灰霉病对番茄叶片蔗糖转化酶活性和可溶性糖含量的影响.pdf

灰霉病对番茄叶片蔗糖转化酶活性和可溶性糖含量的影响 彭家丽 赵虎 李智佳 彭梦醒 刘永华 海南大学园艺学院 海南海口570228 摘要 研究灰霉病菌接种后番茄叶片中蔗糖转化酶介导的糖分代谢的变化规律及其与发病程度之间的相关性 初步阐明蔗糖转化酶在 调控番茄 灰霉病菌互作中的重要作用 通过系统测定灰霉病菌接种后不同时期 0 12 24和48 h 番茄叶片中蔗糖转化酶活性 淀粉 和可溶性糖含量 细胞死亡程度和H2O2积累的动态变化 结果发现 灰霉病菌接种导致番茄叶片细胞壁转化酶 CWIN 细胞质转化酶 CIN 和液泡转化酶 VIN 活性显著上升 其中CWIN活性最先上升且上升幅度最大 其次为CIN 最后为VIN 同时 CWIN和CIN活性 在接种早期 12和24 h 上升幅度较小 而在接种后期 48 h 上升幅度较大 霉病菌接种导致番茄叶片中淀粉含量和己糖 蔗糖显著降 低 但对蔗糖 葡萄和果糖含量没有显著影响 灰霉病菌接种导致番茄叶片在接种早期 24 h 发生显著的细胞死亡和H2O2积累现象 总之 灰霉病菌接种导致3种转化酶活性显著上升 但由于其活性在接种早期上升幅度较小 其分解蔗糖产生的己糖 葡萄糖和果糖 不 能满足植物防御反应的需要而出现己糖 蔗糖下降 这导致植物不能通过糖信号途径及时启动防御反应来有效清除H2O2并防止细胞死 亡的发生 最终导致灰霉病的发生 关键词 灰霉病 细胞壁转化酶 细胞质转化酶 液泡转化酶 己糖 蔗糖 中图分类号 S641 2 文献标识码 A 文章编号 0517 6611 2020 11 0156 05 doi 10 3969 j issn 0517 6611 2020 11 044 开放科学 资源服务 标识码 OSID Effects of Grey Mould on Invertase Activities and Soluble Sugar Content in Tomato Leaves PENG Jia li ZHAO Hu LI Zhi jia et al College of Horticulture Hainan University Haikou Hainan 570228 Abstract To elucidate important roles of invertase in regulating tomato B cinerea interaction the changes of invertase mediated sugar metab olism in tomato leaves after Botrytis cinerea inoculation and their correlation with the progress of grey mould incidence were studied The dy namics of invertase activities starch and soluble sugar content cell death degree and H2O2 accumulation in tomato leaves at different time points 0 12 24 and 48 h after B cinerea inoculation were systematically investigated It was found that cell wall invertase CWIN cyto plasmic invertase CIN and vacuolar invertase VIN of tomato leaves were significantly increased after B cinerea inoculation among three kinds of INVs CWIN activity was induced earliest and most dramatically followed by CIN and VIN Furthermore induction of CWIN and CIN activity was moderate at the early stage of inoculation 12 and 24 h but was dramatic at the