芽胞杆菌SM905的鉴定及其对铁皮石斛胶孢炭疽菌的抑菌活性研究.pdf

38 2 469 475 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2022 年 4 月 收稿日期 2021 11 11 基金项目 浙江省公益技术研究农业项目 解淀粉芽胞杆菌杀虫生物农药研究 2015C32065 作者简介 竺利红 硕士 副研究员 E mail karen2002 通信作者 硕士 研究员 E mail shiyf2003 DOI 10 16409 ki 2095 039x 2022 02 012 芽胞杆菌 SM905的鉴定及其对铁皮石斛胶孢炭疽菌 的抑菌活性研究 竺利红 李孝辉 施跃峰 浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所 杭州 310021 摘要 芽胞杆菌 Bacillus sp SM905 是本实验室分离并保存的一株活性细菌 为进一步明确其分类地位及其 对铁皮石斛胶孢炭疽菌 Colletotrichum gloeosporioides 的抑菌活性 利用形态学 生理生化特性及 16S rDNA 和 gyrB 序列分析对 SM905 进行种属鉴定 采用菌丝生长速率法 插片法和琼脂平板法测定了不同浓度的 SM905 发酵上清液对靶标菌菌丝生长和孢子萌发的影响 并通过盆栽试验考察其防效 结果表明 SM905 为贝莱斯芽胞杆菌 Bacillus velezensis 不同稀释倍数的 SM905 发酵上清液对胶孢炭疽菌均有一定的抑制 作用 其中 5 倍稀释液对菌丝生长的抑制率最高 为 97 89 20 倍稀释液的抑制率也达 90 左右 处 理组残留胶孢炭疽菌气生菌丝表现为畸形 空洞 色素积累等 基内菌丝产生大量的分生孢子 SM905 发酵上清液不影响胶孢炭疽菌孢子的萌发率 但是导致萌发后的菌丝生长稀疏 膨大 盆栽试验结果表 明 SM905 粉剂 100 倍液间隔 7 d 喷施 2 次对铁皮石斛炭疽病的防效为 80 74 优于 10 苯醚甲环唑水 分散粒剂 800 倍液 本研究表明 芽胞杆菌 SM905 可以作为铁皮石斛炭疽病生物防治用生防菌 具有良 好的应用前景 关 键 词 胶孢炭疽菌 铁皮石斛 贝莱斯芽胞杆菌 鉴定 抑菌活性 中图分类号 S476 文献标识码 A 文章编号 1005 9261 2022 02 0469 07 Identification of Bacillu sp SM905 and Its Antifungal Activity against Colletotrichum gloeosporioides ZHU Lihong LI Xiaohui SHI Yuefeng Institute of Plant Protection and Microbiology Zhejiang Academy of Agricultural Sciences Hangzhou 310021 China Abstract Bacillus sp SM905 isolated in our previous study is a bacterium with antifungal activity In this study strain SM905 was further identified as B velezensis based on its morphological and physiological characters combined with the sequences analysis of 16S rDNA and gyrB Mycelial growth rate assay showed that mycelia growth of C gloeosporioides was inhibited in varying degrees by different dilutions of SM905 fermentation supernatant Fermentation supernatant diluted five times exhibited the highest inhibition activity against mycelial growth with the inhibition rate of 97 89 Cover glass insertion