茄子黄萎病苗期抗性鉴定技术的优化及抗源筛选.pdf

2022 44 1 D O I 10 13836 j jjau 2022008A cta A griculturae U niversitatis Jiangxiensis http 江 西 农 业 大 学 学 报 茄 子 黄 萎 病 苗 期 抗 性 鉴 定 技 术 的 优 化 及 抗 源 筛 选 贲 海 燕 1 曲 红 云 2 霍 建 飞 1 姚 玉 荣 1 高 苇 1 郝 永 娟 1 王 万 立 1 张 雪 岩 2 胡 建 坤 3 黄 瑞 荣 3 1 天 津 市 农 业 科 学 院 植 物 保 护 研 究 所 天 津 300381 2 黑 龙 江 省 农 业 科 学 院 园 艺 分 院 黑 龙 江 哈 尔 滨 150069 3 江 西 省 农 业 科 学 院 植 物 保 护 研 究 所 江 西 南 昌 330200 摘 要 目 的 建 立 快 速 有 效 的 茄 子 黄 萎 病 苗 期 抗 性 鉴 定 技 术 并 对 茄 子 资 源 进 行 苗 期 接 种 鉴 定 为 抗 病 育 种 提 供 理 论 依 据 方 法 采 用 温 室 人 工 接 种 分 别 对 茄 子 黄 萎 病 苗 期 接 种 鉴 定 的 接 种 菌 株 浓 度 方 法 接 种 苗 龄 及 接 种 时 间 进 行 系 统 筛 选 与 比 较 并 应 用 筛 选 出 的 最 佳 技 术 对 50 份 不 同 来 源 的 茄 子 资 源 进 行 抗 黄 萎 病 鉴 定 与 评 价 结 果 25 株 强 致 病 力 的 黄 萎 病 菌 株 中 有 7 株 产 孢 效 率 高 从 中 选 取 4 种 不 同 培 养 性 状 的 菌 株 用 于 接 种 最 佳 接 种 浓 度 为 10 6 个 孢 子 m L 及 以 上 其 中 菌 株 2015 61 致 病 力 最 强 接 种 浓 度 10 5 个 孢 子 m L 的 致 病 结 果 与 其 他 菌 株 最 佳 浓 度 的 接 种 结 果 相 当 提 高 了 试 验 整 体 效 率 接 种 方 法 以 无 底 钵 伤 根 法 为 最 佳 最 适 接 种 苗 龄 为 3 4 片 真 叶 期 浸 根 时 间 为 10 m in 利 用 此 抗 性 鉴 定 方 法 从 50 份 不 同 来 源 茄 子 资 源 中 筛 选 出 免 疫 品 种 2 份 中 抗 品 种 3 份 耐 病 品 种 12 份 该 优 化 接 种 技 术 的 发 病 情 况 与 田 间 病 圃 结 果 基 本 一 致 较 准 确 地 反 映 了 茄 子 资 源 对 黄 萎 病 的 真 实 抗 性 结 论 茄 子 黄 萎 病 苗 期 最 佳 接 种 技 术 的 确 立 以 及 抗 黄 萎 病 资 源 的 筛 选 为 抗 病 育 种 提 供 依 据 关 键 词 茄 子 黄 萎 病 接 种 方 法 无 底 钵 伤 根 法 抗 性 评 价 中 图 分 类 号 S436 411 文 献 标 志 码 A 文 章 编 号 1000 2286 2022 01 0062 12 R e s e a r c h o n I n o c u la tiv e M e th o d o f E g g p la n t V e r tic illiu m W ilt a n d E v a lu a tio n o f R e s is ta n c e S o u r c e a t S e e d lin g S ta g e B E N H aiyan 1 Q U H ongyun 2 H U O Jianfei 1 Y A O Y urong 1 G A O W ei 1 H A O Y ongjuan 1 W A N G W anli 1 ZH A N G X ueyan 2 H U Jiankun 3 H U A N G R uirong 3 1 Institute of Plant Protection Tianjin A cadem y of A gricultural Sciences Tianjin 300381 C hina 2 G ardening B ranch H eilongjiang A cadem y of A gricultural Sciences H arbin 150069 C hina 3 Plant Protection Institute