铁皮石斛组培快繁技术.pdf

128 2023 年 第 64 卷 第 1 期 收 稿 日 期 2022 03 14 基 金 项 目 河 北 省 产 业 创 新 创 业 团 队 项 目 199A2905H 河 北 省 创 新 能 力 提 升 计 划 20566301D 邯 郸 市 科 学 技 术 研 究 与 发 展 计 划 21112012018 作 者 简 介 李 得 萍 1997 女 贵 州 茅 台 人 在 读 硕 士 研 究 方 向 为 植 物 组 织 培 养 与 育 种 E mail 1505442752 qq com 通 信 作 者 刘 艳 军 1970 男 天 津 人 高 级 实 验 师 硕 士 从 事 园 艺 植 物 组 织 培 养 和 分 子 育 种 研 究 工 作 E mail liuyanjun00a 126 com 文 献 著 录 格 式 李 得 萍 何 远 秦 许 丁 帆 等 铁 皮 石 斛 组 培 快 繁 技 术 J 浙 江 农 业 科 学 2023 64 1 128 131 DOI 10 16178 j issn 0528 9017 20220217 铁 皮 石 斛 组 培 快 繁 技 术 李 得 萍 何 远 秦 许 丁 帆 易 元 慧 董 洪 雨 刘 艳 军 天 津 农 学 院 园 艺 园 林 学 院 天 津 300392 摘 要 以 铁 皮 石 斛 茎 段 为 外 植 体 探 究 最 佳 的 外 植 体 消 毒 方 法 和 最 适 的 诱 导 增 殖 生 根 培 养 基 进 而 优 化 铁 皮 石 斛 组 培 快 繁 体 系 结 果 表 明 最 佳 外 植 体 消 毒 方 法 为 30 次 氯 酸 钠 消 毒 10 min 外 植 体 污 染 率 6 死 亡 率 0 最 适 诱 导 培 养 基 为 基 础 培 养 基 MS 2 mg L 1 细 胞 分 裂 素 BA 0 5 mg L 1 萘 乙 酸 NAA 在 此 培 养 基 中 再 生 芽 生 长 快 速 且 健 壮 诱 导 率 为 5 6 最 适 增 殖 培 养 基 为 MS 0 5 mg L 1 NAA 1 0 mg L 1 BA 在 此 培 养 基 中 丛 生 芽 芽 势 健 壮 生 长 快 增 殖 率 为 3 8 最 适 生 根 培 养 基 为 MS 0 5 mg L 1 NAA 在 此 培 养 条 件 下 组 培 苗 的 平 均 根 数 达 7 3 条 平 均 根 长 5 8 cm 根 系 正 常 且 生 长 快 速 本 研 究 优 化 了 铁 皮 石 斛 组 培 快 繁 体 系 可 为 组 培 快 繁 工 厂 化 生 产 流 程 的 进 一 步 优 化 提 供 依 据 关 键 词 铁 皮 石 斛 组 织 培 养 茎 段 激 素 培 养 基 中 图 分 类 号 S685 99 文 献 标 志 码 A 文 章 编 号 0528 9017 2023 01 0128 04 铁 皮 石 斛 D e n d r o b i u m c a n d i d u m 又 称 黑 节 草 是 一 种 重 要 的 药 用 草 本 植 物 具 有 生 津 降 血 糖 增 强 机 体 免 疫 力 等 作 用 近 年 愈 发 受 保 健 品 市 场 的 喜 欢 1 3 铁 皮 石 斛 种 子 细 小 没 有 胚 乳 必 须 与 真 菌 共 生 才 能 萌 发 因 此 自 然 繁 殖 率 低 4 5 早 期 一 般 通 过 扦 插 分 株 的 繁 殖 方 式 进 行 铁 皮 石 斛 的 生 产 繁 殖 6 这 些 常 规 方 式 存 在 繁 殖 周 期 长 速 度 慢 等 问 题 