GB T 31790-2025 茄科作物重要类病毒检测鉴定方法.pdf

ICS65 020 20 CCSB16 中华人民共和国国家标准 GB T31790 2025 代替GB T31790 2015 茄科作物重要类病毒检测鉴定方法 DetectionandidentificationofmainviroidsforSolanaceaecrops 2025 04 25发布2025 11 01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布 前 言 本文件按照GB T1 1 2020 标准化工作导则 第1部分 标准化文件的结构和起草规则 的规则 起草 本文件代替GB T31790 2015 马铃薯纺锤块茎类病毒检疫鉴定方法 与GB T31790 2015相 比 除结构调整和编辑性改动外 主要技术变化如下 a 增加了 茄科作物重要类病毒分类信息 见第4章 b 增加了 方法原理 见第5章 c 更改了 试剂 见6 1 2015年版的3 3 d 更改了 仪器设备 见6 2 2015年版的3 1 e 更改了 用具 见6 3 2015年版的3 2 f 增加了 制样 见第7章 g 更改了 结果判定 见第9章 2015年版的第5章 h 删除了 往复双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法 R PAGE 见2015年版的附录B 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 本文件由全国植物检疫标准化技术委员会 SAC TC271 提出并归口 本文件起草单位 中国检验检疫科学研究院 沈阳农业大学 福州海关技术中心 本文件主要起草人 赵振兴 张永江 夏子豪 董铮 沈建国 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为 2015年首次发布为GB T31790 2015 本次为第一次修订 GB T31790 2025 茄科作物重要类病毒检测鉴定方法 1 范围 本文件描述了茄科作物重要类病毒 马铃薯纺锤块茎类病毒 金鱼草潜隐类病毒 辣椒小果类病毒 番茄褪绿矮化类病毒 的RT PCR和实时荧光RT PCR检测方法 本文件适用于茄科作物材料及种子中重要类病毒 马铃薯纺锤块茎类病毒 金鱼草潜隐类病毒 辣 椒小果类病毒 番茄褪绿矮化类病毒 的分子生物学检测 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 其中 注日期的引用文 件 仅该日期对应的版本适用于本文件 不注日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修改单 适用于 本文件 GB T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 4 茄科作物重要类病毒分类信息 4 1 中文名 马铃薯纺锤块茎类病毒 学 名 Pospiviroidfusituberis 英文名 potatospindletuberviroid 缩 写 PSTVd 异名 potatogothicvirus potatospindleviroid spindletuberviroid tomatobunchytopviroid 分类地位 马铃薯纺锤块茎类病毒科 Pospiviroidae 马铃薯纺锤块茎类病毒属 Pospiviroid 马铃薯纺锤块茎类病毒的其他信息见附录A 4 2 中文名 金鱼草潜隐类病毒 学 名 Pospiviroidlatenscolumneae 英文名 Columnealatentviroid 缩 写 CLVd 分类地位 马铃薯纺锤块茎类病毒科 Pospiviroidae 马铃薯纺锤块茎类病毒属 Pospiviroid 金鱼草潜隐类病毒的其他信息见附录B 4 3 中文名 辣椒小果类病毒 学 名 Pospiviroidparvicapsici 英文名 