Jiangxi A cadem y of A gricultural Sciences N anchang 330200 C hina 收 稿 日 期 2021 07 20 修 回 日 期 2021 09 22 基 金 项 目 国 家 重 点 研 发 计 划 项 目 2018Y FD 0201200 Project supported by N ational K ey R esearch and D evelopm ent Program 2018Y FD 0201200 作 者 简 介 贲 海 燕 orcid org 0000 0003 3506 172X benhaiyan506 通 信 作 者 黄 瑞 荣 研 究 员 主 要 从 事 植 物 病 害 防 治 研 究 orcid org 0000 0002 4700 1962 huangruirong073 贲 海 燕 曲 红 云 霍 建 飞 等 茄 子 黄 萎 病 苗 期 抗 性 鉴 定 技 术 的 优 化 及 抗 源 筛 选 J 江 西 农 业 大 学 学 报 2022 44 1 62 73 B E N H Y Q U H Y H U O J F et al R esearch on inoculative m ethod of eggplant verticillium w ilt and evaluation of resistance source at seedling stage J A cta agriculturae universitatis Jiangxiensis 2022 44 1 62 73 第 1 期 贲 海 燕 等 茄 子 黄 萎 病 苗 期 抗 性 鉴 定 技 术 的 优 化 及 抗 源 筛 选 A b s tr a c t O b je c tiv e In this study a rapid and effective technique for identification of eggplant resis tance to verticillium w ilt at seedling stage w as established and eggplant resources w ere inoculated and identi fied at seedling stage thus providing theoretical support for eggplant resistance breeding M e th o d The inocu lation strains concentrations m ethods seedling age and suitable tim e of artificial inoculation in the greenhouse w ere screened system atically Furtherm ore the m ost effective inoculation technique w hich w as screen out w as adopted to identify and evaluate the resistance to V erticillium W ilt of 50 eggplant resources from different sourc es R e s u lt The results show ed that the 7 of 25 strains of V erticillium W ilt w ith high pathogenicity had high sporulation efficiency from w hich 4 strains w ith different culture traits w ere selected for inoculation and the optim al inoculation concentration w as 10 6 spores m L or above A m ong them strain 2015 61 show ed the highest pathogenicity The inoculation result of 10 5 spores m l w as equivalent to 10 6 10 8 spores m L for