赣南地区番茄青枯菌菌系多样性分析.pdf

任敏华 张静燕 崔晓东 等 赣南地区番茄青枯菌菌系多样性分析 J 华南农业大学学报 2022 43 1 67 76 REN Minhua ZHANG Jingyan CUI Xiaodong et al Diversity of Ralstonia solanacearum strains from tomato in the south of Jiangxi Province J Journal of South China Agricultural University 2022 43 1 67 76 赣南地区番茄青枯菌菌系多样性分析 任敏华1 张静燕2 崔晓东1 陈荣华2 刘琼光1 3 1 华南农业大学 植物保护学院 广东 广州 510642 2 赣州市农业科学研究所 江西 赣州 341000 3 广东省微生物信号与作物病害防控重点实验室 广东 广州 510642 摘要 目的 分离鉴定赣南地区番茄青枯病菌 明确菌系分化 为当地番茄抗青枯病育种和病害防治奠定基础 方法 从江西省赣南地区采集番茄青枯病病株 经选择性平板分离 纯化和分子鉴定 获得不同地理来源的青枯 菌Ralstonia solanacearum菌株 通过生理生化测定和接种番茄试验 鉴定青枯菌的生化变种和致病类型 PCR扩增内切葡聚糖酶基因egl序列 明确青枯菌的演化型和序列变种 双层平板培养法测定其对8个不同噬 菌体的敏感性 结果 获得了来自赣南地区9个市 县 的番茄青枯菌菌株44个 其中 41个菌株为生化变种 3个菌株为生化变种 致病力测定结果聚为I II和III类 其致病力分别为强 中和弱 其中 强致病力菌株 占65 9 所有菌株属于亚洲分支演化型 并进一步划分为Sequevar13 14 15 17 18 34 44和48等8个 序列变种 大部分菌株对供试的8个噬菌体敏感 结论 赣南地区番茄青枯菌以生化变种III和强致病力菌株 为主 对噬菌体较敏感 存在8个序列变种 具有明显的菌系分化现象和遗传多样性 关键词 茄科雷尔氏菌 番茄青枯病 生化变种 致病力 演化型 序列变种 噬菌体 中图分类号 S436 412 1 5 文献标志码 A 文章编号 1001 411X 2022 01 0067 10 Diversity of Ralstonia solanacearum strains from tomato in the south of Jiangxi Province REN Minhua1 ZHANG Jingyan2 CUI Xiaodong1 CHEN Ronghua2 LIU Qiongguang1 3 1 College of Plant Protection South China Agricultural University Guangzhou 510642 China 2 Institute of Agricultural Sciences in Ganzhou Ganzhou 341000 China 3 Key Laboratory of Microbial Signals and Crop Disease Control of Guangdong Province Guangzhou 510642 China Abstract Objective Isolating and identifying Ralstonia solanacearum strains from tomato plants in the Southern of Jiangxi Province and clarifying the bacterial differentiation can lay the foundation for local tomato bacterial wilt resistance breeding and disease control The diseased tomato plants were collected from the south of Jiangxi Province R solanacearum strains with different geographical origins were isolated by selective plate purificated and identificated by PCR The test of physiology and biochemistry and inoculation on tomato plants were conducted for the determination of biovar and virulence difference The endoglucanase gene egl fragments were amplified by PCR to determine the phylotype and sequevar of R solanacearum Result