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ICS 65 020 20 CCS B 05 41 河南省 地方标准 DB 41 T 2607 2024 蓝莓组培快繁技术规程 2024 02 01 发布 2024 05 01 实施 河南省市场监督管理局 发 布 DB 41 T 2607 2024 I 目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 培养基的选择与改良 1 5 外植体的选择与接种 2 6 苗木培养 2 7 炼苗与移栽 3 附录 A 资料性 改良 WPM 培养基配方 4 DB 41 T 2607 2024 II 前 言 本文件按照 GB T 1 1 2020 标准化工作导则 第 1部分 标准化文件的结构和起草规则 的规定 起草 本文件由河南省林业局提出并归口 本文件起草单位 平顶山市农业科学院 鲁山县瑞祥种植农民专业合作社 平顶山市农业农村局 平 顶山市林业局 内黄县林业发展中心 本文件主要起草人 周威 曹秀敏 梁建 张佳伟 姬书惠 余祖运 许俊国 岳高飞 曹青军 栗苗苗 张九林 李蕴莹 王新兰 郭克歌 冯晓艺 蒋钦群 肖婉露 法丹丹 DB 41 T 2607 2024 1 蓝莓组培快繁技术规程 1 范 围 本文件规定了蓝莓苗组培快繁过程中培养基 的选择与改良 外植体 的 选择及 接种 苗木 培养 炼苗 与 移栽等 本文件适用于河南省蓝莓组培种苗的繁育 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 4 培养基的选择与改良 WPM 培养基的改良 将 WPM培养中的 K2SO4 CaCL2 FeSO4 Na2EDTA改成 KNO3 190 mg L Ca NO3 2 4H2O 684 mg L C10H13FeN2NaO8 73 4 mg L 改良 WPM 培养基的母液配制 将改良 WPM培养基的化学成份按附 录 A所示的五大类分别用蒸馏水溶解后 配制成质量比为 1 20 1 100 1 200 1 200 1 200的母液 装入广口瓶 母液配制宜使用蒸馏水或去离子水 分别贴上标签 标注名称 配制倍数和日期 置于 2 4 冰箱保存 铁盐应存放在棕色容器中 激素的母液配制 将实验所需的玉米素 zeatin ZT 萘 乙酸 1 naphtahaleneacetin acid NAA 吲哚丁酸 indole 3 butyric IBA 用 1 mol L的 HCl或 95 酒精溶解 再用蒸馏水稀释后分别配制成 100 mg L的 母液 装入棕色广口瓶中 置于 2 4 冰箱保存 配制培养基 4 4 1 溶解琼脂 糖 按所需容量的 70 加蒸馏水 再加入 0 65 的琼脂 加热搅拌融化琼脂 琼脂融化后 加入 3 蔗 糖 稍加热使其溶解 4 4 2 添加母液 糖溶解后 按培养基的配方及所需数量 依次加入改良 WPM培养基母液和激素母液 并充分搅拌 DB 41 T 2607 2024 2 4 4 3 定容 调 pH 值 搅拌均匀后 加蒸馏水定容至所需体积 再充分搅拌 用 0 1 mol L的盐酸或 0 1 mol L的氢氧化钠 调节 pH至 5 2 0 1 芽诱导培养基 改良 WPM ZT 5 0 mg L 蔗糖 30 g L 琼脂粉 6 5 g L 增殖培养基 改良 WPM ZT 1 0 mg L IBA 0 1 mg L 蔗糖 30 g L 琼脂粉 6 5 g L 生根培养基 1 2改良 WPM IBA 0 1 mg L 蔗糖 25 g L 琼脂粉 6 5 g L 以上三种培养基 pH值均为 5 2 0 1 5 外植体的选择与接种 外植体的选择 5 1 1 取材时间和部位 取材应于春 秋两季蓝莓生长的旺盛时期 在晴朗的上午或午后没有露水时取材 避免低温阴雨天 气取材 从具有品种典型性状的健康植株上选择长势旺盛 生长健壮 带有 3 5个完整叶片的新生枝条 