黄瓜细菌性角斑病拮抗细菌的筛选及其防治效果.pdf

38 2 421 427 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2022 年 4 月 收稿日期 2021 02 22 基金项目 国家重点研发计划 2017YFD0701301 中国农业科学院科技创新工程 CAAS ASTIP IVFCAAS 农业部园艺作物生物学与种 质创制重点实验室项目 宁夏瓜菜产业协同创新中心 2017DC55 作者简介 共同第一作者 苑宝洁 硕士研究生 E mail 1160893665 李磊 副研究员 E mail lilei01 通信作者 谢 学文 副研究员 E mail xiexuewen 李宝聚 研究员 E mail libaoju DOI 10 16409 ki 2095 039x 2021 06 016 黄瓜细菌性角斑病拮抗细菌的筛选及其防治效果 苑宝洁 1 2 李 磊 1 张红杰 2 石延霞 1 柴阿丽 1 谢学文 1 李宝聚 1 1 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 北京 100081 2 河北北方学院 张家口 075000 摘要 黄瓜细菌性角斑病是近年来危害严重的黄瓜病害之一 严重时可导致黄瓜大面积减产 本实验室从 黄瓜根际土壤中筛选得到一株对黄瓜细菌性角斑病菌有显著抑制效果的生防细菌 ZF145 经菌落形态观察 生理生化测定 Biolog 测定和多基因序列分析 鉴定菌株 ZF145 为贝莱斯芽胞杆菌 Bacillus velezensis 该 菌株在平板离体试验中的抑菌圈直径为 5 60 cm 抑制率为 62 22 在盆栽和田间试验中 贝莱斯芽胞杆 菌 ZF145 对黄瓜细菌性角斑病有显著的防治效果 盆栽防效为 71 10 田间防效为 61 30 平板对峙和 双层培养试验证明菌株 ZF145 具有较为广谱的抑菌效果 可以明显抑制 6 株病原细菌和 8 株病原真菌的生 长 综上 菌株 ZF145 生防性状优良 在植物病害生物防治中有一定应用潜力 关 键 词 黄瓜细菌性角斑病 贝莱斯芽胞杆菌 ZF145 防治效果 中图分类号 S476 文献标识码 A 文章编号 1005 9261 2022 02 0421 07 Screening of Antagonistic Bacteria against Bacterial Angular Leaf Spot of Cucumber and Its Control Effect YUAN Baojie 1 2 LI Lei 1 ZHANG Hongjie 2 SHI Yanxia 1 CHAI Ali 1 XIE Xuewen 1 LI Baoju 1 1 Institute of Vegetables and Flowers Chinese Academy of Agricultural Sciences Beijing 100081 China 2 Hebei North University Zhangjiakou 075000 China Abstract In recent years bacterial angular leaf spot is one of the most serious cucumber diseases which can lead to yield reduction in a large area An antagonistic bacterium ZF145 with significant inhibitory effect on bacterial angular leaf spot was isolated from the rhizosphere soil of cucumber Based on colony morphology physiological and biochemical analysis biolog analysis and multi gene phylogenetic tree analysis the strain ZF145 was identified as Bacillus velezensis Plate inhibition test showed that the diameter of