复合微生物菌剂对番茄青枯病的生防效应.pdf

南 京 农 业 大 学 学 报 收 稿 日 期 基 金 项 目 国 家 自 然 科 学 基 金 项 目 作 者 简 介 王 文 丽 硕 士 研 究 生 通 信 作 者 王 世 梅 教 授 研 究 方 向 为 土 传 病 害 生 物 防 控 王 文 丽 金 涵 从 炳 成 等 复 合 微 生 物 菌 剂 对 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 应 南 京 农 业 大 学 学 报 复 合 微 生 物 菌 剂 对 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 应 王 文 丽 金 涵 从 炳 成 周 蕾 韦 中 王 世 梅 南 京 农 业 大 学 资 源 与 环 境 科 学 学 院 江 苏 省 固 体 有 机 废 弃 物 资 源 化 研 究 重 点 实 验 室 江 苏 省 有 机 固 体 废 弃 物 协 同 创 新 中 心 教 育 部 资 源 节 约 型 肥 料 工 程 技 术 研 究 中 心 江 苏 南 京 摘 要 目 的 本 文 旨 在 筛 选 复 合 微 生 物 菌 剂 并 研 究 其 防 控 番 茄 青 枯 病 的 效 果 方 法 从 土 壤 中 分 离 获 得 拮 抗 番 茄 青 枯 菌 的 放 线 菌 及 细 菌 各 株 依 据 菌 株 的 形 态 特 征 理 化 特 征 及 基 因 序 列 对 其 进 行 初 步 鉴 定 用 透 射 电 镜 观 察 青 枯 菌 经 放 线 菌 上 清 液 处 理 前 后 的 细 胞 形 态 变 化 定 量 测 定 细 菌 产 酶 活 性 利 用 番 茄 盆 栽 试 验 筛 选 及 验 证 复 合 菌 剂 的 防 病 效 果 利 用 高 通 量 测 序 探 究 复 合 菌 剂 对 根 际 土 壤 细 菌 群 落 结 构 的 影 响 结 果 株 拮 抗 放 线 菌 初 步 鉴 定 为 链 霉 菌 株 拮 抗 细 菌 初 步 鉴 定 为 芽 胞 杆 菌 菌 株 发 酵 上 清 液 与 青 枯 菌 共 培 养 后 经 透 射 电 镜 观 察 青 枯 菌 细 胞 分 泌 的 胞 外 多 糖 显 著 减 少 芽 胞 杆 菌 及 产 活 性 分 别 为 和 利 用 育 苗 基 质 小 盆 栽 试 验 筛 选 出 最 佳 的 菌 剂 组 合 为 链 霉 菌 芽 胞 杆 菌 经 土 壤 盆 栽 试 验 验 证 复 合 菌 剂 对 番 茄 青 枯 病 的 防 效 为 高 通 量 测 序 结 果 表 明 施 用 复 合 菌 剂 能 够 增 加 番 茄 根 际 细 菌 与 多 样 性 提 高 潜 在 有 益 细 菌 类 群 等 的 相 对 丰 度 降 低 劳 尔 氏 菌 属 的 相 对 丰 度 结 论 施 用 复 合 菌 剂 能 够 较 好 防 控 番 茄 青 枯 病 并 改 善 番 茄 根 际 细 菌 群 落 结 构 关 键 词 链 霉 菌 芽 胞 杆 菌 复 合 菌 剂 青 枯 劳 尔 氏 菌 生 防 效 果 细 菌 群 落 结 构 中 图 分 类 号 文 献 标 志 码 文 章 编 号 第 期 王 文 丽 等 复 合 微 生 物 菌 剂 对 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 应 番 茄 是 世 界 上 重 要 的 蔬 菜 作 物 全 球 年 产 量 约 亿 由 青 枯 劳 尔 氏 菌 引 起 的 青 枯 病 对 番 茄 的 破 坏 性 高 常 导 致 番 茄 植 株 的 大 面 积 枯 萎 死 亡 造 成 巨 大 的 经 济 损 失 因 病 原 菌 的 遗 传 多 样 性 耐 药 性 及 广 泛 的 宿 主 范 围 用 化 学 杀 菌 剂 防 治 的 成 功 率 不 高 当 前 市 场 上 能 防 治 青 枯 病 的 化 学 药 剂 极 少 登 记 的 仅 有 噻 森 铜 且 化 学 杀 菌 剂 的 长 期 使 