不 能 满 足 生 产 中 对 铁 皮 石 斛 种 苗 的 大 量 需 求 而 通 过 组 织 培 养 技 术 进 行 组 培 快 繁 可 以 极 大 的 缩 短 繁 殖 时 间 故 使 用 组 织 培 养 技 术 来 进 行 工 厂 化 育 苗 是 解 决 繁 殖 率 低 的 理 想 手 段 7 同 时 也 可 通 过 人 工 种 子 技 术 进 行 铁 皮 石 斛 的 繁 殖 8 9 铁 皮 石 斛 组 培 中 多 采 用 种 子 播 种 10 11 诱 导 原 球 茎 进 行 组 培 快 繁 而 本 研 究 采 用 了 诱 导 铁 皮 石 斛 腋 芽 萌 发 的 方 法 通 过 不 断 剪 切 带 芽 茎 段 来 进 行 诱 导 增 殖 和 生 根 与 传 统 的 无 菌 播 种 快 繁 相 比 本 研 究 采 用 的 方 法 有 以 下 三 点 优 势 首 先 是 成 苗 的 生 长 势 较 强 腋 芽 直 接 再 生 要 比 从 原 球 茎 长 出 的 芽 生 长 势 强 可 以 直 接 用 于 生 根 从 而 缩 短 了 组 培 的 时 间 其 次 腋 芽 萌 发 出 来 的 芽 的 自 然 变 异 率 要 明 显 低 于 原 球 茎 从 而 保 障 了 再 生 苗 的 遗 传 稳 定 性 使 得 组 培 体 系 更 稳 定 最 后 此 方 式 的 成 苗 质 量 高 获 得 的 再 生 苗 在 形 态 上 与 母 本 一 样 高 度 保 持 了 母 本 的 特 性 而 通 过 传 统 方 法 以 原 球 茎 进 行 再 生 的 苗 中 畸 形 苗 较 多 需 要 长 时 间 的 培 养 才 能 变 成 正 常 苗 进 而 影 响 铁 皮 石 斛 的 商 品 价 值 1 材 料 与 方 法 1 1 试 验 材 料 试 验 所 用 铁 皮 石 斛 盆 栽 苗 由 天 津 农 学 院 园 林 植 物 实 验 室 提 供 1 2 试 验 方 法 1 2 1 铁 皮 石 斛 外 植 体 消 毒 剪 取 长 度 为 2 3 cm 的 铁 皮 石 斛 嫩 芽 用 70 乙 醇 溶 液 浸 泡 30 s 无 菌 水 冲 洗 30 s 再 分 别 使 用 20 30 40 的 次 氯 酸 钠 水 溶 液 消 毒 消 毒 时 间 设 置 为 5 10 15 20 min 消 毒 后 无 菌 水 冲 洗 3 次 每 次 冲 洗 10 min 最 后 用 无 菌 滤 纸 吸 干 外 植 体 表 面 水 分 将 外 植 体 接 种 到 基 础 培 养 基 MS 上 试 验 重 复 3 次 每 个 处 理 接 10 瓶 每 瓶 接 种 4 个 外 植 体 10 d 后 观 察 并 统 计 不 同 处 理 的 外 植 体 污 染 率 死 亡 率 李 得 萍 等 铁 皮 石 斛 组 培 快 繁 技 术 129 1 2 2 铁 皮 石 斛 腋 芽 的 诱 导 将 消 毒 处 理 后 没 有 污 染 生 长 健 壮 的 铁 皮 石 斛 茎 段 外 植 体 接 种 到 含 有 不 同 激 素 的 培 养 基 上 诱 导 茎 段 腋 芽 萌 发 培 养 基 以 MS 为 基 本 培 养 基 分 别 添 加 不 同 浓 度 细 胞 分 裂 素 BA 激 动 素 KT 和 萘 乙 酸 NAA 6 种 培 养 基 分 别 为 1 0 mg L 1 BA 1 0 mg L 1 BA 0 5 mg L 1 NAA 2 0 mg L 1 BA 0 5 mg L 1 NAA 1 0 mg L 1 KT 1 0 mg L 1 KT 0 5 mg L 1 NAA 2 0 mg L 1 KT 