late stage of inoculation 48 h Starch content and hexose sucrose in tomato leaves was significantly decreased after B cinerea inoculation but the content of sucrose glucose and fructose was not significantly affected In addition B cinerea inoculation resulted in significant cell death and H2O2 accumulation in tomato leaves at the early stage of inoculation 24 h Collectively B cinerea inoculation significantly induced the activities of three kinds of INVs However because the induction of INV activities was moderate at the early stage of inoculation hexose derived from INV mediated sucrose degradation could not meet the need of plant defense response for hexose which led to reduced hexose sucrose Thus tomato plants fail to ac tivate its defense response to effectively scavenge H2O2 and therefore prevent the incidence of H2O2 induced cell death Key words Botrytis cinerea Cell wall invertase Cytoplasmic invertase Vacuolar invertase Hexose sucrose 基金项目 国家自然科学基金项目 31760579 作者简介 彭家丽 1994 女 广西昭平人 硕士研究生 研究方向 蔗糖代谢和番茄抗病性 通信作者 副教授 博士 从事 蔗糖代谢与蔬菜作物产量 品质和抗逆性研究 收稿日期 2020 02 16 番茄 Solanum lycopersicm 是我国乃至世界上重要的蔬 菜作物之一 据联合国粮农组织统计 2017年世界番茄总产 量高达1 82亿t 番茄灰霉病 Botrytis cinerea 在世界各番 茄产区均有发生 是一种发生普遍且危害较重的真菌病 害 1 3 发病时 一般造成番茄产量损失20 40 严重时 高达60 以上 4 6 然而长期大量使用化学试剂不可避免地 导致灰霉病原菌逐渐产生抗药性 导致一些常规药剂失去作 用 而且还会严重影响人体健康和生态环境 7 9 通过研究 番茄与灰霉病菌互作的生理生化机制 有助于选育抗灰霉病 品种 从而克服上述化学防治的缺点 蔗糖是高等植物叶片光合产物向库器官运输的主要形 态 蔗糖分解代谢在植物对病原菌的防卫反应中发挥着重要 作用 一方面 可以为植物防卫反应提供碳骨架和能量 如 细胞壁加厚 植物抗毒素的合成以及抗病相关蛋白的积累等 防卫反应都需要大量的糖分供应 10 另一方面 蔗糖分解 产生的葡萄糖和果糖也可为病菌的生长发育提供能量和碳 骨架 11 植物体内参与蔗糖分解的有蔗糖合成酶 sucrose synthase Sus 和蔗糖转化酶 invertase INV Sus调控的蔗糖 分解为可逆反应 既可以催化蔗糖合成又可以催化蔗糖分 解 但通常认为Sus在植物体内主要起分解蔗糖作用 12 13 INV则不可逆地将蔗糖 sucrose Suc 水解为葡萄糖 glu cose Glc 和果糖 fructose Fru INV根据其亚细胞定位不 同 可以进一步细分为细胞壁转化酶 cell wall invertase CWIN 液泡转化酶 vacuolar invertase VIN 和细胞质转化 酶 cytoplasmic invertase CIN 14 目前对蔗糖分解代谢在植物抗病性方面的研究主要集 中在CWIN 