inhibition zone was 5 60 cm and the inhibition rate was 62 22 but pot and field experiments indicated that the control effect on bacterial angular leaf spot was 71 10 and 61 30 respectively The antagonistic experiments showed that strain ZF145 had a broad spectrum antibacterial effect which can significantly inhibit the growth of six pathogenic bacteria and eight pathogenic fungi In conclusion strain ZF145 had excellent biocontrol properties and had a certain application potential in biological control of plant diseases Key words bacterial angular leaf spot of cucumber Bacillus velezensis ZF145 control effect 黄瓜细菌性角斑病是由扁桃假单胞流泪致病变种 Pseudomonas amygdali pv Lachrymans 侵染引起的一 种细菌性病害 1 2 该病在苗期和成株期均可发生 苗期以子叶危害为主 成株期以叶片 叶柄以及卷须危 害为主 发生严重时还可造成茎蔓和果实的危害 3 5 严重影响黄瓜产量 黄瓜细菌性角斑病菌主要在种子 422 中 国 生 物 防 治 学 报 第 38 卷 内或随病残体残留在土壤中存活 也可从伤口或气孔侵入对黄瓜造成危害 6 目前 黄瓜细菌性角斑病的 防治主要依靠铜制剂及农用抗生素等 与杀真菌的药剂相比种类单一 且长期使用单一药剂易造成抗药性 增强 7 因此 有针对性地筛选黄瓜细菌性角斑病菌拮抗菌株 开发可以防治黄瓜细菌性角斑病的微生物 杀菌剂是病害生物防治研究的重要方向 芽胞杆菌具有强大的繁殖能力 对营养要求不高 在各种复杂的环境下都能够生存等优点 在生物防 治中有巨大的开发潜力 已经报道的能防治植物病害的芽胞杆菌主要有枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis 多 粘类芽胞杆菌 Paenibacillus polymyxa 苏云金芽胞杆菌 Bacillus thuringiensis 地衣芽胞杆菌 Bacillus licheniformis 蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus 侧孢芽胞杆菌 Bacillus laterosporus 短小芽胞杆菌 Bacillus pumilus 和贝莱斯芽胞杆菌 Bacillus velezensis 等 8 9 本试验旨在从黄瓜根际土壤中筛选出高效的生防细菌 并对其抑菌效果进行初步研究 以期为黄瓜细 菌性角斑病的生物药剂开发提供依据 1 材料与方法 1 1 试验材料 1 1 1 供试菌株 胡萝卜果胶杆菌胡萝卜亚种 Pectobacterium carotovorum subsp carotovorum 扁桃假单 胞流泪致病变种 Pseudomonas amygdali pv lachrymans 丁香假单胞番茄致病变种 Pseudomonas syringae pv tomato 西瓜嗜酸菌 Acidovorax citrulli 野油菜黄单胞野油菜致病变种 Xanthomonas campestris pv campestris 密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种 Clavibacter michiganense subsp sepedonicums 茄匍柄霉 Stemphylium solani Weber 多主棒孢菌 Corynespora cassiicola 炭疽菌 Colletotrichum sp 辣椒疫霉菌 Phytophthora capsici 