青海省茄果类蔬菜灰霉病菌灰葡萄孢的遗传多样性.pdf

研究论文 Research paper 22 February 2026 45 2 250154 菌物学报 Mycosystema ISSN 1672 6472 CN 11 5180 Q Copyright 2026 Institute of Microbiology CAS All rights reserved jwxt Http journals Tel 86 10 64807521 Doi 10 13346 j mycosystema 250154 CSTR 32115 14 j mycosystema 250154 资助项目 青海省重点研发与转化计划 2024 NK 107 This work was supported by the Qinghai Provincial Key Research and Development and Transformation Program 2024 NK 107 Corresponding author E mail xianwr ORCID GUAN Zhiyuan 0009 0001 4369 7181 Received 2025 05 22 Accepted 2025 07 03 250154 1 青海省茄果类蔬菜灰霉病菌灰葡萄孢的遗传多 样性 关致远 马永强 咸文荣 青海大学农林科学院 青海省有害生物重点实验室 青海 西宁 810016 摘 要 为明确青海省侵染茄果类蔬菜的灰葡萄孢菌Botrytis cinerea遗传多样性及群体遗传结构 采用ISSR分子标记技术对分离得到的213株茄果类蔬菜灰葡萄孢菌进行了遗传多样性分析 12条 引物共扩增出243个多态性位点 基于ISSR数据的聚类分析显示 213个菌株在0 65相似系数水 平上可划分为9个类群 5个地理种群间Nei s基因多样性指数为 H 为0 437 0 多态位点百分率 P 达100 有效等位基因数 Ne 为1 807 3 Shannon信息指数 I 为0 625 6 观测等位基因数为2 000 0 遗传分化系数 Gst 为0 203 6 基因流 Nm 为1 956 4 灰葡萄孢菌群体遗传变异主要来源于种群内 部 85 基于0 89相似系数 5个地理种群可划分为2个主要类群和3个亚群 从PCoA分析看出 5个种群间存在部分交叉 但整体呈现地理聚集趋势 3个寄主划分的种群间 存在种群间的遗传 变异仅为2 较地理来源种群来看 种群遗传距离近 遗传相似度高 在PCoA分析中 大部分 种群单株形成了交叉紧密 少部分菌株较离散 关键词 灰葡萄孢菌 遗传多样性分析 ISSR分析标记 引用本文 关致远 马永强 咸文荣 2026 青海省茄果类蔬菜灰霉病菌灰葡萄孢的遗传多样性 菌物学报 45 2 250154 Guan ZY Ma YQ Xian WR 2026 Genetic diversity of Botrytis cinerea on solanaceous vegetables in Qinghai Province northwest China Mycosystema 45 2 250154 Research paper 22 February 2026 45 2 250154 Mycosystema ISSN 1672 6472 CN 11 5180 Q 250154 2 Genetic diversity of Botrytis cinerea on solanaceous vegetables in Qinghai Province northwest China GUAN Zhiyuan MA Yongqiang XIAN Wenrong Key Laboratory of Pests and Diseases of Qinghai Province Academy of Agriculture and Forestry Sciences Qinghai University Xining 810016 Qinghai China Abstract In order to clarify the genetic diversity and population genetic structure of Botrytis cinerea on solanaceous vegetables in Qinghai Province 213 strains of Botrytis cinerea isolated from solanaceous vegetables were analyzed by ISSR molecular marker technology A total of 243 polymorphic loci was amplified by 12 primers Cluster analysis based on ISSR data showed that 213 strains could be divided into 9 groups