研究表明 CWIN在植物抗病性中发挥着积极 作用 如超表达CWIN基因的水稻对细菌性病菌 Xanthomonas oryzae pv Oryzae和真菌性病菌Magnaporthe oryzae抗性均明显增强 15 与此相应 抑制CWIN表达则 会降低植物的抗病性 如通过RNA干扰技术抑制烟草中 CWIN的表达导致植株对卵菌病原菌Phytophthora nicoti anae的抗性降低 16 但也有研究表明 CWIN在植物抗病 性中发挥着负面作用 如番茄CWIN基因LIN8的沉默不 仅没有降低番茄叶片的抗病性 反而增加对细菌性病菌 安徽农业科学 J Anhui Agric Sci 2020 48 11 156 160 163 Xanthomonas campestris pv vesicatoria Xcv 的抗性 17 同 样 通过超表达CWIN抑制因子的方法降低CWIN的活性 导致拟南芥对真菌病菌Plasmodiophora brassicae的抗性增 加 18 因此 CWIN在植物抗病中的作用可能受植物和病 菌种类的影响 此外 其他蔗糖分解酶也在植物抗病中发挥重要作用 如酵母转化酶基因在烟草液泡中的超表达可以增强烟草对 马铃薯Y病毒的抗性 19 拟南芥的CIN突变体 Atcinv1 对 根结线虫和孢囊线虫的抗性下降 20 然而对小麦的研究表 明 CIN基因Ta A N Inv1的下调反而增强植株对条锈病病 菌Puccinia striiformis的抗性 21 因此 和CWIN类似 CIN 在植物抗病中的作用可能同样受植物和病菌种类的影响 总之 蔗糖转化酶在植物抗病中发挥着重要作用 但其具体 作用可能是正面的 也可能是负面的 可能受到不同植物或 病原菌种类的影响 目前有关Sus在植物抗病中的作用研 究则较少 目前有关灰霉病对番茄叶片蔗糖分解代谢影响的研究 较少 因此 笔者研究接种灰霉病后不同时期番茄叶片中蔗 糖转化酶活性 CWIN CIN和VIN 可溶性糖含量 Suc Glc 和Fru 的动态变化 同时对淀粉和过氧化氢 H2O2 进行原 位染色 以期鉴定出对灰霉病菌侵染响应最为敏感的转化酶 种类 初步阐明蔗糖代谢在番茄抵抗灰霉病菌侵染的生理生 化机制 为下一步通过转基因及分子育种等现代生物技术手 段提高番茄对灰霉病的抗性提供参考 1 材料与方法 1 1 材料 试验所用番茄品种为新疆农业科学院园艺研究 所育成的 新番2号 番茄栽培在海南大学实验基地塑料 大棚内进行 将番茄种子消毒后播种到预先装满蛭石32孔 的穴盘内 播种约30 d后 番茄幼苗达到4叶1心 此时将 幼苗定植到花盆内 上 下部直径为25 4和17 8 cm 高 19 7 cm 基质为田园土 羊粪 1 1 再加一定量复合肥 N P K 15 15 15 每盆定植1株苗 共种植20株 番茄 定植28 d后 取大小 形状和植株部位相同的番茄叶片进行 灰霉病菌离体接种试验 1 2 方法 1 2 1 灰霉病菌的培养和接种 番茄灰霉病菌 B cinerea 由海南大学植物保护学院刘铜教授惠赠 将灰霉病菌接种 到V8培养基上培养 在黑暗 23 恒温条件下培养约14 d 后产生大量分生孢子 孢子悬浮液配制和离体接种均参照 Lian等 22 的方法并作适当调整 用SMB液体培养基 1 蛋 白胨 4 麦芽糖 pH 5 6 配制孢子悬浮液 调整孢子最终浓 度至5 105 mL 在直径9 cm的培养皿中倒入25 mL浓度 0 8 的琼脂 待琼脂凝固后将清洗干净的番茄叶片的叶柄 嵌入琼脂中并保持叶片平整 在每片叶片的主脉两侧各接 种3滴孢子悬浮液 每滴5 L 密封后在黑暗条件下培养 23 恒温 对照则接种不含孢子的SMB液体培养基 在接种0 12 24和48 h后分别进行取样 用直径1 cm的打 孔器以菌液滴为中心打孔取样并称重 液氮速冻后在 80 下存放 用于酶活性和糖含量测定 每个处理含5个生物学 重复 1 2 2 蔗糖转化酶活性和可溶性糖含量的测定 INV活性 的测定参照Tomlinson等 23 的方法 蔗糖 葡萄糖 果糖含量 的测定参照King等 24 的酶学方法 1 2 3 细胞死亡染色 番茄叶片在接种12 24和48 h后细 胞死亡染色 具体方法参照Bai等 25 的方法 将番茄叶片在 1 1的乙醇和染色液 将10 mL乳酸 10 mL甘油 10 g苯酚和 10 mg台盼蓝溶于10 mL蒸馏水中 配制的混合液中煮沸 