尖孢镰孢菌 Fusarium oxysporum 灰葡萄孢菌 Botrytis cinerea 西瓜壳二孢菌 Ascochyta cittulina Smith 茄链格孢菌 Alternaria solani 以上菌株均由中国农业科学院蔬菜花卉研究所保存 1 1 2 供试培养基 LB 培养基 胰蛋白胨 10 g 氯化钠 10 g 酵母提取物 5 g 琼脂 18 g 1 L 蒸馏水 用于拮抗菌株的分离和培养 NA 固体培养基 牛肉膏 3 g 蛋白胨 10 g 氯化钠 5 g 琼脂 18 g 1 L 蒸 馏水 用于病原细菌的培养及拮抗试验 NB 液体培养基 牛肉膏 3 g 蛋白胨 10 g 氯化钠 5 g 1 L 蒸 馏水 用于病原细菌菌悬液的摇培 PDA 培养基 马铃薯 200 g 葡萄糖 20 g 琼脂粉 15 g 1 L 蒸馏水 用于病原真菌的培养及拮抗试验 1 1 3 供试黄瓜品种 黄瓜品种 中农 6 号 由中国农业科学院蔬菜花卉研究所选育 1 2 拮抗细菌的分离及纯化 先将从河北沧州 山东潍坊 寿光 北京通州 大兴等地区采集的黄瓜根际土壤样品中称取 10 g 土样放 入装有 90 mL 无菌水的三角瓶中 置于 28 180 r min 的摇床上震荡 30 min 土壤样品充分悬浮后取出置 于 80 的水浴锅中水浴 10 min 然后将土壤样品按 10 4 10 5 10 6 进行梯度稀释 每个梯度吸取 100 L 于 LB 平板上涂布 置于 28 培养箱中倒置培养 菌落长出后选取不同形态经平板划线法进行纯化后保 存编号 备用 10 12 1 3 黄瓜细菌性角斑病拮抗细菌的筛选 以黄瓜细菌性角斑病为靶标菌 采用双层培养法 12 对 1 2 分离的拮抗细菌进行筛选 首先将活化好的 拮抗细菌和病原菌用无菌接种针挑取单菌落分别转接到 LB 和 NB 液体培养基中 置于 28 180 r min 摇床上振荡培养 24 h 制成菌悬液备用 在 90 mm 的 LB 固体培养皿中央点入 5 L 待测拮抗细菌菌悬液 于 28 培养箱中倒置培养 24 h 待测拮抗细菌长出后取出培养皿倒置放入通风橱中 在每个培养皿的盖 子里加入 3 mL 氯仿 放置 12 h 取出 在 4 mL 5 水琼脂中加入 100 L 黄瓜细菌性角斑病菌悬液 混匀后 倒入 LB 平板中 作为上层 置于 28 培养箱中培养 48 h 后取出观察抑菌圈 并采用十字交叉法对抑菌 圈的直径进行测量 计算抑制率 抑菌率 抑菌直径 对照菌落直径 100 1 4 拮抗细菌 ZF145 的鉴定 1 4 1 菌株 ZF145 形态观察和生理特性测定 采用三线法用接种环挑取活化好的单菌落在 LB 固体平 板培养基上进行划线 置于 28 培养箱中培养 24 h 后取出观察其菌落的颜色 形态和大小 依据 伯 第 2 期 苑宝洁等 黄瓜细菌性角斑病拮抗细菌的筛选及其防治效果 423 杰细菌鉴定手册 第八版及 常见细菌系统鉴定手册 28 培养 24 48 h 后 对生理生化特征进 行鉴定 13 1 4 2 Biolog 测定 挑取菌株 ZF145 单菌落接种至 LB 培养基试管斜面上 28 培养 24 h 由中国农业 微生物菌种保藏中心使用 BIOLOG GEN 试剂盒 按照试剂盒说明书操作 对菌株 ZF145 进行唯一碳源 利用的测定 1 4 3 多基因扩增及序列分析 采用细菌基因组 DNA 提取试剂盒 试剂盒购北京自天根生化科技有限公 司 提取菌株 ZF145 的总 DNA 利用细菌 16S rDNA 的通用引物 27F 5 AGAGTTTGATCCTGGCTCAG 3 和 1492R 5 ACGGCTACCTTGTTACGACTT 3 针对目标基因设计引物 gyrB F 5 GCAGCAAAACAGT TATGATGAA 3 和 R 5 AGTCTTCTCCGATACCTGTGC 3 atpD F 5 ACAAGTTTGTCTTCCTC GCC 3 和 R 5 TGAGGTCGCTCTTCATTTAGG 3 菌株 ZF145 进行 PCR 扩增 11 15 反应总体系为 50 L PCR 扩增程序设置为 94 预变性 3 min 94 变性 30 s 60 退火 1 min 72 延伸 45 s 35 个循环 72 补充延伸 10 min 扩增产物选用 1 琼脂糖凝胶电泳检测 PCR 产物直接采用双向测序 方法进行测序 