pepperchatfruitviroid 缩 写 PCFVd 分类地位 马铃薯纺锤块茎类病毒科 Pospiviroidae 马铃薯纺锤块茎类病毒属 Pospiviroid 辣椒小果类病毒的其他信息见附录C 1 GB T31790 2025 4 4 中文名 番茄褪绿矮化类病毒 学 名 Pospiviroidchloronani 英文名 tomatochloroticdwarfviroid 缩 写 TCDVd 分类地位 马铃薯纺锤块茎类病毒科 Pospiviroidae 马铃薯纺锤块茎类病毒属 Pospiviroid 番茄褪绿矮化类病毒的其他信息见附录D 5 方法原理 马铃薯纺锤块茎类病毒 金鱼草潜隐类病毒 辣椒小果类病毒 番茄褪绿矮化类病毒的基因组特征 是该类病毒检疫鉴定的依据 根据马铃薯纺锤块茎类病毒 金鱼草潜隐类病毒 辣椒小果类病毒 番茄 褪绿矮化类病毒的基因组特征建立RT PCR和实时荧光RT PCR检测方法 通过这些方法的有效组 合 判断样品是否带有马铃薯纺锤块茎类病毒 金鱼草潜隐类病毒 辣椒小果类病毒或番茄褪绿矮化类 病毒 6 试剂 仪器设备及用具 6 1 试剂 除另有规定外 所有试剂均为分析纯 6 1 1 试验用水应符合GB T6682中相关规定 6 1 2 RT PCR试剂应符合附录E中E 1 6 1 3 实时荧光RT PCR试剂应符合附录F中F 1 6 2 仪器设备 6 2 1 高速冷冻离心机 6 2 2 电子天平 6 2 3 PCR仪 6 2 4 实时荧光PCR仪 6 2 5 水平电泳系统 6 2 6 20 低温冰箱 6 2 7 40 低温冰箱 6 2 8 80 超低温冰箱 6 2 9 凝胶成像分析系统 6 2 10 恒温水浴锅 6 3 用具 6 3 1 可调移液器 2 5 L 10 L 20 L 100 L 200 L 1000 L 6 3 2 移液器吸头 6 3 3 1 5mL离心管 7 制样 7 1 植物材料制样 待测样品为植物材料 小苗或叶片或果实或块茎 时 挑选有疑似症状的部位单独取样编号 症状描 2 GB T31790 2025 述见附录A 附录D 未表现症状的植物材料分组 2份 3份植物材料为1组 编号 采集的每组样品 进行混合 取一定量的待测样品 如0 5g叶片 每1g样品加入5mL 10mL1 PBS缓冲液 见 E 1 1 研磨后离心取上清液 用于核酸提取 或称取一定量的待测样品 如0 1g叶片 提取核酸后用 于RT PCR或实时荧光RT PCR检测 7 2 种子制样 待测样品为种子时 随机抽取约3000粒种子 或根据实际情况随机抽取0 5g 3 0g种子 研磨成 粉末后每1g样品加入5mL 10mL1 PBS缓冲液 见E 1 1 常温浸泡0 5h 1h或4 浸泡 8h 12h后离心取上清液 用于核酸提取 或称取0 1g干粉样品提取核酸后用于RT PCR或实时荧 光RT PCR检测 8 检测鉴定 8 1 RT PCR检测 取第7章制备的待测样品核酸进行RT PCR检测 试验应设置阳性对照 阴性对照和空白对 照 具体操作按照附录E规定的方法进行 8 2 实时荧光RT PCR检测 取第7章制备的待测样品核酸进行实时荧光RT PCR检测 试验应设置阳性对照 阴性对照和空 白对照 具体操作按照附录F规定的方法进行 9 结果判定 样品检测的结果判定按以下规则进行 若RT PCR检测结果为阴性 则判定样品未携带待测类病毒 若RT PCR检测结果为阳性 且 实时荧光RT PCR检测结果为阳性 则判定样品携带待测类病毒 若RT PCR检测结果为阳 性 且测定的序列为待测类病毒序列 则判定样品携带待测类病毒 若实时荧光RT PCR检测结果为阴性 则判定样品未携带待测类病毒 若实时荧光RT PCR 检测结果为阳性 则判定样品携带待测类病毒 10 结果记录与样品保存 10 1 结果记录 记录包括样品来源 种类 检测时间 地点 方法 结果和检测人员签字 RT PCR检测应有电泳图 片 实时荧光RT PCR检测应有扩增曲线图 10 2 样品保存 阳性样品直接放于 80 超低温冰箱或冷冻干燥后放于 20 低温冰箱或 