兰花组织培养研究进展.pdf

兰花组织培养 研究进展 穆 玉 珍 朱美 瑶 重庆 师 范大 学 生 命 科 学学 院 重庆 沙 坪 坝 401331 综述 了目 前 兰 科 植物 组织培养 的研 究进展 着 重 从 外 植 体 的选 择与 消 毒 褐 化 的 防 控 基 础 培养 基 植物 生 长 调 节 剂 配 方 天 然 植物 成 分 等方 面 阐 述 了 兰花组织培养 技术研 究进展 并总 结 了目 前 兰花组织培养 过程 中的 常见问题 同 时 对 未 来 兰花 的研 究 进 行了 讨 论 与展 望 兰 科 植物 外 植 体 组织培养 培养 基 试验 体 系 也 在 不 断 的 试验 研究 中 逐渐 形 成 试验中 通 常 取 蒴 果 进 行 消 毒 在 无 菌 条件 下 剖 开 蒴 果 取 出种 子 播 种 到培 养 瓶 中 不 同时 期 的 蒴 果 萌 发 率 不 同 有 试验 表 明 春 兰 种 子 作为 外 植 体时 授 粉 后 8 9个 月 的 种 子 萌 发 率 较 高 而 墨 兰 的 种 子 在 3 5个 月 时 容 易 萌 发 2 3 预 处 理 也可 以 提 高种 子 的 萌 发 率 研究 者 对 种 子 进 行 1min的 超声 波 处 理 种 子萌 发 率 达 到 20 用 蜗 牛 酶 处 理 2 3min 种 子萌 发 率 可 达 70 以 上 4 1 2 叶 片 叶 片也可 作为 组织培 养 的 材 料 其 取 材 对 母 株 的 伤 害 不 大 受季 节 影响 较 小 一 般 选 取 试 管 苗 幼 嫩 的 叶 片 其 更 容 易诱 导 原 球 茎 而 成 熟 植 株 的 叶 片 诱 导 成 功 的研究较 少 多 发 生 褐 化 死亡 杨 美 纯 等 5 研究 发现 叶 片 正 面 向 上 放 置 时 诱 导 率 更 高 且对 叶 片 进 行 切 割 更 利 于 切 割 边 缘 诱 导 出 原 球 茎 切 块 应 大 于 0 5cm 0 5cm 否 则 容 易 褐 化 死亡 1 3 花 梗 花 梗 常 作为 外 植 体 材 料 在 多 种 兰 科植 物中 皆 有 运 用 如 蝴蝶 兰 大 花 蕙 兰 文 心 兰 等 国 兰 以 花 梗 作为 外 植 体 的研究较 少 多 集 中 在 种 子 茎 通 过对 石 斛 兰 的研究 发现 用 带 有 节 间的 花 梗 进 行 诱 导 会 出 现 大 部 分 死亡 从 而使 诱 导 效 率 较 低 6 花 梗 的 取 材 受 到 季 节 影响 通常不 同时 期 的 花 梗 诱 导 率 也 不 同 有 试验发 现 开花后 的 花 梗 比 开花 前 幼 嫩 的 花 梗 更 容 易诱 导 出 芽 7 具 体 的 原 理 还 有 待 探 究 1 4 茎尖 茎 尖 是最 早 用 于 兰 花 组织培 养 的 外 植 体 早 在 1960年 Morel 8 采 用 大 花 蕙 兰 的 茎 尖 诱 导 分 化 出 了 植 株 但 茎 尖 的 切取 会 对 母 株 造 成 较 大 伤 害 而 且 在 茎 尖 的 培 养 中 容 易 出 现 褐 化现 象 9 茎 尖 多选 用 幼 嫩 的部 分 作为 材 料 其 细 胞 分 裂 旺 盛 是组织培 养 的 重 要 材 料 同时茎 尖 的 大 小 部 位 也是 重 要 影响 因 素 一 般 认 为 带 有 1 叶 原 基 的 茎 圆 锥 成 活 率 高 中 间部 位 的 侧 芽 成 活 率 高 茎 尖 的诱 导 率 也 与 接 种 方 式有 关 在 对 文 心 兰 的研究 中发现 茎 尖竖 直 接 种 诱 导 率 更 高 10 1 5 其 他 外 植 体 