cultivation assay indicated that the aerial mycelium of C gloeosporioides treated with the fermentation supernatant showed abnormal morphology such as vesicular deformities and pigment accumulation and that a large amount of conidia were produced from the substrate mycelium The results of the agar plate cultivation showed that strain SM905 fermentation supernatant treatment had little effect on the conidia germination rate of C gloeosporioides however the newly formed mycelium grew slowly with the swelling morphology In the pot experiments 100 fold diluted SM905 powder was sprayed twice with an interval of 7 days and the control efficacy on Dendrobium officinale anthracnose 470 中 国 生 物 防 治 学 报 第 38 卷 reached 80 74 which was higher than that of treatment of 10 Difenoconazole WDG 800X dilution Over all our study indicated that B velezensis strain SM905 is a promising bioagent used in biocontrol of D officinale anthracnose Key words Colletotrichum gloeosporioides Dendrobium officinale Bacillus velezensis identification antifungal activity 铁皮石斛 Dendrobium candidium Wall ex Lindl 为兰科石斛属的多年生附生型草本植物 是我国传统 名贵中药材 其多糖成分 具有提高人体免疫力 抗氧化和抗肿瘤的功效 人工栽培已相当普遍 1 2 铁皮石斛喜欢温暖阴湿的环境 病虫发生危害逐年加重 尤其是叶片炭疽病更为严重 已成为制约铁 皮石斛产业化 规模化发展的主要因素之一 3 4 该病由胶孢炭疽菌 Colletotrichum gloeosporioides 引起 主要危害叶片和茎杆 引起落叶甚至植株枯死 对产量和品质影响极大 5 而我国在铁皮石斛上尚没有一 种登记药剂 生产上滥用农药的现象普遍 农药残留超标隐患大 药中药 问题突出 严重威胁铁皮石 斛产业的健康持续发展 6 对铁皮石斛炭疽病的防治 急需安全高效的专用药剂 生物防治是目前植物病害防治的发展方向之一 其中微生物杀菌剂具有环境友好 安全性高等优点而 成为研究热点 7 已获农药登记的微生物杀菌剂主要有芽胞杆菌类 木霉菌 假单胞菌类等 8 登记作物 包括水稻 小麦 番茄 烟草等 铁皮石斛尚未在列 国内外关于铁皮石斛炭疽病的生物防治研究报道较 少 少量研究仅限于实验室拮抗菌的分离筛选 曾欣等 9 通过离体叶片测定法发现内生细菌贝莱斯芽胞杆 菌 Bacillus velezensis B 11对铁皮石斛炭疽病的防效为 64 刘艳明等 10 通过平板对峙法测定了 Ceriporia sp F102 等内生真菌到对铁皮石斛胶孢炭疽菌的抑菌活性 为了保障铁皮石斛的绿色高效种植 迫切需要更多 有应用前景的生防资源 因此很有必要分离筛选该病原菌的优质 高效拮抗菌 本研究从土壤中分离到一 株芽胞杆菌 Bacillus sp SM905 发现其对铁皮石斛胶孢炭疽菌有较好的抑制作用 对其展开了菌种鉴定 抑菌活性测定和盆栽防治试验 为进一步的田间应用提供理论参考 1 材料与方法 1 1 供试材料 供试菌株芽胞杆菌 SM905 