other strains w hich im proved the overall test efficiency The optim al inoculation m ethod w as the root dipping m eth od w ith bottom less bow l the optim al inoculation age w as 3 4 real leaf stage and the optim al root soaking tim e w as 10 m inutes U sing this m ethod 2 im m unized varieties 3 m iddle resistant varieties and 12 enduring variet ies w ere selected from 50 eggplant breeding m aterials This result w as basically consistent w ith the disease re sistance results in the field tests w hich dem onstrated that the optim ized inoculation technology accurately re flected the real resistance of eggplant resources to V erticillium w ilt C o n c lu s io n The establishm ent of the opti m al inoculation technique for verticillium w ilt in eggplant seedling stage and the selection of resources against V e r tic illiu m d a h lia laid a solid foundation for resistance breeding K e y w o r d s eggplant verticillium w ilt inoculation m ethod root cutting m ethod w ith bottom less bow l resistance evaluation 研 究 意 义 由 大 丽 轮 枝 菌 V e r tic illiu m d a h lia K leb 侵 染 引 起 的 茄 子 黄 萎 病 V erticillium w ilt 是 一 种 世 界 性 土 传 病 害 1 该 病 原 菌 的 寄 主 范 围 广 泛 除 侵 染 茄 子 外 还 可 对 棉 花 向 日 葵 番 茄 草 莓 马 铃 薯 等 600 多 种 作 物 造 成 危 害 2 前 人 研 究 进 展 1914 年 美 国 首 次 发 现 由 大 丽 轮 枝 菌 引 发 的 棉 花 黄 萎 病 而 后 在 1935 年 我 国 因 引 进 美 国 的 棉 花 品 种 而 传 入 黄 萎 病 菌 3 在 20 世 纪 50 年 代 初 期 茄 子 黄 萎 病 仅 在 我 国 东 北 局 部 地 区 发 生 随 着 茄 果 类 蔬 菜 种 植 面 积 的 不 断 扩 大 而 迅 速 蔓 延 发 病 范 围 也 日 益 南 扩 目 前 在 我 国 茄 子 主 栽 培 区 均 有 该 病 害 的 发 生 茄 子 黄 萎 病 发 病 率 较 高 一 般 年 份 发 病 率 在 40 50 严 重 年 份 可 达 70 以 上 致 使 毁 种 失 收 对 茄 子 产 量 和 品 质 均 造 成 严 重 的 影 响 已 成 为 制 约 茄 子 产 业 发 展 的 重 要 病 害 1 4 黄 萎 病 属 于 典 型 的 土 传 维 管 束 病 害 其 致 病 菌 大 丽 轮 枝 菌 的 主 要 存 活 结 构 和 初 侵 染 源 是 微 菌 核 由 于 其 抗 逆 性 强 在 土 壤 中 存 活 时 间 较 长 化 学 防 治 并 不 理 想 倒 茬 轮 作 虽 然 有 效 但 在 茄 子 生 产 茬 口 安 排 会 带 来 实 际 困 难 嫁 接 技 术 是 减 轻 茄 子 黄 萎 病 发 生 有 效 的 方 法 但 由 于 其 操 作 环 节 多 技 术 要 求 较 