测序工作由北京博迈德生物技术有限公司完成 将所测得的菌株 ZF145 的 16S rDNA 序列 分析上传 NCBI 利用 NCBI 的 Blast 数据库中进行比对 14 比对不同菌株的 16S rDNA atpD gyrB 基因 采用最大似然法构建系统发育树 分析其亲缘关系 1 5 菌株 ZF145 抑菌谱的测定 1 5 1 细菌抑菌谱测定 菌株 ZF145 对病原细菌的抑菌谱测定采取双层培养的方法 方法参照 1 3 黄瓜细 菌性角斑病拮抗细菌的筛选 1 5 2 真菌抑菌谱测定 采用平板对峙法 15 检测拮抗细菌对病原真菌的抑制效果 PDA 平板中央接种直径 5 mm 的待测病原菌菌饼 28 培养 2 d 后 在距平板中央 3 5 cm 处接种 5 L OD 600 为 0 8 的拮抗菌株 以不接拮抗菌株为对照 28 培养 5 d 每个处理重复 3 次 测量靶标菌的对照菌落半径和处理菌落直径 用抑菌率表示 抑菌率 对照菌落直径 处理菌落直径 对照菌落直径 100 1 6 拮抗菌株 ZF145 对黄瓜细菌性角斑病的防治效果 1 6 1 盆栽防效 将病原菌和拮抗细菌在 NA LB 固体平板上活化 28 培养箱中培养 24 h 后挑取单菌落 转接到 NB LB 液体培养基 置于 28 180 r min 摇床上培养 36 h 后制备成菌悬液待用 盆栽黄瓜长至 2 片真叶时 喷施 1 10 8 cfu mL 黄瓜细菌性角斑病菌悬浮液 接种病菌 24 h 后 采用喷雾接种法接种菌株 ZF145 菌悬液 1 10 8 cfu mL 以 5 中生菌素可湿性粉剂为药剂对照 清水对照只接致病菌不接生防 菌 接菌后将黄瓜苗放入相对湿度 95 温度 26 28 保湿柜中保湿培养 24 h 之后转入相对湿度 50 温度 15 20 的育苗温室培养 重复 3 次 清水对照充分发病后计算病情指数与防治效果 黄 瓜细菌性角斑病 按角斑病斑所占叶片表面积进行分级 0 级 无病斑 1 级 0 5 3 级 6 25 5 级 26 50 7 级 51 75 9 级 75 以上 病情指数 100 各级病叶数 相对级数值 调查总叶数 9 防治效果 100 对照病情指数 处理病情指数 对照病情指数 1 6 2 田间防效 本试验于 2019 年 1 月在中国农业科学院寿光蔬菜研发中心日光温室内检测贝莱斯芽胞 杆菌对黄瓜细菌性角斑病的田间防治效果 试验期间温室内按同一标准进行管理 在温室内设置 3 个独立 的隔离拱棚 每个拱棚长为 10 m 宽为 3 m 共计 30 m 2 每个拱棚内种植 2 垄黄瓜 每垄种植 33 株 待 黄瓜植株长至 10 片真叶时 采用喷雾接种法将 1 10 8 cfu mL 的黄瓜细菌性角斑病菌悬液接种于黄瓜植株 上 每株黄瓜接种 25 mL 菌悬液 24 h 后分别接种 1 10 8 cfu mL 贝莱斯芽胞杆菌 ZF145 菌悬液 100 倍液 喷雾处理 5 中生菌素可湿性粉剂 1000 倍喷雾处理和清水对照 清水对照只接致病菌 待清水对照发病 后 开始调查其他处理的病情指数 计算防治效果 2 结果与分析 2 1 拮抗细菌的分离筛选 采用平板稀释法 对采集的 7 份黄瓜根际土壤样品中的拮抗细菌进行分离 最终获得 384 株拮抗细菌 并对其进行保存 编号 通过双层培养法测定对黄瓜细菌性角斑病的抑制效果 筛选到 8 株对黄瓜细菌性 424 中 国 生 物 防 治 学 报 第 38 卷 角斑病抑制效果较好的拮抗菌株 其中菌株 ZF145 抑菌圈直径最大 图 1 显著高于其他菌株的抑菌直 径 为 5 60 cm 抑制效果为 62 22 表 1 A ZF145 B CK 图 1 菌株 ZF145 对黄瓜细菌性角斑病的抑制效果 Fig 1 The inhibitory effect of antagonistic strain ZF145 on bacterial angular leaf spot of cucumber 表 1 拮抗细菌菌株对黄瓜细菌性角斑病的防效 Table 1 Control effect of antagonistic bacterial strains on bacterial angular leaf spot of cucumber 菌株 Strains 抑菌圈直径 Colony diameter cm 抑菌率 Inhibition rate