圆锥绣球 花园蕾丝 组培快繁技术研究.pdf

中国农学通报 ChineseAgriculturalScienceBulletin 中国农学通报 2023 39 31 76 82 ChineseAgriculturalScienceBulletin 基 金 项 目 江 苏 省 农 业 科 技 自 主 创 新 资 金 项 目 基 于 休 闲 农 业 的 绣 球 花 特 色 资 源 挖 掘 与 综 合 利 用 关 键 技 术 研 究 CX 22 2035 江 苏 省 林 业 科 技 创 新 与 推 广 项 目 绣 球 耐 寒 新 品 种 引 选 与 花 色 定 制 产 品 培 育 利 用 研 究 LYKJ 沭 阳 2021 01 国 家 林 草 局 林 草 国 家 创 新 联 盟 重 点 研 发 项 目 绣 球 种 质 资 源评价 创制与产业化开发 GLM 2021 86 号 第 一 作 者 简 介 邓 衍 明 男 1976 年 出 生 安 徽 滁 州 人 研 究 员 博 士 研 究 方 向 为 花 卉 遗 传 育 种 栽 培 技 术 与 分 子 生 物 学 通 信 地 址 210014 江 苏 省 南 京市玄武区钟灵街50 号 省农科院休闲农业研究所 Tel 025 84399306 E mail nksdym 收稿日期 2022 11 23 修回日期 2023 08 15 圆锥绣球 花园蕾丝 组培快繁技术研究 邓衍明 1 2 秦紫艺 1 2 陈双双 1 邱 帅 3 冯 景 1 高 凯 3 齐香玉 1 陈慧杰 1 1 江苏省农业科学院休闲农业研究所 江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室 南京210014 2 南京农业大学园艺学院 南京210008 3 杭州市园林绿化股份有限公司 杭州310009 摘 要 以圆锥绣球 花园蕾丝 的带芽茎段为外植体 研究外植体消毒方法 基本培养基与植物生长调节 剂组合对其腋芽萌发 丛生芽增殖和不定根诱导的 效果 以及不同基质对组培苗移栽 的影响 以不同有 效 氯 浓 度 的 次 氯 酸 钠 溶 液 消 毒 不 同 时 间 处 理 进 行 消 毒 效 果 比 较 并 以MS 1 2MS WPM 1 2WPM 等 作 为 基 本 培 养 基 添 加 不 同 浓 度 的6 BA NAA 或IBA 进 行 侧 芽 诱 导 增 殖 和 生 根 以 珍 珠 岩 蛭 石 泥 炭 配 比 成 不 同 的 基 质 进 行 组 培 苗 的 移 栽 结 果 表 明 花 园 蕾 丝 外 植 体 最 佳 消 毒 方 法 是75 乙 醇 消 毒30s 后 经 无 菌 水 冲 洗3 4 次 再 用 有 效 氯 浓 度2 0 的 次 氯 酸 钠 溶 液 消 毒8 10min 最 后 用 无 菌 水 冲 洗4 6 次 腋 芽 萌 发 最 佳 培 养 基 为1 2WPM 2 0mg L6 BA 芽 增 殖 的 最 佳 培 养 基 为WPM 2 0mg L6 BA 0 2mg LIBA 诱 导 生 根 的 最 佳 培 养 基 为1 2WPM 0 3 0 5mg LIBA 组 培 苗 移 栽 最 佳 基 质 为 按 等 体 积 比混匀的珍珠岩 蛭石和泥炭土 研究初步建立了圆锥绣球 花园蕾丝 的组培快繁技术体系 可为其工 厂化育苗和规模化生产提供技术支持 关键词 圆锥绣球 离体培养 快繁技术 组培苗 外植体消毒 炼苗移栽 中图分类号 S685 99 文献标志码 A 论文编号 casb2022 0980 Study on Tissue Culture Technology and Rapid Propagation of Hydrangea paniculata Garden Lace DENG Yanming 1 2 QIN Ziyi 1 2 CHEN Shuangshuang 1 QIU Shuai 3 FENG Jing 1 GAO Kai 3 QI Xiangyu 1 CHEN Huijie 1 1 Jiangsu Key Laboratory for Horticultural Crop Genetic Improvement Institute of Leisure Agriculture Jiangsu Academy of Agricultural Sciences Nanjing 210014 2 College of Horticulture Nanjing Agricultural University Nanjing 210008 3 