根 尖 也 能 用 于 组织培 养 洋 兰 中 有 成 功 的 案 例 但 兰 科植 物 种 类繁多 约 有 700属 20000种 分布 辽 阔 多 生于温 带 和 亚 热带 地区 其 姿 态 优 美 花 色 淡雅 花 香 清 幽 被 誉 为 花 中 君 子 再 加 上 历 来文 人 墨客吟 诗 作 赋 赋 予 了 兰 花 高 洁 傲岸 的 文 化 形 象 使得 兰 花 颇 受 人 们喜 爱 具 有 极 大 的 观赏 价值 同时也 具 备 一 定 的 商 业 价值 此 外 部 分 兰 科植 物 也可 入 药 有 着 极 高 药 用 价值 然 而 在 自然 条件 下 兰 花 生 长 周 期 过 长 且其 无性 和有 性 繁殖存 在 许 多 困 难 因 此 很难 进 行 大 量 繁 殖 和 生 产 近 年来 随 着 社 会 的 发 展和 人 们生 活 水平的 提 高 人 们 对 兰 花 这 类 观赏 植 物 的 需 求 也 日 益 增 大 而 传 统 的 兰 花 繁殖 与 生 产 方 式 难 以 满 足 需 求 兰 花 组织 培 养 技术 能 够 缩 短 培 养 周 期 提 高 繁殖 系 数 不 受季 节 影响 同时 降低 了 生 产成本 可 以 在 短 时 间 内 通 过无性 繁殖 大 量 生 产 兰 花 目 前 的研究 对 象 多 集 中 在 蝴蝶 兰 蕙 兰 春 兰 墨 兰 君 子 兰 建 兰 等 学 者 们 就 外 植 体 的 选择 培 养 基 配 方 褐 化现 象 等 进 行 了 深 入 研究 为 工业 化 生 产 和 保护 濒 危 种 类 奠 定 了 技术 基 础 1 外 植 体的选择 目 前 对 兰 科植 物 组织培 养 的研究 选择 的 外 植 体 多 为 某 些 特 定 部 位 具 有 一 定 的 局 限 性 通 过对 兰 花不 同外 植 体 的研究 能 够 扩 大 兰 花 组织培 养 的 材 料 范 围 减 少对 母 株 的 伤 害 兰 花 的 种 子 叶 片 根 尖 花 梗 茎 尖 子 房 花 萼 花 丝 等 都 可 作为 外 植 体 兰 科植 物 的 种 类 外 植 体 的 选择 不 同 试验 结 果 会 存 在 一 定 的 差异 1 1 种 子 兰 花 蒴 果 中 的 种 子数量 众 多 但 种 子 细 小 胚 发 育 不 完 整 且无 胚 乳 种 皮 结构致 密 在 自然 环境 下 不 易 萌 发 种 子 的 非 共 生 萌 发 是 生 产 兰 花 杂 交 花 苗的 重 要 方 式 具 有 广 阔 的研究 前 景 同时也是一 个 技术 难 点 Bernared 1 早 在 1909年 将 卡 特 兰 Cattleya 与 雷 丽 兰 Laelia 的 杂 交 种 子 接 种 到培 养 基 中 成 功 进 行 了 非 共 生 萌 发 开 创 了 非 共 生 萌 发 的先 例 种 子 非 共 生 萌 发 的 基 金 项 目 重 庆 师 范 大 学 大 学 生 创新创 业 训练 计 划 项目 X201910637035 作 者 简 介 朱美瑶 1999 女 重 庆 万 州 人 本 科在 读 研 究 方 向 生 物 科 学 穆玉珍 199 女 重 庆 江 津 人 本 科在 读 研 究 方 向 生 物 科 学 试验 研究 现代 园 艺 2021年 第 1期 輦輲訛 国 兰 的 报 道 较 少 花 丝也可 作为 外 植 体 其 不 易 染 菌 材 料 易 得 一 般 选 取 未 绽 放 的 花 蕾 进 行 消 毒 处 理 邢 桂 梅 等 11 成 功 用 君 子 兰 的 花 丝 诱 导 出 愈 伤 组织 并 发现 活 性 炭 对 花 丝 愈 