胶孢炭疽菌由本实验室保存 1 0 苯醚甲环唑水分散粒剂由瑞士正先达作 物保护有限公司生产 细菌基因组 DNA 抽提试剂盒 PCR 试剂 16S rDNA 通用引物 27F 1492R gyrB 测序引物 UP 1S UP 2Sr 由生工工程 上海 股份有限公司生产或合成 种子培养基 黄豆饼粉 5 g 葡萄 糖 1 g 水 1000 mL pH 7 5 发酵培养基 麸皮 20 g 黄豆饼粉 15 g 番薯淀粉 10 g NaCl 5 g K 2 HPO 4 3 g MgSO 4 1 5 g 水 1000 mL pH 7 5 PDA 培养基 马铃薯 200 g 葡萄糖 20 g 琼脂 15 g 水 1000 mL pH 自然 PDB 培养基 马铃薯 200 g 葡萄糖 20 g 水 1000 mL pH 自然 1 2 菌株 SM905 鉴定 1 2 1 形态学及生理生化特征鉴定 参照文献 11 方法进行 1 2 2 分子鉴定 采用基因组 DNA 抽提试剂盒提取菌株 SM905 的总 DNA 分别用 16S rDNA 和 gyrB 引物扩增 16S rDNA 扩增条件 94 预变性 5 min 94 变性 30 s 50 退火 30 s 72 延伸 1 min 30 s 35 个循环 72 延伸 10 min gyrB 扩增条件 94 预变性 4 min 94 变性 1 min 60 退 火 30 s 72 延伸 2 min 35 个循环 72 延伸 10 min 扩增产物经 1 琼脂糖凝胶电泳检测确定后 送生工工程 上海 股份有限公司测序 测序结果分别在 Genbank 基因数据库中进行 BLAST 比对 并 构建分子系统发育树 1 3 菌株 SM905 发酵上清液和粉剂的制备 取新鲜培养的 SM905 斜面接种于种子培养基中 37 180 r min 振荡培养 16 h 即得种子液 取种 子液 按 5 的接种量计 接入发酵培养基中 37 220 r min 振荡培养至 2 3 芽胞脱落 取部分发酵液 8000 r min 离心 15 min 上清液过 0 22 m 微孔过滤器 即得发酵上清液 4 保存 剩余发酵液用助剂 吸附 烘干 制备含孢量为 100 亿 CFU g 的粉剂 常温避光保存 第 2 期 竺利红等 芽胞杆菌 SM905 的鉴定及其对铁皮石斛胶孢炭疽菌的抑菌活性研究 471 1 4 菌株 SM905 对铁皮石斛胶孢炭疽菌的抑制作用 1 4 1 对胶孢炭疽菌的抑菌活性 采用平板对峙法 12 测定 SM905 对胶孢炭疽菌的抑菌活性 取新鲜培养 的 SM905 斜面 用接种环蘸取少量接入到 PDA 培养基距中心 25 mm 的 4 个点 打孔器打取培养 7 d 的胶 孢炭疽菌菌丝块 d 6 mm 接入培养皿中央 培养 5 d 后观察抑菌效果 1 4 2 对胶孢炭疽菌孢子萌发的影响 将胶孢炭疽菌菌丝块接种在 PDB 培养液 于 28 180 r min 振荡培养 10 d 后 无菌擦镜纸过滤 滤液即为孢子悬浮液 将发酵上清液与融化的 PDA 培养基混合 使其分别稀释 5 10 20 倍 对照组为空白 PDA 培养基 待培养基冷却到 45 时 加入 1 mL 孢子悬 浮液 迅速摇匀倒平板 每处理设 5 个重复 于 28 恒温培养 24 h 每皿用打孔器随机打 3 个孔 将 取得的培养物置于光学显微镜下观察孢子萌发状况 以孢子芽管长度大于孢子短半径者为萌发标准 统 计孢子萌发率 1 4 3 对胶孢炭疽菌菌丝生长的抑制作用 采用菌丝生长速率法 13 测定不同浓度发酵上清液对铁皮石斛胶 孢炭疽菌菌丝生长的抑制效果 将发酵上清液与融化的 PDA 培养基混合 使其分别稀释 5 10 20 倍 以 加入等体积无菌水的 PDA 培养基为对照 倒平板 待冷却后在平板中心接入胶孢炭疽菌菌丝块 d 6 mm 每处理设 5 个重复 于 28 恒温培养 5 d 采用十字交叉法测量菌落直径 计算抑菌率 并利用 SPSS 22 0 软件进行单因素方差分析 抑制率 对照组菌落直径 处理组菌落直径 对照组菌落直径 6 100 采用插片法 14 观察菌丝的形态 即取 5 mL SM905 发酵上清液加入 95 mL 融化的 PDA 培养基中 混 匀 对照组培养基中加入等量无菌水 倒平板 将无菌盖玻片 30 度角斜插入凝固的平板 在盖玻片与培 养基交接处接入胶孢炭疽菌菌丝 于 28 恒温培养 3 d 取出盖玻片置于光学显微镜下观察菌丝生长状态 