Hangzhou Landscaping Incorporated Hangzhou 310009 Abstract The stem segments of Hydrangea paniculata Garden Lace with axillary buds were used as explants to study the sterilization protocol the effects of basic culture mediums and plant growth regulators on axillary buds germination multiple shoot proliferation and adventitious root induction and the influence of different substrates on the transplanting of tissue culture seedlings The sterilization effects of NaClO at various chlorine concentrations and treatment times were compared The treated axillary buds induction proliferation and rooting were taken on the basic mediums of MS 1 2MS WPM and 1 2WPM with different concentrations of 6 BA NAA or IBA The generated tissue culture seedlings were transplanted into various substrates that were mixed with peat perlite and vermiculite The results showed that the most suitable sterilization was to soak the explant in 75 ethanol for 30 s followed by 3 4 washings with sterile water After that explants were treated with NaClO of 2 0 available chlorine concentration for 8 10 min followed by 4 60 引言 绣 球 花 在 欧 美 日 韩 等 地 种 植 普 遍 素 有 无 绣 球 不 成 园 之 说 被 誉 为 花 中 公 主 是 世 界 三 大 花 园 植 物 之 一 1 圆 锥 绣 球 为 绣 球 花 科 绣 球 花 属 落 叶 灌 木 或 小乔木 具有开花量大 花期长 观赏价值高 适应性强 等 优 点 2 圆 锥 绣 球 的 花 序 硕 大 是 为 数 不 多 的 夏 季 开 花 植 物 虽 然 不 像 同 属 的 大 花 绣 球 又 称 大 叶 绣 球 有花色变化 或如栎叶绣球有叶色变化 3 4 但其花期持 久 花色会在秋季转为古铜色 而且花序能宿留枝头长 时 间 不 脱 落 极 大 地 延 长 了 其 观 赏 期 2 此 外 圆 锥 绣 球 耐 寒 耐 旱 抗 病 等 能 力 强 耐 修 剪 易 管 理 还 具 有 绣 球 属 植 物 普 遍 具 有 的 耐 酸 耐 铝 等 优 良 特 性 5 7 因 此 圆锥绣球在国内也越来越受到人们的青睐 如今江 苏 安 徽 浙 江 山 东 甘 肃 等 地 都 有 较 多 栽 植 成 为 非 常重要的园林景观和庭院美化树种 8 圆 锥 绣 球 的 圆 锥 形 花 序 主 要 由 不 孕 花 组 成 大 多 数 品 种 不 产 生 种 子 9 一 些 野 生 种 和 少 数 栽 培 品 种 虽 能 产 生 种 子 但 结 实 率 较 低 且 种 子 常 表 现 为 不 育 或 育 性 很 低 8 如 冯 景 等 2 研 究 了 圆 锥 绣 球 石 灰 灯 种 子 的 萌 发 特 性 发 现 其 种 子 虽 然 不 存 在 形 态 和 物 理 休 眠 但 发 芽 率 较 低 且 污 染 率 很 高 从 而 影 响 发 芽 因 此 圆 锥 绣 球 传 统 繁 殖 方 式 主 要 是 无 性 繁 殖 包 括 扦 插 分 株 压 条 等 10 但 这 些 无 性 繁 殖 方 式 具 有 繁 殖 系 数 低 生 长 速 度 慢 受 