ZF68 3 50 0 50 38 89 5 56 bc ZF72 3 10 0 17 34 44 1 92 b ZF73 3 77 0 25 41 85 2 80 bcd ZF74 3 17 0 29 35 19 3 21 d ZF76 3 83 0 29 42 59 3 21 cd ZF77 3 10 0 36 34 44 4 01 d ZF79 3 43 0 40 38 15 4 49 bcd ZF145 5 60 0 29 62 22 3 21 a 2 2 拮抗细菌 ZF145 的鉴定 菌株 ZF145 在 28 培养箱中培养 24 h 后 在 LB 固体培养皿上菌落为乳白色 边缘不规则 有褶皱 图 2 生理生化测定结果表明 菌株 ZF145 为革兰氏阳性菌 在 NaCl 含量 1 8 的培养基上均能 生长 柠檬酸盐利用 明胶液化为阴性 Biolog 检测结果表明 菌株 ZF145 可以利用 D 葡萄糖 氯化锂 图 2 贝莱斯芽胞杆菌 ZF145 在 LB 培养基的菌落形态 Fig 2 The colony morphology of Bacillus velezensis ZF145 on LB medium 第 2 期 苑宝洁等 黄瓜细菌性角斑病拮抗细菌的筛选及其防治效果 425 亚碲酸钾 1 乳酸钠 但不能利用 D 山梨醇 D 甘露醇 丙三醇 L 谷氨酸 D 天冬氨酸 D 丝氨酸 初步鉴定菌株 ZF145 属于芽胞杆菌属 表 2 菌株 ZF145 全基因组长 3929800 bp 登录号 GCA 014622705 1 分析菌株 ZF145 的多基因系统发育树 该菌株与贝莱斯芽胞杆菌 Bacillus velezensis CP055160 聚在一簇 确定菌株 ZF145 为贝莱斯芽胞杆菌 表 2 ZF145 生理生化特征 Table 2 Physiological and biochemical characteristics of ZF145 项目 Items 反应 Reaction 项目 Items 反应 Reaction 革兰氏染色反应 Gram stain 1 8 NaCl 柠檬酸盐利用 Citric acid 吐温 40 Tween 40 半乳糖 Galactose 天冬氨酸 Aspartic acid 1 乳酸钠 Sodium lactate 丝氨酸 Serine D 果糖 6 PO4 D Fructose 6 PO4 山梨醇 Sorbitol 盐酸胍 Guanidine HCl 丙三醇 Glycerol 注 表示该试验结果为阳性 表示该试验结果为阴性 Note indicated that the result of the experiment was positive indicated that the result of the experiment was negative 图 3 菌株 ZF145 基于多基因序列构建系统发育树 Fig 3 Phylogenetic tree based on the multigene sequences of strain ZF145 2 3 菌株 ZF145 抑菌谱的测定 拮抗菌株 ZF145 可以明显抑制胡萝卜软腐果胶杆菌 丁香假单胞番茄致病变种 马铃薯环腐病菌 野 油菜黄单胞野油菜致病变种和西瓜嗜酸菌 5 种病原细菌的生长 且对病原真菌也有明显的抑制效果 可以 抑制番茄匍柄霉病 灰葡萄孢 西瓜壳二孢 尖孢镰孢菌 茄链格孢 辣椒炭疽病菌 多主棒孢菌 辣椒 疫霉菌 8 种病原真菌的生长 表明拮抗菌株 ZF145 具有较为广谱的抑菌能力 表 3 426 中 国 生 物 防 治 学 报 第 38 卷 表 3 菌株 ZF145 对病原菌的抑菌效果 Table 3 The inhibitory effect of ZF145 on 14 different pathogenic fungi 病原菌 Pathogen 抑菌率 Inhibition rate 病原菌 Pathogen 抑菌率 Inhibition rate 胡萝卜软腐果胶杆菌 P carotovorum subsp carotovorum 45 19 4 49 c 灰葡萄孢菌 B cinerea 63 09 3 76 a 丁香假单胞菌番茄致病变种 P syringae pv tomato 42 59 3 21 c 多主棒孢菌 