另取少量菌丝于扫描电镜进一步形态观察 1 5 菌株 SM905 防治铁皮石斛炭疽病盆栽试验 试验采用 雁荡 1 号 品种 采用人工接种病原菌 即每盆喷施含孢量为 10 7 孢子 mL 的铁皮石斛胶 孢炭疽菌孢子悬浮液 10 mL 2 d 后用于试验 试验设 4 个处理 1 喷施 SM905 粉剂 100 倍液 20 mL 1 次 2 间隔 7 d 喷施 SM905 粉剂 100 倍液 20 mL 2 次 3 喷施 10 苯醚甲环唑水分散粒剂 800 倍液 20 mL 1 次 4 喷施无菌水 20 mL 1 次 每处理 30 盆 重复 3 次 每个处理分别于首次施药后 15 30 d 随机调查 30 株铁皮石斛 统计病情指数并计算防效 病情分级标准为 0 级 无病斑 1 级 病斑面积占 整个叶面积 5 以下 3 级 病斑面积占整个叶面积 6 15 5 级 病斑面积占整个叶面积 16 25 7 级 病斑面积占整个叶面积 26 50 9 级 病斑面积占整个叶面积 50 以上 计算病情指数和防治 效果 病情指数 病级数 该病级植株数 最大病级数 植株总株数 100 防治效果 对 照组病情指数 处理组病情指数 对照病情指数 100 利用 SPSS 22 0 软件进行单因素方差分析 2 结果与分析 2 1 菌株 SM905 鉴定 2 1 1 形态学 生理生化特征 SM905 在营养肉汤 培养基上呈淡黄色菌落 表面干燥且粗糙 边缘不 整齐 革兰氏染色呈阳性 短杆状 两端钝圆 单 个 成对或成串出现 椭圆形芽胞 中生到次端生 图 1 好氧 能利用葡萄 和乳糖 蔗糖 甘 露醇和麦芽糖等 发酵葡萄糖产酸 可水解淀粉和 明胶 氧化酶反应 V P 反应 硝酸盐还原反应和 接触酶反应均呈阳性 根据上述特征 初步判断 SM905 为芽胞杆菌属 2 1 2 16S rDNA 和 gyrB 序列分析 菌株 SM905 的 16S rDNA 和 gyrB 序列 Genbank 号分别为 OM021868 B A C 图 1 SM905 杆状体 A 孢囊体 B 芽胞 C 形态 100 Fig 1 Rod shaped strain A sporangium B and spore C morphology of strain SM905 100 472 中 国 生 物 防 治 学 报 第 38 卷 和 OM037015 并与相关属种进行比对 构建的系统发育树 图 2 可以看出 菌株 SM905 与贝莱斯芽胞 杆菌 B velezensis 的模式菌株 BCRC 17467 聚合在一枝 同源性达 99 以上 结合形态学和生理生化特征 将菌株 SM905 鉴定为贝莱斯芽胞杆菌 SM905 Bacillus velezensis strain BCRC 17467 DQ903176 1 Bacillus amyloliquefaciens strain IFO 15535 AB014097 1 Bacillus amyloliquefaciens strain BCRC 11601 DQ309294 1 Bacillus siamensis KCTC 13613 KC608573 1 Bacillus subtilis strain IFO 13719 AB014103 1 Paenibacillus apiarius AB462410 1 100 93 100 0 1 SM905 Bacillus velezensis strain BCRC 17467 EF433407 1 Bacillus vallismortis strain DSM 11031 NR 024696 1 Bacillus amyloliquefaciens strain NBRC 15535 NR 041455 1 Bacillus amyloliquefaciens strain BCRC 11601 NR 116022 1 Bacillus subtilis subsp subtilis strain 168 NR 102783 2 Bacillus licheniformis strain NBRC 12200 NR 113588 1 Bacillus pumilus strain ATCC 7061 NR 043242 1 Paenibacillus apiarius strain DSM 5581 MN845156 1 100 52 91 56 51 0 02 A B 图 2 菌株 SM905 