茄子绵疫病的病原分离及鉴定.pdf

2022 年 第 63 卷 第 1 期 129 收 稿 日 期 2021 10 12 基 金 项 目 铜 仁 市 科 技 支 撑 计 划 铜 市 科 研 2020 45 号 贵 州 省 科 技 计 划 黔 科 合 支 撑 2020 4Y065 贵 州 省 教 育 厅 青 年 科 技 人 才 成 长 项 目 黔 教 合 KY 字 2019 175 作 者 简 介 谭 智 勇 副 教 授 博 士 E mail daydayupccc 163 com 文 献 著 录 格 式 谭 智 勇 谌 潇 雄 韦 海 霞 等 茄 子 绵 疫 病 的 病 原 分 离 及 鉴 定 J 浙 江 农 业 科 学 2022 63 1 129 130 133 DOI 10 16178 j issn 0528 9017 20212356 茄 子 绵 疫 病 的 病 原 分 离 及 鉴 定 谭 智 勇 1a 谌 潇 雄 2 韦 海 霞 1b 郑 燕 飞 1b 陈 文 俊 3 谭 军 4 1 铜 仁 学 院 a 经 济 管 理 学 院 b 农 林 工 程 与 规 划 学 院 贵 州 铜 仁 554300 2 贵 州 财 经 大 学 公 共 管 理 学 院 贵 州 贵 阳 550025 3 铜 仁 市 锦 江 绿 色 蔬 菜 产 业 发 展 有 限 公 司 贵 州 铜 仁 554300 4 中 国 热 带 农 业 科 学 院 香 料 饮 料 研 究 所 海 南 万 宁 571533 摘 要 对 贵 州 碧 江 地 区 茄 子 绵 疫 病 病 菌 进 行 分 离 纯 化 培 养 采 用 生 物 学 分 子 学 鉴 定 等 方 法 对 其 进 行 研 究 结 果 表 明 引 起 贵 州 碧 江 茄 子 绵 疫 病 的 病 原 菌 为 辣 椒 疫 霉 菌 为 当 地 茄 子 绵 疫 病 的 防 治 提 供 了 理 论 依 据 关 键 词 病 原 菌 鉴 定 茄 子 绵 疫 病 中 图 分 类 号 S436 411 文 献 标 志 码 A 文 章 编 号 0528 9017 2022 01 0129 02 茄 子 是 贵 州 省 聚 焦 种 植 七 个 优 势 单 品 蔬 菜 之 一 全 省 种 植 面 积 达 4 万 hm 2 绵 疫 病 为 茄 子 三 大 病 害 之 一 全 生 育 期 均 可 发 生 苗 期 和 成 株 期 均 可 受 害 一 般 减 产 20 30 发 病 严 重 时 损 失 超 过 50 主 要 危 害 茄 果 也 能 危 害 叶 茎 花 器 等 部 位 据 相 关 文 献 报 道 辣 椒 疫 霉 菌 1 3 和 烟 草 疫 霉 菌 3 4 均 能 引 发 茄 子 绵 疫 病 不 同 地 区 引 发 的 病 原 菌 有 所 差 异 据 笔 者 调 研 了 解 近 年 来 碧 江 区 茄 子 绵 疫 病 发 病 较 重 目 前 尚 未 见 贵 州 碧 江 茄 子 绵 疫 病 病 原 菌 的 研 究 报 道 本 研 究 对 该 病 害 的 病 原 菌 进 行 了 形 态 学 和 分 子 生 物 学 鉴 定 明 确 引 起 贵 州 茄 子 绵 疫 病 病 原 菌 旨 在 为 生 产 上 防 治 茄 子 绵 疫 病 提 供 理 论 依 据 1 材 料 与 方 法 1 1 材 料 2020 年 9 10 月 分 2 次 在 贵 州 省 铜 仁 市 碧 江 区 和 平 乡 蔬 菜 种 植 基 地 采 集 茄 子 绵 疫 病 病 株 1 2 病 原 菌 的 分 离 选 取 感 病 的 茄 子 果 实 用 75 的 乙 醇 擦 净 表 面 去 除 表 皮 在 病 健 交 界 处 剪 取 小 块 组 织 至 PDA 培 养 基 上 25 培 养 待 分 离 物 上 长 出 菌 丝 挑 取 菌 落 边 缘 进 行 纯 化 置 于 4 冰 箱 中 保 存 1 3 病 原 菌 形 态 观 察 病 原 菌 接 种 至 PDA 平 板 培 养 基 于 25 恒 温 箱 暗 培 养 定 期 观 察 病 原 菌 的 菌 落 生 长 记 录 菌 落 的 颜 色 形 态 及 生 长 情 况 在 光 学 显 微 镜 