A total of 44 R solanacearum strains were obtained from nine cities counties in the south of Jiangxi 收稿日期 2021 01 25 网络首发时间 2021 06 15 11 08 45 网络首发地址 作者简介 任敏华 硕士研究生 主要从事植物细菌病害研究 E mail renmishka 通信作者 陈荣华 研究 员 主要从事农作物病害研究 E mail Chenronghua009 刘琼光 副教授 博士 主要从事植物细菌 病害研究 E mail qgliu 基金项目 江西省赣州市科技项目 赣市财教字 2019 号 华南农业大学学报 Journal of South China Agricultural University 2022 43 1 67 76 DOI 10 7671 j issn 1001 411X 202101041 Province among which 41 strains were identified as biovar III and three strains were identified as biovar IV According to the results of virulence difference 44 strains were clustered into three groups namely group I high virulence group II moderate virulence and group III weak virulence of which group I high virulence strains accounted for 65 9 All strains were belonged to the phylotype I and further divided into eight sequevars namely Sequevar 13 14 15 17 18 34 44 and 48 respeclively Most R solanacearum strains were sensitive to the eight tested bacteriophages Conclusion The strains of R solanacearum from tomato in the south of Jiangxi Province are mainly biovar III and high virulence sensitive to bacteriophages have eight sequevars and have obvious differentiation and genetic diversity Key words Ralstonia solanacearum Tomato bacterial wilt Biovar Virulence Phylotype Sequevar Bacteriophage 茄科雷尔氏菌Ralstonia solanacearum俗称青 枯菌 是危害严重的世界性植物病原细菌 1 广泛分 布于热带 亚热带 温带地区 寄主范围极广 2 青 枯菌侵染番茄引起的番茄青枯病 在我国南方番茄 产区普遍发生且危害严重 3 4 青枯菌具有高度变异性及适应性 菌系分化 明显 不同菌株间基因组变异性较强 明确不同 来源青枯菌的致病力分化 探索青枯菌的种内遗 传多样性 具有重要意义 关于青枯菌的种下分 类 Hayward等 5 华静月等 6 根据3种双糖和3种 己醇的利用能力不同 划分出5个生化变种或生 化型 Prior等 7 根据地理起源的密切相关性 将青 枯菌分为4个演化型 即亚洲分支演化型 美 洲分支演化型 非洲分支演化型 和印度 尼西亚分支演化型 而在演化型内根据内切 葡聚糖酶 Endoglucanase 基因egl序列的差异 又 细分为多个序列变种 Sequevar 目前 国际上已 经鉴定出51个序列变种 来自中国的青枯菌属于 演化型 和 以及1 12 13 14 15 16 17 18 34 44和48等11个序列变种 8 尽管我国有些省 份对番茄青枯病菌有研究报道 9 但来自江西省的 番茄青枯菌菌系研究较少 近年来 在江西省赣南地区种植番茄 辣椒和 茄子等茄科蔬菜面积扩大 发展态势迅猛 然而 由 于青枯病的严重危害 给当地蔬菜生产造成了巨大 的经济损失 目前 番茄青枯病的防治尚无有效的 防治药剂 虽然有研究表明选择合适的噬菌体或噬 菌体组合对作物青枯病具有较好的防治作用 10 12 但其应用仍受到许多限制 选育抗病或耐病品种是 青枯病防治最经济有效的方法 但由于青枯菌菌系 分化明显 且与寄主 环境之间构成复杂的互作关 系 使得生产上推广的抗病品种往往随着种植年限 的延长 青枯菌菌系致病力的变化 导致品种的抗 性丧失 13 15 因此 抗病育种工作任务艰巨 分离赣 南地区的番茄青枯菌菌株 