at the level of 0 65 similarity coefficient The Nei s gene diversity index H was 0 437 0 the percentage of polymorphic loci P was 100 the effective number of alleles Ne was 1 807 3 the Shannon s information index I was 0 625 6 and the observed number of alleles was 2 000 0 The genetic differentiation coefficient Gst was 0 203 6 and the gene flow Nm was 1 956 4 The genetic variation of B cinerea mainly occurred within the population 85 Based on the similarity coefficient of 0 89 the five geographical populations could be divided into two main groups and three subgroups The PCoA analysis reveals that although there is some degree of overlap among the populations they generally exhibit a geographically clustery tendency The genetic variation among the three host populations is only 2 Compared with the geographical origin population the population genetic distance is close and the genetic similarity is high In the PCoA analysis most of the individual strains formed a close cross and a small number of strains were discrete Keywords Botrytis cinerea genetic diversity analysis ISSR analysis markers 茄果类蔬菜 辣椒 番茄 茄子 在生长发育 过程中 经常会受到各种病害的侵袭 导致产量 和品质的下降 灰霉病是设施蔬菜常见且比较难 防治的一种病害 花 果 叶 茎均可发病 造 成严重减产 李娜 2015 灰霉病是由灰葡萄孢 属Botrytis spp 引起的一种真菌性病害 可危害 茄果类 葫芦科 蔷薇科等470多种植物 Staats et al 2005 研究表明 灰葡萄孢菌Botrytis cinerea Pers 是茄果类蔬菜灰霉病的主要致病菌 张静 2010 Garc a et al 2015 叶艳英等 2015 灰葡萄孢菌喜低温高湿 病菌发育的最适温度为 20 23 相对湿度持续在90 以上利于发病 因此 遇连阴天 棚内低温高湿 光照弱 通风 不良的条件下 病害易流行 Alison et al 2016 青海属高原大陆性气候 降水量少 日温差大 由于这些特点 青海省蔬果类蔬菜种植主要以设 施种植为主 而灰霉病发病适宜温度与绝大多数 棚室蔬菜生长的适宜温度相近 并且大棚内湿度 高 使该病发生更加普遍和严重 一旦开始发病 会突然暴发和蔓延 赵霞 2020 以辣椒为例 一般损失率为15 20 严重时达30 50 最高可达100 常导致叶片大量腐烂 失去食 用价值 郝永娟等 2011 在灰葡萄孢菌遗传多样性及种群结构研究 中 RFLP Giraud et al 1997 RAPD van der Vlugt Bergmans et al 1993 和SSR Fournier et al 2002 标记技术应用最为广泛 研究证实该病 原菌存在显著的群体内遗传变异 表现出高度的 遗传多态性 张艳杰等 2017 冯宝珍和李培谦 2020 的研究表明来源于茄子上的灰葡萄孢菌 具有明显的遗传多样性 并通过RAPD将15株 病原菌分为4个类群 余文贵等 2011 用SSR分 关致远 等 青海省茄果类蔬菜灰霉病菌灰葡萄孢的遗传多样性 菌物学报 研究论文 250154 3 子标记将番茄 草莓 莴苣上采集的29株灰葡 萄孢菌分为3类 并且分类结果与采集地点高度 一致 ISSR的应用较少 冯晓菲等 2019 对四川 省10个县的195株草莓上的灰葡萄孢菌进行 遗传多样性分析 使用了6条ISSR引物扩增 出63个多态性位点 研究结果表明灰葡萄孢菌 具有丰富的遗传多样性 李廷刚等 2013 采用 ISSR分子标记技术分析山东省番茄灰葡萄孢菌 的遗传多样性 