C cassiicola 53 67 3 79 b 西瓜嗜酸菌 A citrulli 14 81 3 21 f 尖孢镰孢菌 F oxysporum 31 25 3 31 d 野油菜黄单胞野油菜致病变种 X campestris pv campestris 25 93 3 21 e 茄链格孢菌 A solani 43 53 2 35 c 番茄匍柄霉菌 S solani Weber 48 11 2 86 c 炭疽菌 Colletotrichum sp 54 07 1 41 b 西瓜壳二孢菌 A cittulina Smith 46 33 2 98 c 辣椒疫霉菌 P capsici 43 63 0 94 c 密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种 C michiganense subsp sepedonicums 30 37 2 80 de 2 4 拮抗菌株 ZF145 对黄瓜细菌性角斑病防治效果 2 4 1 盆栽防效 采用喷雾接种法对两叶一心的黄瓜植株接种黄瓜细菌性角斑病菌 4 d 后 清水对照开始 发病 其病情指数 21 09 而接种拮抗菌株 ZF145 菌悬液 1 10 8 cfu mL 后 黄瓜植株的病情指数为 6 10 防治效果为 71 10 与对照药剂中生菌素的防治效果无明显差异 表 4 研究表明从土壤样品中分离出 来的贝莱斯芽胞杆菌 ZF145 在温室条件下对黄瓜细菌性角斑病具有良好的防治效果 表 4 菌株 ZF145 对黄瓜细菌性角斑病的盆栽防治效果 Table 4 Control effect of strain ZF145 on bacterial angular leaf spot of cucumber 处理 Treatment 病情指数 Disease index 防治效果 Control effect 贝莱斯芽胞杆菌 Bacillus velezensis ZF145 1 10 8 cfu mL 6 10 0 50 71 10 2 37 a 5 中生菌素 Zhongshengmycin1000 6 19 0 38 70 63 1 82 a 清水对照 CK 21 09 1 02 2 4 2 田间防效 贝莱斯芽胞杆菌 ZF145 按 10 8 CFU mL 浓度施用时对黄瓜细菌性角斑病的防治效果为 61 30 对照药剂 5 中生菌素可湿性粉剂按 1000 倍施用时对黄瓜细菌性角斑病的防治效果为 54 48 表 5 同等条件下 贝莱斯芽胞杆菌 ZF145 的防治效果高于对照药剂中生菌素的防治效果 表明菌株 ZF145 在田间也具有较强的抑菌活性 表 5 菌株 ZF145 对黄瓜细菌性角斑病的田间防治效果 Table 5 Control efficacy of antagonistic bacteria strain ZF145 on bacterial angular leaf spot of cucumber 处理 Treatment 病情指数 Disease index 防治效果 Control effect 贝莱斯芽胞杆菌 B velezensis ZF145 1 10 8 cfu mL 9 16 0 65 61 30 2 73 a 5 中生菌素 Zhongshengmycin1000 10 77 0 48 54 48 2 03 b 清水对照 CK 23 66 2 30 3 讨论 近年来 黄瓜细菌性角斑病发生严重 对黄瓜产量造成严重的威胁 目前 对黄瓜细菌性角斑病的防 治方法主要采用化学防治 但化学药剂存在种类单一 抗药性等问题 15 而生物防治能有效地避免这些问 题 并且可以达到一菌多防的效果 16 17 大量研究发现 土壤中存在大量的拮抗细菌 可以抑制多种病原 菌的生长 从马铃薯根际土壤中筛选到一株解淀粉芽胞杆菌 Z17 2 对马铃薯立枯丝核菌具有明显的抑制 作用 18 因此 本试验以筛选黄瓜细菌性角斑病的高效生防菌株为出发点 从黄瓜根际土壤中分离出 384 株细菌菌株 并成功筛选获得了 1 株对黄瓜细菌性角斑病具有良好拮抗能力的贝莱斯芽胞杆菌 ZF145 其 离体抑菌率为 62 22 盆栽防治效果为 71 10 田间防治效果为 61 30 大量研究表明 对 1 种病原菌具有明显抑制作用的拮抗菌株可能会对多种病原菌具有抑制效果 研究 