用 也 会 对 人 类 健 康 和 环 境 造 成 许 多 不 利 影 响 近 年 来 利 用 有 益 功 能 微 生 物 防 控 青 枯 病 已 成 为 一 种 安 全 可 靠 的 防 控 方 法 功 能 微 生 物 包 括 无 致 病 力 的 劳 尔 氏 菌 青 枯 菌 噬 菌 体 及 拮 抗 生 防 菌 株 研 究 表 明 无 致 病 力 的 劳 尔 氏 菌 通 过 与 青 枯 菌 竞 争 生 态 位 而 抑 制 病 害 发 生 但 其 在 田 间 环 境 中 难 以 在 根 际 大 量 定 殖 导 致 与 致 病 菌 的 竞 争 力 相 对 较 弱 青 枯 菌 噬 菌 体 能 够 靶 向 控 制 病 原 菌 在 防 控 番 茄 青 枯 病 中 亦 有 应 用 但 噬 菌 体 施 入 土 壤 后 常 面 临 着 扩 散 率 低 失 活 率 高 等 问 题 且 病 原 菌 分 泌 的 胞 外 多 糖 也 会 限 制 噬 菌 体 的 吸 附 从 而 影 响 其 应 用 效 果 拮 抗 生 防 菌 主 要 包 括 芽 胞 杆 菌 链 霉 菌 木 霉 等 这 些 生 防 菌 株 能 够 通 过 产 生 拮 抗 物 质 与 病 原 菌 竞 争 营 养 及 诱 导 植 株 产 生 系 统 抗 性 等 方 式 抑 制 青 枯 菌 生 长 从 而 降 低 植 物 发 病 率 生 防 菌 株 因 其 在 根 际 定 殖 后 能 够 自 行 传 播 与 维 持 起 到 长 期 抑 制 土 传 病 害 的 作 用 能 减 少 非 再 生 资 源 的 投 入 因 此 在 农 业 生 产 中 得 到 广 泛 应 用 链 霉 菌 是 土 壤 放 线 菌 中 的 重 要 类 群 约 占 土 壤 可 培 养 微 生 物 的 普 遍 存 在 于 根 际 土 壤 中 可 以 产 生 多 样 的 次 生 代 谢 产 物 帮 助 植 物 抵 御 病 原 菌 的 入 侵 链 霉 菌 在 固 体 发 酵 基 质 上 可 形 成 丰 富 的 分 生 孢 子 易 于 储 存 和 运 输 芽 胞 杆 菌 营 养 要 求 简 单 产 生 的 芽 孢 抗 逆 性 强 兼 具 拮 抗 及 促 生 作 用 是 生 防 菌 筛 选 的 重 要 对 象 单 一 生 防 菌 剂 的 应 用 效 果 常 不 稳 定 或 持 续 时 间 较 短 研 究 不 同 功 能 微 生 物 之 间 潜 在 的 协 同 效 应 探 索 施 用 复 合 微 生 物 制 剂 控 制 植 物 病 害 是 克 服 单 一 菌 剂 缺 陷 的 途 径 之 一 本 研 究 以 筛 选 的 拮 抗 放 线 菌 与 芽 胞 杆 菌 为 材 料 研 究 复 合 菌 剂 防 控 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 应 为 土 传 病 害 的 防 控 提 供 生 防 策 略 材 料 与 方 法 材 料 供 试 菌 株 拮 抗 放 线 菌 细 菌 青 枯 劳 尔 氏 菌 均 由 本 实 验 室 分 离 保 存 培 养 基 高 氏 号 培 养 基 可 溶 性 淀 粉 去 离 子 水 燕 麦 培 养 基 燕 麦 片 琼 脂 粉 去 离 子 水 牛 肉 膏 蛋 白 胨 培 养 基 葡 萄 糖 蛋 白 胨 酵 母 粉 牛 肉 膏 去 离 子 水 铬 天 青 检 测 培 养 基 十 六 烷 基 三 甲 基 溴 化 铵 磷 酸 盐 缓 冲 液 去 离 子 水 琼 脂 色 氨 酸 培 养 基 甘 露 醇 酵 母 膏 色 氨 酸 去 离 子 水 吲 哚 乙 酸 比 色 液 硫 酸 去 离 子 水 种 子 发 酵 培 养 基 葡 萄 糖 黄 豆 粉 酵 母 粉 去 离 子 水 拮 抗 放 线 菌 及 拮 抗 细 菌 的 初 步 鉴 定 根 据 放 线 菌 快 速 鉴 定 与 系 统 分 类 和 链 霉 菌 鉴 定 手 册 的 方 法 对 前 期 从 南 京 郊 区 番 茄 大 棚 土 样 中 筛 选 获 得 的 具 有 拮 