40 低温冰箱 至 少保存一年 保存的样品要做好标记和登记工作 以备复验 谈判和仲裁 保存期满后 应经灭活处理 3 GB T31790 2025 附 录 A 资料性 马铃薯纺锤块茎类病毒其他信息 A 1 寄主范围 自然寄主有马铃薯 Solanumtuberosum 番茄 Solanumlycopersicum 辣椒属植物 Capsium sp 鳄梨 Perseaamericana 人参果 Solanummuricalum 曼陀罗 Daturastramonium 素叶白 英 Solanumjasminoides 蓝花茄 S rantonnetii 果酱木 Streptosolenjamesonii 和灯笼果 Physalisperuviana 等 A 2 地理分布 亚洲 阿富汗 孟加拉国 中国 广西 河北 黑龙江 江苏 吉林 辽宁 内蒙古 青海 陕西 山东 印度 以色列 日本 哈萨克斯坦 巴基斯坦 越南 欧洲 奥地利 阿塞拜疆 白俄罗斯 比利时 保加利亚 克罗地亚 捷克 丹麦 爱沙尼亚 芬兰 法国 格鲁吉亚 德国 希腊 匈牙利 爱尔兰 意大利 立陶宛 马耳他 黑山 荷兰 波兰 葡萄牙 俄罗斯 斯洛 文尼亚 西班牙 瑞典 瑞士 土耳其 乌克兰 英国 美洲 阿根廷 巴西 哥斯达黎加 古巴 多米尼加 墨西哥 秘鲁 美国 加拿大 委内瑞拉 非洲 贝宁 埃及 加纳 肯尼亚 尼日利亚 南非 乌干达 大洋洲 澳大利亚 A 3 症状 侵染马铃薯引起的症状表现与其株系 栽培品种品系及环境条件有关 PSTVd侵染马铃薯后引起 植株僵直 纤细 矮化 叶片小而直立 叶色浓绿 有时卷缩和扭曲 有的全株失去润泽的绿色 有的从上 方观察叶子是暗绿色和皱缩的 有的顶部叶片变小 卷曲 耸立 有的则不表现症状 块茎变小 畸形典 型块茎症状表现为伸长呈纺锤状或哑铃形 有时龟裂 有的芽眼突出 PSTVd弱株系通常造成马铃薯 减产17 24 强株系可引起减产60 70 侵染番茄和辣椒引起植株矮化 生长不良 顶部新叶出现黄化 老叶出现坏死 黄化卷曲等症状 有 时不出现明显的症状 见图A 1 图A 2 4 GB T31790 2025 来源 Mackie等 2019 图A 1 马铃薯纺锤块茎类病毒侵染马铃薯引起的症状 来源 Zhang等 2023 图A 2 马铃薯纺锤块茎类病毒侵染番茄引起的症状 A 4 传播途径 主要通过被感染的繁殖材料如种子及种薯进行远距离传播 田间主要通过机械摩擦进行传播 也 有研究报道 PSTVd可通过蚜虫传播 A 5 基因组 PSTVd的基因组是一条共价闭合的单链环状RNA分子 基因组长341nt 364nt 通常为 359nt 具有5个功能区 形成稳定的杆状或拟杆状二级结构 该属类病毒通过不对称滚环模式进行复 制 基因组不编码蛋白质 5 GB T31790 2025 附 录 B 资料性 金鱼草潜隐类病毒其他信息 B 1 寄主范围 自然寄主主要为鱼花属 Columnea 袋鼠花属 Nematanthus 双色茉莉 Brunfelsiaundulata 大岩桐属 Gloxinia 等观赏园艺植物 在田间主要侵染番茄 Solanumlycopersicum 也可侵染辣椒属 Capsiumsp 马铃薯 Solanumtuberosum 茄子 Solanummelongena 等重要茄科作物 B 2 地理分布 亚洲 泰国 越南 中国台湾地区 欧洲 比利时 丹麦 法国 意大利 荷兰 英国 美洲 美国 加拿大 哥斯达黎加 非洲 马里 B 3 症状 CLVd侵染的观赏园艺植物通常没有症状 但可能成为茄科作物的毒源 茄科作物被CLVd侵染的 症状与马铃薯纺锤块茎类病毒类似 出现褪绿 叶片变古铜色 脱水脆化 叶型扭曲变形 叶脉坏死 植株 生长减缓等症状 见图B 1 造成严重的产量损失 来源 Laomanotham等 2022 图B 1 金鱼草潜隐类病毒侵染番茄引起的症状 6 GB T31790 2025 B 4 传播途径 CLVd可通过机械摩擦 花粉 种子传播 CLVd在寄主矮牵牛的种传率为25 在寄主番茄的种 传率为5 3 100 B 