5 min进行染色 然后在2 5 g mL的水合氯醛溶液中进行脱 色处理 最后对叶片进行拍照 1 2 4 淀粉和H2O2原位染色 叶片淀粉染色参考Sosso 等 26 的方法 将番茄叶片在95 乙醇中煮沸30 min将叶绿 素完全去除 然后将叶片在I KI溶液 将1 g碘和1 g碘化 钾溶于100 mL水中 中染色15 min 然后用清水冲洗2次 最后进行拍照记录 叶片H2O2染色参考Thordal Christensen等 27 的方法 将番茄叶片放入1 mg mL的DAB 3 3 diaminobenzidine 溶液中 在 80 kPa下抽真空7 min 共重复3次 中间轻轻振 荡去除叶片表面的气泡 然后避光室温下放置30 min 最 后在95 乙醇中煮沸10 min去除叶绿素后进行拍照 存在 H2O2的部位在染色后呈棕红色 1 3 数据处理 利用Excel 2010软件对试验数据进行作图 和t test分析 2 结果与分析 2 1 灰霉病菌接种不同时期病斑和细胞死亡情况 对接种 后12 24 48 h的番茄叶片进行观察 发现在接种后12和 24 h未出现肉眼可见的病斑 只是在48 h观察到明显病斑 图1 在此基础上 进一步对上述4个时期的叶片进行台 盼蓝染色 以观察叶片细胞死亡情况 发现在12 h 接种部位 并未出现细胞死亡现象 但在24 h已经开始出现细胞死亡现 象 图1中箭头所示 到48 h时细胞死亡出现的面积更大 图1 这表明 虽然在接种后24 h叶片并未出现明显的病 斑 但在接种部位已经开始发生细胞死亡现象 表明此时病 菌已经成功侵染进入叶片细胞 在接下来的试验中 重点研 究灰霉病菌侵染前2个时期 0和12 h 和侵染后2个时期 24和48 h 番茄叶片中蔗糖转化酶活性 CWIN CIN和 VIN 和可溶性糖 蔗糖 葡萄糖和果糖 含量的动态变化 2 2 灰霉病菌侵染对番茄叶片转化酶活性的影响 对不同 接种时期转化酶活性的测定表明 无论接种与否 叶片中的3 种转化酶CWIN CIN和VIN活性均呈快速上升趋势 图2 但与对照相比 病菌接种情况下3种转化酶活性的上升幅度 更大 表明病菌侵染诱导了3种转化酶的活性 进一步分析 表明 CWIN活性在接种后12 h已经显著高于对照 在12 24 和48 h分别较对照增加48 31 和268 图2A 而CIN 在接种后24 h显著高于对照 图2B 在24和48 h分别较对 照增加61 和101 和CIN类似 VIN也是在接种后 24 h显著高于对照 但仅比对照高31 且其活性在接种后 75148卷11期 彭家丽等 灰霉病对番茄叶片蔗糖转化酶活性和可溶性糖含量的影响 注 E中标尺代表1 cm 其他标尺均代表1 25 cm E和F中箭头表 示在接种部位出现蓝色细胞死亡信号 Note Scale bar in E represents 1 cm other bars all represent 1 25 cm Arrows in E and F indicate blue signal of cell death appears at inoculation sites 图1 灰霉病菌接种后番茄叶片病斑和细胞死亡发展的动态变化 Fig 1 Dynamics of disease symptom and cell death development after inoculated with B cinerea in tomato leaves 48 h和对照无显著差异 图2C 上述证据表明 灰霉接种 对3种转化酶活性均产生诱导效应 其中CWIN活性最先受 到诱导 CIN和VIN活性随后受到诱导 且VIN活性受到诱 导的时间较短 在3种转化酶中 CWIN和CIN活性受病菌诱 导上升的幅度大于VIN 2 3 灰霉病菌侵染对番茄叶片可溶性糖含量的影响 通常 情况下 病菌侵染会诱导可溶性糖分在侵染部位的积累 从 而为植物防御反应提供养分和能量 14 因此 进一步测定 番茄叶片接种部位中的可溶性糖含量 蔗糖 葡萄糖和果 糖 结果表明 3种可溶性糖含量在整个调查时期内 接种 后0 48 h 均呈先上升后下降的变化趋势 但3种可溶性糖 含量在接种叶片和对照叶片之间无显著差异 表明灰霉病菌 接种对叶片中的可溶性糖含量无显著影响 图3A C 虽 然与对照相比 接种后叶片中的可溶性糖含量没有变化 但 己糖 蔗糖在接种后呈降低趋势 