结果表明该地区菌株遗传多样性 水平较低 但菌株遗传关系与其地理分布显著相 关 本文利用ISSR技术进行遗传多样性分析 解析灰葡萄孢菌遗传多样性与其地理来源 种群 和寄主的关联 揭示其传播与适应性规律 为精 准分区用药 抗病育种和抗药性治理等灰霉病综 合防治策略提供依据 1 材料与方法 1 1 菌株来源 于2023年5月至2024年8月 在青海省主 要设施茄果类蔬菜种植地进行样本采集工作 已 在海西蒙古族藏族自治州 简称海西州 海东 市 西宁市 黄南藏族自治州 简称黄南州 和海 南藏族自治州 简称海南州 共5个地区进行采 样工作 对采集到的典型病样进行分离鉴定 得到213株灰葡萄孢菌菌株 表1 其中从番茄 分离得到115株 含有HMF QHF 辣椒分离得 到72株 含有HML QHL 茄子分离得到26株 含有HMQ QHQ 1 2 DNA 提取 本研究采用CTAB法挑取病原菌菌丝 提 取B cinerea基因组DNA 刮取事先培养好的病 原菌菌丝置于2 0 mL离心管中 加入2 mm直 径的无菌钢珠 加入700 L的CTAB提取液 用组织破碎仪30 r s破碎2 min 10 000 r min离 心3 min 减少泡沫 加入700 L三氯甲烷 充 分混匀 4 放置40 min 在高速离心机上 12 000 r min 4 离心10 min 吸取500 L上 清液至1 5 mL离心管中 并加入500 L异丙醇 置于 20 冰箱内2 h或过夜 在高速离心机上 4 12 000 r min离心10 min 取出并倒掉上 清液后用1 000 L 75 的无水乙醇洗涤 倒掉无 水乙醇后开盖烘干内部未挥发的无水乙醇 加入 50 L无菌无酶水 保存于 20 冰箱内 用微 量核酸测定仪初步测定提取的DNA质量 将其 稀释到一定浓度 放入 20 保存备用 1 3 ISSR 引物及 PCR 扩增 随机抽取8个菌株进行ISSR引物筛选 选用王子迎等 2007 及黄燕 2012 报道的10条 引物 以及10条由杨凌天润奥科生物科技有限 公司设计的灰葡萄孢菌多态性引物 筛选出12个 条带清晰 条带数较多的引物 表 2 用于后续 试验 对条带清晰度较低的进行8梯度实验 确 定各引物的最佳退火温度 PCR反应体系 10 L DNA模板1 L 引 物1 L 2 Taq PCR Master Mix 5 L 加ddH 2 O 补足至10 L PCR反应程序 95 预变性 3 min 94 变性40 s 退火40 s 退火温度见 表2 72 延伸60 s 共35个循环 72 延 伸10 min 4 保存 PCR扩增产物采用8 非 变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离 电泳结束 后 采用硝酸银染色方案对凝胶进行显色 1 4 数据分析 利用最优反应体系和筛选的引物扩增供试 茄果类蔬菜灰葡萄孢菌后 对扩增谱带进行统计 分析 使图片信息转为数据信息 同一引物的扩 增产物 每条清晰条带为1个基因位点 产物扩 增片段的出现则赋值 1 产物扩增片段不清晰 或不出现则赋值 0 建立起0和1矩阵 汇总 并保存为Excel文件 应用Popgene 32软件计算 和分析遗传多样性相关指数 群体间和群体内的 Shannon s指数 Nei s指数 等位基因数 有效 等位 Nei 1972 Leyronas et al 2015a 并根据 不同地理来源 不同作物来源划分的各个群体 得到种群间Nei s遗传距离 利用NTSYS pc 2 10e软件中clustering中的SAHN软件建立个 体间遗传关系聚类图和各群体间遗传关系聚类 图 并利用Genalex基于各种群的遗传相似系数 进行PCoA分析 Research paper 22 February 2026 45 2 250154 Mycosystema ISSN 1672 6472 CN 11 5180 Q 250154 4 表 1 供试灰葡萄孢供试菌株 Table 1 Tested strains of Botrytis cinerea 采样地区 Sampling area 菌株编号 Strain 地点 Location 经度 Longitude 纬度 Latitude 海拔 Altitude m HXZ HMF 1 3A 4 6A 6B 7 8 10 12 13 格尔木市 GolmudCity 94 49 36 39 2 780 00 HMF 29 30 31 33 95 03 36 38 2 824 20 HMF 34 1 34 2A 34 2B 德令哈市 DelhiCity 97 18 37 31 2 822 02 HMQ 7 8 9 10 11 HML34 HMF 25 26 27 28A 都兰县 Dulan County 98 10 36 31 2 950 00 HANZ HMF 55 56 61A 61B 62 贵德县 Guide County 101 39 35 95 2 308 50 HUNZ HML 23 1 23 2 24 1 24 2 24 3 54 