高 以 及 增 加 投 入 成 本 等 问 题 很 难 在 实 践 生 产 中 推 广 应 用 选 育 及 利 用 抗 病 品 种 是 防 治 茄 子 黄 萎 病 最 直 接 安 全 高 效 的 措 施 之 一 其 中 筛 选 抗 病 种 质 资 源 是 抗 病 育 种 中 重 要 的 基 础 工 作 自 然 病 圃 法 是 抗 病 性 鉴 定 中 最 传 统 应 用 最 普 遍 的 方 法 目 前 其 鉴 定 结 论 仍 是 新 品 种 审 定 时 主 要 的 依 据 但 由 于 其 鉴 定 周 期 长 且 受 季 节 的 影 响 鉴 定 材 料 数 量 受 到 限 制 5 此 外 病 圃 中 病 菌 数 量 的 不 确 定 分 布 不 均 以 及 气 候 环 境 条 件 的 变 化 等 一 系 列 因 素 均 会 影 响 鉴 定 结 果 的 准 确 性 本 研 究 切 入 点 苗 期 室 内 人 工 接 种 法 不 受 季 节 影 响 能 更 好 地 控 制 选 择 压 并 且 可 大 量 重 复 性 筛 选 材 料 6 目 前 作 物 黄 萎 病 采 用 的 接 种 方 法 多 为 蘸 根 法 伤 根 法 这 在 棉 花 和 向 日 葵 等 作 物 上 研 究 的 较 为 深 入 而 茄 子 上 的 接 种 鉴 定 方 法 报 道 较 少 7 10 进 一 步 完 善 改 进 茄 子 黄 萎 病 人 工 接 种 技 术 仍 有 必 有 拟 解 决 的 关 键 问 题 因 此 本 研 究 以 茄 子 为 试 验 材 料 采 用 现 有 报 道 的 接 种 方 法 比 较 在 同 一 品 种 上 的 接 种 效 果 并 综 合 探 究 了 不 同 类 型 强 致 病 力 菌 株 菌 液 浓 度 茄 子 苗 龄 等 因 素 对 接 种 成 效 的 影 响 以 期 优 化 最 佳 接 种 技 术 从 而 构 建 高 效 稳 定 简 便 的 茄 子 黄 萎 病 苗 期 抗 病 性 鉴 定 评 价 体 系 为 茄 子 黄 萎 病 基 础 研 究 抗 病 育 种 与 利 用 及 抗 源 筛 选 等 提 供 63 江 西 农 业 大 学 学 报 第 44 卷 技 术 支 撑 同 时 采 用 本 研 究 优 化 的 茄 子 黄 萎 病 抗 性 鉴 定 技 术 对 收 集 到 的 50 份 茄 子 资 源 品 种 的 抗 性 进 行 鉴 评 通 过 与 田 间 病 圃 中 各 品 种 的 抗 性 鉴 定 结 果 进 行 比 对 以 验 证 优 化 技 术 的 实 用 性 和 鉴 定 结 果 的 准 确 性 并 期 待 挖 掘 到 抗 耐 黄 萎 病 的 茄 子 资 源 种 质 以 缓 解 当 前 生 产 抗 耐 黄 萎 病 品 种 不 足 及 茄 黄 萎 病 育 种 抗 源 材 料 匮 乏 问 题 1 材 料 与 方 法 1 1 试 验 材 料 供 试 品 种 茄 子 品 种 龙 杂 茄 10 号 为 本 课 题 组 培 育 的 耐 病 品 种 供 试 菌 株 不 同 培 养 性 状 的 强 致 病 力 菌 株 25 株 其 中 A 型 菌 株 11 株 为 菌 核 型 菌 落 生 长 缓 慢 菌 核 多 B 型 菌 株 7 株 为 菌 核 型 菌 落 为 灰 黑 色 菌 落 生 长 较 慢 菌 核 多 C 型 菌 株 3 株 为 丝 核 型 气 生 菌 丝 发 达 菌 核 较 多 菌 落 生 长 较 快 D 型 菌 株 4 株 为 菌 丝 型 气 生 菌 丝 发 达 为 灰 白 色 11 所 有 菌 株 均 由 本 课 题 组 单 孢 分 离 纯 化 后 保 存 表 1 1 2 茄 子 黄 萎 病 菌 产 孢 力 的 测 定 将 25 个 供 试 菌 株 在 PD A 培 养 基 上 进 行 活 化 25 黑 暗 条 件 下 培 养 4 d 后 在 无 菌 工 作 台 中 使 用 灭 好 菌 的 打 孔 器 打 取 菌 碟 每 150 m L 马 铃 薯 液 体 培 养 基 中 放 入 2 块 25 130 r m in 摇 床 培 养 4 d 产 孢 量 较 多 时 四 层 纱 布 过 滤 收 集 滤 液 15 m L 用 蒸 馏 水 定 容 至 100 m L 配 制 成 孢 子 悬 浮 液 取 少 量 用 血 球 计 数 板 测 量 计 算 每 毫 升 孢 子 个 数 每 个 菌 株 3 次 重 复 