季 节 限 制 等 缺 点 往 往 不 能 满 足 规 模 化 生 产 在 短 期 内 对 大 量 种 苗 的 需 求 11 而 植 物 组 织 培 养 技 术 能 够 在 保 持 母 本 优 良 性 状 的 同 时 实 现 快 速 繁 殖 的 目 的 不 仅 能 够 在 短 时 间 内 获 得 大 量 规 格 一 致 的 优 质 种 苗 满 足 生 产 需 要 而 且 培 养 的 环 境 条 件 可 控 能 周 年 进 行 生 产 从 而 克 服 传 统 育 苗 方 法 周 期 长 而 效 率 低 的 缺 点 在 植 物 基 因 工 程 分 子 育 种 等 领 域 都 具 有 重 要 作 用 12 绣 球 属 植 物 组 织 培 养 技 术 已 有 研 究 以 大 花 绣 球 为 主 关 于 圆 锥 绣 球 的 研 究 则 相 对 较 少 13 如 王 红 梅 等 9 14 对 圆 锥 绣 球 北 极 熊 和 粉 色 精 灵 进 行 了 组 培 快 繁 技 术 研 究 初 步 建 立 了 这 2 个 品 种 的 启 动 培 养 增 殖 培 养 和 生 根 培 养 技 术 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 的 花 形 为 蕾 丝 帽 形 白 色 的 不 孕 花 环 绕 在 密 集 的 可 育 花 周 围 花 序 整 体 呈 圆 锥 状 后 期 花 色 会 变 为 浅 粉 色 既 可 孤 植 群 植 或 集 中 连 片 种 植 造 景 又 可 作 为 盆 花 鲜 切 花 干 花 使 用 具 有 较 高 的 观 赏 生 态 和 经 济 价 值 是 深 受 市 场 欢 迎 的 优 良 新 品 种 但 是 目 前 尚 无 花 园 蕾丝 组培 快繁 技术 方面 的 报 道 本 研 究 对 花 园 蕾 丝 各 离 体 培 养 阶 段 进 行 试 验 旨 在 形 成 高 效 的 种 苗 组 培 快 繁 技 术 体 系 为 其 工 厂 化 育 苗 和 规 模 化 生 产 提 供 技 术 支 持 1 材料与方法 1 1 试验材料 试 验 材 料 为 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 保 存 于 江 苏 省 农 业 科 学 院 绣 球 花 种 质 资 源 圃 试 验 于2021 年4 5 月 开 展 在 晴 天 上 午 剪 取 无 病 虫 为 害 的 当 年 生 健 壮 嫩枝 底部用湿纸巾包裹好以防其失水 及时带回实验 室进行接种前处理 1 2 试验方法 1 2 1 外植体消毒 外植体为所取嫩枝剪成的茎段 参 考 王 红 梅 等 9 的 方 法 对 材 料 进 行 修 剪 去 叶 等 预 处 理 后 用 洗 洁 精 水 浸 泡5 min 洗 净 浮 尘 后 自 来 水 冲 洗 60 90min 在 超 净 工 作 台 上 先 用70 乙 醇 消 毒30s 再 用 无 菌 水 冲 洗3 4 次 之 后 用 有 效 氯 浓 度 为1 0 2 0 3 0 的 次 氯 酸 钠 NaClO 溶 液 分 别 处 理6 8 10 min 最 后 用 无 菌 水 冲 洗4 6 次 置 于 无 菌 滤 纸 上 吸 干 水 分 将 茎 段 两 端 剪 去 保 留 长 度 为1 2cm 且 含1 个 节 正 向 竖 直 接 种 于 不 添 加 任 何 植 物 生 长 调 节 剂 的 MS 培 养 基 中 做 好 标 记 后 在 培 养 室 内 培 养 2 周 后 统 计存活茎段数和污染茎段数 计算存活率和污染率 如 式 1 2 存活 率 存活 茎段数 接 种茎段 数 100 1 污染 率 污 染茎 段数 接 种茎 段数 100 2 1 2 2 启 动 培 养 试 验 设 计 为 不 同 类 型 的 基 本 培 养 基 MS 1 2MS WPM 1 2WPM 不 同 浓 度 细 胞 分 裂 素 6 BA 0 5 1 0 1 5 2 0 mg L 和 不 同 浓 度 生 长 素NAA 0 0 0 1 0 2 0 3mg L 的3 因 素4 水 平 正 交 试 验 共16 washings with sterile water The best start up medium for axillary buds was 1 2WPM 2 0 mg L 6 BA for shoots was WPM 2 0 mg L 6 BA 0 2 mg L IBA and for rooting was 1 2 WPM 0 3 0 5 mg