抗 番 茄 青 枯 菌 能 力 的 放 线 菌 菌 株 及 细 菌 菌 株 进 行 初 步 鉴 定 检 测 其 形 态 及 理 化 特 征 提 取 菌 株 的 总 采 用 细 菌 基 因 的 通 用 引 物 进 行 扩 增 并 进 行 基 因 序 列 分 析 所 得 序 列 与 数 据 库 中 已 知 序 列 进 行 比 对 和 同 源 性 分 析 用 的 法 构 建 系 统 发 育 树 确 定 菌 株 的 分 类 地 位 镜 检 观 察 菌 株 细 胞 形 态 有 无 芽 孢 及 芽 孢 着 生 的 位 置 并 测 序 分 析 基 因 序 列 确 定 其 分 类 地 位 拮 抗 放 线 菌 菌 株 对 青 枯 菌 分 泌 胞 外 多 糖 的 影 响 将 放 线 菌 菌 株 的 斜 面 孢 子 环 接 种 在 高 氏 号 液 体 培 养 基 中 三 角 瓶 于 摇 床 发 酵 离 心 取 上 清 液 于 液 体 培 养 基 接 种 青 枯 菌 再 根 据 预 试 验 的 结 果 添 加 上 述 上 清 液 与 青 枯 菌 共 培 养 取 样 透 射 电 镜 下 观 察 菌 体 形 态 并 拍 照 南 京 农 业 大 学 学 报 第 卷 芽 胞 杆 菌 的 生 物 学 特 性 芽 胞 杆 菌 产 铁 载 体 及 的 定 性 检 测 将 待 测 菌 株 接 种 于 培 养 基 上 于 培 养 如 果 菌 落 周 围 出 现 有 橘 黄 色 透 明 圈 表 明 待 测 菌 株 产 铁 载 体 将 待 测 菌 株 接 种 于 装 有 色 氨 酸 液 体 培 养 基 的 的 离 心 管 中 振 荡 培 养 取 样 离 心 取 上 清 液 在 离 心 管 分 别 加 入 比 色 液 和 上 清 液 静 置 后 观 察 如 果 显 现 红 色 则 为 阳 性 说 明 菌 株 分 泌 并 且 显 色 越 深 表 明 菌 株 分 泌 的 能 力 越 强 耐 受 性 及 活 性 测 定 将 菌 株 的 菌 体 细 胞 分 别 接 种 液 体 培 养 基 培 养 后 分 别 添 加 液 体 培 养 基 体 积 的 后 吸 取 于 平 板 涂 布 计 数 每 个 浓 度 设 个 重 复 测 定 菌 株 产 活 性 采 用 黄 嘌 呤 氧 化 酶 法 酶 试 剂 盒 购 自 南 京 建 成 生 物 有 限 公 司 拮 抗 放 线 菌 与 芽 胞 杆 菌 菌 株 间 的 相 容 性 检 测 利 用 平 板 交 叉 划 线 法 检 测 菌 株 间 的 相 容 性 分 别 用 接 种 环 蘸 取 新 鲜 的 放 线 菌 分 生 孢 子 及 芽 胞 杆 菌 菌 苔 于 平 板 上 交 叉 划 线 培 养 后 观 察 各 菌 株 在 交 叉 划 线 接 触 点 的 生 长 状 况 放 线 菌 及 芽 胞 杆 菌 的 固 体 发 酵 放 线 菌 的 固 体 发 酵 于 锥 形 瓶 装 入 种 子 发 酵 培 养 基 灭 菌 后 分 别 接 种 菌 株 新 鲜 的 孢 子 悬 液 条 件 下 培 养 获 得 液 体 种 子 悬 液 然 后 接 入 固 体 发 酵 基 质 取 固 体 发 酵 基 质 混 匀 装 入 锥 形 瓶 灭 菌 接 种 种 子 悬 液 摇 动 次 观 察 基 质 颜 色 及 气 味 的 变 化 发 酵 后 取 样 测 定 孢 子 数 具 体 方 法 称 取 菌 剂 添 加 无 菌 水 振 荡 层 纱 布 过 滤 制 取 孢 子 悬 液 将 孢 子 悬 液 进 行 适 当 稀 释 显 微 计 数 统 计 单 位 体 积 的 孢 子 数 换 算 出 每 克 菌 剂 中 孢 子 数 芽 胞 杆 菌 固 体 发 酵 将 芽 胞 杆 菌 分 别 接 种 到 装 有 的 三 角 瓶 中 培 养 制 备 种 子 悬 液 将 固 体 发 酵 基 质 装 入 三 角 瓶 灭 菌 接 种 种 子 悬 液 每 翻 动 次 培 养 后 取 样 镜 检 菌 体 形 态 至 形 成 芽 孢 后 取 样 进 行 稀 释 涂 布 计 