基于 16S rDNA A 和 gyrB B 序列的进化树 Fig 2 Phylogenetic trees of strain SM905 based on sequences of 16S rDNA A and gyrB B 2 2 菌株 SM905 对胶孢炭疽菌的抑制作用 2 2 1 对胶孢炭疽菌的抑菌活性 从图 3 可知 SM905 对铁皮石斛炭疽病菌有较强的抑菌活性 形成了明 显的抑菌带 界限边缘整齐 靠近抑菌带边缘菌丝稀疏并颜色加深 2 2 2 对胶孢炭疽菌孢子萌发的影响 与对照相比 不同稀释倍数的 SM905 发酵上清液对胶孢炭疽菌孢 子萌发率与对照相比差异不显著 表 1 从形态上观察 SM905 发酵上清液对新萌发菌丝生长抑制明显 表现为菌丝粗细不一 分支少 菌丝中部有明显的膨大 而对照组菌丝粗细均匀 舒展 分支多 呈大网 状 图 4 表明 SM905 发酵过程中产生了含有抗 胶孢炭疽菌的活性物质 能显著抑制其孢子萌发后 新菌丝的生长 2 2 3 对胶孢炭疽菌菌丝生长的影响 从表 1 可以 看出 SM905 发酵上清液不同稀释倍数对胶孢炭疽 菌菌丝生长的抑制率存在极显著差异 P 0 01 随着稀释倍数增大 抑制效果逐渐下降 表 1 SM905 发酵上清液 20 倍稀释液对胶孢炭疽菌菌丝 生长的抑制率仍大于 90 通过光学显微镜观察到 该浓度处理组气生菌丝粗细不一 盘曲折叠 隔膜 之间菌丝缩短 菌丝膨大 大量色素积累 基部菌 丝产生大量分生孢子 而对照组胶孢炭疽菌菌丝均 匀 光滑 粗壮 菌丝内无色素积累现象 无分生 孢子产生 进一步通过扫描电镜观察到处理组菌丝 图 3 SM905 对胶孢炭疽菌的抑菌活性 Fig 3 Antifungal activity of SM905 against Colletotrichum gloeosporioides 第 2 期 竺利红等 芽胞杆菌 SM905 的鉴定及其对铁皮石斛胶孢炭疽菌的抑菌活性研究 473 表 1 SM905 发酵上清液对胶孢炭疽菌孢子萌发及菌丝生长的抑制效果 Table 1 Inhibitory effect of strain SM905 fermentation filtrate on spore germination and mycelial growth of C gloeosporioides 发酵上清液稀释倍数 Dilution ratio of fermentation filtrate 孢子萌发率 Spore germination rate 菌丝生长抑制率 Inhibition rate of mycelial growth 稀释 5 倍 Diluted by 5 times 86 22 1 86 b 97 89 0 48 Aa 稀释 10 倍 Diluted by10 times 87 29 2 47 ab 93 84 0 67 Bb 稀释 20 倍 Diluted by 20 times 88 38 2 63 a 90 14 0 49 Cc 对照 Control 88 18 3 31 ab A B A 对照组菌丝 Mycelium of control group B 处理组菌丝 Mycelium of treatment group 图 4 SM905 对胶孢炭疽菌孢子新萌发菌丝的影响 400X Fig 4 Effect of SM905 against the newly germinated mycelium of C gloeosporioides 400X DE BA C 1 光学显微镜 Optical microscope 400 A 对照组菌丝 Mycelium of control group B 处理组气生菌丝 Aerial mycelium of treatment group C 处理 组基部菌丝 Substrate mycelium of treatment group 2 扫描电镜 SEM D 对照组菌丝 Mycelium of control group E 处理组菌丝 Mycelium of treatment group 图 5 SM905 对胶孢炭疽菌菌丝形态的影响 Fig 5 The effect of strain SM905 on mycelial morphology of C gloosporioides 出现大量空洞 菌丝断裂现象明显 证实了 SM905 对胶孢炭疽菌菌丝的破坏作用 