伤 组织 的诱 导 和 分 化 有 抑 制 作 用 2 消毒 方 式 消 毒 是 否 彻 底 将 直 接 影响 试验 的 成 功 率 通常用 到 的 消 毒 试 剂有 酒 精 升 汞 次 氯 酸 钠 过 氧 化 氢 等 升 汞 为 剧 毒 物 质 次 氯 酸 钠 具 有 氧 化 性且无 毒 可 代 替 升 汞 但 升 汞 的 消 毒 效 果 优 于 次 氯 酸 钠 高 壮壮 等 12 将 蝴 蝶 兰 花 梗 用 2 过 氧 化 氢 消 毒 10min 再 用 10 次 氯 酸 钠 消 毒 15min 达 到 的效 果 与 0 1 升 汞 消 毒 效 果 无 明 显差异 以 此 方 式 代 替 升 汞 消 毒 具 有 重 要 意义 在 消 毒 过 程 中 消 毒 剂 的 浓 度 消 毒 的 时 间 以 及 外 植 体 的 保存 时 间 等 都会 直 接 影响 外 植 体 的 消 毒 效 果 一 般 用 75 的 酒 精消 毒 30 45s 0 1 的 升 汞 消 毒 5 8min 10 的 次 氯 酸 钠 消 毒 20min 13 有 试验发现 外 植 体 现 取 现 用 时 污染 率 最 小 随 着时 间 增加 污染 率 增加 当 保存 时 间 超 过 7d时 污染 率 最 大 达 到 100 14 不 同 的 外 植 体 的 消 毒 方 式有 所 差异 种 子 一 般 选 用 蒴 果 进 行 消 毒 处 理 若 选 用 种 子 直 接 进 行 消 毒 则 不 可 用 75 酒 精消 毒 可 选 用 2 次 氯 酸 钠溶 液 消 毒 6min 15 花 梗 茎 等 消 毒 完 毕 后 需 将 其 与 消 毒 剂 接 触 部 分 切 除 所以 消 毒 前 外 植 体要 切取 足 够 的 体积 3 防止褐 化 的 方 法 褐 化 是 在 组织培 养 过 程 中 外 植 体 中 的 酚 类 物 质 被 氧 化 成了 褐 色 的 醌 类 物 质 抑 制了其 他 酶 的 活 性 从 而 导致 外 植 体 发 生 褐 变 死亡 的 现 象 褐 化 与 多 种 因 素 有 关 如 外 植 体 的 选择 取 材 时 间 大 小 生 理 状 态 培 养 基 成分 培 养 条件 以 及 试验 预 处 理 等 研究 发现 蝴 蝶 兰 带 腋 芽 的 花 梗 要 比 不 带 腋 芽 的 褐 化 程 度 低 花 梗 的 褐 化 程 度 低 于 花 萼 16 17 一 般 认 为 处 于生 长 旺 盛期 的 外 植 体 其 褐 化 程 度 更 小 与 PVP相 比 活 性 炭 是 非 专 一 吸 附 剂 不 仅 会 吸 附酚 类 物 质 还 会 吸 附 其 它植 物 组 织 生 长 所 需要 的 物 质 因 此 会 影响 外 植 体 生 长和 诱 导 而 PVP也因 不 同外 植 体产 生的 酚 类 物 质 有 所 差异 而 效 果 不 同 通 过对 蝴蝶 兰 的研究 表 明 在 含 有 1 Vc 溶 液 培 养 皿 中 切取 茎 尖 再将 茎 尖 接 种 到 含 有 0 2 聚 乙 烯吡咯 烷酮 PVP 的 培 养 基 中 可 以 减 少 褐 化发 生 7 研究 发现 活 性 炭 抑 制 褐 化 效 果 较 Vc高 18 热 激 处 理 也可 以 减 小 褐 化 程 度 试验发现 40 热 激 9min 并 结 合 0 1 水 杨 酸 处 理 能 有 效 抑 制 蝴蝶 兰 的 褐 化 19 在 初 期 培 养 中 进 行 一 段 时 间的 暗 培 养 能 降 低 褐 化 率 但 时 间 过 长 会 影响 生 长 在 对 春 兰 褐 化 的防 控 中 发现 暗 培 养 10d的 褐 化 