建立该地区青枯菌资源 库 明确青枯菌的生化变种 致病力 序列变种以及 对噬菌体的敏感性 将有助于解析青枯病的发生流 行机理 指导番茄抗青枯病育种和制定相关的病害 防治措施 1 材料与方法 1 1 供试培养基及噬菌体 固体培养基 牛肉膏3 g L 1 酵母膏3 g L 1 蛋 白胨3 g L 1 硫酸镁0 25 g L 1 磷酸氢二钾2 g L 1 磷酸二氢钾0 5 g L 1 蔗糖15 g L 1 琼脂粉18 g L 1 半固体培养基 牛肉膏3 g L 1 酵母膏3 g L 1 蛋白胨3 g L 1 硫酸镁0 25 g L 1 磷酸氢二钾2 g L 1 磷酸二氢钾0 5 g L 1 蔗糖15 g L 1 琼脂粉8 g L 1 LB液体培养基 酵母提取物5 g L 1 氯化钠 10 g L 1 胰蛋白胨10 g L 1 生化变种鉴定基础培养基 蛋白胨1 0 g L 1 磷 酸二氢胺 1 0 g L 1 氯化钾 0 2 g L 1 七水硫酸镁 0 2 g L 1 溴百里酚蓝指示剂3 0 ml L 1 pH调至7 0 2 3 5 三苯基氯化四氮唑 TTC 培养基 水解 干酪素1 g L 1 蛋白胨10 g L 1 甘油5 mL L 1 琼 脂粉32 g L 1 使用前 每1 L培养基加5 mL 质量 浓度为10 g L 1的TTC溶液 牛肉膏蛋白胨 NA 液体培养基 牛肉浸膏3 g L 1 葡萄糖10 g L 1 蛋白胨5 g L 1 酵母粉0 5 g L 1 pH调至7 0 供试噬菌体 编号分别为P1556 1 P1556 2 P7 1 P574 P1521 P1555 L P1555 1和P1555 M 分离自江西 广东等地作物青枯病土壤 由华南农 业大学植物细菌研究室提供并保存 1 2 青枯菌的分离纯化与保存 2019 2020年 在番茄青枯病发病高峰期间 68 华南农业大学学报 第 43 卷 前往江西省赣南地区各市 县区采集番茄青枯病标 本 用TTC选择性培养基分离青枯菌 30 条件下 培养24 48 h 挑取青枯菌典型单菌落 在TTC平 板上划线纯化 继代3次 获得纯化菌株 用青枯菌 特异性引物759 5 GTCGCCGTCAACTCACTTTCC 3 和760 5 GTCGCCGTCAGCAATGCGGAATCG 3 7 进行PCR鉴定 将扩增得到280 bp特异目的片段的 青枯菌菌株 80 甘油保存 同时 用细菌基因 组DNA提取试剂盒 提取各菌株DNA 20 保 存备用 1 3 青枯菌生化变种测定 参照Hayward等 5 华静月等 6 方法 分别将 乳糖 甘露醇 山梨醇和甜醇加入基础培养基中 质 量浓度均为10 g L 1 分装试管 每管4 5 mL 110 条件下灭菌20 min 纤维二糖和麦芽糖经过滤灭菌 后 分别加入灭菌的基础培养基中 质量浓度为 10 g L 1 每个菌株每种化合物接种3支试管 以不 接种青枯菌为对照 28 条件下培养21 d 1 4 青枯菌致病性测定及数据处理 参照何自福等 16 的方法 选择对青枯病表现不 同抗性的5个番茄品种 分别为红圣佳二号 抗 病 金艳 中抗 多宝 中抗 粉霸 感病 和精棚 T红 高感 作为致病性分化的鉴别品种 将健康 番茄种子播于穴盘消毒基质中 待4 5片叶苗龄时 用于接种 采用浸根接种方法 将番茄根部浸于 1 108 CFU mL 1青枯菌悬液中 15 min后移栽到盆 钵中 每盆种2株 以浸无菌水的植株为空白对照 每个菌株接种每个番茄品种20株 定期记录发病 情况 接种后第45天 各处理病情稳定 统计发病 率 采用离差平均和的系统聚类方法 即Ward聚 类 对数据进行聚类分析 1 5 egl基因扩增和系统发育树构建 内源葡聚糖酶基因 egl基因 扩增引物 Endo F 5 ATGCATGCCGCTGGTCGCCGC 3 和Endo R 5 GCGTTGCCCGGCACGAACACC 3 PCR扩 增反应程序 96 预变性9 min 95 变性1 min 70 退火1 min 72 延伸2 min 30个循环 72 延伸10 min 扩增产物交由睿博兴科生物技 术公司进行测序 将序列提交到GenBank数据库 并与相关序列进行比对 参考序列信息见表1 用 Clustalx和MEGA软件进行系统发育分析 采用 Jukes and Cantor模型邻接法 Neighbor joining 表 1 参考序列信息 Table 1 Referenced sequence ination 参考菌株 Reference strain 寄主 Host 来源 Origin 演化型 Phylotype 序列变种 Sequevar egl登录号 Accession number JT523马铃薯 Solanum tuberosum留尼汪岛 Reunion 13 AF295252 PSS8番茄 S lycopersicum中国 China 14 FJ561066 PSS358番茄 S lycopersicum中国 China 15 EU407298 UW151姜 