5 基因组 CLVd的基因组是一条共价闭合的单链环状RNA分子 基因组长374nt左右 具有5个功能 区 形成稳定的杆状或拟杆状二级结构 该属类病毒通过不对称滚环模式进行复制 基因组不编码蛋 白质 7 GB T31790 2025 附 录 C 资料性 辣椒小果类病毒其他信息 C 1 寄主范围 主要侵染辣椒属 Capsiumsp 番茄 Solanumlycopersicum 也可侵染马铃薯 Solanumtubero sum 茄子 Solanummelongena 等重要茄科作物 C 2 地理分布 亚洲 泰国 越南 沙特阿拉伯 以色列 欧洲 比利时 荷兰 美洲 加拿大 C 3 症状 在辣椒中 被侵染的辣椒果实大小减少到原来的50 左右 植株长势略减缓 新叶比健康植株略小 且叶色苍白 部分病株通常在种植季末才出现症状 在番茄中 病株幼叶面出现坏死斑 叶脉和叶柄处 出现坏死条 长势严重减弱 在马铃薯中 叶面和叶柄同样出现坏死 块茎生长畸形 呈细长状 且侧面 异常伸长 块茎体积下降至四分之一至二分之一 见图C 1 来源 Yanagisawa和Matsushita 2017 Verhoeven等 2009 图C 1 辣椒小果类病毒侵染马铃薯 辣椒引起的症状 8 GB T31790 2025 C 4 传播途径 PCFVd可通过机械摩擦 花粉 种子传播 PCFVd在寄主辣椒的种传率为19 在寄主番茄的种 传率为0 1 4 带毒花粉传播率为69 2 带毒种子传毒率为65 3 C 5 基因组 PCFVd的基因组是一条共价闭合的单链环状RNA分子 基因组长348nt左右 具有5个功能 区 形成稳定的杆状或拟杆状二级结构 该属类病毒通过不对称滚环模式进行复制 基因组不编码蛋 白质 9 GB T31790 2025 附 录 D 资料性 番茄褪绿矮化类病毒其他信息 D 1 寄主范围 主要侵染番茄 Solanumlycopersicum 辣椒属 Capsiumsp 马铃薯 Solanumtuberosum 茄 子 Solanummelongena 等重要茄科作物 也可侵染小蔓长春花 Vincaminor 马鞭草属 Verbena 矮牵牛属 Petunia 等观赏园艺植物 D 2 地理分布 亚洲 印度 以色列 日本 欧洲 比利时 捷克 芬兰 法国 德国 荷兰 挪威 葡萄牙 斯洛文尼亚 西班牙 英国 美洲 加拿大 墨西哥 美国 D 3 症状 不同株系的致病力不同 被侵染的番茄植物 早期出现叶片褪绿和顶端发育迟缓 症状进一步发展 为整株生长迟缓 叶片变黄铜色或紫色 叶片减少 严重变形 卷曲 坏死 果实数量减少 果实变形 严重 时整株死亡 见图D 1 来源 Matsushita等 2008 https ephytia inra fr en C 5244 Tomato Tomato chlorotic dwarf viroid TCDVd 图D 1 番茄褪绿矮化类病毒侵染番茄引起的症状 01 GB T31790 2025 D 4 传播途径 TCDVd可通过机械摩擦 花粉传播 有研究发现TCDVd可被熊蜂在传粉过程中传播 TCDVd的 种传研究结果相互矛盾 这可能是致病株系不同造成的 部分株系不种传 有株系在寄主矮牵牛的种传 率为25 在寄主番茄的种传率为5 3 100 D 5 基因组 TCDVd的基因组是一条共价闭合的单链环状RNA分子 基因组长360nt左右 具有5个功能 区 形成稳定的杆状或拟杆状二级结构 该属类病毒通过不对称滚环模式进行复制 基因组不编码蛋 白质 11 GB T31790 2025 附 录 E 规范性 RT PCR检测 E 1 试剂 E 1 1 1 PBS缓冲液 pH7 2 7 4 使用电子天平称取8 0g氯化钠 NaCl 0 2g氯化钾 KCl 1 15g磷酸氢二钠 Na2HPO4 0 2g 磷酸二氢钾 KH2PO4 溶于800mL灭菌双蒸水中 并定容至1000mL 4 储存 E 1 2 核酸提取及扩增试剂 核酸提取试剂为合格的RNA提取试剂盒 E 1 3 电泳缓冲液TAE 50 使用电子天平称取242g三羟甲基氨基甲烷 