77 HMF 53 53 2 53 3 54 54 2 54 3 尖扎县 Jainca County 101 99 35 98 2 235 20 HML 25 56 HMF 79 80 101 88 36 10 2 010 20 HDS HMQ6 HMF 20 21 23 HML32 1 互助县 Huzhu County 101 84 36 87 2 458 30 HMF 81 82 83 104 105 106 平安区 Ping an District 102 22 36 47 2 050 30 HML 59B 60 62 化隆县 Hualong County 102 27 35 89 1 938 90 HML53 乐都区 Ledu District 102 06 36 45 2 217 20 HML 5 6 1 6 4 102 40 36 52 2 245 00 HML8 102 39 36 62 2 336 00 HML 43 49 50 51 HMF 47 48 49 51 102 31 36 47 2 003 60 HML52 5 102 39 36 58 2 167 80 HML44 2 HMF52 HMF52 2 102 50 36 45 1 893 10 HML 46 47 48 102 57 36 44 1 851 80 HML 27 28 29 30 1 循化县 Xunhua County 102 28 35 55 1 898 80 HML 64 1 66 67 68 69 2 HMF 87 88 89 1 89 2 91 92 93 102 28 35 86 1 924 00 HML 70 72 73 74 75 102 29 35 88 1 894 90 HMQ 13 14 HMF 71A 71B 72 73 74 75 76 民和县 Minhe County 102 81 36 15 2 115 80 HMF 63 64 65 66 67 68 69 70 102 86 36 31 1 810 40 XNS QHQ 1 2 3 6 QHL QHF 1 2 3 6 8 9 11 12 城北区 ChengbeiDistrict 101 75 36 73 2 278 10 HMF 44 45 46 城中区 ChengzhongDistrict 101 68 36 53 2 476 00 HML 35 36 36 2 36 3 大通县 Datong County 101 72 36 86 2 351 40 HML37 HMF 35 36A 36B 36 2 36 2A 36 3 37A 101 69 36 81 2 419 50 HMQ 15 16A 16B 18 HML16 101 61 37 02 2 492 18 HMF 37B 37 2 37 3 38 38 2 38 3 101 63 37 01 2 496 00 HML15 HMF 16 16 2 16 4 17 18 101 60 37 01 2 487 90 HMQ 4 1 4 2 5 2 5 3 5 4 101 60 37 03 2 516 68 HMQ 12 19 1 19 2 21 20 HML42 HMF 40 41 1 41 2 42 42 2 湟源县 Huangyuan County 101 22 36 71 2 632 90 HMF 94 95 96 101 19 36 73 2 692 70 HML84 101 51 36 70 2 639 30 HML 81 82 湟中区 Huangzhong District 101 50 36 69 2 369 90 HMF 97 98 99 101 53 36 71 2 378 90 HMF 84 85 86 101 50 36 74 2 424 00 HML 19 19 2 19 5 20 1 20 2 101 51 36 71 2 347 40 HML 21 1 21 2 22 1 22 2 22 3 22 4 101 50 36 75 2 422 10 HML 39 40 40 2 40 3 40 4 41 101 56 36 78 2 536 00 HML38 HMF39B 101 56 36 77 2 514 60 注 HXZ 海西蒙古族藏族自治州 海西州 HANZ 海南藏族自治州 海南州 HUNZ 黄南藏族自治州 黄南州 HDS 海东市 XNS 西宁市 下同 Note HXZ Haixi Mongol and Tibetan Autonomous Prefecture HANZ Hainan Tibetan Autonomous Prefecture HUNZ Huangnan Tibetan Autonomous Prefecture HDS Haidong City XNS Xining City The same below 关致远 等 青海省茄果类蔬菜灰霉病菌灰葡萄孢的遗传多样性 菌物学报 研究论文 250154 5 表 2 用于扩增的 ISSR 引物序列及退火温度 