1 3 茄 子 黄 萎 病 菌 最 佳 接 种 浓 度 的 筛 选 从 上 述 产 孢 力 强 的 菌 株 中 选 择 4 种 不 同 培 养 类 型 菌 株 各 1 株 A 型 菌 株 2015 078 B 型 菌 株 2015 037 C 型 菌 株 2015 061 D 型 菌 株 2015 102 25 130 r m in 摇 床 液 体 培 养 4 d 后 纱 布 过 滤 浓 度 分 别 稀 释 至 10 8 10 7 10 6 10 5 10 4 个 孢 子 m L 茄 苗 长 至 3 4 片 真 叶 期 采 用 伤 根 后 10 m L 菌 悬 液 灌 根 接 种 法 每 个 处 理 32 棵 茄 子 苗 每 个 处 理 3 次 重 复 1 4 茄 子 黄 萎 病 菌 接 种 方 法 的 筛 选 在 试 验 温 室 内 茄 苗 长 至 3 4 片 真 叶 期 采 用 上 述 筛 选 出 的 接 种 菌 株 2015 61 接 种 浓 度 为 1 10 5 个 孢 子 m L 以 5 种 处 理 方 式 接 种 蘸 根 法 把 茄 子 幼 苗 轻 轻 拔 起 根 部 泥 土 清 洗 干 净 后 蘸 根 30 m in 灌 根 法 在 根 际 1 cm 部 位 斜 切 一 刀 后 将 10 m L 孢 子 悬 浮 液 进 行 灌 根 拌 土 法 把 孢 子 悬 浮 表 1 茄 子 黄 萎 病 菌 2 5 株 菌 株 来 源 T a b 1 T h e o r ig in o f 2 5 is o la te s o f V e r tic illiu m d a h lia e 形 态 类 型 C ultural type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type A 型 type B 型 type B 型 type B 型 type 菌 株 名 称 Isolates 2015 018 2015 158 2015 020 2015 074 2015 017 2015 178 2015 019 2015 044 2015 101 2015 013 2015 147 2015 037 2015 081 采 集 地 点 Location 鸡 西 市 虎 林 市 华 南 村 鸡 西 市 虎 林 市 华 南 村 鸡 西 市 虎 林 市 华 南 村 绥 芬 河 市 朝 阳 村 牡 丹 江 市 东 宁 市 北 河 沿 村 牡 丹 江 市 东 宁 市 北 河 沿 村 鸡 西 市 密 山 市 铁 西 村 鸡 西 市 密 山 市 新 治 村 牡 丹 江 市 海 林 市 新 合 村 大 庆 市 三 胜 村 大 庆 市 八 村 牡 丹 江 市 盘 刀 沟 村 大 庆 市 泰 康 县 万 丈 村 形 态 类 型 C ultural type B 型 type B 型 type B 型 type B 型 type B 型 type C 型 type C 型 type C 型 type D 型 type D 型 type D 型 type D 型 type 菌 株 名 称 Isolates 2015 014 2015 054 2015 037 2015 033 2015 182 2015 097 2015 136 2015 061 2015 129 2015 018 2 2015 102 2015 106 采 集 地 点 Location 大 庆 市 肇 州 镇 壮 大 村 绥 化 市 安 达 市 卧 里 屯 乡 齐 齐 哈 尔 市 泰 来 县 大 榆 树 乡 双 鸭 山 市 集 贤 县 先 锋 村 乌 兰 察 布 市 平 地 泉 镇 平 一 村 加 格 达 奇 区 白 桦 乡 鹤 岗 市 绥 滨 县 兴 边 村 绥 化 市 肇 东 市 太 平 乡 绥 化 市 肇 东 市 黎 明 镇 吉 林 市 大 绥 河 镇 干 沟 村 哈 尔 滨 市 双 城 市 周 家 镇 哈 尔 滨 市 宾 县 64 第 1 期 贲 海 燕 等 茄 子 黄 萎 病 苗 期 抗 性 鉴 定 技 术 的 优 化 及 抗 源 筛 选 液 拌 入 土 壤 中 均 匀 使 土 壤 接 种 终 浓 度 为 1 10 5 个 孢 子 m L 注 射 法 将 10 m L 孢 子 悬 浮 液 用 灭 菌 针 头 注 入 茄 苗 茎 基 部 无 底 钵 伤 根 法 采 用 8 连 排 