Tris 57 1mL冰乙酸 C2H4O2 37 2g乙二胺四乙 酸二钠 Na2EDTA 2H2O 溶于灭菌双蒸水 定容至1000mL 用时稀释至1 TAE 注 TBE等电泳缓冲液同等使用 E 2 检测步骤 E 2 1 核酸提取 称取0 1g样品加液氮研磨成粉末状 迅速将其移入灭菌的1 5mL离心管中 或将第7章制备的上 清液100 L移入1 5mL离心管中 加入0 5mL的裂解液SL 剧烈振荡1min 在高速离心机中 12000r min离心2min 将上清液移入过滤柱上 过滤柱放在收集管中 12000r min离心2min 小 心吸取上层无色水相到新离心管中 缓慢加入0 4倍上清液体积的无水乙醇 混匀后转移到吸附柱 中 12000r min离心15s 弃取收集管废液 向吸附柱中加入350 L去蛋白液 12000r min离心 15s 弃取收集管废液 向吸附柱中加入80 LDNase 工作液 含10 LDNase 工作液和70 L缓 冲液 室温放置15min 向吸附柱中加入350 L去蛋白液 12000r min离心15s 弃取收集管废 液 向吸附柱中加入500 L漂洗液 12000r min离心15s 弃取收集管废液 重复漂洗一次 弃取收集 管废液 12000r min离心2min 将吸附柱放入一个新的灭菌1 5mL离心管中 向吸附膜的中间部位 悬空滴加30 L双蒸水 室温放置2min 12000r min离心2min 得到RNA溶液 80 保存备用 注 此处以0 1g样品或100 L上清液为例参照过柱法RNA提取试剂盒进行核酸提取 实际检测时根据样品量 按比例调整加入的试剂 其他等效核酸提取试剂同等使用 包括商品化试剂盒 E 2 2 引物序列 E 2 2 1 正向引物PSTVd F 5 GGAGTAATTCCCGCCGAAACAGG 3 反向引物PSTVd R 5 GGTTCCAAGGGCTAAACACC 3 扩增片段长度约195bp E 2 2 2 正向引物CLVd F 5 GCCATGCAAAGRAAAAAGAAYGGG 3 反向引物CLVd R 5 TGCAGGGTCAGGTGTGAACCAC 3 21 GB T31790 2025 扩增片段长度约370bp E 2 2 3 正向引物PCFVd F 5 TTCCACCCTGCTTCTACCGAC 3 反向引物PCFVd R 5 AAAGCACCTCTGTCAGTTGTA 3 扩增片段长度约345bp E 2 2 4 正向引物TCDVd F 5 ACAACTGAAGCTCCCGAGAA 3 反向引物TCDVd R 5 CTGTTTCGCCTTCCACAAG 3 扩增片段长度约241bp E 2 3 cDNA合成 cDNA合成在PCR仪或恒温水浴锅中进行 按下列组分 见表E 1 制备RT反应混合液20 L 反应条件 25 温育20min 37 随机引物 或42 反向引物 反转录1 5h 95 灭活3min 表E 1 cDNA合成体系 试剂名称加样量 L 核酸2 0 反向引物或随机引物 20 mol L 1 0 5 AMV缓冲液4 0 dNTP 10mmol L 2 0 AMV反转录酶 5U L 1 0 RNA酶抑制剂 40U L 1 0 DEPC处理过的H2O9 0 总体积20 0 注 商品化试剂盒同等使用 E 2 4 PCR扩增 PCR反应在PCR仪中进行 PCR反应体系 按表E 2配制 PCR反应条件 94 预变性3min 然后94 变性45s 58 PSTVd 58 CLVd 59 PCFVd 58 TCDVd 退火45s 72 延伸60s 35个循环 最后一个循环结束后72 继续延伸 10min 表E 2 PCR反应体系 试剂名称加样量 L cDNA2 0 正向引物 10 mol L 1 0 反向引物 10 mol L 1 0 ddH2O8 5 2 TaqPCRmix12 5 总体积25 0 注 一步法RT PCR检测试剂盒同等使用 步骤E 2 3和E 2 4合并进行 31 GB T31790 2025 E 2 5 琼脂糖凝胶电泳 