Table 2 ISSR primer sequence and annealing temperature 引物 Primer 序列 Sequence 5 3 退火温度 Annealing temperature 808 AGAGAGAGAGAGAGAGC 48 3 818 CACACACACACACACAG 52 809 AGAGAGAGAGAGAGAGG 48 3 889 AGTCGTAGTACACACACACACAC 60 3 ILE23 ACAGAGAGAGAGAGAGC 52 ILE11 AGAGAGAGAGAGAGAGT 50 ILE131 CACCACACACACACACA 52 ILE79 ACAACACACACACACAC 50 ISSR9 GAGGAGAGAGAGAGAGG 54 ILE120 CACGAGAGAGAGAGAGA 52 ILE67 GAGAGAGAGAGAGAGACC 56 ILE46 GAGAGAGAGAGAGAGACT 54 2 结果与分析 2 1 所有 213 株灰葡萄孢菌遗传多样性分析 本文采用12个ISSR引物 对病原菌共213个 样本进行PCR扩增 12条ISSR引物共扩增多 态性条带243条 对213株灰葡萄孢菌进行聚类 分析 在相似系数0 65的水平上 213株菌被分为 9个类群 图1 类群8包含的菌株数量最多 为 65株菌株 其中西宁市58株 黄南州7株 类 群1有17株菌 均来自海西州 类群2包含 22株菌株 分别是来自海西州的10株 海东市 的12株 类群3包含的13株菌株均来自海东市 类群4的9株菌均来自海东市乐都区 类群5包 含41株菌株 其中西宁市3株 海东市38株 类群6的24株菌株均来自西宁市大通县 类群 7的7株菌株也都来自西宁市大通县 类群9有 15株菌 其中10株来自黄南州 5株来自海 南州 2 2 灰葡萄孢菌地理种群间的遗传多样性分析 2 2 1 灰葡萄孢菌地理种群间群体遗传多样性水平 从地理水平将采集到的病原菌划分为5个 种群 在群体水平上 Nei s基因多样性指数 H 为0 437 0 Shannon信息指数 I 为0 625 6 多 态位点百分率 P 为100 有效等位基因数 Ne 为1 807 3 观测等位基因数为2 000 0 说明等 位基因的分布在5个地理区间比较均匀 表3 病原菌的遗传多样性水平在不同地区之间具有 一定差异 5个地理种群结果显示多态性条带比 的均值为84 03 5个种群多态位点百分率依 次为 海东市 西宁市 海西州 黄南州 海南州 5个地理种群的Nei s基因多样性指数为0 197 1 0 412 3 Shannon信息指数为0 288 3 0 595 8 5个地理种群的其余遗传多样性指标变化与 Nei s基因多样性指数变化基本一致 上述结果 表明青海省茄果类蔬菜上的灰葡萄孢菌不同地 理种群之间具有丰富的遗传多样性 2 2 2 灰葡萄孢菌地理种群间群体遗传分化 通过Popgene32软件分析 从地理水平划分的 5个种群的遗传分化系数 Gst 为0 203 6 Gst 0 5 种群间的遗传分化极明显 种群内遗传多样性 Hs 均值为0 339 0 种群间遗传多样性 Dst 均 值为0 086 6 Dst Ht Hs 表4 5个不同地理 来源的种群内差异比种群间差异明显 5个地理 种群间的基因流 Nm 为1 956 4 ISSR的分子方差分析 AMOVA 揭示5个地 理种群里 有15 的遗传变异存在于群间 85 的遗传变异量存在于种群内 表 5 低于基因分 化系数所体现的20 36 2 2 3 灰葡萄孢菌的同源性分析 对青海省不同地理来源的茄果类蔬菜灰葡 萄孢菌5个种群的遗传距离及遗传相似度求平 均值 5个种群的平均遗传距离为0 161 5 平均 遗传相似度为0 852 7 表6 5个种群的遗传距离 范围是0 076 6 0 292 0 其中海西州与海南州距离 最大 0 292 0 其次是海南州与海东市 0 231 4 西宁市与海东市遗传距离最小 0 076 6 其次是海 西州与海东市 0 091 7 病原菌5个种群的遗传 相似度范围为0 746 8 0 926 2 其中海西州与海 南州遗传相似度最低 0 746 8 海南州与海东市 的结果表明 遗传距离越远遗传相似度越低 2 2 4 灰葡萄孢菌地理种群间群落结构分析 利用NTSYS pc软件 基于5个地理种群的 UPGMA聚类分析可知这5个种群之间的亲缘关 系 图 2 5个种群之间的亲缘关系并不高 在 相似系数为0 89水平上 5个地理种群被划分为 2个亚群 海西州 海东市和西宁市的遗传距离 相近 共同组成一个亚群 黄南州和海南州组成 一个类群 Research paper 22 February 2026 45 2 250154 Mycosystema ISSN 1672 6472 CN 11 5180 Q 250154 6 图 1 所有 213 株灰葡萄孢菌聚类图 Fig 1 Cluster diagram of 213 strains of Botrytis