下 拍 照 记 录 病 原 菌 的 菌 丝 和 孢 子 形 态 1 4 病 原 菌 分 子 鉴 定 参 考 文 献 4 采 用 rDNA ITS 序 列 分 析 方 法 对 病 原 菌 进 行 分 子 生 物 学 鉴 定 以 ITS1 ITS4 为 引 物 对 菌 株 的 rDNA 进 行 扩 增 反 应 条 件 为 95 预 变 性 5 min 35 个 循 环 95 变 性 30 s 58 退 火 30 s 72 延 伸 1 min 循 环 结 束 后 72 延 伸 7 min PCR 产 物 用 AxyPrep DNA 凝 胶 回 收 试 剂 盒 回 收 具 体 操 作 按 试 剂 盒 说 明 书 进 行 取 各 菌 种 纯 化 后 的 PCR 产 物 使 用 测 序 仪 ABI3730 XL 进 行 DNA 测 序 将 所 得 序 列 在 NCBI 中 比 对 选 择 相 似 度 最 大 的 序 列 作 为 物 种 鉴 定 结 果 2 结 果 与 分 析 2 1 茄 子 绵 疫 病 症 状 田 间 症 状 茄 子 绵 疫 病 主 要 为 害 果 实 图 1 病 部 果 肉 呈 现 黄 褐 色 至 黑 褐 色 腐 烂 状 部 分 严 重 果 实 上 面 有 白 色 絮 状 菌 丝 2 2 病 原 菌 形 态 特 征 病 原 菌 在 PDA 培 养 基 上 培 养 菌 落 为 白 色 表 面 密 被 绒 状 图 2 中 A 菌 丝 无 隔 膜 孢 子 囊 呈 椭 圆 形 且 有 明 显 乳 头 状 突 起 图 2 中 B 按 照 柯 赫 氏 法 则 步 骤 将 所 分 离 到 的 疫 霉 菌 株 编 号 gjq 接 种 茄 子 后 发 病 症 状 与 大 田 的 症 状 相 似 从 发 病 部 位 再 次 分 离 得 到 的 病 原 菌 的 形 态 与 图 2 中 A 相 同 130 2022 年 第 63 卷 第 1 期 图 1 茄 子 绵 疫 病 果 实 症 状 2 3 病 原 菌 分 子 鉴 定 将 测 序 所 得 序 列 进 行 BLAST 在 线 比 对 通 过 图 2 茄 子 绵 疫 病 形 态 学 鉴 定 结 果 分 子 系 统 发 育 图 3 分 析 发 现 分 离 获 得 的 菌 株 gjq 的 rDNA ITS 序 列 与 NCBI 数 据 库 中 对 应 登 录 号 KJ696538 1 LT707536 1 KC677731 1 GU111643 1 和 MH842162 1 序 列 的 相 似 度 为 100 病 原 菌 菌 株 gjq 鉴 定 为 辣 椒 疫 霉 菌 与 棕 榈 疫 霉 P h y t o p h t h o r a p a l m i v o r a 相 似 度 为 65 图 3 基 于 rDNA ITS 序 列 构 建 的 系 统 发 育 树 3 小 结 分 子 鉴 定 结 果 显 示 贵 州 碧 江 茄 子 绵 疫 病 病 原 菌 为 辣 椒 疫 霉 菌 这 与 四 川 的 情 况 相 同 5 据 报 道 辣 椒 疫 霉 菌 寄 主 范 围 包 括 葫 芦 科 茄 科 豆 科 等 18 科 78 种 植 物 寄 主 范 围 较 广 6 8 是 一 种 土 传 卵 菌 以 卵 孢 子 或 厚 垣 孢 子 在 土 壤 病 残 体 中 越 冬 可 存 活 数 月 甚 至 更 长 时 间 对 贵 州 碧 江 区 茄 子 绵 疫 病 的 防 治 建 议 及 时 拔 除 病 株 防 止 其 进 一 步 扩 散 合 理 轮 作 换 茬 降 低 土 壤 中 病 菌 的 积 累 量 选 用 抗 病 品 种 降 低 病 害 感 染 率 选 用 有 针 对 性 的 药 剂 开 展 防 控 降 低 病 害 发 生 率 参 考 文 献 1 孔 志 强 徐 军 陈 胜 文 等 茄 子 绵 疫 病 的 显 微 识 别 与 综 合 防 治 J 长 江 蔬 菜 2019 9 53 55 2 唐 可 兰 何 振 华 李 健 生 等 6 种 药 剂 对 茄 子 绵 疫 病 的 防 治 试 验 J 湖 南 农 业 科 学 2019 10 56 58 3 陆 家 云 植 物 病 害 诊 断 