在接种后48 h显著低于对 照 图3D 由于高的己糖 蔗糖可诱导植物的抗病反 应 14 因此己糖 蔗糖的降低可能会导致植物的抗病能力 下降 注 表示病菌接种处理与对照之间存在极显著差异 P 0 01 Note indicates significant differences between inoculated and non inoculated tomato leaves P 0 01 图2 灰霉病菌接种对番茄叶片转化酶活性的影响 Fig 2 Effects of B cinerea inoculation on invertase activities in tomato leaves 2 4 灰霉病菌侵染对番茄叶片淀粉和H2O2积累的影 响 对叶片中的淀粉进行原位染色 结果发现在接种后0 h 时 蓝黑色的淀粉信号均匀分布在整个叶片 图4A 在接种 病菌24 h后叶片虽然没有病斑出现 但在接种部位已经出现 蓝黑色信号消失的现象 表明接种部位的淀粉已经消耗殆 尽 接种病菌48 h后 整个叶片的淀粉几乎被完全消耗 特别 是在接种部位及其附近几乎没有淀粉信号的存在 只是离接 种部位较远的部位还有少量淀粉存在 对照叶片在培养 48 h后蓝黑色的淀粉信号只是出现微弱的下降 而且淀粉信 号均匀分布于整个叶片 数据未列出 上述结果表明 灰霉 病菌接种会导致接种部位及其附近的淀粉含量大幅下降 此外 对叶片H2O2的原位染色表明 在接种后0 h时 在叶片中未检测到任何棕红色的H2O2信号 图4B 在接 种病菌24 h后叶片虽然没有病斑出现 但在接种部位已经检 测到H2O2信号 在接种病菌48 h后 伴随着病斑的出现 H2O2信号显著增强 但主要局限于接种部位 只是在紧邻接 种部位的地方出现微弱的H2O2信号 对照叶片在培养48 h 后并未出现明显的H2O2信号 数据未列出 上述结果表 明 灰霉病菌接种会导致接种部位H2O2含量大幅上升 3 结论与讨论 蔗糖分解代谢不仅可以为植物的防御反应提供能量和 碳骨架用于各种抗菌物质的合成 也可以作为信号分子调控 植物抗病基因的表达 14 此外 病菌生长发育所需的糖分也 来自于植物蔗糖的分解 因为绝大部分植物病原菌包括灰霉 病菌主要是利用葡萄糖和果糖作为其能量来源 28 29 因此 植物体内的蔗糖分解酶在植物抗病中发挥着重要作用 目 前研究主要集中在转化酶特别是CWIN在植物抗病中的 作用 30 目前仍不清楚蔗糖转化酶在番茄抵御灰霉病侵染中的 具体作用 笔者系统研究了灰霉病菌侵染对番茄叶片中3 种转化酶 CWIN CIN和CIN 活性的影响 结果发现灰霉病 菌侵染会显著诱导番茄叶片中3种转化酶活性的上升 这 851 安徽农业科学 2020年 注 表示病菌接种处理与对照之间存在极显著差异 P 0 05 Note indicates significant differences between inoculated and non inoculated tomato leaves P 0 05 图3 灰霉病菌接种对番茄叶片可溶性糖含量和己糖 蔗糖的影响 Fig 3 Effects of B cinerea inoculation on the content of soluble sugars and hexose sucrose in tomato leaves 注 图中所有标尺均代表1 cm A中箭头表示在接种部位蓝黑色淀粉信号消失 B中箭头表示在接种部位出现棕红色的H2O2信号 Note Scale bars in A and B all represent 1 cm Arrows in A indicate blue dark signal of starch disappears at inoculation sites arrows in B indicate brown ish red signal of H2O2 appears at inoculation sites 图4 灰霉病菌接种对番茄叶片中淀粉和H2O2分布的影响 Fig 4 Effects of B cinerea inoculation on the distribution of starch and H2O2 in tomato leaves 和其他研究中的发现类似 如辣椒接种Xanthomonas campestris pv vesicatoria Xcv 后 