数 复 合 菌 剂 的 筛 选 利 用 育 苗 基 质 小 盆 栽 试 验 筛 选 防 控 效 果 较 佳 的 复 合 菌 剂 调 整 单 一 菌 剂 的 孢 子 或 细 胞 数 在 同 一 个 数 量 级 即 复 合 菌 剂 为 单 菌 剂 体 积 比 混 匀 每 盆 生 防 菌 剂 接 种 量 菌 剂 与 育 苗 基 质 搅 拌 均 匀 设 置 空 白 对 照 为 不 接 生 防 菌 处 理 基 质 对 照 为 不 接 菌 处 理 排 除 基 质 干 扰 在 育 苗 基 质 盘 中 播 种 杂 交 代 红 矮 生 番 茄 种 子 每 穴 放 置 颗 露 白 的 种 子 在 上 面 覆 盖 一 层 基 质 用 水 浇 透 置 于 温 室 中 培 育 待 番 茄 苗 长 到 叶 心 时 移 栽 到 直 径 的 小 钵 中 每 钵 装 入 含 菌 剂 的 基 质 番 茄 苗 培 养 周 后 每 钵 接 种 青 枯 菌 每 处 理 钵 根 据 节 结 果 选 择 菌 株 设 置 单 一 菌 株 链 霉 菌 芽 胞 杆 菌 及 株 菌 两 两 复 合 的 组 合 共 个 处 理 室 内 条 件 白 天 温 度 光 照 夜 间 温 度 黑 暗 开 始 发 病 后 记 录 番 茄 的 发 病 状 况 病 情 稳 定 后 计 算 植 株 发 病 率 复 合 菌 剂 对 番 茄 青 枯 病 的 防 控 效 果 及 土 壤 细 菌 群 落 结 构 的 影 响 盆 栽 试 验 土 壤 采 自 南 京 郊 区 麒 麟 镇 后 村 番 茄 种 植 园 土 壤 为 黄 棕 壤 有 机 质 含 量 将 土 壤 晾 干 磨 碎 过 筛 后 备 用 设 置 复 合 菌 剂 组 合 处 理 以 不 加 菌 剂 为 空 白 对 照 以 单 一 菌 剂 为 对 照 菌 株 拮 抗 植 物 病 原 真 菌 不 拮 抗 青 枯 菌 菌 株 拮 抗 青 枯 菌 不 拮 抗 病 原 真 菌 共 个 处 理 每 处 理 钵 生 防 菌 剂 接 种 量 将 各 菌 剂 与 土 壤 混 匀 每 钵 装 入 含 菌 剂 的 土 壤 在 育 苗 盘 中 培 育 番 茄 苗 长 到 叶 心 时 选 取 大 小 一 致 的 番 茄 苗 移 栽 到 盆 钵 中 室 内 条 件 同 节 周 后 接 种 的 青 枯 菌 终 浓 度 为 开 始 发 病 后 统 计 番 茄 的 发 病 情 况 并 计 算 病 情 指 数 番 茄 青 枯 病 单 株 病 情 分 级 标 准 见 文 献 发 病 稳 定 后 取 植 株 根 际 土 测 定 并 分 析 各 处 理 对 根 际 土 壤 细 菌 群 落 结 构 的 影 响 土 壤 高 通 量 测 序 样 品 采 集 及 分 析 分 别 选 取 个 处 理 中 的 植 株 去 除 表 层 土 壤 后 将 番 茄 植 株 连 同 根 部 土 壤 一 同 拔 出 去 掉 植 株 主 体 土 抖 落 并 收 集 根 部 的 根 际 土 壤 样 品 充 分 混 匀 取 充 分 混 匀 的 第 期 王 文 丽 等 复 合 微 生 物 菌 剂 对 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 应 土 壤 样 品 采 用 提 取 样 品 利 用 检 测 抽 提 浓 度 和 纯 度 值 为 将 符 合 要 求 的 样 品 送 至 上 海 凌 恩 生 物 科 技 有 限 公 司 进 行 土 壤 细 菌 高 通 量 测 序 数 据 处 理 与 分 析 数 据 处 理 采 用 软 件 采 用 软 件 进 行 差 异 显 著 性 检 验 结 果 与 分 析 拮 抗 放 线 菌 及 拮 抗 细 菌 的 初 步 鉴 定 从 土 壤 中 筛 选 获 得 的 株 放 线 菌 及 株 细 菌 对 青 枯 菌 有 显 著 的 拮 抗 作 用 如 图 所 示 图 放 线 菌 及 细 菌 对 青 枯 菌 的 拮 抗 作 用 图 菌 株 的 系 统 发 育 树 放 线 菌 的 初 步 鉴 