第 二 版 M 北 京 中 国 农 业 出 版 社 1997 431 下 转 第 133 页 韩 海 亮 等 不 同 种 衣 剂 对 糯 玉 米 苗 期 草 地 贪 夜 蛾 的 防 治 效 果 133 别 是 84 1 90 2 90 3 19 由 于 50 氯 虫 苯 甲 酰 胺 40 溴 酰 噻 虫 嗪 和 50 吡 虫 硫 双 威 对 玉 米 田 鳞 翅 目 夜 蛾 科 害 虫 的 防 治 效 果 较 好 本 研 究 将 此 3 种 种 衣 剂 列 为 候 选 种 衣 剂 在 本 研 究 中 出 苗 后 第 10 天 对 照 田 间 幼 苗 草 地 贪 夜 蛾 为 害 株 率 已 经 达 到 38 9 第 17 天 超 过 50 虫 口 压 力 较 大 在 此 环 境 下 50 氯 虫 苯 甲 酰 胺 40 溴 酰 噻 虫 嗪 和 50 吡 虫 硫 双 威 3 种 种 衣 剂 对 草 地 贪 夜 蛾 有 效 控 制 时 间 为 出 苗 后 10 d 左 右 能 部 分 解 决 玉 米 出 苗 即 被 为 害 问 题 但 持 效 期 低 于 同 类 药 剂 对 小 地 老 虎 等 地 下 害 虫 持 效 期 短 可 能 与 药 剂 降 解 有 关 现 有 研 究 表 明 较 高 浓 度 的 虫 嗪 种 衣 剂 对 草 地 贪 夜 蛾 种 群 有 一 定 的 抑 制 作 用 但 随 着 药 剂 在 植 株 体 内 的 降 解 抑 制 作 用 逐 渐 降 低 20 此 外 草 地 贪 夜 蛾 虫 口 压 力 大 取 食 量 大 有 可 能 是 造 成 持 效 期 短 的 原 因 因 此 要 进 一 步 筛 选 合 适 的 种 衣 剂 提 高 幼 虫 防 效 增 强 保 叶 效 果 延 长 持 效 期 解 决 草 地 贪 夜 蛾 在 玉 米 苗 期 的 为 害 问 题 此 外 在 种 衣 剂 防 效 下 降 后 应 及 时 配 合 叶 面 防 治 手 段 减 轻 草 地 贪 夜 蛾 造 成 的 为 害 参 考 文 献 1 郭 井 菲 赵 建 周 何 康 来 等 警 惕 危 险 性 害 虫 草 地 贪 夜 蛾 入 侵 中 国 J 植 物 保 护 2018 44 6 1 10 2 姜 玉 英 刘 杰 朱 晓 明 草 地 贪 夜 蛾 侵 入 我 国 的 发 生 动 态 和 未 来 趋 势 分 析 J 中 国 植 保 导 刊 2019 39 2 33 35 3 姜 玉 英 刘 杰 谢 茂 昌 等 2019 年 我 国 草 地 贪 夜 蛾 扩 散 为 害 规 律 观 测 J 植 物 保 护 2019 45 6 10 19 4 韩 海 亮 章 金 明 徐 红 星 等 草 地 贪 夜 蛾 在 浙 江 东 阳 田 间 玉 米 植 株 上 的 发 生 及 防 治 策 略 J 昆 虫 学 报 2020 63 5 613 623 5 韩 海 亮 包 斐 赵 福 成 等 草 地 贪 夜 蛾 药 剂 防 控 效 果 初 报 J 浙 江 农 业 科 学 2019 60 9 1511 1513 6 陈 泽 南 邹 甜 王 志 伟 等 种 衣 剂 防 病 虫 害 的 研 究 进 展 J 安 徽 农 业 科 学 2018 46 32 10 13 7 岳 瑾 王 品 舒 张 金 良 等 不 同 种 衣 剂 对 玉 米 生 长 及 病 虫 害 防 治 效 果 研 究 J 农 业 科 技 通 讯 2017 6 70 73 8 孙 斌 张 志 刚 王 素 平 等 14 种 悬 浮 种 衣 剂 对 玉 米 地 下 害 虫 蚜 虫 和 茎 基 腐 病 的 防 效 评 价 J 中 国 农 学 通 报 2019 35 24 128 132 9 杨 书 成 王 燕 王 建 军 等 60 g L 戊 唑 醇 悬 浮 种 衣 剂 对 玉 米 丝 黑 穗 病 防 治 效 果 试 验 J 南 方 农 业 学 报 2011 42 11 1350 1352 10 王 勇 庆 马 千 里 谭 煜 婷 等 氯 虫 苯 甲 酰 胺 对 草 地 贪 夜 蛾 的 毒 力 即 田 间 防 效 J 环 境 昆 虫 学 报 2019 41 4 782 788 11 闫 文 娟 杨 