0 5 mg L 1 NAA 每 个 处 理 接 种 10 瓶 每 瓶 接 种 4 个 外 植 体 试 验 重 复 3 次 接 种 后 每 3 d 观 察 1 次 40 d 后 统 计 平 均 每 个 侧 芽 诱 导 系 数 与 再 生 芽 生 长 情 况 1 2 3 铁 皮 石 斛 腋 芽 增 殖 培 养 将 铁 皮 石 斛 茎 段 上 诱 导 出 的 腋 芽 接 种 到 含 不 同 激 素 的 培 养 基 上 进 行 增 殖 培 养 培 养 基 以 MS 为 基 本 培 养 基 分 别 添 加 不 同 浓 度 分 裂 素 BA 和 生 长 素 NAA 吲 哚 丁 酸 IBA 6 种 培 养 基 分 别 为 0 5 mg L 1 IBA 0 5 mg L 1 IBA 1 mg L 1 BA 1 mg L 1 IBA 0 5 mg L 1 BA 0 5 mg L 1 NAA 0 5 mg L 1 NAA 1 mg L 1 BA 1 mg L 1 IBA 0 5 mg L 1 BA 每 个 处 理 接 种 10 瓶 每 瓶 接 种 4 个 外 植 体 每 个 处 理 重 复 3 次 接 种 后 每 3 d 观 察 1 次 经 过 40 d 后 观 察 并 统 计 平 均 每 个 侧 芽 增 殖 系 数 与 丛 生 芽 生 长 情 况 1 2 4 铁 皮 石 斛 的 生 根 培 养 将 增 殖 培 养 中 萌 发 的 腋 芽 长 到 3 5 cm 高 时 剪 下 一 部 分 继 续 用 于 增 殖 培 养 另 一 部 分 进 行 生 根 培 养 将 用 于 生 根 培 养 的 小 苗 接 种 到 含 有 不 同 生 长 素 的 生 根 培 养 基 上 培 养 基 以 MS 为 基 本 培 养 基 分 别 添 加 不 同 种 类 和 不 同 浓 度 的 生 长 素 IAA 0 5 mg L 1 1 0 mg L 1 2 0 mg L 1 和 NAA 0 2 mg L 1 0 5 mg L 1 1 0 mg L 1 每 个 处 理 接 种 10 瓶 每 瓶 接 种 4 个 外 植 体 每 个 处 理 重 复 6 次 接 种 后 每 5 d 观 察 1 次 30 d 后 观 察 并 统 计 植 株 平 均 生 根 数 平 均 根 长 和 生 根 质 量 以 及 植 株 生 长 情 况 1 2 5 培 养 条 件 以 上 培 养 基 均 采 用 5 5 g L 1 琼 脂 粉 30 g L 1 蔗 糖 pH 5 8 6 0 培 养 温 度 25 2 光 照 强 度 2 000 2 500 lx 连 续 照 明 1 2 6 数 据 统 计 及 方 法 腋 芽 诱 导 系 数 诱 导 形 成 的 腋 芽 数 接 种 茎 段 数 增 殖 系 数 有 效 芽 数 接 种 外 植 体 数 有 效 芽 为 芽 高 1 cm 的 芽 试 验 数 据 均 采 用 Excel 进 行 处 理 2 结 果 与 分 析 2 1 不 同 消 毒 处 理 方 法 对 外 植 体 消 毒 效 果 的 影 响 由 表 1 可 知 不 同 浓 度 的 消 毒 剂 和 消 毒 时 间 对 外 植 体 消 毒 效 果 不 同 在 20 次 氯 酸 钠 消 毒 液 作 用 下 外 植 体 污 染 率 一 直 是 处 于 很 高 的 水 平 说 明 在 低 浓 度 消 毒 液 下 微 生 物 基 本 不 受 影 响 即 使 延 长 作 用 时 间 也 不 能 杀 死 植 株 体 内 的 微 生 物 从 外 植 体 生 长 来 看 在 低 浓 度 的 消 毒 液 作 用 下 除 了 被 微 生 物 侵 