报 2007 3 591 596 27 SALES E K BUTARDO N G Molecular analysis of somaclonal variation in tissue culture derived bananas using MSAP and SSR markers J Internationaljournalofbiological 2014 8 6 615 622 46
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