制备1 5 的琼脂糖凝胶 然后将PCR产物加入到样品孔中 同时加入DNA分子质量标准物作分 子质量标记 在水平电泳系统中电泳 电泳结束后在凝胶成像分析系统中观察是否扩增出预期的特异 性DNA电泳带 拍照 并保存照片 E 3 结果判定 在阴性对照和空白对照无特异性扩增的条件下 PSTVd阳性对照出现预期195bp大小的扩增片段 若待测样品未出现预期大小的扩增片 段 则判定RT PCR结果为阴性 若待测样品出现预期大小的扩增片段 则判定RT PCR结果 为阳性 CLVd阳性对照出现预期370bp大小的扩增片段 若待测样品未出现预期大小的扩增片 段 则判定RT PCR结果为阴性 若待测样品出现预期大小的扩增片段 则判定RT PCR结果 为阳性 PCFVd阳性对照出现预期345bp大小的扩增片段 若待测样品未出现预期大小的扩增片 段 则判定RT PCR结果为阴性 若待测样品出现预期大小的扩增片段 则判定RT PCR结果 为阳性 TCDVd阳性对照出现预期241bp大小的扩增片段 若待测样品未出现预期大小的扩增片 段 则判定RT PCR结果为阴性 若待测样品出现预期大小的扩增片段 则判定RT PCR结果 为阳性 41 GB T31790 2025 附 录 F 规范性 实时荧光RT PCR检测 F 1 试剂 核酸提取试剂同E 1 2 F 2 引物探针 实时荧光RT PCR所用引物探针见表F 1 表F 1 引物探针序列 目标类病毒名称序列 PSTVd 正向引物qPSTVd F5 GGAGTAATTCCCGCCGAAACAGG 3 反向引物qPSTVd R5 TTCTCGGGAGCTTCAGTTGT 3 探针qPSTVd Pr5 6FAM CTCGCGCCCGCAGGACCACCCCTC BHQ 1 3 CLVd 正向引物qCLVd F15 GGTTCACACCTGACCCTGCAG 3 正向引物qCLVd F25 AAACTCGTGGTTCCTGTGGTT 3 反向引物qCLVd R5 CGCTCGGTCTGAGTTGC 3 探针qCLVd Pr5 6FAM AGCGGTCTCAGGAGCCCCGG BHQ 1 3 PCFVd 正向引物qPCFVd F5 TCTTCTAAGGGTGCCTGTGG 3 反向引物qPCFVd R5 GCTTGCTTCCCCTTTCTTTT 3 探针qPCFVd Pr5 Cy5 CTCCCCCGAAGCCCGCTTAG BHQ 3 3 TCDVd 正向引物qTCDVd F5 TTTCCTTCCTTTGCGCGCCACT 3 反向引物qTCDVd R5 GGAACCACGAGTTTAGTTCCG 3 探针qTCDVd P5 6FAM CTCGCCCCCTTGCGCTGTCGCT BHQ 1 3 F 3 核酸提取 方法同E 2 1 F 4 实时荧光RT PCR反应 实时荧光RT PCR反应在实时荧光PCR仪中进行 体系及反应程序见表F 2 51 GB T31790 2025 表F 2 实时荧光RT PCR反应体系及程序 组分加入量 L 2倍探针法一步混合液 2 ProbeOne StepMix 10 0 探针法一步酶混合液 ProbeOne StepEnzymeMix 0 4 目标类病毒正向引物 10 mol L 0 2 目标类病毒反向引物 10 mol L 0 2 目标类病毒探针 10 mol L 0 1 核酸4 0 RNase freeH2O加至20 0 45 15min 94 30s 94 5s 60 30s 40个循环 注1 此处以一步法qRT PCR试剂盒为例进行实时荧光RT PCR反应 其他商品化试剂盒同等使用 注2 两步法检测试剂盒同等使用 F 5 结果判定 在空白对照及阴性对照无Ct值且无扩增曲线 阳性对照Ct值 30并出现典型扩增曲线的条件下 若不满足该两项条件 此次检测无效 应重做 待测样品的Ct值 40时 判定实时荧光RT PCR结果为阴性 待测样品的Ct值 35时 判定实时荧光RT PCR结果为阳性 待测样品35 Ct值 40时 应重新进行测试 如果重新测试的Ct值 