染 造 成 的 生 长 影 响 外 外 植 体 没 有 出 现 受 消 毒 液 影 响 而 褐 变 死 亡 的 现 象 在 高 浓 度 40 的 次 氯 酸 钠 作 用 下 微 生 物 几 乎 全 被 杀 死 只 有 在 消 毒 时 间 为 5 min 时 有 少 数 外 植 体 出 现 污 染 现 象 可 能 是 由 于 消 毒 时 间 过 短 引 起 的 这 说 明 在 此 浓 度 下 微 生 物 不 能 够 生 存 但 同 时 在 这 种 较 高 浓 度 的 消 毒 液 水 平 下 几 乎 所 有 外 植 体 都 出 现 了 褐 变 死 亡 现 象 说 明 在 高 浓 度 的 消 毒 液 作 用 下 植 物 材 料 不 能 够 正 常 生 长 当 采 用 30 次 氯 酸 钠 消 毒 时 间 为 10 min 时 外 植 体 污 染 率 6 死 亡 率 0 在 外 植 体 污 染 率 较 低 的 前 提 下 也 能 保 证 外 植 体 的 存 活 消 毒 效 果 较 好 综 合 考 虑 最 适 的 铁 皮 石 斛 茎 段 外 植 体 消 毒 方 法 为 使 用 30 次 氯 酸 钠 水 溶 液 消 毒 10 min 表 1 不 同 消 毒 处 理 方 法 对 铁 皮 石 斛 外 植 体 消 毒 效 果 的 影 响 消 毒 时 间 min 20 次 氯 酸 钠 30 次 氯 酸 钠 40 次 氯 酸 钠 污 染 率 死 亡 率 污 染 率 死 亡 率 污 染 率 死 亡 率 5 100 0 45 0 14 82 10 100 0 6 0 40 100 15 97 0 0 28 0 100 20 81 5 0 87 0 100 2 2 不 同 培 养 基 对 铁 皮 石 斛 茎 段 腋 芽 诱 导 培 养 的 影 响 由 表 2 可 知 采 用 不 同 激 素 的 培 养 基 对 铁 皮 石 斛 茎 段 腋 芽 诱 导 的 情 况 差 异 明 显 在 单 独 使 用 BA 或 KT 时 虽 然 都 能 诱 导 出 腋 芽 但 芽 细 弱 颜 色 淡 绿 说 明 再 生 芽 内 源 生 长 素 含 量 较 低 需 要 在 培 养 基 中 添 加 外 源 激 素 当 添 加 NAA 后 再 生 芽 健 壮 且 诱 导 率 高 于 单 独 添 加 分 裂 素 BA 或 KT 当 使 用 KT 作 为 分 裂 素 时 诱 导 出 的 芽 细 弱 诱 导 率 不 高 同 时 随 着 KT 浓 度 的 增 加 再 生 芽 出 现 玻 璃130 2023 年 第 64 卷 第 1 期 化 现 象 说 明 KT 不 适 宜 铁 皮 石 斛 的 生 长 使 用 BA 作 为 分 裂 素 时 诱 导 出 的 再 生 芽 生 长 正 常 生 长 速 度 快 随 着 BA 浓 度 的 增 加 诱 导 率 也 增 大 当 BA 浓 度 为 2 0 mg L 1 时 再 生 芽 生 长 快 且 健 壮 诱 导 率 5 6 因 此 选 择 MS 2 0 mg L 1 BA 0 5 mg L 1 NAA 作 为 铁 皮 石 斛 茎 段 诱 导 腋 芽 的 诱 导 培 养 基 表 2 不 同 培 养 基 对 铁 皮 石 斛 茎 段 腋 芽 诱 导 培 养 的 影 响 培 养 基 平 均 每 个 侧 芽 诱 导 系 数 再 生 芽 生 长 情 况 1 mg L 1 BA 2 3 细 弱 颜 色 淡 绿 色 1 mg L 1 BA 0 5 mg L 1 NAA 3 3 健 壮 颜 色 正 常 2 mg L 1 BA 0 5 mg L 1 NAA 5 6 健 壮 颜 色 深 绿 1 