L IBA The best substrate for transplanting the plantlets was an equal amount of well mixed perlite vermiculite and peat The study developed a quick propagation system for H paniculata Garden Lace through tissue culture and provided a technical guidance for factory scale seedling development and mass production Keywords Hydrangea paniculata culture in vitro rapid propagation technology tissue culture seedling explant sterilization transplant seedling 邓 衍 明 等 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 组 培 快 繁 技 术 研 究 77中国农学通报 个 处 理 表1 将 外 植 体 离 体 培 养 获 得 的 无 菌 苗 分 别 接种于不同处理的培养基中 置于组培架上培养 温度 25 2 光 照 时 间16h d 每 瓶 接 种3 个 茎 段 每 处 理 接 种30 瓶 作 为 重 复 培 养30d 后 观 察 腋 芽 萌 发 和 生 长 情 况 统 计 各 瓶 中 腋 芽 萌 发 茎 段 数 计 算 萌 芽 率 如式 3 萌 芽率 萌发茎 段 数 接 种茎段数 1 00 3 1 2 3 增 殖 培 养 试 验 设 计 为 不 同 基 本 培 养 基 MS 1 2MS WPM 1 2WPM 不 同 浓 度 细 胞 分 裂 素6 BA 1 5 2 0 2 5 3 0 mg L 和 不 同 浓 度 生 长 素IBA 0 05 0 1 0 15 0 2 mg L 的3 因 素4 水 平 正 交 试 验 共16 个 处 理 表2 将 启 动 培 养 萌 发 的 腋 芽 切 割 成 带 有1 2 个节的茎段 接种于不同处理的增殖培养基中 接种后 置 于 组 培 架 上 培 养 环 境 条 件 与 启 动 培 养 相 同 每 瓶 接 种3 个 茎 段 每 处 理 接 种10 瓶 作 为 重 复 培 养30d 后 观察各处理的芽增殖情况并统计增殖芽的数量 计 算增殖系数 如式 4 增 殖系数 增殖后芽数 接种茎段数 4 1 2 4 生根培养 选取增殖培养获得的生长健壮的幼芽 进 行 生 根 培 养 试 验 以1 2MS 和1 2WPM 作 为 基 本 培 养 基 分 别 添 加0 1 0 3 0 5 mg L 的IBA 共6 个 处 理 表3 每 瓶 接 种3 个 芽 每 处 理 接 种10 瓶 作 为 重 复 接 种 后20d 统 计 生 根 芽 数 和 每 芽 生 根 数 计 算 生 根 率 式 5 和平均生根数 生根率 生根 芽数 接种 芽数 1 00 5 1 2 5 炼 苗 移 栽 移 栽 前 先 将 组 培 瓶 移 至 散 射 光 下 室 温培养3d 进行预炼苗 再打开封口膜置于温室内炼苗 3d 洗 净 小 苗 根 部 残 留 的 培 养 基 将 其 移 栽 至 已 灭 菌 的 不 同 物 质 等 体 积 配 比 的4 种 基 质 中 珍 珠 岩 蛭 石 泥 炭 土 1 1 1 珍 珠 岩 蛭 石 1 1 珍 珠 岩 泥 炭 土 1 1 蛭 石 泥 炭 土 1 1 移 栽 后7d 统 计 成 活 株 数 计 算 成 活 率 式 6 移栽后30d 测量小苗的株高和株幅 移 栽成 活率 成 活株数 移 栽株 数 10 0 6 1 2 6 数 据 处 理 与 统 计 分 析 试 验 所 得 数 据 用Excel 2016 进 行 统 计 和 整 理 用SPSS 26 0 对 结 果 进 行 方 差 分析 2 结果与分析 2 1 不同处理对外植体消毒效果的影响 由图1 2 可以看出 当有效氯浓度为1 0 时 不同 消 毒 时 间 下 外 植 体 的 污 染 率 无 显 著 差 异 但 消 毒6min 表 1 启动培养正交试验设计表 表 2 增殖培养正交试验设计表 处理编号 1 2 3 4 5 6 7 8 基本培养基 MS MS MS MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 