cinerea 关致远 等 青海省茄果类蔬菜灰霉病菌灰葡萄孢的遗传多样性 菌物学报 研究论文 250154 7 表 3 灰葡萄孢菌 5 个地理种群的 ISSR 遗传多样性分析 Table 3 ISSR genetic diversity analysis of five geographical populations of Botrytis cinerea 种群 Population 多态位点百分率 Percentage of polymorphic loci P 观测等位基因数 Number of observed alleles Na 有效等位基因数 Effective numbers of alleles Ne Nei s基因多样性 指数 Nei s gene diversity index H Shannon信息指数 Shannon s information index I HDS 99 18 1 991 8 1 749 8 0 412 3 0 595 8 HANZ 50 21 1 502 1 1 352 0 0 197 1 0 288 3 HXZ 90 53 1 905 3 1 643 5 0 361 8 0 527 9 HUNZ 81 48 1 814 8 1 562 5 0 318 5 0 466 5 XNS 98 77 1 987 7 1 730 4 0 405 1 0 587 4 Average 84 03 1 840 3 1 607 6 0 339 0 0 493 2 Population level 100 00 2 000 0 1 807 3 0 437 0 0 625 6 表 4 灰葡萄孢菌 5 个不同地理来源种群遗传多样性 Nei s 分析 Table 4 Nei s analysis of genetic diversity of five different geographical populations of Botrytis cinerea 总遗传变异 Total genetic variation Ht 种群内变异 Variation within population Hs 遗传分化系数 Genetic differentiation coefficient Gst 基因流 Gene flow Nm 0 425 6 0 339 0 0 203 6 1 956 4 表 5 灰葡萄孢菌 5 个不同地理来源种群间和种群内分子方差分析 AMOVA Table 5 Molecular variance analysis AMOVA among and within five different geographical sources of Botrytis cinerea 变异来源 Source of variation 自由度 Df 平方和 Sum of square 方差分量 Variance component 变异百分率 Percentage of variation P值 P value 种群间Among populations 4 1 202 230 7 178 15 辣椒 茄子 3个种群的Nei s基 因多样性指数为0 413 4 0 436 6 Shannon信息 指数为0 596 8 0 624 8 2 3 2 灰葡萄孢菌寄主种群间群体遗传分化 ISSR的分子方差分析 AMOVA 揭示3个寄 主植物划分的种群里 有2 的遗传变异存在于 种群间 98 的遗传变异量存在于种群内 表8 2 3 3 灰葡萄孢菌的同源性分析 对青海省不同寄主分离得到的灰葡萄孢菌 3个种群进行分析 表9 3个种群的遗传距离及 遗传相似度的平均值为0 021 4和0 978 7 3个 种群的遗传距离范围为0 014 0 0 030 6 茄子和辣 椒遗传距离最大 是0 030 6 番茄与茄子和番茄 与辣椒的遗传距离次之 分别是0 019 8和0 014 0 3个种群的遗传相似度范围为0 969 8 0 986 1 较地理种群来看 从不同寄主植物划分的3个种 群遗传距离很近 遗传相似度很大 2 3 4 灰葡萄孢菌寄主种群间群落结构分析 从不同寄主分离得到的病原菌划分的3个 种群 用UPGMA聚类分析显示了这3个种群 之间的亲缘关系较地理种群相近 图4 这也与 遗传距离和遗传相似度得到的结果相互印证 在 相似系数为0 98水平上 番茄和辣椒聚为一个 类群 茄子单独作为一个类群 表 7 灰葡萄孢菌在 3 个寄主种群间的 ISSR 遗传多样性分析 Table 7 ISSR genetic diversity analysis of Botrytis cinerea in three host populations 种群 Population 多态位点百分率 Percentage of polymorphic loci P 观测等位 基因数 Number of observed alleles Na 有效等位基因数 Effective numbers of alleles Ne Nei s基因多样性 指数 Nei