mg L 1 KT 1 2 细 弱 颜 色 发 黄 1 mg L 1 KT 0 5 mg L 1 NAA 2 7 细 弱 有 玻 璃 化 现 象 2 mg L 1 KT 0 5 mg L 1 NAA 1 8 细 弱 都 为 玻 璃 化 苗 2 3 不 同 培 养 基 对 铁 皮 石 斛 丛 生 芽 增 殖 培 养 的 影 响 由 表 3 可 知 不 同 激 素 的 培 养 基 对 铁 皮 石 斛 丛 生 芽 增 殖 情 况 差 异 明 显 在 单 独 使 用 生 长 素 IBA 或 NAA 时 虽 然 都 有 一 定 的 增 殖 但 增 殖 率 不 高 且 丛 生 芽 生 长 缓 慢 说 明 丛 生 芽 内 源 激 素 含 量 较 低 需 要 在 培 养 基 中 添 加 外 源 激 素 添 加 BA 后 增 殖 系 数 高 于 单 独 使 用 IBA 或 NAA 当 使 用 IBA 作 为 分 裂 素 时 增 殖 出 的 芽 生 长 缓 慢 再 生 芽 长 势 弱 同 时 加 入 BA 后 再 生 芽 的 长 势 稍 好 但 生 长 也 缓 慢 说 明 IBA 不 适 宜 铁 皮 石 斛 生 长 当 使 用 NAA 作 为 分 裂 素 时 再 生 芽 芽 势 正 常 且 生 长 快 生 长 素 与 分 裂 素 比 例 为 1 2 时 更 利 于 铁 皮 石 斛 的 生 长 当 NAA 浓 度 为 0 5 mg L 1 BA 浓 度 为 1 mg L 1 时 再 生 芽 长 势 健 壮 生 长 快 增 殖 系 数 3 8 因 此 最 佳 的 增 殖 培 养 基 为 MS 0 5 mg L 1 NAA 1 mg L 1 BA 表 3 不 同 培 养 基 对 铁 皮 石 斛 丛 生 芽 增 殖 培 养 的 影 响 培 养 基 平 均 每 个 侧 芽 增 殖 系 数 丛 生 芽 芽 生 长 情 况 0 5 mg L 1 IBA 1 6 芽 势 细 弱 生 长 缓 慢 0 5 mg L 1 IBA 1 mg L 1 BA 2 8 芽 势 一 般 生 长 较 慢 1 mg L 1 IBA 0 5 mg L 1 BA 2 2 芽 势 细 弱 生 长 较 慢 0 5 mg L 1 NAA 2 8 芽 势 正 常 生 长 较 快 0 5 mg L 1 NAA 1mg L 1 BA 3 8 芽 势 健 壮 生 长 快 1 mg L 1 NAA 0 5 mg L 1 BA 1 4 芽 势 细 弱 生 长 缓 慢 有 玻 璃 化 现 象 2 4 不 同 生 长 素 对 铁 皮 石 斛 组 培 苗 生 根 生 长 的 影 响 由 表 4 可 知 在 不 同 的 培 养 基 中 铁 皮 石 斛 组 培 苗 生 根 数 量 长 度 及 生 根 质 量 明 显 不 同 在 使 用 IAA 作 为 生 根 诱 导 激 素 时 生 根 数 量 较 少 根 长 较 短 且 诱 导 出 的 再 生 根 基 本 都 是 短 粗 生 长 缓 慢 的 肉 质 根 不 具 有 根 的 功 能 移 栽 时 不 易 成 活 在 使 用 NAA 作 为 生 根 诱 导 激 素 时 诱 导 出 的 根 生 长 迅 速 平 均 根 长 明 显 长 于 IAA 诱 导 出 的 根 长 同 时 诱 导 出 的 均 为 生 长 正 常 的 根 具 有 主 动 吸 收 功 能 可 以 进 行 直 接 移 栽 当 NAA 的 用 量 为 0 5 mg L 1 时 平 均 生 根 数 为 7 3 条 平 均 根 长 达 5 8 cm 且 都 为 生 长 快 的 正 常 根 当 继 续 增 加 NAA 的 用 量 时 再 