其叶片中的CWIN和VIN 活性持续增加 同样烟草叶片接种Xcv后 CWIN活性也显著 增加 31 通过进一步分析表明 首先 3种转化酶活性受到 病菌侵染诱导的时期不同 其中CWIN转化酶活性受到诱 导的时间最早 接种后12 h 而CIN和VIN活性受到诱导的 时间较晚 接种后24 h 值得注意的是 CWIN活性的上升 发生在叶片细胞死亡出现之前 接种后12 h 而CIN和VIN 活性的上升则出现在叶片细胞死亡之后 接种后24 h 此 外 虽然CIN和VIN的活性都是在接种后24 h受到诱导 但 CIN的诱导可持续到接种后48 h 而VIN活性在接种后48 h 时和对照已无显著差异 其次 3种转化酶在病菌侵染后上 升的幅度不同 其中CWIN活性最高比对照增加268 CIN 最高比对照增加101 而VIN最高仅比对照增加31 因 95148卷11期 彭家丽等 灰霉病对番茄叶片蔗糖转化酶活性和可溶性糖含量的影响 此 从活性诱导时期和活性上升幅度来看 CWIN对灰霉病菌 侵染响应最为灵敏 其次为CIN 最后为VIN 这表明和CIN 与VIN相比 CWIN可能在番茄 灰霉病菌互作中发挥着更 为重要的作用 转基因证据表明蔗糖转化酶特别是CWIN在植物抗病 中发挥着重要作用 但受不同植物或病菌种类的影响 其具 体作用可能是正面的 也可能是负面的 该研究结果表明 虽然接种后转化酶活性的大幅上升 但植物仍出现严重的病 症 表明病菌侵染所诱导的转化酶活性上升似乎更有利于灰 霉病菌的发育 而不利于植物的抗病性 有观点认为 CWIN 活性的小幅上升可为病菌生长发育提供更多的己糖 从而降 低植物的抗病性 而CWIN活性的大幅上升才能产生足够的 己糖信号来激活植物的抗病反应 14 32 如接种病菌Pst DC3000后 抗病拟南芥植株叶片中的CWIN活性上升幅度 远高于不抗病拟南芥植株 33 细菌性病害Xanthomonas campestris pv vesicatoria Xcv 甚至可以向辣椒细胞中分泌一 种致病蛋白因子来抑制辣椒CWIN活性的上升 从而降低辣 椒的抗病能力 31 在该研究中 CWIN活性在接种后12和 24 h分别上升48 和31 只有在接种后48 h才大幅上升 268 同样CIN活性在接种后24 h上升61 而在48 h大 幅上升101 这表明CWIN和CIN在病菌侵染早期活性上 升幅度较小 这可能会促进灰霉病菌的生长发育 导致植物 发病 对叶片中己糖 蔗糖的测定也验证了此推论 病菌侵 染后番茄叶片中的己糖 蔗糖比值呈下降趋势 表明CWIN 和CIN活性的小幅上升并不能提高己糖 蔗糖 因此不能激 活植物的抗病反应 伴随着转化酶活性的上升 灰霉病菌侵染并没有改变叶 片中蔗糖 葡萄糖和果糖的含量 类似的现象也存在于其他 植物病菌互作系统中 如水稻和拟南芥分别受到水稻白叶 枯菌 Xanthomonas oryzae pv oryzae 和Pst DC3000的侵染 后 其叶片中的可溶性糖含量都未发生显著变化 34 35 虽然 糖分含量未发生变化 但糖分消耗速率可能已经发生了较大 变化 因为在接种24和48 h后 接种部位及其附近的淀粉 含量大幅下降 表明灰霉病菌侵染导致叶片对糖分的消耗速 率显著增加 一般认为 植物叶片中储存的淀粉在被植物利 用之前需要首先转化为蔗糖运输到需要糖分的部位 然后蔗 糖被进一步分解为葡萄糖和果糖用于植物的生长发育 14 但该研究揭示伴随着病菌侵染和淀粉含量的下降 番茄叶片 中的蔗糖或己糖 葡萄糖和果糖 含量并未显著上升 可能 的合理解释就是接种后转化酶活性的大幅上升可迅速将蔗 糖分解为葡萄糖和果糖 而葡萄糖和果糖又被植物或病菌快 速的消耗利用 因此 虽然病菌侵染导致淀粉含量下降 但 并没有出现可溶性糖含量显著升高的现象 作为防御反应之一 植物受到病原菌侵染时会增强其清 除活性氧的能力 从而避免活性氧过量积累所导致的植物细 胞死亡 36 灰霉病原菌是一种腐生型病原菌 叶片细胞的 死亡可为其提供包括糖分在内的其他许多养分 从而增加其 致病性 37 该研究对番茄叶片细胞死亡和H2O2的原位染 色表明 接种灰霉病菌24 h后 虽然还不能肉眼观察到番茄 叶片上病斑的出现 但此时已经发生明显的细胞死亡和 H2O2积累现象 这表明番茄叶片不能及时有效清除活性氧 和避免细胞死亡的出现 最终导致灰霉病的发生 参考文献 1 邱珂 甲基营养型芽孢杆菌Lw 6防治灰霉病研究 