率 最 低 暗 培 养 20 30d 的 褐 化 率 迅 速 升 高 17 当 外 植 体 发 生 褐 化 后 可 切 除 褐 化 部 分 将 健 康 部 分 转 入 新 的 培 养 基 中 以 防 止 褐 化 4 基础培养基 在 国 内 学 者 的研究 中 兰 花 组织培 养 所 采 用 的 基 础 培 养 基 一 般 为 MS和 VW 其 中 VW培 养 基 一 般 用 于 培 养 气 生 兰 花 例 如 有 试验 证 明 最 适宜 蝴蝶 兰 花 梗 生 长 的 培 养 基 配 方为 MS培 养 基 而适宜 蝴蝶 兰 根 培 养 的 培 养 基 为 1 2MS培 养 基 20 在 君 子 兰 的 培 养 过 程 中 诱 导 生 根 多 用 1 2MS培 养 基 诱 导 四 倍 体 形 成 和 愈 伤 组织 形 成 多 用 MS培 养 基 21 在 墨 兰 以 胚 诱 导 原 球 茎 的 形 成过 程 中 1 2MS的效 果 最好 在 花芽和 茎 尖 诱 导 原 球 茎 形 成 的 过 程 中 以 MS培 养 基 培 养 效 果 最 佳 3 还 有 学 者 通 过 正 交 试验 得 出 MS对 墨 兰 根 状 茎分 化 率 的 影响显 著 当 MS含 量 由 小 到 大 逐渐 增加时 对 墨 兰 根 状 茎分 化 率 的 影响 效 果 为 先 减 小 后 增 大 22 5 植 物 生 长 调节剂 植 物 生 长调 节 剂 可 影响 和有 效 调 控植 物 的生 长和 发 育 一 般 由人 工 合成 的 或 从 微 生 物中 提 取 其 生 理和 生 物学 效 应 与 植 物 激 素 相 似 在 兰 花 的 组织培 养 中 有 着 重 要 作 用 在 兰 花 组织培 养 中 常用 的植 物 生 长调 节 剂有 6 BA NAA 2 4 D IAA 不 同 种 类 不 同 浓 度 的 植 物 生 长调 节 剂 对 兰 花 的生 长和 诱 导 会 起 到 不 同 的 作 用 有 试验 表 明 6 BA对 蝴蝶 兰 花 梗 腋 芽 的 萌 发 具 有 明显 的 促 进 作 用 且 在 一 定 浓 度 范 围 内 随 着 6 BA浓 度 的 升 高 花 梗 侧 芽 分 化 率 逐渐 提 高 23 而 在 胚 诱 导 原 球 茎 试验中 6 BA的 浓 度 低 于 0 5mg L时对 胚 萌 发 无 明显影响 高 于 0 5mg L时 起 抑 制 作 用 NAA浓 度 在 低 于 0 5mg L时 随 着 浓 度 的 增加对 胚 萌 发 的 促 进 作 用 逐 步 增强 超 过 这 个 浓 度也 会 起 抑 制 作 用 3 在 墨 兰 种 子 无 菌萌 发 的 正 交 试验中发现 R NAA R 6 BA R MS 即 NAA对 墨 兰 种 子 发 芽 率 的 影响 效 果 最 大 6 BA次 之 MS最 小 22 也 有 试验 表 明 2 4 D在 愈 伤 组 织 的 形 成 及 分 化方 面有 积 极 作 用 NAA在 拟 原 球 茎分 化方 面 也 有 重 要 的 作 用 24 在关于 文 心 兰 的 有 关 试验 中发现 培 养 基 中 添 加 TDZ有 利 于诱 导 花 梗 芽 转 化为 营 养 芽 25 6 天然 植 物 成分 在 兰 花 的 组织培 养 中 还 可 选择 性 地 添 加一 些 天 然 植 物 组织成分 如 香 蕉 泥 马铃 薯 匀 浆 椰 乳 等 对 兰 花 的生 长 也 能 起 到 促 进 作 用 有 试验 表 明 在 培 养 基 中 添 加 10 香 蕉汁 液 较 适 合 大 花 蕙 兰 组培 苗的诱 导 生 根 26 在 大 花 