生 出 的 根 生 长 速 度 有 一 定 的 下 降 且 在 个 别 植 株 上 出 现 了 玻 璃 化 现 象 说 明 高 浓 度 的 NAA 开 始 对 组 培 苗 产 生 毒 害 作 用 综 上 所 述 最 佳 的 铁 皮 石 斛 组 培 苗 生 根 培 养 基 配 方 是 MS 0 5 mg L 1 NAA 表 4 不 同 激 素 对 铁 皮 石 斛 组 培 苗 生 根 的 影 响 激 素 平 均 生 根 数 平 均 根 长 cm 生 根 质 量 及 生 长 情 况 0 5 mg L 1 IAA 1 2 2 1 肉 质 根 生 长 缓 慢 1 0 mg L 1 IAA 2 5 3 0 肉 质 根 生 长 较 慢 2 0 mg L 1 IAA 2 9 2 6 肉 质 根 生 长 缓 慢 0 2 mg L 1 NAA 5 1 4 9 正 常 根 生 长 较 快 0 5 mg L 1 NAA 7 3 5 8 正 常 根 生 长 快 1 0 mg L 1 NAA 6 6 3 4 正 常 根 生 长 较 快 3 讨 论 铁 皮 石 斛 再 生 植 株 具 有 多 种 获 取 途 径 常 用 的 方 式 是 使 用 铁 皮 石 斛 种 子 进 行 无 菌 播 种 形 成 原 球 茎 再 通 过 原 球 茎 增 殖 分 化 发 育 成 完 整 再 生 植 株 12 也 可 以 通 过 诱 导 茎 段 茎 尖 幼 芽 或 叶 片 等 外 植 体 形 成 丛 生 芽 来 获 取 再 生 植 株 13 本 试 验 采 用 后 者 以 茎 段 为 外 植 体 建 立 了 一 套 完 整 的 诱 导 腋 芽 萌 发 增 殖 生 根 培 养 快 繁 体 系 铁 皮 石 斛 使 用 工 厂 化 生 产 育 苗 可 以 在 一 定 时 间 内 生 产 大 量 整 齐 度 良 好 的 瓶 苗 14 在 工 厂 化 育 苗 中 使 用 种 子 扩 繁 要 优 于 茎 段 其 优 势 主 要 体 现 在 起 始 阶 段 的 种 子 外 植 体 感 染 率 较 低 且 种 子 的 增 殖 系 数 显 著 高 于 茎 段 等 但 诱 导 种 子 萌 发 诱 导 原 球 茎 所 需 的 周 期 较 长 且 因 种 子 是 通 过 杂 交 授 粉 得 到 的 其 遗 传 性 不 稳 定 由 种 子 再 生 的 植 株 经 过 多 次 继 代 受 环 境 以 及 添 加 的 外 源 激 素 的 影 响 易 改 变 其李 得 萍 等 铁 皮 石 斛 组 培 快 繁 技 术 131 原 有 的 性 状 进 而 出 现 性 状 分 离 的 现 象 以 茎 段 为 外 植 体 进 行 腋 芽 诱 导 增 殖 出 来 的 植 株 其 遗 传 稳 定 性 高 能 较 好 地 保 持 原 有 亲 本 植 株 的 性 状 15 本 试 验 选 用 30 次 氯 酸 钠 来 对 茎 段 进 行 外 植 体 消 毒 消 毒 10 min 外 植 体 污 染 率 为 6 死 亡 率 为 0 消 毒 效 果 高 于 其 他 浓 度 的 次 氯 酸 钠 以 及 HgCl 2 等 常 用 消 毒 液 16 17 诱 导 茎 段 腋 芽 萌 发 阶 段 可 以 通 过 采 用 添 加 一 些 外 源 激 素 来 加 快 其 增 殖 和 生 长 本 试 验 诱 导 培 养 基 为 MS 2 0 mg L 1 BA 0 5 mg L 1 NAA 诱 导 系 数 5 6 再 生 芽 生 长 快 且 健 壮 增 殖 阶 段 采 用 生 长 素 与 分 裂 数 比 例 为 1 2 时 更 适 宜 铁 皮 石 斛 的 生 长 