Zingiber officinale澳大利亚 Australia 16 AF295254 P11花生 Arachis hypogaea中国 China 17 FJ561068 GMI1000番茄 S lycopersicum法国 France 18 AF295251 JT519天竺葵 Pelargonium hortorum留尼汪岛 Reunion 31 GU295032 PSS219番茄 S lycopersicum中国 China 34 FJ561167 O3橄榄树 Olea europaea中国 China 44 FJ561069 TB28烟草 Nicotiana tabacum中国 China 44 FJ561127 Tb43烟草 N tabacum中国 China 44 FJ561129 BdlI木槿 Hibiscus syriacus中国 China 44 FJ561098 CIIP365马铃薯 S tuberosum菲律宾 The Philippines 45 GQ907151 MADI7辣椒 Capsicum annuum马达加斯加 Madagascar 46 GU295040 GMI8254番茄 S lycopersicum印度尼西亚 Indonesia 47 GU295014 M2桑树 Morus alba中国 China 48 FJ561067 CMR87番茄 S lycopersicum喀麦隆 Cameroon 35 EF439727 CMR12番茄 S lycopersicum喀麦隆 Cameroon 52 EF439725 CMR39番茄 S lycopersicum喀麦隆 Cameroon 41 EF439726 CFBP2972马铃薯 S tuberosum马提尼克 Martinique 35 EF371809 UW551天竺葵 P hortorum肯尼亚 Kenya 1 DQ657596 ICMIP7963马铃薯 S tuberosum肯尼亚 Kenya 7 AF295263 第 1 期 任敏华 等 赣南地区番茄青枯菌菌系多样性分析 69 NJ 构建系统发育树 1 000次重复Bootstrap统计 学检验后构建发育树 1 6 噬菌体敏感性测定 噬菌体培养 在15 mL的LB液体培养基中 将 青枯菌与噬菌体按照体积比1 1混匀 在30 180 r min 1条件下培养过夜 双层平板制备 取青枯菌菌液100 L加入15 mL 50 的半固体培养基 迅速混匀倒入固体培养基 平板上 制成双层平板 点接3 L噬菌体液 30 条件下培养24 h 观察噬菌斑产生情况 根据青枯 菌被侵染的噬菌体数量 n 个 判别青枯菌对噬菌体 的敏感性 标准 n 2 敏感性弱 3 n 5 敏感性 中等 6 n 7 敏感性强 n 8 敏感性特强 2 结果与分析 2 1 青枯菌的分离纯化 2019 2020年 在江西省赣南地区各市 县番 茄种植地均有青枯病发生 采集自于都 上犹 石 城 瑞金等9个县 市 的番茄青枯病病株中 共分 离和鉴定出44个青枯菌株 其中于都县9个 上犹 县7个 石城县4个 瑞金市2个 大余县3个 安 远县3个 会昌县6个 兴国县2个 全南县8个 2 2 青枯菌的生化变种鉴定 根据对6种碳水化合物的利用情况 表2 44个番茄青枯菌可划分为生化变种 和 其中 来自大余县的3个青枯菌菌株为生化变种 其余 的41个青枯菌均为生化变种 表明赣南地区番 续表 1 Continued table 1 参考菌株 Reference strain 寄主 Host 来源 Origin 演化型 Phylotype 序列变种 Sequevar egl登录号 Accession number UW162香蕉 Musa nana秘鲁 Peru 4 AF295256 MOLK2香蕉 M nana菲律宾 The Philippines 3 EF371841 CMR66木龙葵 S scabrum喀麦隆 Cameroon 49 EF439729 JT525天竺葵 P hortorum留尼汪岛 Reunion 19 AF295272 CFBP3059茄子 S melongena布基纳法索 Burkina Faso 23 AF295270 NCPPB332马铃薯 S tuberosum津巴布韦 Zimbabwe 22 DQ657649 MAFF301558马铃薯 S tuberosum日本 Japan 8 AY465002 Psi番茄 S lycopersicum印度尼西亚 Indonesia 10 EF371804 ACH732番茄 S lycopersicum澳大利亚 Australia 11 GQ907150 表 2 青枯菌生化变种鉴定1 Table 2 Biovar identification of Ralstonia solanacearum 来源 Origin 菌株编号 No of strain 菌株数 个 Strain quantity 麦芽糖 Maltose 纤维二糖 Cellobiose 乳糖 Lactose 