定 放 线 菌 形 态 学 特 征 菌 株 在 燕 麦 培 养 基 上 气 生 菌 丝 呈 粉 红 色 菌 落 形 状 为 不 规 则 圆 形 电 镜 观 察 其 孢 子 丝 呈 直 链 状 孢 子 为 圆 柱 形 图 菌 株 在 燕 麦 培 养 基 上 菌 落 呈 规 则 圆 形 边 缘 整 齐 表 面 有 褶 皱 气 生 菌 丝 前 期 呈 淡 绿 色 后 期 逐 渐 变 为 灰 绿 色 电 镜 观 察 孢 子 丝 为 螺 旋 状 分 生 孢 子 为 椭 圆 形 图 对 菌 株 的 基 因 测 序 并 选 取 同 源 性 高 的 相 关 序 列 信 息 进 行 系 统 发 育 分 析 如 图 所 示 菌 株 登 录 号 与 玫 瑰 绿 链 霉 菌 序 列 相 似 性 为 菌 株 与 孟 加 拉 链 霉 菌 相 似 性 为 株 菌 初 步 鉴 定 为 链 霉 菌 图 菌 株 及 孢 子 丝 形 态 南 京 农 业 大 学 学 报 第 卷 兼 具 拮 抗 及 促 生 作 用 的 细 菌 鉴 定 从 土 壤 中 筛 选 出 株 对 青 枯 菌 具 有 拮 抗 效 果 的 细 菌 菌 株 对 青 枯 菌 的 拮 抗 效 果 见 图 株 菌 在 平 板 上 均 为 乳 白 色 菌 落 边 缘 整 齐 呈 圆 形 简 单 染 色 镜 检 发 现 端 生 芽 孢 中 生 芽 孢 菌 体 形 态 图 略 通 过 菌 株 的 基 因 序 列 测 序 菌 株 与 贝 莱 斯 芽 胞 杆 菌 序 列 相 似 性 为 菌 株 与 萎 缩 芽 胞 杆 菌 序 列 相 似 性 为 株 菌 初 步 鉴 定 为 芽 胞 杆 菌 放 线 菌 对 青 枯 菌 分 泌 胞 外 多 聚 物 的 影 响 通 过 透 射 电 镜 观 察 发 现 经 菌 株 发 酵 上 清 液 处 理 后 与 对 照 相 比 青 枯 菌 的 荚 膜 厚 度 明 显 变 薄 图 说 明 拮 抗 菌 株 的 代 谢 产 物 能 显 著 抑 制 青 枯 菌 胞 外 多 聚 物 的 分 泌 图 及 对 照 处 理 对 青 枯 菌 形 态 的 影 响 芽 胞 杆 菌 的 生 物 学 特 征 从 表 可 知 菌 株 分 泌 铁 载 体 能 力 较 强 定 性 检 测 均 为 阳 性 在 耐 受 性 试 验 中 株 菌 在 含 条 件 下 仍 能 较 好 生 长 表 明 其 对 耐 受 性 较 高 菌 株 具 有 较 高 的 活 性 菌 株 的 活 性 分 别 为 和 表 芽 胞 杆 菌 的 植 物 促 生 特 性 及 对 耐 受 性 菌 株 产 铁 载 体 产 吲 哚 乙 酸 浓 度 注 数 量 代 表 了 菌 株 产 铁 载 体 或 对 耐 受 能 力 的 强 弱 放 线 菌 与 芽 胞 杆 菌 菌 株 间 的 相 容 性 株 菌 间 的 相 容 性 结 果 图 显 示 菌 株 对 有 抑 制 作 用 菌 株 与 交 叉 处 正 常 生 长 菌 株 间 没 有 拮 抗 作 用 株 芽 胞 杆 菌 对 链 霉 菌 生 长 有 抑 制 作 用 图 菌 株 及 的 相 容 性 拮 抗 菌 株 的 固 体 发 酵 经 预 试 验 发 现 玉 米 粉 黄 豆 粉 麦 麸 与 稻 壳 较 适 宜 链 霉 菌 生 长 通 过 各 基 质 在 不 同 水 平 上 孢 子 数 量 的 比 较 获 得 固 体 菌 剂 最 佳 发 酵 配 方 玉 米 粉 黄 豆 粉 麦 麸 稻 壳 质 量 比 为 料 水 比 为 将 培 养 的 种 子 液 接 入 固 体 发 酵 基 质 接 种 量 为 发 酵 后 孢 子 第 期 王 文 丽 等 复 合 微 生 物 菌 剂 对 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 应 量 菌 剂 呈 暗 棕 色 有 土 腥 气 味 产 生 固 体 发 酵 配 方 玉 米 粉 黄 豆 粉 麦 麸 稻 壳 的 质 量 比 为 料 水 比 为 将 培 养 的 种 子 液 接 入 固 体 发 