丛 生 芽 生 长 健 壮 增 殖 率 高 本 试 验 增 殖 培 养 基 为 MS 0 5 mg L 1 NAA 1 0 mg L 1 BA 增 殖 率 3 8 综 上 所 述 本 研 究 以 茎 段 为 外 植 体 优 化 了 铁 皮 石 斛 组 培 快 繁 体 系 使 用 茎 段 诱 导 腋 芽 萌 发 增 殖 的 方 法 可 以 成 为 一 种 稳 定 繁 殖 优 株 的 途 径 为 铁 皮 石 斛 繁 育 和 优 质 种 苗 生 产 提 供 了 参 考 依 据 参 考 文 献 1 寇 战 利 陈 社 论 刘 冰 林 等 铁 皮 石 斛 多 糖 对 糖 尿 病 大 鼠 脂 代 谢 异 常 的 改 善 作 用 及 机 制 J 广 州 中 医 药 大 学 学 报 2021 38 11 2462 2468 2 刘 杰 陈 双 雪 何 柳 等 铁 皮 石 斛 药 用 价 值 研 究 探 索 J 中 国 林 副 特 产 2021 4 73 75 3 舒 杰 铁 皮 石 斛 的 应 用 价 值 及 林 下 仿 野 生 栽 培 技 术 J 现 代 农 业 科 技 2021 24 61 69 4 张 明 夏 鸿 西 朱 利 泉 等 石 斛 组 织 培 养 研 究 进 展 J 中 国 中 药 杂 志 2000 25 6 3 6 5 周 艳 荣 铁 皮 石 斛 组 织 培 养 快 速 繁 殖 技 术 的 优 化 D 呼 和 浩 特 内 蒙 古 农 业 大 学 2018 6 贾 红 茹 王 丽 英 李 焕 明 等 铁 皮 石 斛 的 特 性 及 其 人 工 栽 培 技 术 J 安 阳 工 学 院 学 报 2010 9 6 86 87 7 陈 瑞 蕊 林 先 贵 施 亚 琴 药 用 石 斛 及 其 组 培 技 术 研 究 概 要 J 江 苏 农 业 科 学 2002 30 5 64 66 8 赖 佳 铁 皮 石 斛 液 体 悬 浮 培 养 和 人 工 种 子 的 研 究 D 成 都 四 川 农 业 大 学 2013 9 许 丁 帆 李 建 科 刘 艳 军 等 铁 皮 石 斛 愈 伤 组 织 稳 定 培 养 体 系 的 建 立 J 天 津 农 业 科 学 2018 24 8 67 69 90 10 邱 诗 春 张 世 平 冯 山 柴 等 铁 皮 石 斛 种 子 快 繁 培 养 体 系 的 优 化 J 江 苏 农 业 科 学 2021 49 3 58 61 11 胡 佳 丽 铁 皮 石 斛 种 子 组 织 培 养 条 件 的 优 化 研 究 D 杭 州 浙 江 农 林 大 学 2018 12 陈 志 汪 一 婷 吕 永 平 等 铁 皮 石 斛 无 菌 播 种 成 苗 体 系 优 化 J 浙 江 农 业 学 报 2018 30 11 1870 1878 13 欧 阳 凡 董 文 宾 付 瑜 等 铁 皮 石 斛 茎 段 快 繁 技 术 的 研 究 J 生 物 技 术 通 报 2016 32 3 63 67 14 陈 潇 倩 铁 皮 石 斛 工 厂 化 生 产 技 术 研 究 D 福 州 福 建 农 林 大 学 2016 15 黄 艳 艳 仉 劲 付 均 惠 等 铁 皮 石 斛 人 工 繁 育 技 术 J 北 方 园 艺 2021 2 115 123 16 任 洁 铁 皮 石 斛 组 培 苗 培 养 及 丛 生 芽 增 殖 体 系 的 建 立 D 南 京 南 京 师 范 大 学 2015 17 高 燕 李 泽 生 耿 秀 英 等 铁 皮 石 斛 杂 交 种 组 织 培 养 技 术 试 验 J 热 带 农 业 科 技 2014 37 2 21 24 责 任 编 辑 张 瑞 麟