6 BA 浓度 1 5 2 0 2 5 3 0 1 5 2 0 2 5 3 0 IBA 浓度 0 05 0 10 0 15 0 20 0 10 0 05 0 20 0 15 处理编号 9 10 11 12 13 14 15 16 基本培养基 WPM WPM WPM WPM 1 2WPM 1 2WPM 1 2WPM 1 2WPM 6 BA 浓度 1 5 2 0 2 5 3 0 1 5 2 0 2 5 3 0 IBA 浓度 0 15 0 20 0 05 0 10 0 20 0 15 0 10 0 05 处理编号 1 2 3 4 5 6 7 8 基本培养基 MS MS MS MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2MS 6 BA 浓度 0 5 1 0 1 5 2 0 0 5 1 0 1 5 2 0 NAA 浓度 0 0 0 1 0 2 0 3 0 1 0 0 0 3 0 2 处理编号 9 10 11 12 13 14 15 16 基本培养基 WPM WPM WPM WPM 1 2WPM 1 2WPM 1 2WPM 1 2WPM 6 BA 浓度 0 5 1 0 1 5 2 0 0 5 1 0 1 5 2 0 NAA 浓度 0 2 0 3 0 0 0 1 0 3 0 2 0 1 0 0 mg L mg L 78和8min 的 污 染 率 接 近100 外 植 体 因 污 染 致 死 使 得 存 活 数 几 乎 为0 消 毒10min 时 部 分 外 植 体 能 够 存 活 但 存 活 率 只 有16 7 当 有 效 氯 浓 度 为2 0 时 消 毒8 min 和10 min 的 污 染 率 均 为43 3 显 著 低 于 消 毒6min 处 理 的70 0 成 活 率 分 别 为40 0 和43 3 高 于 消 毒6 min 处 理 的26 7 但 消 毒8 min 和10 min 处理间的污染率和存活率均无显著差异 当有效氯浓 度 为3 0 时 虽 然 外 植 体 的 污 染 率 随 消 毒 时 间 的 增 加 而 降 低 但 外 植 体 受 到 消 毒 剂 的 伤 害 加 重 导 致 成 活 率 也 呈 下 降 趋 势 在 消 毒10 min 时 降 至 最 低 值10 0 因 此 综 合 考 虑 外 植 体 污 染 和 成 活 情 况 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 外 植 体 的 最 佳 消 毒 方 法 为 75 乙 醇 消 毒30s 后 无 菌 水 冲 洗3 4 次 再 用 有 效 氯 浓 度 为2 0 的 NaClO 溶液消毒8 10min 然后用无菌水冲洗4 6 次 2 2 不同处理对启动培养的影响 启 动 培 养 表4 结 果 表 明 不 同 基 本 培 养 基 和 植 物 生 长 调 节 剂 组 合 均 能 使 花 园 蕾 丝 休 眠 芽 萌 发 但 不 同 处 理 的 萌 芽 率 不 同 其 中 处 理16 1 2WPM 2 0mg L 6 BA 的 萌 芽 率 最 高 为98 9 其 次 是 处 理2 MS 1 0mg L6 BA 0 1mg LNAA 处 理5 1 2MS 0 5mg L 6 BA 0 1mg LNAA 和 处 理10 WPM 1 0mg L6 BA 0 3 mg LNAA 都 为95 6 处 理12 WPM 2 0 mg L 6 BA 0 1 mg L NAA 处 理13 1 2WPM 0 5 mg L 6 BA 0 3 mg LNAA 的 萌 芽 率 较 低 以 处 理13 的 萌 芽 率 为 最 低 只 有20 0 在 启 动 培 养 过 程 中 萌 发 的 休 眠 芽 状 态 良 好 均 可 用 于 后 续 的 增 殖 培 养 和 生 根 培 养 因 此 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 外 植 体 启 动 培 养 的 最 佳培养基为处理16 即1 2WPM 2 0mg L6 BA 2 3 不同处理对增殖培养的影响 由 表5 可 知 各 处 理 均 能 使 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 腋 芽 增 殖 增 殖 系 数 为1 5 5 8 但 不 同 基 本 培 养 基 和 不 同 激 素 组 合 对 腋 芽 增 殖 的 影 响 不 同 处 理1 2 3 5 7 8 15 