蕙 兰 原 球 茎增 殖 及 芽 苗 分 化试验中 香 蕉 泥 促 进效 果 最好 9 在 蝴蝶 兰 组织培 养 体 系 的研究 中发 现 添 加 土 豆 泥 或 香 蕉 泥 的 培 养 基 分 化 生 长 状 况 均 较 好 分 化 率 都 可 达 到 90 以 上 23 7 展望与讨论 植 物 组织培 养 技术 是目 前 发 展 较 为 成 熟 的 现代 生 物 技术 之一 也是 重 要 的 基 础 研究 手 段 之一 兰 科植 物 2021年 第 1期 现代 园 艺 试验 研究 輦輳訛 上 接 第 23页 量 降低 花 瓣 内相 对 电 导 率 进 而 延 长 芍 药 切 花 瓶 插 期 寿命 和 盛 花 期 天 数 12 Ca 2 在 八 仙 花 鲜 切 花 保 鲜 中 的 作 用 以 往 研究 中 鲜 有 报 道 本 次 试验 设 置 试验 组 14 16探 讨 Ca 2 对 于 切 花 保 鲜 的 作 用 结 果 显 示 在 瓶 插 过 程 中 尤 其是 瓶 插后 期 低 浓 度 的 Ca 2 对 于 保 持 八 仙 花 鲜 切 花 鲜 重 和花 径 有 积 极影响 STS是 乙 烯拮 抗 剂 具 有 低 毒 稳 定 易 移 动 等 特 点 可 起 到 延缓 花 衰老 的 作 用 13 刘 萍 等 11 研究 表 明 STS SB处 理 能 延 长 牡 丹 切 花 的 单 花 寿命 有 利 于提 高 花 瓣 中 可 溶 性 糖 可 溶 性 蛋 白 质 含 量 增强 超 氧 化物 歧 化 酶 SOD 活 性 降低 丙 二 醛 MDA 含 量和花 瓣 浸 出 液 相 对 电 导 率 REC 的 上 升 幅 度 14 而 本 试验 结 果 显 示 STS对 于 八 仙 花 鲜 切 花 保 鲜 不 利 主 要体 现 在 其加 速 花 瓣萎蔫 无 法 保 持 花 梗 直立 使 切 花 鲜 重 和花 冠 径 显 著 降低 等 方 面 关于 STS对 八 仙 花 鲜 切 花 的 毒 害 作 用 其 中作 用 机 理 值得 进 一 步 探 究 收稿 2020 07 23 1 任洁 八仙花 的 应 用及研 究进展 J 绿 色 科 技 2018 13 165 167 2 宋 振 洲 张 翠 欣 焦 卫 东 等 八仙花 盆 栽 管 理 技术 J 河 北林 业 科 技 2009 05 108 109 3 李 青 绣 球 属 观 赏 植物研 究进展 及 在 西 藏 发 展 前 景 J 西 藏 科 技 2019 02 66 68 4 白 桦 王培 不同 pH值 保鲜 液 对 八仙花 切 花瓶插 寿命 的 影响 J 宁 夏 农林 科 技 2013 54 11 14 16 5 吴文杰 林 少 峰 陈 荣 顺 等 8 HQ瓶插液 保鲜 绣 球 花 效 应 的研 究 J 现 代 园艺 2017 05 7 9 6 班 伟 木 醋 液 对 八仙花瓶插 寿命 及 生 理 特 性的 影响 J 南 方农 业 2016 10 03 94 97 7 黄 剑 波 张 英 慧 不同 环境 下 的 8 HQS和 CA对 香石竹 的保鲜效 果研 究 J 安 徽 农 业 科 学 2008 03 965 967 1031 8 刘 伟 杨 茂 云 常 征 不同 浓 度 水杨 酸 保鲜 液 对 康 乃馨 切 花 保鲜的 影 响 J 安 徽 农 学 通 报 2017 23 04 30 32 9 白 建 波 周 银 丽 罗 冰 柠檬 酸 代 替 AgNO 3对 香石竹切 花 保鲜效果 的研 究 J 湖 北农 业 科 学 2010 49 10 2466 2468 10 赵 丽 孙 百 灵 韩立 双 等 CaCl 2对 