s gene diversity index H Shannon 信息指数 Shannon s information index I 番茄Tomato 100 00 2 000 0 1 807 2 0 436 6 0 624 8 辣椒Capsicum 99 59 1 995 9 1 777 6 0 425 6 0 612 4 茄子Eggplant 98 35 1 983 5 1 750 5 0 413 4 0 596 8 Average 99 31 1 993 1 1 778 4 0 425 2 0 611 3 Population level 100 00 2 000 0 1 810 2 0 437 8 0 626 5 表 8 灰葡萄孢菌 3 个不同寄主来源种群间和种群内分子方差分析 AMOVA Table 8 Molecular variance analysis AMOVA among and within three different hosts of Botrytis cinerea 变异来源 Source of variation 自由度 Df 平方和 Sum of square 方差分量 Variance component 变异百分率 Percentage of variation P值 P value 种群间Among populations 2 224 203 1 065 2 0 001 种群内Within populations 210 9 736 098 46 362 98 总体Total 212 9 960 300 47 428 100 关致远 等 青海省茄果类蔬菜灰霉病菌灰葡萄孢的遗传多样性 菌物学报 研究论文 250154 9 表 9 不同寄主划分的 3 个种群的遗传相似度和遗传距离 Table 9 Genetic similarity and genetic distance of three populations divided by different hosts 群体 Population 番茄 Tomato 辣椒 Capsicum 茄子 Eggplant 番茄Tomato 0 986 1 0 980 3 辣椒Capsicum 0 014 0 0 969 8 茄子Eggplant 0 019 8 0 030 6 注 上方为遗传相似度 下方为遗传距离 Note Genetic similarity is above and genetic distance is below 图 4 灰葡萄孢菌 3 个不同寄主植物种群的种群聚类图 1 番茄种群 2 辣椒种群 3 茄子种群 Fig 4 Species clusters of three different host plant populations of Botrytis cinerea 1 Population on tomato 2 Population on capsicum 3 Population on eggplant 2 3 5 灰葡萄孢菌寄主种群的 PCoA 主坐标分析 根据ISSR的试验数据将灰葡萄孢菌按照不 同寄主划分为3个种群 并且分别对各群体种群 的213个个体进行PCoA分析 图5 通过二维散 点图显示 大部分种群单株交叉紧密 少部分菌 株较离散 表明在这3个群体划分中 各菌株显 示出较高的相似度 这一结果与UPGMA相似 图 5 3 个寄主种群灰葡萄孢菌 213 个单株 PCoA 分析 pop1 番茄种群 pop2 辣椒种群 pop3 茄子种群 Fig 5 PCoA analysis of 213 individual strains of Botrytis cinerea on three host populations pop1 Population on tomato pop2 Population on capsicum pop3 Population on eggplant 3 讨论 本研究对青海省茄果类蔬菜主产区213株 灰葡萄孢菌采用ISSR分子标记技术进行了遗传 多样性和种群结构分析 采用12条ISSR引物 扩增出243个多态性条带 ISSR聚类分析将 213株菌株在0 65相似系数水平上划分为9个 类群 不同菌株间存在一定的基因交流 地理来 源的5个种群 Nei s基因多样性指数 H 为0 437 0 Shannon信息指数为0 625 6 多态位点百分率 P 为100 有效等位基因数 Ne 为1 807 3 观测 等位基因数2 000 0 说明等位基因的分布在5个 地理区间比较均匀 遗传分化系数 Gst 为0 203 6 Gst 0 5 种群间的遗传分化极明显 种群内遗传 多样性 Hs 均值为0 339 0 种群间遗传多样性 Dst 均值为0 086 6 5个不同地理来源种群的 种群内差异比种群间差异明显 基因流 Nm 为 1 956 4 根据Wright 1931 所提出的 当基因流 水平 Nm 1 0时 遗传漂变主导种群分化 当 Nm处于1 0 4 0区间时 基因流的均质化效应 可有