特 制 营 养 钵 将 钵 底 部 长 出 的 须 根 剪 断 后 浸 泡 在 菌 悬 液 中 30 m in 以 无 菌 水 处 理 为 对 照 组 C K 每 个 处 理 3 次 重 复 每 次 重 复 32 棵 茄 子 苗 1 5 无 底 钵 伤 根 法 接 种 苗 龄 的 筛 选 采 用 无 底 钵 伤 根 法 对 茄 子 不 同 真 叶 期 3 4 片 5 6 片 和 7 8 片 进 行 最 佳 接 种 苗 龄 的 筛 选 接 种 菌 株 为 2015 61 接 种 浓 度 1 10 5 个 孢 子 m L 剪 断 钵 底 须 根 后 浸 泡 在 菌 悬 液 中 30 m in 每 个 处 理 32 株 苗 3 次 重 复 1 6 无 底 钵 伤 根 法 最 佳 接 种 时 间 的 筛 选 在 试 验 温 室 中 茄 苗 长 至 3 4 片 真 叶 剪 断 无 底 钵 须 根 后 分 别 进 行 10 20 30 m in 不 同 浸 泡 时 间 的 处 理 接 种 菌 株 为 2015 61 接 种 浓 度 为 1 10 5 个 孢 子 m L 每 个 处 理 32 株 苗 3 次 重 复 试 验 期 间 茄 苗 按 常 规 方 法 管 理 但 防 虫 不 治 病 1 7 病 情 调 查 及 分 级 标 准 所 有 试 验 均 在 黑 龙 江 省 农 科 院 试 验 温 室 内 进 行 白 天 平 均 温 度 27 3 夜 间 平 均 温 度 为 17 5 接 种 后 待 茄 子 黄 萎 病 典 型 发 病 症 状 出 现 后 进 行 第 一 次 病 情 调 查 之 后 每 10 d 调 查 一 次 至 发 病 稳 定 不 再 扩 展 依 据 如 下 分 级 标 准 进 行 病 情 级 数 调 查 计 算 病 情 指 数 茄 子 黄 萎 病 苗 期 分 级 标 准 0 级 植 株 生 长 健 康 无 发 病 症 状 1 级 植 株 1 2 真 叶 发 黄 卷 曲 或 叶 片 脱 落 2 级 植 株 3 片 及 以 上 真 叶 发 黄 卷 曲 或 脱 落 3 级 整 个 植 株 的 真 叶 几 乎 全 部 发 病 出 现 萎 蔫 黄 化 或 脱 落 而 植 株 顶 部 新 叶 片 健 康 或 发 黄 但 未 脱 落 全 株 未 完 全 枯 死 4 级 植 株 全 株 枯 死 或 只 剩 光 杆 发 病 率 及 病 情 指 数 按 照 以 下 公 式 计 算 发 病 率 发 病 株 数 总 株 数 100 1 病 情 指 数 相 应 病 级 相 应 病 级 病 株 数 总 株 数 最 高 级 值 100 2 1 8 茄 子 黄 萎 病 抗 病 性 鉴 定 与 评 价 采 用 以 上 建 立 的 无 底 钵 伤 根 法 对 本 研 究 室 保 存 的 50 份 茄 子 种 质 资 源 进 行 抗 性 鉴 定 依 据 这 些 材 料 品 种 在 本 单 位 占 地 700 m 2 的 茄 子 黄 萎 病 标 准 病 圃 的 结 果 进 行 比 较 验 证 茄 子 黄 萎 病 抗 病 性 鉴 定 分 级 标 准 如 下 免 疫 I D I 0 抗 病 R D I 15 中 抗 M R 15 D I 30 耐 病 T 30 D I 50 中 感 M S 5070 1 9 统 计 分 析 应 用 D PS 统 计 分 析 软 件 进 行 原 始 数 据 处 理 并 用 D uncan 氏 新 复 极 差 法 进 行 差 异 显 著 性 分 析 2 结 果 与 分 析 2 1 茄 子 黄 萎 病 菌 株 类 型 的 筛 选 试 验 结 果 表 明 25 株 强 致 病 力 菌 株 中 7 株 有 较 好 的 产 孢 力 表 2 其 中 A 型 菌 株 3 株 B 型 菌 株 2 株 C 型 菌 株 1 株 D 型 菌 株 1 株 25 摇 床 培 养 第 4 天 产 孢 量 达 到 最 大 孢 子 滤 液 定 容 稀 释 后 的 浓 度 为 1 1 10 7 2 3 10 7 个 孢 子 m L 推 算 原 滤 液 孢 子 浓 度 在 7 33 10 7 15 33 10 7 个 孢 子 m L 茄 子 黄 萎 病 菌 常 见 的 接 种 浓 度 为 1 10 7 个 孢 子 m L 本 试 验 中 筛 选 到 这 7 株 菌 株 产 孢 快 可 作 为 接 种 试 验 的 接 种 菌 株 其 他 