康 乃馨 鲜 切 花 保鲜的 影响 J 延 边 大 学 农 学学 报 2014 36 04 352 355 11 刘萍 范 琪琪 丁 义 峰 等 不同 浓 度 硫 代 硫 酸 银 和 苯 甲酸 钠 组 合 对 牡 丹 切 花 衰老 的 调 节 作 用 J 北方 园艺 2017 04 124 127 12 张 玉 李 伟 Ca NO 3 2对 芍 药 切 花瓶插 期 生 理 和 观 赏 品 质 的 影响 J 北方 园艺 2019 19 81 87 13 黄海 泉 江 婷 樊 国 盛 等 STS对 六 出 花 切 花 生 理 效 应 的 影响 J 江 西 农 业 大 学学 报 2014 2 295 299 14 刘萍 范 琪琪 丁 义 峰 等 不同 浓 度 硫 代 硫 酸 银 和 苯 甲酸 钠 组 合 对 牡 丹 切 花 衰老 的 调 节 作 用 J 北方 园艺 2017 04 124 127 生 长 周 期 长 在 自然 环境 中 繁殖 慢 运 用 组织培 养 技术 可 以 实 现 兰 科植 物 的 快 速 繁殖 以 满 足 市场 所 需 此 外 在 兰 花 组织培 养 过 程 中 产 生的 次 生 代 谢 物 有药用 价值 如 君 子 兰 中 含 有 的 抗 病 毒 和 抗 癌 的 物 质 这些 物 质无 法 在 体外合成 次 生 代 谢 产 物 的研究 也是组织培 养 的 重 要 方 向 种 子 的 无 菌萌 发 也 有 重 要 意义 是 杂 交 品 种 培 育 的 唯 一 方 式 为 兰 花 优 良 性 状 的 选择 提供 了 技术 基 础 兰 花 的 组织培 养 加 快 了 兰 花 的 工业 化 生 产 为 基 因 转 化 提供 了 材 料 为 保护 珍 稀 品 种 奠 定 基 础 但 兰 花 组织培 养 在 实际 的 操 作中 仍 存 在 不 少难 题 如 组 织培 养 过 程 中 褐 化 次 生 代 谢 物 的 污染 染 菌 等 问题 都会 给 兰 花 组织 的生 长 以 及 诱 导 分 化 造 成 不 利影响 因 此 兰 花 组织培 养 体 系 与 流 程 仍 需 进 一 步 探索 与 完 善 目 前 生 物 科 学发 展 较 为 迅 速 可 结 合 生 物化学 细 胞 生 物学 分 子 生 物学 等 在 兰 花 的 组织培 养 方 面 进 行 更 为 深 入 的研究 总 之 兰 花 组织培 养 技术 有 广 阔 的 发 展 前 景 及 较 高 的 实 用 价值 收稿 2020 07 01 1 BernardN Llevolutiondanslasymbioselesorchideesetleurschan pignonsconnensaux J AnnSciNatSer 1909 9 9 191 196 2 庞 惠 仙 一种 芽孢杆 菌 促 进 春 兰 等种 子萌发 试 验 方 法 初 报 J 植物 生 理 学 通 讯 2010 46 02 191 192 3 曾 宋 君 程 式君 张京丽 等 墨 兰 及 其 杂种的 组织培养与 快速 繁殖 J 广 西 植物 1998 02 58 61 4 明 兴 加 张 笑逸 伍淳操 等 兰 科 植物种 子 的 营 养 萌发 J 世界 科 学 技术 中 医 药现 代 化 2012 14 05 2077 2081 5 杨 美 纯 周 歧 伟 许 鸿 源 等 外 部 因 子 对 蝴蝶 兰 叶 片 原 球 茎 状 体 发 生 的 影响 J 广 西 植物 2000 01 42 46 6 陈和 明 江 南 吕 复 兵 等 澳洲 鸽 子石 斛 兰花 梗芽 组织培养 技术研 究 J OL 热 带 作 物 学 报 1 7 