甘露醇 Mannitol 山梨醇 Sorbitol 甜醇 Dulcitol 生化变种 Biovar 于都县 Yudu County Tm1901 Tm1908 Tm1920 Tm1924 9 上犹县 Shangyou County Tm1913 Tm1919 7 石城县 Shicheng County Tm1925 Tm1929 4 瑞金市 Ruijin City Tm1930 Tm1931 2 大余县 Dayu County Tm1932 Tm1934 3 安远县 Anyuan County Tm1935 Tm1937 3 会昌县 Huichang County Tm1938 Tm1943 6 兴国县 Xingguo County Tm2046 Tm2047 2 全南县 Quannan County Tm1944 Tm1945 Tm2048 Tm2058 8 1 表示被利用 表示不被利用 1 indicates to be used indicates not to be used 70 华南农业大学学报 第 43 卷 茄青枯菌以生化变种 为主 2 3 青枯菌的致病力测定 青枯菌接种红圣佳二号 抗病 金艳 中抗 多 宝 中抗 粉霸 感病 精棚T红 高感 5个抗性程 度不同的番茄品种 结果表明 44个菌株在不同的 番茄品种上的致病力存在明显差异 表3 表 3 44个青枯菌接种5个番茄品种的发病率及聚类分组 Table 3 Incidence of 44 Ralstonia solanacearum strains inoculated to five tomato cultivars and their clustering results 来源 Origin 菌株编号 No of strain 发病率 Incidence rate聚类分组 Cluster红圣佳2号Hongshengjia 2金艳Jinyan多宝Duobao粉霸Fenba精棚T红Jingpeng T red 于都县 Yudu County Tm1901 55 80 95 100 95 Tm1902 90 85 75 100 100 Tm1903 85 80 95 100 100 Tm1904 90 95 70 100 100 Tm1907 85 75 80 100 100 Tm1908 37 65 60 72 90 上犹县 Shangyou County Tm1913 90 70 90 100 90 Tm1914 95 75 85 95 100 Tm1915 85 75 95 90 100 Tm1916 60 75 90 85 95 Tm1917 40 70 85 90 100 Tm1918 50 70 95 90 100 Tm1919 0 5 15 40 65 于都县 Yudu County Tm1920 80 85 80 90 90 Tm1923 50 80 95 68 95 Tm1924 80 95 85 85 100 石城县 Shicheng County Tm1925 65 85 85 95 85 Tm1926 95 100 90 100 100 Tm1928 80 75 100 95 100 Tm1929 35 21 40 50 95 瑞金市 Ruijin City Tm1930 90 95 95 100 100 Tm1931 100 100 100 100 100 大余县 Dayu County Tm1932 20 35 65 45 80 Tm1933 35 35 55 80 90 Tm1934 20 40 75 60 100 安远县 Anyuan County Tm1935 40 52 85 95 100 Tm1936 30 35 90 80 89 Tm1937 85 95 90 100 95 会昌县 Huichang County Tm1938 90 85 95 100 100 Tm1939 80 85 95 100 95 Tm1940 85 90 100 95 100 Tm1941 100 84 100 100 100 Tm1942 95 100 100 100 95 Tm1943 40 85 95 90 100 全南县 Quannan County Tm1944 100 100 95 100 100 Tm1945 100 90 100 90 100 兴国县 Xingguo County Tm2046 100 100 100 100 100 Tm2047 100 100 100 100 100 全南县 Quannan County Tm2048 100 95 100 100 89 Tm2049 100 95 100 100 90 Tm2050 100 95 100 100 100 Tm2054 100 100 100 100 100 Tm2055 100 95 100 100 100 Tm2058 90 90 100 100 100 第 1 期 任敏华 等 赣南地区番茄青枯菌菌系多样性分析 71 采用系统聚类中的离差平均和的聚类方法 