发现贝莱斯芽胞杆菌可以有效的抑制多主棒孢病菌 19 小麦赤霉病 立枯丝核菌 20 等病原菌的生长 李新 第 2 期 苑宝洁等 黄瓜细菌性角斑病拮抗细菌的筛选及其防治效果 427 宇 21 研究发现解淀粉芽胞杆菌 ZF 57 可以有效抑制密执安棒杆菌番茄溃疡致病型 丁香假单胞菌番茄致病 变种 胡萝卜软腐果胶杆菌 青枯雷尔氏菌 茄匍柄霉菌 多主棒孢菌的生长 本研究结果发现贝莱斯芽 胞杆菌 ZF145 可以有效抑制胡萝卜软腐果胶杆菌 丁香假单胞菌流泪致病变种 丁香假单胞菌番茄致病变 种 密执安棒杆菌马铃薯环腐致病变种 茄匍柄霉菌 灰葡萄孢菌 尖孢镰孢菌等多种病原菌的发生 表 明贝莱斯芽胞杆菌 ZF145 应用空间较为广泛 因此 以生防菌的独特优势可作为防治真菌病害及细菌病害 的有效拮抗菌株 这表明贝莱斯芽胞杆菌 ZF145 在黄瓜细菌性角斑病防治方面具有广阔的应用前景 参 考 文 献 1 李磊 基于全基因组测序的黄瓜细菌性流胶病病原菌致病力和比较基因组分析 D 北京 中国农业科学院 2018 2 Jeong H Klopper W Ryu CM Genome sequences of Pseudomonas amygdali pv Tabaci strain ATCC 11528 and pv Lachrymans strain 98A 744 J Genome A 2015 3 3 e00683 15 3 何永梅 李荣 黄瓜细菌性角斑病发生原因与综合防治 J 植物医生 2018 31 2 59 61 4 黄和喜 金静 刘士辉 等 靶斑病与霜霉病 细菌性角斑病的区别及其防治 J 现代园艺 2018 369 21 168 169 5 邓银宝 肖艳 范小明 等 12 松脂酸铜悬浮剂防治黄瓜细菌性角斑病试验效果初报 J 现代园艺 2017 23 5 6 6 代园凤 丁香假单胞菌黄瓜致病变种黄瓜株系和甜瓜株系的分子生物学比较 D 南京 南京农业大学 2013 7 王素英 对作物具有促生和防病作用细菌组合的筛选 D 北京 中国农业大学 2003 8 李德全 陈志谊 聂亚锋 生防菌 Bs 916 及高效突变菌株抗菌物质及其对水稻抗性诱导作用的研究 J 植物病理学报 2008 2 192 198 9 赵昱榕 李磊 谢学文 等 贝莱斯芽胞杆菌 ZF2 对多主棒孢病菌防治效果 J 中国生物防治学报 2019 35 2 217 225 10 谢学文 董瑞利 石延霞 等 黄瓜炭疽病拮抗细菌的筛选及其抑制效果 J 中国生物防治学报 2016 32 2 215 220 11 赵旖森 张亮 盛浩 等 辣椒疫霉病生防细菌的筛选鉴定及其防效 J 中国蔬菜 2019 1 65 69 12 袁雪 侯旭 胡晓 等 桃褐腐病拮抗细菌的筛选 鉴定及生防作用 J 北京农学院学报 2018 33 04 11 17 13 东秀珠 蔡妙英 常见细菌系统鉴定手册 M 北京 科学出版社 2001 14 朱飞舟 陈利玉 陈汉春 16SrRNA 基因序列分析法测定病原细菌 J 长沙 中南大学学报 医学版 2013 38 10 1035 1041 15 程永乐 马铃薯四种病害拮抗菌的筛选及发酵条件优化 D 呼和浩特 内蒙古农业大学 2019 16 崔彦 防治黄瓜细菌角斑病的中草药提取物的筛选与研究 D 保定 河北农业大学 2008 17 Gao H Li P Xu X et al Research on Volatile Organic Compounds From Bacillus subtilis CF 3 Biocontrol Effects on Fruit Fungal Pathogens and Dynamic Changes During Fermentation J Frontiers in Microbiology 2018 9 456 18 李夏冰 刘瑜 时浩杰 等 黄瓜细菌性角斑病对噻唑锌的抗药性风险评估 J 农药 2013 52 11 832 834 850 19 李焕玲 李宝聚 李宝聚博士诊病手记 五十三 黄瓜细菌性角斑病的症状多样性与综合防治 J 中国蔬菜 2012 21 23 25 20 赵先丽 孙军德 程海涛 黄瓜细菌性角斑病的拮抗细菌筛选初报 J 沈阳农业大学学报 2005 3 95 97 21 李新宇 解淀粉芽胞杆菌微粉剂的研制及对黄瓜棒孢叶斑病的防治研究 D 沈阳 沈阳农业大学 2020 责任编辑 吕平香