的 增 殖 系 数 均 较 低 而 处 理10 WPM 2 0 mg L 6 BA 0 2 mg L IBA 的 增 殖 系 数 最 高 为 5 8 其 次 是 处 理9 WPM 1 5 mg L6 BA 0 15 mg L IBA 增 殖 系 数 为4 7 以MS 为 基 本 培 养 基 时 处 理 表 4 不同处理对外植体萌芽率的影响 处理 1 2 3 4 萌芽率 90 0 2 7b 95 6 2 0ab 72 2 3 8d 84 4 3 0c 处理 5 6 7 8 萌芽率 95 6 2 0ab 93 3 2 4b 67 8 3 3d 84 4 3 0c 处理 9 10 11 12 萌芽率 71 1 3 7d 95 6 2 2ab 72 2 3 1d 46 7 5 7e 处理 13 14 15 16 萌芽率 20 0 4 0f 66 7 4 1d 80 0 2 9c 98 9 1 1a 表 3 生根培养处理 处理编号 1 2 3 4 5 6 基本培养基 1 2MS 1 2MS 1 2MS 1 2WPM 1 2WPM 1 2WPM IBA 浓度 mg L 0 1 0 3 0 5 0 1 0 3 0 5 不同小写字母表示处理间差异显著 P 0 05 下同 图 1 外植体在 NaClO 溶液中不同消毒时间的污染情况 有 效 氯 浓 度 外 植 体 污 染 率 图 2 外植体在 NaClO 溶液中不同消毒时间的成活情况 有 效 氯 浓 度 外 植 体 存 活 率 邓 衍 明 等 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 组 培 快 繁 技 术 研 究 79中国农学通报 1 4 大 部 分 增 殖 芽 矮 小 且 叶 片 发 黄 其 中 处 理4 MS 3 0mg L6 BA 0 2mg LNAA 虽然增 殖系数 较 高 2 7 但 增 殖 芽 矮 小 叶 片 发 黄 且 基 部 有 愈 伤 组 织 形 成 以1 2MS 为 基 本 培 养 基 时 处 理5 8 以 处 理6 1 2MS 2 0 mg L6 BA 0 05 mg LNAA 的 增 殖 系 数 最 高 为 3 1 显 著 高 于 其 他3 个 处 理 且 叶 色 正 常 只 有 微 量 愈 伤 组 织 形 成 但 同 样 存 在 增 殖 芽 矮 小 的 现 象 以WPM 为 基 本 培 养 基 时 处 理9 12 以 处 理10 WPM 2 0 mg L 6 BA 0 2mg LNAA 的 增 殖 效 果 最 好 增 殖 系 数 显 著 高 于 其 他3 个 处 理 且 增 殖 芽 生 长 良 好 叶 色 正 常 无 愈 伤 组 织 形 成 以1 2WPM 为 基 本 培 养 基 时 处 理13 16 虽然 总体 上增 殖芽 生长 良好 叶色 正常 但增 殖系 数 均 显 著 低 于 处 理10 其 中 处 理15 1 2WPM 2 5mg L 6 BA 0 1mg LNAA 的 增 殖 系 数 最 低 只 有1 5 因 此 综 合 分 析 增 殖 系 数 和 增 殖 芽 的 生 长 状 态 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 最 佳 增 殖 培 养 基 为 处 理10 即WPM 2 0mg L6 BA 0 2mg LIBA 2 4 不同处理对生根培养的影响 基 本 培 养 基 和IBA 对 花 园 蕾 丝 生 根 率 和 平 均 生 根 数 均 具 有 显 著 影 响 基 本 培 养 基 为1 2MS 时 各 处 理 生 根 数 均 为0 而 基 本 培 养 基 为1 2WPM 时 各 处 理 生 根 率 都 接 近 或 达 到100 其 中 处 理5 1 2WPM 0 3 mg LIBA 和 处 理6 1 2WPM 0 5 mg LIBA 的 生 根 率 均 为100 平 均 生 根 数 也 显 著 高 于 其 他 处 理 分 别 为7 90 和8 33 条 株 因 此 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 生 根培养的最佳培养基为1 2WPM 0 3 0 5mg LIBA 2 5 不同基质对组培苗移栽的影响 移 栽7 d 后4 个 处 理 的 移 栽 成 活 率 都 为100 但 不 同 处 理 的 株 高 不 同 其 中 处 理1 珍 珠 岩 蛭 石 泥 炭 土 1 1 1 株 高 为3 43 cm 显 著 高 于 其 他3 个 处 理 其 次 为 处 