图 5 2 3 菌株 SM905 防治铁皮石斛炭疽病盆栽试验 由盆栽试验结果 表 2 可以看出 人工接种病原菌后 对照组开始陆续发病 30 d 时病情指数为 15 78 SM905 粉剂 100 倍液间隔 7 d 喷施 2 次 药后 15 d 对铁皮石斛炭疽病的防效达 83 96 与喷施 1 次的防 474 中 国 生 物 防 治 学 报 第 38 卷 效 55 36 差异极显著 但低于 10 苯醚甲环唑 800 倍液 85 4 30 d 时防效仍保持在 80 优于 10 苯醚甲环唑 800 倍液 79 28 显著优于 SM905 喷施 1 次防效 50 70 表明 SM905 防治铁皮 石斛炭疽病应选择发病初期用药 并且连续用 2 次防效更好 持效期更长 表 2 SM905 粉剂防治铁皮石斛炭疽病的盆栽试验 Table 2 Control efficacy of strain SM905 on Dendrobiumbium officinale anthracnose 15 d 30 d 处理 Treatment 病情指数 Disease index 防治效果 Control efficacy 病情指数 Disease index 防治效果 Control efficacy SM905 1 次 5 37 55 36 Cc 7 78 50 70 Bc SM905 2 次 1 93 83 96 Bb 3 04 80 74 Aa 10 苯醚甲环唑 Difenoconazole WDG 1 76 85 4 Aa 3 27 79 28 Ab 无菌水 Sterile water 12 03 15 78 注 表中大小写字母分别表示差异显著性 P 0 01 和 P 0 05 Note Data with the uppercase and lowercase letters indicated significant difference at 0 01and 0 05 level respectively 3 讨论 铁皮石斛是名贵中药材 炭疽病是影响其品质和产量的重要病害之一 研制安全 高效的生物农药 对于保障铁皮石斛质量安全 促进产业持续健康发展具有重要的研究意义及广阔的应用前景 贝莱斯芽胞 杆菌属于芽胞杆菌属 该菌首次发现于西班牙马拉加的一条名为贝莱斯河的河口 研究表明贝莱斯芽胞杆 菌对引起稻瘟病 梨灰霉病 草莓炭疽病 小麦赤霉病等病害的多种植物病原菌具有抑制作用 15 18 在生 物防治方面具有巨大的应用潜能 贝莱斯芽胞杆菌对铁皮石斛炭疽病的研究局限于实验室拮抗菌的分离筛 选阶段 所筛菌株仅在室内中表现出拮抗作用还是不够的 只有在应用中依旧表现出良好防效的拮抗菌株 才具有生防应用潜力 19 本研究筛选到一株贝莱斯芽胞杆菌 SM905 平板对峙试验表明该菌对铁皮石斛胶 孢炭疽菌具有较强的抑制活性 本研究还进一步展开了 SM905 对铁皮石斛炭疽病的盆栽防治试验 结果 表明 SM905 粉剂 100 倍液对炭疽病的防效达 80 以上 优于 10 苯醚甲环唑 800 倍液 本说明该菌株具 有较强的开发前景 各生防菌株的来源不同 产生的拮抗活性物质类型不同 其作用机理也有所差异 20 作用机理的研究 对建立田间使用技术十分关键 以往研究表明贝莱斯芽胞杆菌的抑菌机理为致使病原菌菌丝畸形和降低孢 子萌发率 21 24 相比之下本研究菌株 SM905 在机理上有两个不同点 SM905 仅抑制胶孢炭疽菌孢子萌发 后新菌丝的生长 对孢子萌发率本身没有显著影响 SM905 发酵上清液 20 倍稀释液能抑制胶孢炭疽菌气 生菌丝的生长 使其膨大畸形 空洞 甚至断裂 但同时也发现其能诱导病原菌基部菌丝在 3 d 内产生大 量分生孢子 而对照组菌丝培养 10 d 后才开始形成明显的分生孢子堆 说明 SM905 发酵产生的活性物质 胁迫了病原菌菌丝的生长 加速其老化产孢 分生孢子可以在不良环境中休眠 如条件合适 则继续萌发 生长 侵染植物 因此在实际应用中应选择发病初期施药 同时保证足够的药剂浓度 或者通过重复施药 以达到彻底杀灭病原菌菌丝的目的 这一点与盆栽试验结果吻合 SM905 粉剂 100 倍液施用 2 次效果优于 1 次 在后续的研究中 我们将进一步开展 SM905 的发酵工艺研究 活性物质的分离鉴定以及田间应用技 术研究 希望能为铁皮石斛的安全生产提供一种新型高效的生防制剂 参 考 文 献 1 郭冕 江吉富 石斛多糖药理作用的研究概况 