酵 基 质 接 种 量 为 发 酵 后 孢 子 量 菌 剂 呈 灰 色 有 强 烈 的 土 腥 气 味 产 生 根 据 预 试 验 结 果 确 定 芽 胞 杆 菌 的 固 体 发 酵 条 件 菌 株 与 配 方 麦 麸 玉 米 粉 米 糠 的 质 量 比 为 料 水 比 为 接 种 量 培 养 菌 剂 细 菌 数 量 达 菌 剂 细 菌 数 量 达 复 合 菌 剂 的 筛 选 利 用 育 苗 基 质 盆 栽 试 验 筛 选 出 最 佳 的 菌 剂 组 合 从 图 可 以 看 出 对 照 植 株 发 病 率 为 菌 剂 处 理 植 株 发 病 率 为 复 合 菌 剂 处 理 植 株 发 病 率 为 单 菌 剂 处 理 发 病 率 分 别 为 防 控 效 果 较 复 合 菌 剂 处 理 差 复 合 菌 剂 显 示 出 较 强 的 协 同 作 用 而 复 合 菌 剂 发 病 率 与 其 对 应 的 单 菌 剂 没 有 显 著 差 异 未 表 现 出 明 显 的 协 同 作 用 所 以 选 择 复 合 菌 剂 进 行 后 续 试 验 图 不 同 处 理 对 番 茄 植 株 青 枯 病 发 病 率 的 影 响 空 白 对 照 基 质 对 照 下 同 不 同 小 写 字 母 表 示 在 水 平 差 异 显 著 复 合 菌 剂 对 番 茄 青 枯 病 的 防 控 效 果 及 根 际 细 菌 群 落 结 构 的 影 响 图 不 同 处 理 番 茄 的 病 情 指 数 复 合 菌 剂 对 番 茄 青 枯 病 的 防 控 效 果 从 图 可 知 发 病 初 期 空 白 对 照 番 茄 的 病 情 指 数 高 于 各 菌 剂 处 理 植 株 发 病 迅 速 随 着 种 植 时 间 的 延 长 各 处 理 番 茄 的 病 情 指 数 逐 渐 增 加 左 右 病 情 开 始 稳 定 复 合 菌 剂 处 理 的 病 情 指 数 为 防 控 效 果 为 单 菌 剂 处 理 情 况 相 似 在 左 右 病 情 趋 于 稳 定 病 情 指 数 为 防 控 效 果 为 单 菌 剂 对 照 处 理 其 在 室 内 平 板 对 峙 试 验 中 未 表 现 出 对 青 枯 菌 的 拮 抗 作 用 但 在 盆 栽 试 验 中 具 有 一 定 的 防 控 效 果 其 病 情 指 数 为 防 效 为 左 右 空 白 对 照 在 时 病 情 指 数 为 在 时 病 情 才 趋 于 稳 定 病 情 指 数 为 复 合 菌 剂 对 番 茄 根 际 土 壤 细 菌 群 落 结 构 的 影 响 从 图 可 知 复 合 菌 剂 单 菌 剂 与 的 土 壤 细 菌 群 落 丰 度 与 多 样 性 均 高 于 空 白 对 照 表 明 添 加 菌 剂 显 著 提 高 土 壤 细 菌 群 落 的 丰 富 度 与 多 样 性 其 中 复 合 菌 剂 群 落 丰 度 最 高 相 对 于 提 高 南 京 农 业 大 学 学 报 第 卷 而 复 合 菌 剂 单 菌 剂 和 处 理 的 指 数 相 对 于 分 别 提 高 和 从 图 可 以 看 出 不 同 处 理 群 落 组 成 大 致 相 同 但 相 对 丰 度 有 较 大 差 异 丰 度 较 高 的 前 个 细 菌 门 分 别 为 变 形 菌 门 酸 杆 菌 门 拟 杆 菌 门 芽 单 胞 菌 门 放 线 菌 门 绿 弯 菌 门 疣 微 菌 门 浮 霉 菌 门 厚 壁 菌 门 黏 球 菌 门 施 用 菌 剂 后 变 形 菌 门 的 丰 度 显 著 高 于 其 在 菌 剂 处 理 中 相 对 丰 度 最 高 为 在 复 合 菌 剂 中 为 在 菌 剂 中 为 而 在 中 仅 占 酸 杆 菌 门 各 菌 剂 处 理 均 低 于 复 合 菌 剂 与 菌 剂 相 对 丰 度 分 别 为 和 高 达 拟 杆 菌 门 芽 单 胞 菌 门 等 相 对 于 差 异 不 明 显 结 果 表 明 施 用 菌 剂 能 够 影 响 部 分 根 际 土 壤 细 菌 门 水 平 的 相 对 丰 度 不 同 菌 剂 处 理 对 根 