40时 判定实时荧光 RT PCR结果为阴性 如果重新测试的Ct值 40 则判定实时荧光RT PCR结果为阳性 61 GB T31790 2025 参 考 文 献 1 田夏夏 李世访 张志想 类病毒及其分类进展 J 植物保护 2024 50 05 230 237 2 Adkar PurushothamaCR PerreaultJP Currentoverviewonviroid hostinteractions J WileyInterdisciplinaryReviews RNA 2020 11 2 e1570 3 HadidiA SunL RandlesJW Modesofviroidtransmission J Cells 2022 11 4 719 4 LaomanothamS KungwonP PorsoongnoenS etal Characterizationandtransmissionof Columnealatentviroidintomato J InternationalJournalofAgriculturalTechnology 2022 18 4 1633 1650 5 MaJ MudiyanselageSDD WangY Emergingvalueoftheviroidmodelinmolecularbi ologyandbeyond J VirusResearch 2022 313 198730 6 MackieAE BarbettiMJ RodoniB etal Effectsofapotatospindletuberviroidtomato strainonthesymptoms biomass andyieldsofclassicalindicatorandcurrentlygrownpotatoandto matocultivars J Plantdisease 2019 103 12 3009 3017 7 VerhoevenJTJ BotermansM SchoenR etal Possibleoverestimationofseedtransmis sioninthespreadofpospiviroidsincommercialpepperandtomatocropsbasedonlarge scalegrow out trialsandsystematicliteraturereview J Plants 2021 10 8 1707 8 VerhoevenJTJ JansenCCC RoenhorstJW etal Pepperchatfruitviroid biological andmolecularpropertiesofaproposednewspeciesofthegenusPospiviroid J VirusResearch 2009 144 1 2 209 214 9 YanagisawaH MatsushitaY HostrangesandseedtransmissionofTomatoplantamacho viroidandPepperchatfruitviroid J EuropeanJournalofPlantPathology 2017 149 211 217 10 ZhangS Groth HelmsD Viroiddiseasesoftomato M ViralDiseasesofFieldandHor ticulturalCrops AcademicPress 2024 379 385 11 ZhangY LiZ DuY etal Auniversalprobeforsimultaneousdetectionofsixpospivir oidsandnaturalinfectionofpotatospindletuberviroid PSTVd intomatoinChina J Journalof IntegrativeAgriculture 2023 22 3 790 798 71 GB T31790 2025