帅 王 勇 庆 等 草 地 贪 夜 蛾 应 急 防 控 药 剂 田 间 药 效 筛 选 J 应 用 昆 虫 学 报 2019 56 4 788 792 12 成 玮 关 洪 丹 杨 汉 平 等 防 治 玉 米 地 草 地 贪 夜 蛾 药 剂 试 验 初 报 J 浙 江 农 业 科 学 2020 61 12 2610 2611 2614 13 王 芹 芹 崔 丽 王 立 等 14 种 杀 虫 剂 对 草 地 贪 夜 蛾 的 杀 卵 活 性 J 植 物 保 护 2019 46 6 80 83 113 14 DAVIS F M NG S S WILLIAMS W P Visual rating scales for screening whorl stage corn for resistance to fall armyworm J Technical Bulletin Mississippi Agricultural and Forestry Experiment Station 1992 186 1 9 15 李 涛 陈 剑 山 孙 明 凯 等 草 地 贪 夜 蛾 应 急 防 控 技 术 优 化 J 植 物 保 护 学 报 2020 47 4 900 901 16 ALINE C L GABRIEL M M TALO D J Microsclerotia production of M e t a r h i z i u m spp for dual role as plant biostimulant and control of S p o d o p t e r a f r u g i p e r d a through corn seed coating J Fungal biology 2020 124 8 689 699 17 吴 嫦 娟 熊 腾 飞 尹 艳 琼 等 玉 米 种 子 丸 粒 化 包 衣 处 理 对 草 地 贪 夜 蛾 的 防 治 效 果 J 环 境 昆 虫 学 报 2020 42 6 1314 1321 18 何 发 林 孙 石 昂 于 灏 泳 等 氯 虫 苯 甲 酰 胺 拌 种 对 3 种 玉 米 地 下 害 虫 的 防 治 效 果 J 植 物 保 护 2020 46 1 253 261 19 任 美 凤 陆 俊 姣 李 大 琪 等 2 种 种 衣 剂 对 小 地 老 虎 幼 虫 的 毒 力 测 定 及 保 苗 效 果 J 中 国 植 保 导 刊 2017 37 4 68 70 20 巴 吐 西 张 智 寇 爽 等 噻 虫 嗪 种 衣 剂 对 草 地 贪 夜 蛾 生 命 参 数 的 影 响 J 植 物 保 护 学 报 2020 47 4 891 899 责 任 编 辑 张 瑞 麟 上 接 第 130 页 4 SCHOCH C L SEIFERT K A HUHNDORF S Nuclear ribosomal internal transcribed spacer ITS regionas a universal DNA barcode marker for fungi J Proceedings of the National Academy of Science 2012 109 16 6241 5 席 亚 东 乔 昕 房 超 等 四 川 茄 子 对 绵 疫 病 菌 P h y t o p h t h o r a c a p s i c i 的 抗 性 鉴 定 与 评 价 J 北 方 园 艺 2020 14 8 17 6 席 亚 东 陈 国 华 谢 丙 炎 等 辣 椒 疫 霉 菌 全 球 传 播 与 危 害 及 生 物 学 特 性 研 究 进 展 J 北 方 园 艺 2016 11 199 203 7 张 曦 王 秀 雪 邹 春 蕾 辣 椒 抗 疫 病 基 因 初 步 定 位 J 东 北 农 业 大 学 学 报 2021 52 3 20 25 8 王 会 征 兰 玉 彬 辣 椒 疫 霉 菌 果 胶 裂 解 酶 PL101 基 因 的 克 隆 及 生 物 信 息 学 分 析 J 微 生 物 学 通 报 2020 47 12 4021 4028 责 任 编 辑 张 瑞 麟