菌 株 由 于 产 孢 量 不 足 或 达 到 最 佳 产 孢 量 所 需 时 间 较 长 影 响 接 种 鉴 定 试 验 效 率 因 此 不 用 于 本 试 验 的 接 种 鉴 定 2 2 茄 子 黄 萎 病 菌 接 种 浓 度 的 筛 选 试 验 选 取 的 四 种 类 型 菌 株 均 有 较 强 的 致 病 力 但 植 株 整 体 发 病 的 严 重 程 度 存 在 一 定 差 异 表 3 其 中 A 型 菌 株 2015 178 发 病 较 轻 接 种 25 d 不 同 接 种 浓 度 的 平 均 病 情 指 数 为 61 6 65 8 D 型 菌 株 2015 102 整 体 发 病 最 重 接 种 25 d 的 平 均 病 情 指 数 为 73 4 84 4 C 型 菌 株 2015 61 以 菌 液 浓 度 1 10 7 个 孢 子 m L 接 种 的 病 情 指 数 最 高 达 86 9 但 其 致 病 力 与 D 型 菌 株 65 江 西 农 业 大 学 学 报 第 44 卷 2015 102 比 较 在 相 同 菌 液 浓 度 下 无 显 著 性 差 异 各 菌 株 不 同 浓 度 接 种 后 发 病 趋 势 基 本 相 似 即 接 种 浓 度 越 大 发 病 越 严 重 表 3 当 接 种 浓 度 为 1 0 10 6 个 孢 子 m L 及 以 上 时 各 菌 株 病 情 指 数 差 异 不 显 著 发 病 趋 于 稳 定 试 验 中 发 现 菌 株 2015 61 有 更 好 的 致 病 效 率 表 3 其 处 理 浓 度 为 1 10 5 个 孢 子 m L 时 接 种 15 d 和 25 d 的 病 情 指 数 分 别 为 44 3 和 78 1 与 1 10 6 个 孢 子 m L 及 以 上 的 病 情 指 数 差 异 不 显 著 可 达 到 同 样 的 致 病 效 果 因 此 接 下 来 的 鉴 定 方 法 试 验 和 抗 病 性 鉴 定 试 验 均 应 用 菌 株 2015 61 接 种 以 减 少 菌 种 扩 繁 工 作 量 提 高 试 验 成 效 2 3 茄 子 黄 萎 病 菌 接 种 方 法 的 筛 选 试 验 调 查 结 果 显 示 5 种 接 种 方 法 均 能 诱 导 茄 苗 发 病 但 病 害 显 症 及 病 情 差 异 较 大 表 4 蘸 根 接 种 发 病 速 率 快 接 种 第 8 天 即 表 现 出 底 部 叶 片 变 黄 半 边 退 绿 的 症 状 接 种 第 25 天 平 均 病 指 最 高 达 85 7 灌 根 法 在 接 种 伤 根 时 较 难 把 控 接 种 第 25 天 的 病 情 指 数 为 77 1 整 体 表 现 为 发 病 不 均 匀 注 射 法 接 种 病 情 进 展 相 对 较 慢 病 情 严 重 度 低 于 蘸 根 接 种 和 灌 根 接 种 该 法 操 作 困 难 功 效 低 拌 土 法 接 种 显 症 慢 接 种 第 12 天 才 开 始 显 症 整 体 发 病 轻 接 种 15 d 和 25 d 的 平 均 病 情 指 数 分 别 为 20 1 和 62 2 明 显 低 于 其 他 接 种 方 法 且 发 病 不 均 匀 无 底 钵 伤 根 法 接 种 发 病 速 率 较 快 均 匀 度 好 操 作 简 便 接 种 后 第 15 25 天 的 平 均 病 指 分 别 为 44 5 和 80 5 接 种 成 效 与 蘸 根 接 种 和 灌 根 接 种 无 差 异 病 情 指 数 与 鉴 定 寄 主 的 实 际 抗 感 情 况 较 为 一 致 2 4 无 底 钵 伤 根 法 不 同 接 种 苗 龄 对 发 病 的 影 响 结 果 显 示 茄 子 植 株 不 同 苗 龄 进 行 接 种 对 黄 萎 病 发 病 程 度 的 影 响 较 大 表 5 其 中 3 4 片 真 叶 期 发 病 效 果 最 好 处 理 25 d 后 病 株 率 和 病 情 指 数 分 别 为 100 59 8 好 于 其 它 处 理 此 时 清 水 对 照 处 理 植 株 生 长 良 好 无 发 病 而 4 5 片 真 叶 6 7 片 真 叶 期 病 情 指 数 在 53 7 以 上 但 其 清 水 对 照 处 理 植 株 叶 片 出 现 大 面 积 黄 化 花 叶 斑 植 株 老 化 严 重 干 扰 其 病 情 指 数 的 调 查 影 