理3 珍 珠 岩 泥 炭 土 1 1 株 高 为2 82 cm 处理2 珍珠 岩 蛭石 1 1 处理4 蛭石 泥炭 土 1 1 的 株 高 无 显 著 差 异 分 别 为2 07 1 97cm 4 个 处 理 的 株 幅 变 化 趋 势 与 株 高 相 似 处 理2 处 理4 的 株 幅 较 小 分 别 为5 36 5 01cm 而 处 理1 处 理3 的 株 幅 较 大 分 别 为6 98 6 90 cm 因 此 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 组 培 苗 的 最 佳 移 栽 基 质 为 处 理1 即 等 体 积 比 混 匀 的 珍 珠 岩 蛭石和泥炭土 3 结论 本 研 究 通 过 设 置3 种 有 效 氯 浓 度 的NaClO 溶 液 分 别 处 理 不 同 时 间 确 定 了 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 外 植 体 消 毒 的 最 佳 方 法 是 经75 乙 醇 消 毒30s 后 无 菌 水 冲 洗3 4 次 再 用 有 效 氯 浓 度 为2 0 的NaClO 溶 液 消 毒 8 10min 然 后 用 无 菌 水 冲 洗4 6 次 后 用 无 菌 滤 纸 吸 干 水 分 即 可 用 于 接 种 通 过 分 别 设 置16 种 启 动 培 养 基 和 增 殖 培 养 基 配 方 试 验 发 现 外 植 体 最 佳 启 动 培 养 基 是1 2WPM 2 0 mg L 6 BA 最 佳 增 殖 培 养 基 是 WPM 2 0 mg L 6 BA 0 2 mg L IBA 通 过 设 置6 种 不 同 生 根 培 养 基 处 理 发 现 最 佳 生 根 培 养 基 是 1 2WPM 0 3 0 5 mg LIBA 生 根 效 果 良 好 通 过 将 炼 苗 后 的 组 培 苗 移 栽 到4 种 不 同 基 质 中 进 行 生 长 发 现 最 佳 移 栽 基 质 是 等 体 积 比 混 匀 的 珍 珠 岩 蛭 石 和 泥 炭土 本研究初步建立了圆锥绣球 花园蕾丝 的离体 培 养 和 快 繁 技 术 体 系 研 究 结 果 可 为 其 工 厂 化 育 苗 和 规模化生产提供技术支撑 4 讨论 植 物 在 生 长 的 过 程 中 易 因 环 境 的 影 响 而 携 带 各 种病原微生物 因此 对外植体进行消毒非常重要 是 成 功 建 立 组 培 快 繁 体 系 的 第 一 步 如 果 消 毒 不 彻 底 会 导 致 外 植 体 因 污 染 而 死 亡 如 果 消 毒 剂 浓 度 过 高 或 处 理 时 间 过 长 又 会 对 外 植 体 自 身 造 成 伤 害 甚 至 致 其 死 亡 因 此 选 择 合 适 的 消 毒 剂 及 恰 当 的 消 毒 处 理 时 间 非 常 关 键 15 本 研 究 发 现 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 带 芽 茎 段 使 用75 乙 醇 和NaClO 溶 液 作 为 消 毒 剂 时 随 着 消 毒 剂 浓 度 的 增 加 和 消 毒 时 间 的 延 长 外 植 体 污 染 率 均 有 所 降 低 但 存 活 率 并 不 都 呈 上 升 趋 势 试 验 结 果表明 花园蕾丝 可能表面携带的菌类较多 或者内 生 菌 较 多 这 与 王 红 梅 等 9 在 圆 锥 绣 球 北 极 熊 上 发 表 5 幼芽在不同处理下的增殖系数和生长状态 处理 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 增殖系数 1 5 0 2f 1 7 0 1f 1 5 0 2f 2 7 0 1e 1 6 0 2f 3 1 0 1de 1 7 0 1f 1 9 0 1f 4 7 0 2b 5 8 0 2a 3 2 0 1d 2 9 0 1de 3 9 0 2c 4 1 0 1c 1 5 0 2f 4 0 0 2c 增殖芽生长状态 矮小 叶色正常 大量愈伤 矮小 叶片发黄 无愈伤 矮小 叶片发黄 无愈伤 矮小 叶片发黄 有愈伤 生长良好 叶片发黄 无愈伤 矮小 叶色正常 微量愈伤 矮小 叶色正常 有愈伤 生长良好 叶色正常 有愈伤 矮小 叶片发黄 无愈伤 生长良好 叶色正常 无愈伤 矮小 叶片发黄 无愈伤 生长良好 叶片正常 无愈伤 生长良好 叶色正常 有愈伤 矮小 叶色正常 无愈伤 生长良好 叶色正常 无愈伤 生长良好 叶色正常 少量愈伤 