装入洁净的塑料袋封口带回实验室 2 4 冰箱保湿存放 所取材料 2 d内使用完毕 5 1 2 外植体预处理 用剪刀将嫩枝上的叶片剪下 用洗涤剂刷洗后 经自来水冲洗 30 min 40 min 无菌滤纸吸干水分 备用 外植体的消毒与接种 在用酒精消毒过的超净工作台面上 将清洗后的叶片一起先放入 75 乙醇溶液中振荡浸润 30 s 40 s 无菌水冲洗 4次 无菌滤纸吸干水分后 用 0 1 的升汞消毒 6 min 8 min 再用无菌水冲洗 5次 6 次 无菌滤纸吸干水分备用 将已消毒的幼嫩叶片置于无菌滤纸上 把叶片切成 1 cm见方的小块 接种到灭菌过的诱导培养基中 每瓶接种 3 4个材料 向下稍微按压 让切口充分接触培养基 6 苗木培养 芽诱导培养及方法 将外植体叶片接种到灭菌过的芽诱导培养基中培养 培养温度为 25 2 光照强度 60 mol m 2 s 1 100 mol m 2 s 1 光照时间 12 h d 16 h d 初代诱导培养时间一般为 3周 5周 为最大限度保持母本特性 宜以直接诱导不定芽为主 增殖培养及方法 诱导培养 3周 5周后 产生大量丛生芽 继续培养 当苗高 5 cm 6 cm时剪取丛生苗 截成 2 0 cm 3 0 cm长的茎段 接种在增殖培养基中培养 培养温度为 25 2 光照强度 60 mol m 2 s 1 100 mol m 2 s 1 光照时间 12 h d 16 h d 培养时间一般为 4周 6周 继代增殖代数宜控制在 10 15代 增值系数 2 5 4 0 生根培养及方法 DB 41 T 2607 2024 3 增殖培养 3周 4周后 苗子长到 4 cm 5 cm高时 剪取健壮一致的丛生苗接种到生根培养基上培养 培养温度为 25 2 光照强度度 60 mol m 2 s 1 100 mol m 2 s 1 光照时间 12 h d 16 h d 经 3周 4周培养 苗子长到 6 cm 8 cm高 基部长出 3 5条 1 cm 2 cm长的根时 即可进行炼苗移栽 7 炼苗与移栽 组培苗炼苗 炼苗时 选取具有该品种特征特性 生长健壮 叶色正常 根 茎 叶俱全的完整植株进行炼苗 首先将培养瓶放置在有散射光 60 mol m 2 s 1 100 mol m 2 s 1 的大棚或温室中 温度控 制在 25 2 封口培养 5 d 7 d后 再开口培养 3 d 4 d 炼苗前 10 d 检修大棚或温室 覆盖棚膜 并在裙膜下面放风口的位置固定 40 50目白色防虫网 同时准备和棚膜大小相同的 2针遮阳网 密闭棚室 用百菌清烟剂熏棚消毒 组培苗移栽 7 2 1 基质选择与配制 基质一般由泥碳土 珍珠岩 蛭石按 3 1 1 的比例混合而成 或用粗粒蛭石与沙以 3 1的比例混 合 装入 50孔黑色 PS标准穴盘 并稍压紧 用 0 5 g L的多菌灵 80 可湿性粉剂 溶液喷透备用 7 2 2 移栽 将洗干净的组培苗栽入事先装好基质的穴盘中 轻轻覆盖根部 稍作按压 幼苗不倒即可 待整个 穴盘栽满后用 600倍的百菌清或多菌灵喷雾或作定根水浇灌 最后将穴盘苗分品种 移栽日期 在苗床 上整齐摆放 盖薄膜保湿培养 DB 41 T 2607 2024 4 A A 附录 A 资料 性 改良 WPM 培养基配方 改良 WPM培养基配方参照表 A 1 表 A 1 改良 WPM 培养基配方 名称 成分 含量 mg L 大量 KNO3 190 MgS04 7H20 370 KH2P04 170 NH4N03 400 微量 MnS04 H20 22 5 ZnS04 7H20 8 6 CuSO4 5H20 0 25 Na2Mo04 2H20 0 25 钙盐 Ca N03 2 4H20 684 铁盐 C10H13FeN2NaO8 73 4 有机物 肌醇 100 甘氨酸 2 0 VB1 0 1 VB6 0 5 烟酸 0 5
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