际 土 壤 细 菌 属 水 平 的 影 响 优 势 菌 属 如 图 所 示 复 合 菌 剂 处 理 中 相 对 丰 度 为 为 为 菌 剂 处 理 中 相 对 丰 度 最 高 为 为 菌 剂 处 理 的 相 对 丰 度 为 为 中 与 相 对 丰 度 分 别 为 和 均 低 于 种 菌 剂 处 理 而 相 对 丰 度 为 均 高 于 种 菌 剂 处 理 表 明 菌 剂 处 理 能 显 著 降 低 病 原 菌 属 的 相 对 丰 度 提 高 有 益 菌 属 的 相 对 丰 度 图 不 同 处 理 对 根 际 土 壤 细 菌 多 样 性 门 水 平 的 群 落 组 成 和 优 势 菌 属 相 对 丰 度 的 影 响 第 期 王 文 丽 等 复 合 微 生 物 菌 剂 对 番 茄 青 枯 病 的 生 防 效 应 讨 论 生 防 菌 剂 是 防 控 番 茄 青 枯 病 的 重 要 措 施 土 壤 放 线 菌 在 生 物 防 治 中 表 现 出 巨 大 的 潜 力 本 研 究 从 番 茄 种 植 区 土 壤 中 筛 选 出 株 拮 抗 放 线 菌 初 步 鉴 定 为 链 霉 菌 链 霉 菌 不 仅 抑 制 青 枯 菌 的 生 长 经 透 射 电 镜 观 察 细 胞 形 态 发 现 其 发 酵 上 清 液 还 影 响 青 枯 菌 胞 外 多 糖 的 分 泌 量 等 曾 证 明 玫 瑰 绿 链 霉 菌 能 够 促 进 小 麦 生 长 但 利 用 玫 瑰 绿 链 霉 菌 防 控 青 枯 病 鲜 有 报 道 等 研 究 发 现 孟 加 拉 链 霉 菌 能 够 代 谢 产 生 邻 苯 二 甲 酸 乙 基 己 基 酯 可 以 拮 抗 细 菌 和 真 菌 链 霉 菌 产 生 活 性 物 质 的 作 用 有 待 进 一 步 检 测 连 作 障 碍 造 成 的 土 壤 盐 渍 化 会 使 植 物 遭 受 逆 境 伤 害 活 性 氧 含 量 增 加 发 生 膜 脂 过 氧 化 作 用 细 胞 生 物 膜 受 损 超 氧 化 物 歧 化 酶 是 生 物 体 防 御 氧 化 损 伤 的 一 种 金 属 酶 对 自 由 基 具 有 强 烈 清 除 作 用 功 能 微 生 物 细 胞 在 根 际 定 殖 菌 体 如 产 生 能 催 化 发 生 歧 化 反 应 减 少 对 植 物 的 伤 害 具 有 促 进 植 物 生 长 防 治 植 物 病 害 的 作 用 本 试 验 筛 选 获 得 株 芽 胞 杆 菌 产 活 性 高 且 拮 抗 青 枯 菌 同 时 能 够 分 泌 铁 载 体 与 已 有 研 究 发 现 萎 缩 芽 胞 杆 菌 能 够 产 生 多 种 具 有 生 物 活 性 的 代 谢 产 物 如 细 菌 素 脂 肽 几 丁 质 酶 及 铁 载 体 生 长 素 赤 霉 素 等 促 进 植 株 的 生 长 并 具 有 较 好 生 防 潜 力 等 研 究 发 现 贝 莱 斯 芽 胞 杆 菌 能 产 生 高 效 的 抗 氧 化 肽 具 有 蛋 白 酶 葡 聚 糖 酶 和 纤 维 素 酶 等 多 种 水 解 酶 活 性 青 枯 病 暴 发 的 主 要 原 因 是 植 物 根 际 有 益 菌 群 数 量 的 减 少 细 菌 多 样 性 的 降 低 和 植 物 病 原 菌 的 积 累 在 控 制 植 物 病 害 方 面 种 或 种 以 上 有 益 微 生 物 的 联 合 应 用 比 单 一 微 生 物 的 应 用 效 果 好 等 报 道 一 些 微 生 物 组 合 提 供 了 对 多 种 作 物 的 广 谱 保 护 并 改 善 其 生 长 提 高 其 产 量 和 品 质 本 研 究 筛 选 出 芽 胞 杆 菌 与 链 霉 菌 组 合 种 菌 之 间 无 拮 抗 作 用 相 对 于 单 一 菌 剂 处 理 复 合 菌 剂 处 理 表 现 出 明 显 的 协 同 效 应 为 植 物 病 害 的 综 合 防 治 提 供 了 新 的 选 择 植 物 健 康 与 土 壤 微 生 物 群 落 多 样 性 呈 正 相 关 在 番 茄 根 际 土 