即 Ward聚类 对44个菌株接种5个番茄品种的青枯 病发病率结果进行聚类分析 明确青枯菌之间的致 病力差异 采用离差平均和方法 样本间的距离采 用欧氏距离 该距离数值的大小反映样本之间的相 似度 数值越小 2个样本之间的相似度越高 数值 越大 则相似度越低 本研究以欧氏距离1 2为参 考标准 将44个青枯菌聚为3个组 图1 第 组 共有29个菌株 分别来自除大余县外的8个县 市 第 组的7个菌株分离自于都 上犹 石城 会 昌4个县 该组致病力为中等强度 第 组的8个 菌株分离自于都 上犹 石城 大余 安远5个县 致 病力弱 其中来自上犹县的Tm1919致病力最弱 上述结果表明 赣南地区番茄青枯菌致病力分化现 象明显 在于都 上犹和石城县均存在致病力强 中 弱3种类型的菌株 但总体来看 赣南地区番茄 青枯菌以致病较强的菌株占优势 2 4 青枯菌序列变种及系统发育分析 44个青枯菌的egl基因片段序列与标准参考菌 株进行比对 构建系统发育树 图2 结果表明 江 西省赣南地区的番茄青枯菌属于亚洲分支 演化型 I Phylotype 的8个序列变种 Sequevar 其中 Tm1929 Tm1935和Tm1937与马铃薯青枯菌 JT523 留尼汪岛 属于Sequevar 13 Tm1908 Tm1920 Tm1923 Tm1924 Tm1930 Tm1931 Tm1933 Tm1934 Tm1940 Tm1943 Tm2046 Tm2054共14个菌株与来自中国的番茄青枯菌 PSS8属于Sequevar 14 Tm1925 Tm1928 Tm1932 Tm2055和Tm2058与来自中国的番茄青枯菌 PSS358属于Sequevar 15 Tm1913 Tm1919 Tm1931 Tm2046 Tm2047 Tm2054 Tm1944 Tm2050 Tm2055 Tm1942 Tm2049 Tm2048 Tm1945 Tm1941 Tm1930 Tm1937 Tm1926 Tm1938 Tm1903 Tm1939 Tm1940 Tm2058 Tm1928 Tm1915 Tm1914 Tm1907 Tm1913 Tm1904 Tm1902 Tm1920 Tm1924 Tm1917 Tm1918 Tm1943 Tm1923 Tm1916 Tm1901 Tm1925 Tm1908 Tm1933 Tm1936 Tm1935 Tm1934 Tm1932 Tm1929 Tm1919 0 0 5 1 0 1 5 2 0 2 5 3 0 欧氏距离 Euclidean distance 图 1 基于44个青枯菌接种5个番茄品种发病率的聚类分析结果 Fig 1 Clustering results based on the incidence of 44 Ralstonia solanacearum strains inoculated to five tomato cultivars 72 华南农业大学学报 第 43 卷 Tm2047共8个菌株与来自中国的花生青枯菌 P11属于Sequevar 17 Tm1901 Tm1904 Tm1907 Tm1926 Tm1938 Tm1939共8个菌株与来自法国 的番茄青枯菌GMI1000均为Sequevar 18 Tm1944 与来自中国台湾的番茄青枯菌PSS219为Sequevar 34 Tm1936与来自中国的烟草青枯菌Tb28为 Sequevar 44 Tm1945 Tm2048 Tm2050共4个菌株 与来自中国的桑青枯菌M2同为Sequevar 48 GMI1000 Sequevar18 MADI7 Sequevar46 GMI8254 Sequevar47 Tm1945 Tm2048 49 50 M2 Sequevar48 Tm1913 14 15 16 17 18 19 Tm2047 P11 Sequevar17 CIIP365 Sequevar45 Tm1929 35 37 JT523 Sequevar13 JT519 Sequevar31 Tm1908 20 23 24 30 31 33 34 40 41 42 43 Tm2046 54 PSS8 Sequevar14 Tm1936 Tb28 Sequevar44 Tm1944 PSS219 Sequevar34 Tm1925 28 32 Tm2055 58 PSS358 Sequevar15 UW151 Sequevar16 MAFF301558 Sequevar8 Psi Sequevar10 ACH732 Sequevar11 CMR66 Sequevar49 CFBP3059 Sequevar23 JT525 Sequevar19 NCPPB332 Sequevar22 UW551 Sequevar1 MOLK2 Sequevar3 UW162 Sequevar4 ICMIP7963 Sequevar7 CMR39 Sequevar41 CMR87 Sequevar35 CMR12 Sequevar52 