J 医学综述 2015 21 24 4525 4528 2 何伯伟 潘慧锋 浙江铁皮石斛产业提升发展的实施措施与建议 J 浙江农业科学 2014 2 152 155 3 卢振辉 李明焱 王伟杰 等 铁皮石斛主要病虫害及其非化学农药防治 J 浙江农业科学 2016 57 1 123 126 4 李景蕻 张丽华 铁皮石斛种苗生产中 种常见病害及防治 J 种子 2015 34 12 128 130 5 赵玲琳 王国荣 沈伟东 等 铁皮石斛炭疽病病原菌的分离鉴定及其有效杀菌剂的筛选 J 植物保护 2018 44 6 185 190 第 2 期 竺利红等 芽胞杆菌 SM905 的鉴定及其对铁皮石斛胶孢炭疽菌的抑菌活性研究 475 6 戴德江 沈瑶 沈颖 等 浙江省特色作物安全用药整体解决的实践与思考 J 农药科学与管理 2015 36 12 1 7 7 姚锦爱 黄鹏 赖宝春 等 贝莱斯芽胞杆菌 ZZBV 3 的鉴定及其对草莓根腐病的防效 J 中国生物防治学报 2021 37 1 172 177 8 袁善奎 王以燕 师丽红 等 我国生物源农药标准制定现状及展望 J 中国生物防治学报 2018 34 1 1 7 9 曾欣 张亚惠 迟惠荣 等 温郁金内生拮抗细菌 B 11 的分离及其抑菌活性 J 微生物学通报 2019 46 5 1018 1029 10 刘艳明 黄雅丽 李婷 等 野生与人工栽培铁皮石斛内生真菌生物多样性比较及抗炭疽病活性菌株的筛选 J 华南农业大学学报 2020 41 3 47 55 11 东秀珠 蔡妙英 常见细菌系统鉴定手册 M 北京 科学出版社 2001 349 388 12 杨胜清 张帆 马贵龙 贝莱斯芽胞杆菌 S6 拮抗物质分离纯化及抑菌机理 J 农药 2017 56 9 645 648 13 蔡甜星 刘楚非 蔡烈伟 等 放线菌 V17 的分类鉴定及其对茶树炭疽病菌的拮抗作用 J 宁德师范学院学报 2021 33 3 281 285 14 汪红 解丽芳 王甜 等 用浸染法提高放线菌形态观察的效果 J 西华师范大学学报 2011 32 3 256 258 15 沙月霞 隋书婷 曾庆超 等 贝莱斯芽胞杆菌 E69 预防稻瘟病等多种真菌病害的潜力 J 中国农业科学 2019 52 11 1908 1917 16 孙平平 崔建潮 贾晓辉 等 贝莱斯芽胞杆菌 L 1 对梨灰霉和青霉病菌的抑制作用评价及全基因组分析 J 微生物学报 2018 58 9 1637 1646 17 Nam M H Kim H S Lee H D et al Biological control of anthracnose crown rot in strawberry using Bacillus velezensis nsb 1 J Acta Horticulturae 2014 1049 685 688 18 宗英 赵月菊 刘阳 等 一株贝莱斯芽胞杆菌抑制禾谷镰刀菌的研究 J 核农学报 2018 32 2 310 317 19 Kloepper J W Beauchamp C J A review of issues related to measuring colonization of plant roots by bacteria J Canadian Journal of Microbiology 1992 38 12 1219 1232 20 王波 周涧楠 黄忠勤 等 一株多粘类芽胞杆菌 Paenibacillus polymyxa 对甘薯黑斑病的生物防治效果及作用机理初探 J 江西农业学报 2017 29 10 40 43 21 李永丽 周洲 尹新明 贝莱斯芽胞杆菌 Mr12 预防苹果轮纹病等病害的潜力及其全基因组分析 J 果树学报 2021 38 9 1459 1467 22 Rabbee MF Ali MS Choi J et al Bacillus velezensis a valuable member of bioactive molecules within plant microbiomes J Molecules 2019 24 6 1046 23 朱志贤 于翠 李勇 等 一株桑椹菌核病生防菌分离鉴定及其拮抗作用分析 J 中国森林病虫 2019 38 5 1 7 24 杨胜清 张帆 马贵龙 贝莱斯芽胞杆菌 S6 拮抗物质分离纯化及抑菌机理 J 农药 2017 56 9 645 648 责任编辑 吕平香