壤 中 存 在 一 个 稳 定 而 复 杂 的 菌 群 网 络 维 持 番 茄 植 株 的 健 康 有 助 于 防 止 青 枯 菌 感 染 青 枯 菌 的 入 侵 会 破 坏 根 际 细 菌 群 落 结 构 导 致 非 致 病 性 细 菌 的 多 样 性 和 丰 度 明 显 下 降 而 复 合 菌 剂 的 应 用 能 够 提 高 土 壤 微 生 物 群 落 多 样 性 增 加 数 量 和 指 数 本 研 究 利 用 高 通 量 测 序 检 测 菌 剂 对 土 壤 细 菌 群 落 的 影 响 结 果 发 现 施 用 单 一 菌 剂 及 复 合 菌 剂 后 土 壤 中 变 形 菌 门 与 放 线 菌 门 等 的 相 对 丰 度 增 加 等 研 究 发 现 健 康 土 壤 网 络 中 放 线 菌 门 芽 单 胞 菌 门 变 形 菌 门 的 比 例 均 高 于 发 病 土 壤 在 属 水 平 上 相 对 于 空 白 对 照 单 菌 剂 与 复 合 菌 剂 处 理 的 鞘 氨 醇 单 胞 菌 属 与 假 单 胞 菌 属 相 对 丰 度 均 在 较 高 水 平 鞘 氨 醇 单 胞 菌 属 具 有 抑 制 土 传 疾 病 和 产 生 植 物 激 素 类 化 合 物 的 作 用 而 劳 尔 氏 菌 属 相 对 丰 度 均 低 于 对 照 表 明 菌 剂 处 理 能 显 著 降 低 病 原 菌 属 的 丰 度 等 研 究 发 现 在 微 聚 集 体 中 劳 尔 氏 菌 属 的 相 对 丰 度 与 青 枯 病 发 病 率 呈 显 著 正 相 关 盆 栽 试 验 中 选 择 单 一 菌 株 作 为 对 照 是 初 筛 时 由 于 菌 株 处 理 效 果 优 于 菌 株 其 与 复 合 菌 株 比 较 如 果 对 照 再 设 置 处 理 就 更 有 说 服 力 对 照 菌 株 链 霉 菌 其 主 要 抑 制 植 物 病 原 真 菌 在 平 板 对 峙 试 验 中 对 青 枯 菌 无 明 显 拮 抗 作 用 但 在 盆 栽 试 验 中 作 为 对 照 处 理 却 显 示 出 对 青 枯 病 具 有 一 定 的 防 控 效 果 从 细 菌 的 群 落 结 构 分 析 上 看 其 可 能 原 因 是 改 善 了 根 际 的 微 生 物 区 系 从 而 间 接 减 弱 了 青 枯 病 的 发 生 也 从 侧 面 验 证 了 改 善 根 际 微 生 物 区 系 可 减 低 病 害 发 生 的 程 度 参 考 文 献 高 苗 杨 金 广 刘 旭 等 一 株 裂 解 性 青 枯 雷 尔 氏 菌 噬 菌 体 的 分 离 及 生 物 学 特 性 分 析 中 国 农 业 科 学 徐 沛 东 魏 方 林 张 蕊 蕊 等 种 杀 菌 剂 防 治 番 茄 青 枯 病 的 应 用 技 术 世 界 农 药 陈 胜 华 番 茄 青 枯 病 生 物 防 治 策 略 研 究 农 业 与 技 术 南 京 农 业 大 学 学 报 第 卷 陈 庆 河 翁 启 勇 胡 方 平 无 致 病 力 青 枯 菌 株 对 番 茄 青 枯 病 的 防 治 效 果 中 国 生 物 防 治 陈 志 龙 陈 杰 许 建 平 等 番 茄 青 枯 病 生 物 防 治 研 究 进 展 江 苏 农 业 科 学 沈 婷 张 园 园 王 辰 等 白 刺 链 霉 菌 菌 株 固 体 发 酵 及 防 控 草 莓 根 腐 病 的 研 究 南 京 农 业 大 学 学 报 阮 继 生 黄 英 放 线 菌 快 速 鉴 定 与 系 统 分 类 北 京 科 学 出 版 社 中 国 科 学 院 微 生 物 研 究 所 放 线 菌 分 类 组 链 霉 菌 鉴 定 手 册 北 京 科 学 出 版 社 黄 明 媛 番 茄 青 枯 病 拮 抗 菌 筛 选 鉴 定 及 发 酵 条 件 研 究 哈 尔 滨 东 北 农 业 大 学 刘 邮 洲 陈 夕 军 梁 雪 杰 等 一 株 萎 缩 芽 胞 杆 菌 的 鉴 定 及 其 脂 肽 类 化 合 物 分 析 中 国 生 物 防 治 学 报 责 任 编 辑 刘 怡 辰