80现 的 结 果 类 似 因 此 本 试 验 中 先 用70 乙 醇 浸 泡 处 理30s 利 用 乙 醇 的 强 穿 透 力 使 菌 体 蛋 白 变 性 再 用 有 效 氯 浓 度2 0 的NaClO 溶 液 浸 泡 可 得 到 较 好 的 消 毒 效 果 但 本 研 究 结 果 显 示 的 污 染 率 仍 较 高 成 活 率 也 有 提 升 的 空 间 白 一 苇 等 16 为 解 决 组 培 中 的 污 染 问 题 在 培 养 基 中 添 加 了 抗 生 素 灭 菌 剂 等 物 质 从 而 探 索出一种用药液对外植体进行包衣处理的抗污染新方 法 成效显著 故在今后的试验中 尚需进一步研究更 加 高 效 的 外 植 体 消 毒 和 灭 菌 方 法 以 进 一 步 完 善 圆 锥 绣球 花园蕾丝 的无菌培养技术体系 不 同 基 本 培 养 基 类 型 对 不 同 植 物 的 离 体 培 养 效 果 存 在 很 大 差 异 本 研 究 发 现 启 动 培 养 时 MS 和 1 2MS 培 养 基 的 萌 芽 率 均 较 高 这 与 雷 亚 灵 17 的 研 究 结果相同 这可能是因为圆锥绣球 花园蕾丝 休眠芽 在 萌 发 阶 段 对 铵 盐 的 需 求 较 大 但 在 增 殖 培 养 中 WPM 培 养 基 的 增 殖 系 数 显 著 高 于 其 他 培 养 基 与 MS 培 养 基 相 比 WPM 培 养 基 中 铵 盐 的 含 量 较 低 而 硫 酸 盐 含 量 增 加 18 因 此 圆 锥 绣 球 花 园 蕾 丝 在 增 殖 培 养 的 过 程 中 可 能 对 铵 盐 的 需 求 有 所 下 降 而 对 硫 酸 盐 的 需 求 上 升 在 生 根 培 养 时 1 2WPM 的 生 根 效 果 显 著 好 于1 2MS 这 与 李 杨 丽 19 的 研 究 结 果 类 似 在 其 开 展 的 研 究 中 B5 和WPM 培 养 基 都 比MS 培 养 基 更加适合绣球的离体培养 在 不 同 培 养 阶 段 不 同 的 激 素 配 比 对 组 培 苗 的 生 长 影 响 显 著 需 要 不 断 进 行 优 化 本 试 验 在 启 动 增 殖 生 根 培 养 的 过 程 中 分 别 采 用 了 不 同 浓 度 的6 BA NAA 和IBA 作 为 生 长 调 节 剂 结 果 表 明 在 启 动 培 养 中 花 园 蕾 丝 的 萌 芽 率 总 体 较 高 说 明 其 休 眠 芽 较 易 萌 发 随 着6 BA 浓 度 的 上 升 萌 芽 率 先 上 升 后 下 降 这 与Liu 等 20 的 研 究 结 果 非 常 相 似 此 外 随 着NAA 浓 度 的 增 加 萌 芽 率 降 低 说 明NAA 在 一 定 程 度 上 抑 制 了 芽 的 萌 发 在 增 殖 培 养 中 随 着6 BA 浓 度 的 上 升 增 殖 系 数 先 上 升 后 下 降 与 殷 丽 青 等 21 对 粗 齿 绣 球 的 研 究 结 果 一 致 在 生 根 培 养 中 本 研 究 发 现 花 园 蕾 丝 组 培 苗 的 生 根 相 对 较 容 易 不 同 处 理 的 生 根 率 均 接 近 或 达 到100 但 生 根 数 随 着IBA 浓 度 的 升 高 而 增 加 说 明 在 一 定 浓 度 范 围 内 IBA 具 有 促 进 其 生 根 的 作 用 黄 烈 健 等 22 认 为 生 根 培 养 时 IBA 和NAA 同 时 使 用 的 效 果 远 好 于 单 独 使 用 其 中 任 一 种 激 素 的 效 果 陈 爽 等 23 在 对 野 生 蜡 莲 绣 球 和 纯 兰 绣 球 进 行 组 培 快 繁 技 术 研 究 时 发 现 较 适 宜 的 生 根 培 养 基 都 是IBA 和NAA 同 时 使 用 的 培 养 基 周 余 华 等 24 在 对 圆 锥 绣 球 石 灰 灯 进 行 扦 插 育 苗 时 发 现 NAA 和ABT 是 最 佳 生 根 剂 李 露 等 25 在 开 展 非 洲 紫 罗 兰 离 体 快 繁 研 究 时 发 现 IAA 和NAA 诱 导 侧 芽 生 根 的 效 应 相 同 因 此 未 来 有 必 要 开 展 更 多 生 长 调 节 剂 的 筛 选 和 比 较 试 验 尤 其 是NAA 或IAA 及 其 与IBA ABT 等 的 配 合 使 用 试 验 以 进 一 步 改 良 花 园 蕾 丝 的 生 根 培 养 基 配 方 参考文献 1 陈 慧 杰 邓 衍 明 齐 香 玉 等 绣 球 叶 斑 病 病 原 鉴 定 及 其 生