2020 06 16 7 王 仁 睿 李 明 福 韩 林波 等 蝴蝶 兰组织培养 体 系 的 建立 及 其 关键 技术研 究 J 中国农 学 通 报 2010 26 10 197 201 8 MorelG Producingvirus freeCymbidium J AmOrchidSocBull 1960 29 495 497 9 相 阳 杨同 梅 雷勤 峰 大花 蕙 兰组织培养 的 初 步 研 究 J 山 东林 业 科 技 2009 39 03 58 59 148 10 张 超 陈 立思 王 广 东 等 文 心 兰 茎尖 诱 导 原 球 茎 的 影响 因 子 研 究 J 广 东农 业 科 学 2008 04 27 31 11 邢 桂 梅 王 冲 吴 海红 等 君 子 兰花 丝离 体 培养影响 因 素 研 究 J 沈 阳 农 业 大 学学 报 2010 41 05 531 534 12 高 壮壮 娄 倩 刘 雅 莉 蝴蝶 兰 大 辣椒 组培 快 繁 技术 体 系 优 化 的 研 究 J OL 西 北林 学 院 学 报 1 7 2020 06 16 13 胡 瑶 李 宏 告 张 跃 龙 等 国 兰组培 中 外 植 体 高 效 消 毒 方 法 研 究 J 湖 南 农 业 科 学 2018 03 7 9 14 宋 火 元 不同 消 毒 处理 及保 存 时 间 对 蝴蝶 兰 外 植 体 脱 毒 效果的 影 响 J 现 代 园艺 2019 42 17 31 33 15 张 武 凡 刘红 霞 兰 科 植物种 子 表 面 消 毒 方 法 及 其 对种 子萌发率 的 影响 J 中国农 学 通 报 2014 30 25 235 238 16 余 慧 琳 王 爱 武 赵辉 等 蝴蝶 兰花 梗腋芽 离 体 快 繁 控 制 褐 变 的研 究 J 中国农 学 通 报 2009 25 09 192 195 17 王 宝 宁 张 显 宋 军 阳 秦 岭 野生 春 兰组织培养 过程 中的 褐 化 控 制 研 究 J 北方 园艺 2011 05 169 172 18 吴 晓霞 陈 刚 张 彪 等 植物 组织培养 中 褐 变 的研 究进展 J 河 北林 果研 究 2002 03 284 288 19 酒 立 君 易 盼盼 王 飞 等 热 激 结 合 水杨 酸 处理 对 蝴蝶 兰组培 褐 变 的 影响 J 西 北农 业 学 报 2015 24 03 144 149 20 曾 德 华 蝴蝶 兰组织培养 研 究 D 中 南 林 业 科 技 大 学 2015 21 王 纪 张 敏 黄 利 斌 君 子 兰组织培养 研 究进展 J 江 苏 林 业 科 技 2015 42 04 38 40 23 22 张 小 娟 陈 秀 萍 李 云 霞 等 墨 兰 种 子 无 菌 萌发 及 根 状 茎 诱 导 分 化 研 究 J 中国 园艺 文 摘 2017 33 10 12 16 23 王 常 芸 李 晓 亮 张京伟 等 蝴蝶 兰组培 快 繁 技术 体 系 研 究 J 北方 园艺 2013 15 122 124 24 周 根 余 谢 薇 程 磊 影响 铁 皮 石 斛 原 球 茎 生 长 的 若 干 因 素 J 江 西 科 学 1999 04 231 235 25 王 安 石 韩 松 陈 施明 等 切 花 文 心 兰花 梗芽 组培 快 繁 技术研 究 J 广 东农 业 科 学 2015 42 04 23 27 2 26 任 惠 陈 冠南 王 宏 等 不同 培养 基 对 大花 蕙 兰组织培养和 快速 繁 殖 的 影响 J 中国 热 带农 业 2013 04 58 60 试验 研究 现代 园 艺 2021年 第 1期 輦輴訛