D 杨凌 西北农 林科技大学 2018 2 张敏 段海 马超 等 木霉菌防治番茄灰霉病田间药效试验 J 植物 医生 2007 20 6 30 31 3 张庆萍 王燕春 王秀琴 等 番茄灰霉病发生特点及室内毒力测定 J 北方农业学报 2018 46 2 69 72 4 黄海 张鑫 邹杭 等 番茄灰霉病菌室内毒力测定及药效试验 J 西 北农林科技大学学报 自然科学版 2015 43 2 184 190 5 武东霞 灰葡萄孢菌 Botrytis cinerea 对苯噻菌酯和咯菌腈的抗药性风 险研究 D 南京 南京农业大学 2015 6 刘圣明 周明国 段亚冰 等 设施蔬菜灰霉病抗药性分子检测及精准 防控关键技术研究与应用 R 河南科技大学 2017 7 吕婷 番茄灰霉病拮抗菌筛选及复合生物海藻液肥研制 D 杭州 浙 江大学 2018 8 宁玉波 灵芝多糖的提取及对番茄抗灰霉病诱导效应的研究 D 泰 安 山东农业大学 2016 9 陈治芳 王文桥 韩秀英 等 新杀菌剂对番茄灰霉病菌的室内毒力及 田间防效 J 植物保护 2011 37 5 193 195 205 10 BERGER S SINHA A K ROITSCH T Plant physiology meets phytopa thology Plant primary metabolism and plant pathogen interactions J Journal of experimental botany 2007 58 15 16 4019 4026 11 RICO A PRESTON G M Pseudomonas syringae pv tomato DC3000 uses constitutive and apoplast 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in planta Botrytis ci nerea inoculation assays for tomato J OL The plant cell 2018 8 8 e2810 2019 12 05 https bio protocol org e2810 DOI 10 21769 BioProtoc 2810 下转第163页 061 安徽农业科学 2020年 200 mg L处理比较适合富硒麦芽的生产 硒处理后小麦籽 粒中的硒主要以有机态形式存在 其中硒代蛋氨酸所占总硒 含量的比例最高 其次为甲基硒半胱氨酸和硒代半胱氨 酸 12 不同品种小麦对硒的富集转化能力影响极为显著 以蛋白质含量高的品种更为有利于硒的吸收和转化 表2 不同小麦品种对硒富集能力的影响 Table 2 Influence of different wheat varieties on selenium enrichment ability 小麦品种 Wheat varieties 蛋白质 Protein g kg 较郑麦004 Compared with Zhengmai 004 总硒 Total selenium mg kg 较郑麦004 Compared with Zhengmai 004 有机硒 Organic selenium mg kg 较郑麦004 Compared with Zhengmai 004 有机硒 总硒 Organic selenium total selenium 郑麦004 Zhengmai 004 119 0 60 50 60 469 99 95 郑麦366 Zhengmai 366 137 0 15 13 93 70 54 88 93 632 54 84 99 93 总之 通过种子萌发过程进行硒营养强化 可以满足人 们对富硒产品的需求 最终有助于人体健康和功能农业的发 展 如何通过种子发芽萌发工艺开发更多硒营养强化小麦 制品等有待更为深入的研究 参考文献 1 CHEN J S An original discovery Selenium deficiency and keshan sisease an endemic heart disease J Asia Pacific journal of clinical nutrition 2012 21 3 320 326 2 RAYMAN M P The importance of selenium to human