响 最 终 的 调 查 结 果 因 此 无 底 钵 伤 根 法 最 佳 接 种 苗 龄 为 3 4 片 真 叶 期 为 宜 2 5 无 底 钵 伤 根 法 不 同 接 种 时 间 对 发 病 的 影 响 两 次 调 查 结 果 表 明 无 底 钵 伤 根 法 不 同 浸 泡 时 间 对 发 病 程 度 的 影 响 差 异 不 明 显 表 6 接 种 第 15 天 浸 根 10 m in 的 病 情 指 数 为 31 0 发 病 率 为 90 6 浸 根 30 m in 的 病 情 指 数 为 33 9 发 病 率 为 87 5 接 种 第 表 2 不 同 培 养 性 状 的 强 致 病 力 菌 株 2 5 株 产 孢 量 的 比 较 T a b 2 T h e s p o r e p r o d u c in g r a te s o f 2 5 H ig h ly p a th o g e n ic s tr a in s w ith d iffe r e n t c u ltu r e tr a its w e r e c o m p a r e d 形 态 类 型 C ultural type A 菌 核 型 Sclerotia type B 菌 核 型 Sclerotia type 菌 株 名 称 Isolates 2015 18 2015 158 2015 20 2015 74 2015 17 2015 178 2015 19 2015 44 2015 101 2015 13 2015 147 2015 37 2015 81 原 孢 子 浓 度 10 7 个 孢 子 m L 1 O riginal concentration 1 47 0 23 8 89 0 85 3 78 0 38 3 78 0 38 4 44 0 04 15 33 2 00 3 56 0 38 11 80 0 69 1 78 0 77 1 33 0 2 67 1 33 9 11 0 14 0 69 0 17 稀 释 后 孢 子 浓 度 10 7 个 孢 子 m L 1 D iluted concentration 0 22 0 03 1 33 0 58 0 57 0 06 0 57 0 06 0 67 0 31 2 30 0 30 0 53 0 06 1 77 0 40 0 27 0 12 0 20 0 0 40 0 20 1 37 0 32 0 10 0 03 形 态 类 型 C ultural type C 丝 核 型 Interm ediate type D 菌 丝 型 M ycelium type 菌 株 名 称 Isolates 2015 14 2015 54 2015 37 2015 33 2015 182 2015 97 2015 136 2015 61 2015 129 2015 18 2015 102 2015 106 原 孢 子 浓 度 10 7 个 孢 子 m L 1 O riginal concentration 5 33 1 33 2 67 1 33 2 67 0 1 56 1 02 0 89 0 38 3 56 0 38 0 49 0 15 9 33 1 53 1 11 0 38 7 33 1 15 8 44 1 68 3 11 0 77 稀 释 后 孢 子 浓 度 10 7 个 孢 子 m L 1 D iluted concentration 0 80 0 20 0 40 0 20 0 40 0 0 23 0 15 0 13 0 06 0 53 0 06 0 07 0 02 1 40 0 53 0 17 0 06 1 10 0 17 1 27 0 25 0 47 0 12 66 第 1 期 贲 海 燕 等 茄 子 黄 萎 病 苗 期 抗 性 鉴 定 技 术 的 优 化 及 抗 源 筛 选 表 3 不 同 接 种 浓 度 对 茄 子 黄 萎 病 发 病 程 度 的 影 响 T a b 3 E ffe c ts o f d iffe r e n t in o c u lu m c o n c e n tr a tio n s o n r e s is ta n c e to e g g p la n t V e r tic illiu m w ilt 菌 株 名 称 Isolates 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