0 01 演化型 Phylotype 演化型 Phylotype 演化型 Phylotype 演化型 Phylotype Tm1901 02 03 04 07 26 38 39 将序列变种相同的菌株置于同一水平分支上 代表参考菌株 Strains with the same sequevar are settled at the same branch indicates reference strain 图 2 基于青枯菌egl基因序列的系统发育分析 Fig 2 Phylogenetic analysis based on sequence of egl gene of Ralstonia solanacearum 第 1 期 任敏华 等 赣南地区番茄青枯菌菌系多样性分析 73 2 5 青枯菌序列变种 Sequevar 的地理分布 在所分离的44个番茄青枯菌中 Sequevar 14共有14个菌株 分布于于都 瑞金 大余 会昌 兴国 全南6个县 市 Sequevar 18有8个菌株 分 布于会昌 石城 于都3个县 Sequevar 17有8个菌 株 其中7个分布于上犹县 1个来自兴国县 Sequevar 15有5个菌株 来自于石城 大余 全南 3个县 Sequevar 48的4个菌株 全部来自全南县 Sequevar 13有3个菌株 分布于石城和安远县 Sequevar 34和Sequevar 44各有1个菌株 分别来 自全南和安远县 上述结果表明 赣南地区番茄青 枯菌序列变种存在丰富的多样性 2 6 青枯菌对噬菌体的敏感性测定 双层平板法检测8个噬菌体裂解青枯菌的试 验结果 表4 表明 44个番茄青枯菌中 只有菌株 Tm2047对噬菌体的敏感性弱 有12个菌株对噬菌 体的敏感性表现为中等 有4个菌株对噬菌体的敏 感性较强 另有27个菌株都能被8个噬菌体裂解 其敏感性表现为特强 上述结果表明 赣南地区番 茄青枯菌对噬菌体普遍表现敏感 表 4 44个青枯菌对8个噬菌体的敏感性测定 Table 4 Sensitivity determination of 44 Ralstonia solanacearum to eight bacteriophages 来源 Origin 菌株编号 No of strain 数量 个 Quantity 噬菌体1 Bacteriophage敏感性2 SensitivityP1555 L P1555 1 P1555 M P1556 1 P1556 2 P7 1 P574 P1521 于都县 Yudu County Tm1901 Tm1907 5 M Tm1908 1 V 上犹县 Shangyou County Tm1913 Tm1914 2 S Tm1915 Tm1919 4 V Tm1916 1 S 于都县 Yudu County Tm1920 Tm1924 3 V 石城县 Shicheng County Tm1925 Tm1929 3 V Tm1928 1 S 瑞金市 Ruijin City Tm1930 Tm1931 2 V 大余县 Dayu County Tm1932 Tm1934 3 V 安远县 Anyuan County Tm1935 Tm1937 3 V 会昌县 Huichang County Tm1938 Tm1939 2 M Tm1940 Tm1943 4 V 全南县 Quannan County Tm1944 1 M Tm1945 1 M 兴国县 Xingguo County Tm2046 1 V Tm2047 1 W 全南县 Quannan County Tm2048 Tm2049 2 M Tm2050 1 M Tm2054 Tm2058 3 V 1 表示产生噬菌斑 表示不产生噬菌斑 2 M 中等 S 强 V 特强 W 弱 1 indicates having plaques indicates no having plaques 2 M Moderate S Strong V Very strong W Weak 3 讨论与结论 不同地理来源的青枯菌在与寄主长期协同进 化的过程中 演化出明显的生理分化型或菌系多样 性 国外报道 番茄青枯菌属于1号生理小种 分为 演化型 和 17 18 生化变种 II III和 IV 19 20 存在Sequevar 1 4 5 6 7 8 9 10 11 13 14 15 18 20 29 31 35 41 38 39 46 52等22个 序列变种 21 23 在我国 已报道的番茄青枯菌属于 1号生理小种 演化型 分为生化变种II III和 74 华南农业大学学报 第 43 卷 IV 存在Sequevar13 14 15 16 17 18 34 44 48和54等10个序列变种 24 25 曾宪铭等 26 曾测定 广东省13种农作物上的129个青枯菌 其生化变 种鉴定为 及其亚型 其中番茄青枯菌 为生化变种 和 郑向华等 27 也获得类似的研究 结果 将番茄青枯菌鉴定为生化变种 2009年 Xu等 28 基于演化型分类框